CC BY
57
УДК 616-092.4:616.34-008.87:616.345:612.112.92
ВЛИЯНИЕ ЛАКТОБАКТЕРИНА НА СОСТАВ ПРИСТЕНОЧНОЙ МИКРОФЛОРЫ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА И ФУНКЦИОНАЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ МЫШЕЙ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЛЕКАРСТВЕННОМ ДИСБИОЗЕ В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ МАГНИТНОГО ПОЛЯ ПОВЫШЕННОЙ НАПРЯЖЁННОСТИ
© Медведева О.А., Калуцкий П.В., Беседин А.В., Жиляева Л.В., Медведева С.К.
Кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии Курского государственного медицинского университета, Курск
E-mail: pvk62@mail.ru
Изучено влияние пробиотика лактобактерин на пристеночную нормофлору толстого кишечника и функционально-метаболическую активность нейтрофилов крови мышей при дисбиозе, индуцированном гентамицином, в условиях воздействия магнитного поля аномальных характеристик. Проведенное исследование позволило установить, что пе-роральное применение пробиотических лактобацилл на фоне лекарственного дисбиоза и воздействия аномального магнитного поля способствуют более полному восстановлению облигатных представителей нормофлоры в муцино-вом слое толстой кишки и нормализации подавляющего большинства исследованных показателей функционально-метаболической активности нейтрофилов крови мышей, чем при лекарственном дисбиозе в условиях фоновых значений геомагнитного поля.
Ключевые слова: дисбиоз, магнитные поля, микрофлора кишечника, функционально-метаболическая активность нейтрофилов крови, лактобактерин.
INFLUENCE OF LACTOBACTERIN ON THE MUSINE LARGE INTESTINE MICROFLORAE STRUCTURE AND MICE BLOOD NEUTROPHILS FUNCTIONAL-METABOLIC ACTIVITY IN EXPERIMENTAL ANTIBIOTIC-INDUCED DYSBIOSIS IN THE CONDITION OF THE ANOMALOUS CHARACTERISTICS
OF MAGNETIC FIELD Medvedeva O.A., Kalutsky P. V., Besedin A. V., Zhilyaeva L. V., Medvedeva S.K.
Microbiology, Virology, Immunology Department of the Kursk State Medical University, Kursk Influence of the probiotic lactobacterin on the musine large intestine normal flora and functional-metabolic activity of mice neutrophils is studied in dysbiosis , induced by gentamycin, in the conditions of magnetic field abnormal characteristics influence .The conducted research has allowed to establish that oral application of probiotic lactobacilli against drug dysbiosis and influences of an abnormal magnetic field promotes more complete recovery of the normal flora obligate representatives in the musine layer of large and normalization most of the investigated indicators functional-metabolic activity of blood mice neutrophils, than in drug dysbiosis in case of geomagnetic field background values.
Keywords: dysbiosis, magnetic fields, intestinal microflora, functional-metabolic activity of blood neutrophils, lactobac-terin.
Адаптация человека во внешней среде зависит от целого ряда специфических и неспецифических факторов. Кожные покровы, слизистые оболочки проксимальных отделов респираторного тракта, ротовой полости, желудочно-кишечного тракта, влагалища, сообщающиеся с внешней средой, являются открытыми биологическими системами, и их микрофлора играет важную роль в защите организма от неблагоприятных внешних воздействий.
Нормальную микрофлору называют еще «экстракорпоральным органом», который состоит из сотен тысяч родов и видов микроорганизмов. Из их числа 60% присутствуют в желудке, тонкой и толстой кишке. Являясь местом обитания многочисленного бактериального сообщества, отделённого от внутренней среды организма только слоем эпителиальных клеток, кишечник адаптирован для двусторонних обменных процессов хозяин-
микрофлора. Структура и состав кишечной микрофлоры отражают процессы естественного отбора, протекающие как внутри самого сообщества, так и на уровне его взаимодействия с организмом хозяина [1, 3].
Роль нормальной индигенной микрофлоры всё ещё недостаточно изучена, но одна их наиболее важных её функций заключается в поддержании колонизационной резистентности против внешней паразитарной экспансии, а также обеспечение контроля над чрезмерным ростом потенциальных патогенов, уже присутствующих в кишечнике.
Одной из наиболее частых причин нарушений в составе и структуре нормофлоры кишечника является воздействие на нее антибактериальных препаратов. В опубликованных нами ранее работах [6] показано, что магнитное поле аномальных характеристик само по себе является фактором,
приводящим к изменениям в составе нормофло-ры, состояния слизистой оболочки кишечника и функции иммунной системы организма. Кроме того, было установлено, что сочетанное воздействие антибактериальных препаратов и магнитного поля аномальных характеристик вызывает более глубокие изменения, нежели каждый из перечисленных факторов в отдельности.
Общеизвестно, что одними из наиболее часто используемых в практике средств для лечения и профилактики дисбиотических состояний являются пробиотические препараты. Популярными стали пробиотики, изготовленные на основе би-фидобактерий и лактобактерий (бифидумбакте-рин-форте, бифиформ, бифилиз, бификол, аци-пол, линекс, биомасса ацидофильных лактобакте-рий «Наринэ» ацилакт) [5].
Эти препараты содержат культуры живых микроорганизмов, способных восстанавливать нормальный микробиоценоз, угнетать патогенные и условно-патогенные микроорганизмы и создавать благоприятные условия для развития нормальной микрофлоры. В присутствии пробиоти-ков происходит индукция антителообразования (8^А), повышение фагоцитарной активности лейкоцитов. Важным преимуществом таких биопрепаратов является то, что микроорганизмы, входящие в их состав, непатогенны и нетоксичны.
При выборе пробиотического препарата возникает несколько проблемных вопросов, первый из которых выживаемость. Пробиотическими свойствами обладают только живые микробы. Доказано, что лишь небольшое число штаммов лактобактерий и бифидобактерий обладают ки-слотоустойчивостью, большинство штаммов гибнет в желудке. Пробиотик лактобактерин - это микробная масса живых Ь. р1аШ;агцш, лиофильно высушенных в защитной сахаро-желатино-молочной среде. Именно этот вид лактобацилл более устойчив в кислой среде. Кроме того, доказано, что их антибактериальная активность связана с продукцией молочной кислоты, спирта и ли-зоцима, веществ, обладающих антибиотической активностью, интерферонов, интерлейкина-1 [10].
Цель настоящего исследования состояла в изучении влияния пробиотических лактобактерий на пристеночную микробиоту толстого кишечника и функциональные характеристики фагоцитов в условиях дисбиоза, вызванного введением антибиотика и влиянием магнитного поля аномальных характеристик.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперимент проводили на мышах линии СВА весом 18-20 г. Содержание, питание, уход за
животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР от 12.08.1977 № 755). Все животные содержались при сходных условиях в отношении температуры, влажности, освещения, а также рациона питания. Животные были разделены на 5 групп: мыши 1-й группы находились при фоновых значениях геомагнитного поля на территории г. Курска - напряжённость поля 0,45 эрстеда (ГМП-контроль); у животных 2-й, 3-й, 4-й и 5-й опытных групп моделировали дисбиоз. При этом мыши 2-й и 4-й групп находились в аномальном магнитном поле (АМП) с напряжённостью 3 эрстеда при предварительном «омагничи-вании» до моделирования экспериментального дисбиоза в течение 2 недель, а также всё остальное время эксперимента. Животные 3-й и 5-й групп находились при фоновых значениях геомагнитного поля на территории г. Курска. Экспериментальный лекарственный дисбиоз моделировался путём ежедневного внутрибрюшинного введения раствора гентамицина в течение 5 дней. Затем в опытных группах 2 (АМП-коррекция) и 3 (ГМП-коррекция) проводили 3-недельную коррекцию нормофлоры введением пробиотика «Лактобактерин» в дозе, рассчитанной согласно инструкции с пересчётом на единицу массы животных (пробиотик вводили per os при помощи калиброванной канюли). В 4-й (АМП-дисбиоз) и 5-й (ГМП-дисбиоз) опытных группах животные не получали препарат для коррекции нормофло-ры, а вывод животных из эксперимента проводился на 3 сутки после последней инъекции ген-тамицина.
Для исследования пристеночной микрофлоры у мышей после их вывода из эксперимента путём дислокации шейных позвонков забирали биопта-ты толстого кишечника (слепой и прямой кишки), свободные от химуса. Материал помещали в стерильный фосфатный буфер (рН 6.0) в соотношении 1 мг ткани в 100 мкл раствора на срок 2 часа для разжижения муцина. Микробиологические исследования пристеночного муцина проводили согласно методике, предложенной Л.И. Кафар-ской и Н. А. Коршуновым [4, 8].
Из материала готовились мазки, которые окрашивали по Граму. Разведение исследуемого материала готовили до концентраций 10-1; 10-2; 10-3;10-4 и по 0,1 мл суспензии соответствующего разведения засевали на питательные среды (табл. 1).
Идентификация выделенных культур проводилась на микробиологическом анализаторе «Multiscan-Ascent» с использованием коммерческих тест-систем «Лахема-Чехия» ЭНТЕРОтест-
16, СТАФИтест-16, СтрептоТест-16, ЭН-КОККУСтест-16, API 20C Aux (BioMerieux 20 210).
Количество бактерий в 1 г биологического материала вычисляли по числу выросших колоний микроорганизмов - колониеобразующих единиц (КОЕ) при посеве из максимального разведения, где наблюдался рост не менее 10 колоний. При этом учитывали объём посевного материала. Для расчёта использовали следующую формулу:
КОЕ=Е/ (к*у*и), где
КОЕ - колониеобразующая единица, Е - общее количество бактерий, К - количество внесённого материала, v - количество чашек Петри, n - разведение материала.
Количество выделенных микроорганизмов выражали в Ig КОЕ/г массы биологического материала.
Для оценки функционально-метаболической активности нейтрофильного звена иммунитета производили исследование периферической крови животных. Функционально-метаболическая активность нейтрофилов крови оценивалась по активности фагоцитоза (процент нейтрофилов, принимающих участие в фагоцитозе, из общего числа сосчитанных нейтрофилов); фагоцитарному числу (среднее число частиц латекса, поглощённых одним фагоцитом из числа сосчитанных по-лиморфноядерных лейкоцитов). Кислородзави-симую активность бактерицидных систем ней-трофилов оценивали в тесте восстановления нит-росинего тетразолия [2, 10]. Индекс стимуляции нейтрофилов (ИСН) рассчитывали как отношение диформазан-позитивных клеток в стимулированной реакции к диформазан-позитивным клеткам в спонтанной реакции НСТ-теста. Функциональный
резерв нейтрофилов (ФРН) определялся как разница между диформазан-позитивными клетками в стимулированной зимозаном реакции и диформа-зан-позитивными клетками в спонтанной реакции НСТ-теста.
Уровень миелопероксидазы определялся ци-тохимически по методу Грехема-Кнолля [7]. Состояние кислороднезависимых бактерицидных систем оценивалось по среднему гистохимическому коэффициенту при постановке лизосо-мально-катионного теста [9].
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием критериев Вилкоксона-Манна-Уитни, Крускала-Уоллиса, Фридмана и непараметрического варианта критерия Ньюмена-Кейлса.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
После курса применения лактобактерина в опытной группе животных (АМП-коррекция) восстановление облигатных представителей нор-мофлоры (табл. 2), идентифицированных как лак-тобактерии, произошло на 94% по отношению к контролю (ГМП без дисбиоза) и на 120% по отношению к значению того же показателя при зафиксированном дисбиозе в условиях воздействия магнитного поля аномальных значений. Зарегистрированное значение показателя ^ КОЕ/г составило ^ 6,01 против ^ 6,39 в контроле и ^ 5,01 в группе АМП-дисбиоз. В другой опытной группе (ГМП-коррекция) количество лактобацилл было установлено на уровне ^ 5,51, что свидетельствует о восстановлении этих бактерий всего на 86% по отношению к контролю и на 110% - по отношению к группе ГМП-дисбиоз.
Таблица 1
Схема посева суспензий биоптатов кишечника мышей для бактериологического исследования пристеночной микрофлоры
Питательные среды Выделяемые микроорганизмы Разведения суспензии пристеночного муцина
МРС агар Лактобактерии 10-2; 10-4
Эндо Энтеробактер; Е.соП 10-2; 10-4
Среда № 10 Стафилококки 10-2; 10-4
Сабуро Дрожжеподобные грибы 10-2; 10-4
Висмут-сульфит агар Сальмонеллы; цитробактер 10-2; 10-4
Бифидо-агар Бифидобактерии 10-2; 10-4
Кровяной агар Стафилококки, стрептококки, энтерококки 10-2; 10-4
Таблица 2
Десятичный логарифм численности представителей мукозной микрофлоры кишечника экспериментальных и контрольных групп животных в пересчёте на 1 грамм биоптата
^^^^ Наименова-^^^ ние ^группы Микроорганизмы ^^^ ГМП- контроль, M±m АМП- дисбиоз, M±m АМП- коррекция, M±m ГМП- дисбиоз, M±m ГМП- коррекция, M±m
Lactobacillus spp. 6,39±0,34 5,01±0,4* 6,01±0,3 4,6±0,22 5,51±0,25
Bifidobacterium spp. 5,37±0,25 3,84±0,2* 5,4±0,27 3,25±0,2* 4,59±0,23*
E.coli 4,83±0,28 3,45±0,36* 4,58±0,23 4,5±0,41 3,65±0,17*
E.coli гем+ 0 0 0 0 0
Enterobacter spp. 5,41±0,26 3,9±0,25* 0* 3,98±0,33* 3,34±0,15*
Salmonella spp. 5,14±0,25 4,8±0,54* 0* 6,1±0,65* 3,34±0,19*
Citrobacter spp. 6,07±0,34 3,27±0,13* 0* 0* 0*
Streptococcus spp. 4,8±0,2 0* 0* 0* 0*
Enterococcus spp. 3,83±0,18 5,41±0,25* 4,77±0,3* 4,85±0,1* 4,63±0,25*
Enterococcus spp. гем+ 0 0 0 0 0
Staphylococcus spp. 0 5,12±0,25* 4,23±0,25* 5,01±0,1* 3,74±0,15*
Staphylococcus spp. гем. + 0 4,73±0,5* 2,74±0,14* 0 0
Candida spp. 0 5,0±0,21* 0 5,63±0,28* 4,23±0,12*
Примечание: * - p<0,05 по отношению к данным в группе ГМП-контроль.
Несколько иная картина наблюдалась в отношении бифидобактерий. Количество представителей микроорганизмов этого рода в опытной группе АМП-коррекция 5,4) достоверно достигло значений контроля (^ 5,37) и в 1,4 раза превысило показатель в группе АМП-дисбиоз. В группе ГМП-коррекция восстановление числа бифидобактерий зафиксировано на уровне 84% (^ 4,59) по отношению к контролю и на 141% -по отношению к значению КОЕ в группе ГМП-дисбиоз.
Показатель КОЕ микроорганизмов, определённых как кишечная палочка, не достиг уровня контроля (^ 4,83) ни в одной из опытных групп. Значение КОЕ в группе животных АМП-коррекция составило ^ 4,58, что свидетельствует о восстановлении данного микроорганизма на 95% по отношению к контролю и на 133% - по отношению к значению того же показателя при лекарственном дисбиозе в условиях воздействия магнитного поля аномальных значений. В опытной группе животных, находившихся в при фоновых значениях геомагнитного поля (ГМП-коррекция), восстановление содержания кишеч-
ной палочки составило 76% (^ 3,65) по отношению к контролю и 81% - по отношению к значению ^ КОЕ/г в группе ГМП-дисбиоз.
Наличие микроорганизмов, идентифицированных как гемолитические варианты кишечной палочки и энтерококки, не зафиксировано ни в контрольной, ни в опытных группах животных.
При воспроизведении экспериментального дисбиоза в условиях воздействия магнитного поля аномальных характеристик количество бактерий рода энтеробактер зарегистрировано на уровне ^ 3,9, что меньше контрольного показателя ГМП на 28%. Коррекция пробиотиком лактобак-терином привела к тому, что бактерии этого рода не определялись среди представителей пристеночной микрофлоры толстого кишечника мышей, подвергшихся воздействию аномального магнитного поля. В опытной группе ГМП-коррекция отмечалось уменьшение определяемого показателя до ^ 3,34, что на 38% меньше значений контроля и на 16% - значений ^ КОЕ/г в группе ГМП-дисбиоз.
Аналогичная картина зарегистрирована в отношении представителей рода сальмонелла, со-
держание которых уменьшилось на 7% под воздействием гентамицина и магнитного поля аномальных характеристик. Трёхнедельная коррекция лактобактерином привела к тому, что бактерии этого рода не определялись среди представителей микрофлоры толстого кишечника мышей, подвергшихся воздействию аномального магнитного поля. В опытной группе ГМП-коррекция количество сальмонелл (^ 3,34) уменьшилось по сравнению с контролем на 35%, а по сравнению со значением ^ КОЕ/г в группе ГМП-дисбиоз -на 45%.
Среди микроорганизмов муцинового слоя толстого кишечника мышей бактерии, идентифицированные, как цитробактер и стрептококк, не были зарегистрированы в опытных группах АМП-коррекция и ГМП-коррекция, хотя в контрольной группе их количественные показатели были достаточно высоки - ^ 6,07 и ^ 4,8 соответственно.
Негемолитические энтерококки обнаруживались как в контрольной, так и в опытных группах. Количество негемолитических энтерококков в опытной группе АМП-коррекция зарегистриро-
вано на уровне ^ 4,73, что выше контрольного значения (^ 3,83) на 24,5% и ниже значения в группе АМП-дисбиоз на 12% (^ 5,41). В опытной группе ГМП-коррекция этот показатель составил ^ 4,63, что превышает значение контроля на 21% и ниже значения в группе ГМП-дисбиоз (^ 4,85) на 4%.
Негемолитические стафилококки в контрольной группе выделены не были, в отличие от опытных групп. В группе животных, находившихся в условиях воздействия аномального магнитного поля в течение всего эксперимента, их число составило ^ 4,23, что 12% больше, чем в группе ГМП-коррекция (^ 3,74), тогда как в группах АМП-дисбиоз и ГМП-дисбиоз значения были статистически одинаковы (^ 5,01 и ^ 5,1).
Наличие гемолитических стафилококков было зарегистрировано в опытной группе АМП-коррекция - их количество составило ^ 2,74 (это на 42% меньше, чем в группе АМП-дисбиоз).
Представители дрожжеподобных грибов рода кандида не входили в состав флоры муцинового слоя толстого кишечника мышей контрольной и опытной группы АМП-корреция, тогда как в
Таблица 3
Функционально-метаболическая активность нейтрофилов крови экспериментальных и контрольных групп животных
Наименование
группы Показатели^, функционально-^, метаболической ^^ активности ГМП- контроль, M±m АМП- дисбиоз, M±m АМП- коррекция, M±m ГМП- дисбиоз, M±m ГМП- коррекция, M±m
Фагоцитарная активность, % 52,2±2,9 62,64±5,01* 49,09±2,6 52,2±1,04 45,01±3,0*
Фагоцитарное число 1,67±0,1 2,42±0,2* 1,57±0,1 1,67±0,03 1,4±0,1*
Завершённость фагоцитоза, % 78,8±0,4 97,0±8,2* 74,1±4,1 78,8±1,57 67,9±4,4*
Индекс активности фагоцитов 0,87±0,1 1,5±0,1* 0,81±0,1 0,875±0,01 0,75±0,1
НСТ-спонтанный 21,8±0,1 20,88±1,67 16,3±0,9* 17,4±1,34* 15,0±0,7*
НСТ-стимулированный 32,4±1,86 26,6±2,1* 30,4±1,6 32,4±0,64 27,9±1,4*
Индекс стимуляции нейтрофилов 2,9±0,14 2,5±0,2* 2,7±0,1 2,89±0,05 2,49±0,13*
Функциональный резерв нейтрофилов 18,5±0,98 12,15±0,9* 17,3±0,1* 18,45±0,36 15,9±0,7*
ЛКБ 55,0±2,9 66,9±2,9* 51,7±0,24* 55,2±3,1 47,4±2,1*
МП 12,5±0,68 16,2±0,9* 11,7±0,9 13,8±0,7* 10,7±0,5*
Примечание: * - p<0,05 по отношению к данным группы ГМП-контроль.
опытной группе ГМП-коррекция, а также в группах ГМП-дисбиоз и АМП-дисбиоз зарегистрировано наличие данных микроорганизмов. Значение этого показателя в группе ГМП-коррекция составило lg 4,23, что на 25% ниже показателя, зарегистрированного в группе ГМП-дисбиоз, и на 15% -в группе АМП-дисбиоз.
Характеризуя состояние функционально-метаболической активности нейтрофилов крови (табл. 3), необходимо отметить, что в группе ГМП-коррекция значения спонтанного и стимулированного НСТ-теста были достоверно ниже контроля, также были снижены и интегральные их показатели - функциональный резерв и индекс стимуляции нейтрофилов. Уровни лизосомальных катионных белков и миелопероксидазы в этой группе при применении лактобактерина так и не достигли контроля. В результате этого остальные исследованные показатели (фагоцитарная активность, фагоцитарное число и завершённость фагоцитоза) так и не достигли контрольных значений.
В то же время в группе АМП-коррекция ней-трофилы реагировали на применение препарата нормализацией фагоцитарных активности и числа, индекса активности, завершённости фагоцитоза, а также практически всех показателей, характеризующих состояние как кислородзависимой бактерицидной системы, так и уровня кислород-независимых ферментных систем нейтрофилов.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что пероральное применение у животных пробиотика лактобактерин при развитии лекарственного дисбиоза на фоне воздействия аномального магнитного поля способствует более полному, чем при действии фонового геомагнитного поля, восстановлению содержания облигатных представителей нормофлоры в муци-новом слое толстой кишки. Это сопровождалось нормализацией подавляющего большинства исследованных показателей функционально-метаболической активности нейтрофилов крови животных при их нахождении в аномальном магнитном поле, тогда как в условиях фоновых значений геомагнитного поля полной коррекции показателей достичь не удалось. При этом, однако, не удалось достичь полной элиминации ряда условно-патогенных микроорганизмов, таких как негемолитические и гемолитические представители рода стафилококк, которые считаются нетипичными для кишечного микробиоценоза микроорганизмами. Наличие этих бактерий в желудочно-кишечном тракте, по данным литературы, мо-
жет приводить к воспалительным процессам, пищевой токсикоинфекции и др. формам патологии. Это свидетельствует о необходимости совершенствования методов коррекции дисбиозов в условиях воздействия магнитных полей аномальных характеристик.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ардатская М.Д., Минушкин О.Н. Дисбактериоз кишечника: эволюция взглядов. Современные принципы диагностики и фармакологической коррекции // Consilium medicum. Приложение Гастроэнтерология. - 2006. - № 2. - С. 4-18.
2. Бажора Ю.И., Тимошевский В.Н., Протченко П.3., Головченко А.Н. Определение функциональной активности нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия // Лаб. дело. - 1981. - № 4. - С. 198-200.
3. Бельмер С.В. Антибиотико-ассоциированный дис-биоз у детей // Русский медицинский журнал. -2004. - № 1. - С. 14-16.
4. Ефимов Б.А., Кафарская Л.И., Коршунов В.М. Современные методы оценки качественных и количественных показателей микрофлоры кишечника и влагалища // Журн. микробиол. - 2002. - № 4. -С. 72-78.
5. Калмыкова А.И., Селятицкая В.Г., Пальчико-ва Н.А., Бгатова Н. Клеточные и системные механизмы действия пробиотиков. - Новосибирск, 2007. - 280 с.
6. Медведева О.А., Калуцкий П.В., Беседин А.В., Медведева С. К. Исследование пристеночной микрофлоры кишечника мышей в условиях аномального магнитного поля в норме и при экспериментальном дисбиозе // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2010. - № 2. -С. 15-20.
7. Нарциссов Р. П. Критерии лабораторной диагностики болезней // Лаб. дело. - 1964. - № 3. -С. 150-151.
8. Несвижский Ю.В., Богданов Е.А., Зверев В.В., Воробьев А.А. Микробиоценоз пристеночного муцина желудочно-кишечного тракта крыс с индуцированным дисбиозом // Журн. микробиол. - 2007. -№ 3. - С. 57-60.
9. Способ оценки функциональной активности ней-трофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия: методич. рекомендации / сост. М.Е. Виксман, А.Н. Маянский. - Казань, 1979. - 14 с.
10. Ткаченко Е.И., Суворова А.Н. Дисбактериоз кишечника. - СПб.: Спецлит, 2007. - 238 с.
11. Шубич М.Г. Выявление катионных белков в цитоплазме лейкоцитов с помощью бромфенолового синего // Цитология. - 1974. - № 10. - С. 13211322.
