CC BY
52
УДК 615.273.3+614.84
С. А. Никишин, И. Я. Моисеева, Л. В. Ионичева, О. А. Водопьянова, В. Е. Небольсин
ВЛИЯНИЕ ДИКАРБАМИНА НА КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ КРОВЕТВОРНОЙ ТКАНИ КОСТНОГО МОЗГА ПРИ КУРСОВОМ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОМ ВВЕДЕНИИ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО РАДИОГЕННОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ СИСТЕМЫ КРОВИ
Аннотация. Актуальнность и цели: изучение влияния на миелопоэз дикарба-мина в лечебно-профилактическом режиме введения в дозе 4 мг/кг в условиях экспериментального пострадиационного костномозгового синдрома у кроликов. Материалы и методы. Сформировано три группы животных. Группа № 1 (n = 10) являлась интактной. Животные групп 2 (n = 10), 3 (n = 10) подвергались однократному воздействию ионизирующей радиации. Животным группы 3 вводили препарат дикарбамин производства ОАО «ВалентаФарм» внутрь в дозе 4 мг/кг ежедневно пять раз до облучения и десять раз после облучения. Забор костного мозга проводили пунктированием подвздошной кости животных до начала эксперимента, на 3-и, 7-е, 10-е, 14-е, 21-е, 28-е сутки опыта. Результаты. Дикарбамин в ранние сроки после лучевого повреждения статистически значимо уменьшал глубину пострадиационного дефицита клеток, составляющих нейтрофильный, лимфоцитарный, моноци-тарный, эритрокариоцитарный и мегакариоцитарный ряды, в дальнейшем сокращал длительность пострадиационного дефицита клеток кроветворной ткани костного мозга путем нормализации процессов пролиферации и диф-ференцировки субпопуляций миелокароцитов. Дикарбамин обеспечивал высокий уровень защиты пролиферирующих кроветворных предшественников в ранние сроки после лучевого воздействия и сокращал период костномозговой постлучевой цитопении; протективное действие препарата охватывало все ростки кроветворения.
Ключевые слова: дикарбамин, костный мозг, пострадиационная динамика, кролики.
S. A. Nikishin, I. Ya. Moiseeva, L. V. Ionicheva, O. A. Vodop'yanova, V. E. Nebol'sin
INFLUENCE OF DICARBAMIN ON CELLULAR COMPOSITION OF BLOOD-FORMING TISSUES OF BONE MARROW AT COURSE HEALTH-CARE ADMINISTRATION IN EXPERIMENTAL RADIOGENIC BLOOD SYSTEM DAMAGE
Abstract. Background: to investigate the influence of Dicarbamin on myelopoiesis in a health-care dosing regimen in a dose of 4mg per kg in conditions of experimental post-radiation bone marrow syndrome of rabbits. Materials and methods.
3 groups of animals were formed. Group 1 (n = 10) was intact. Animals of groups
2 (n = 10), 3 (n = 10) were exposed a single impact of ionizing radiation. Daily animals from group no.3 were administered orally the drug Dicarbamin of «Valenta-Pharm» production in a dose of 4 mg per kg 5 times before and 10 times after exposure. The bone marrow puncture of animals ilium was carried out before the exper-
iment and at 3, 7, 10, 14, 21, 28 experiment day. Results. In the early period after radiation exposure Dicarbamin reduced statistically the intensity of post-radiation deficiency of cells forming neutrophil, lymphocyte, monocyte, erythrokaryocyte and megakaryocyte series, then decreased the duration of post-radiation blood-forming cells deficiency by normalization of proliferation and differentiation processes in myelokaryocytes subpopulations. Dicarbamin provided a high level of protection of proliferating hematopoietic precursors in the early period after radiation exposure and decreased the period of bone marrow post-radiation cytopenia. The protective effect of the drug embraced all hematopoietic stem cells.
Key words: dicarbamin, bone-marrow, post-radiation dynamics, rabbits.
Введение
Актуальной задачей фармакологии является разработка новых миело-протекторов, обладающих низкой токсичностью, возможностью длительного применения, способных уменьшать повреждение клеток крови, стволовых мультипотентных клеток костного мозга и ускорять восстановление гемопо-эза [1-3], что существенным образом расширило бы возможности химио- и радиотерапии. С этой точки зрения для нас представляет научный интерес новый отечественный препарат дикарбамин (ОАО «ВалентаФарм, Россия, МНН - имидазолилэтанамид пентандиовой кислоты), который ускоряет диф-ференцировку и функциональное созревание нейтрофилов и применяется в качестве средства сопровождения химиотерапии для снижения ее миелосу-прессивных эффектов [1, 2, 4, 5].
Материалы и методы
Исследование проведено в лаборатории кафедры «Общая и клиническая фармакология» Медицинского института Пензенского государственного университета. Эксперименты были выполнены на 30 половозрелых кроликах-самцах породы шиншилла массой 2,5-3,0 кг. Животных содержали на стандартном пищевом рационе вивария со свободным доступом к воде. Все манипуляции с животными проводились в соответствии с Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (ETSN 123, Страсбург, 18 марта 1986 г.) и были одобрены локальным этическим комитетом.
С учетом цели исследования было сформировано три группы животных. Группа 1 (n = 10) являлась интактной. Животные групп 2 (n = 10),
3 (n = 10) подвергались однократному воздействию ионизирующей радиации. Для моделирования лучевого повреждения проводилось облучение с помощью аппарата АГАТ-«С» разовой очаговой дозой 5 Гр, расстояние от источника ионизации до ионизируемой поверхности составляло 90 см, процентная доза равнялась 94 %, а максимальная доза облучения составила 5,31 Гр. Животным группы 3 вводили препарат дикарбамин производства ОАО «ВалентаФарм» внутрь в дозе 4 мг/кг ежедневно пять раз до облучения и десять раз после облучения. Для исследования костного мозга проводили пункцию подвздошной кости под местным обезболиванием 2,0 мл 2 % раствора новокаина при помощи асептической аспирации иглой Кассирского и шприцем (обезвоженными) до начала эксперимента, на 3-и, 7-е, 10-е, 14-е, 21-е, 28-е сутки. Из части полученного пунктата готовили мазки, другую - разводили для подсчета ми-
елокариоцитов и мегакариоцитов. Производили цитологический анализ мазков пунктата. Статистическую обработку результатов экспериментального исследования проводили с помощью пакета статистических программ: русифицированной версии программы STATISTICA 6.0 (StatSoft - Russia, 1999), BIOSTAT (S. A. Glantz, McGrawHill, перевод на русский язык - «Практика», 1998). Определялись основные статистические характеристики: среднее, стандартное квадратическое отклонение. Достоверность различий рассчитана с помощью t-критерия Стьюдента в случае равенства дисперсий, его модификации (t-критерий с раздельными оценками дисперсий) в случае неравенства дисперсий и с поправкой Бонферрони для множественных сравнений.
Результаты исследования
В костном мозге на третьи сутки после радиоактивного воздействия на фоне дикарбамина абсолютное количество миелокариоцитов статистически значимо сократилось с 16,01 ± 2 ,96*109/л до 10,50 ± 2,25*109/л, однако было в шесть раз выше такового показателя в группе интактных животных (табл. 1).
Затем в кроветворной ткани костного мозга началось интенсивное накопление клеток-предшественниц, с седьмых суток показатель уже не отличался от такового в группе интактных животных, удерживаясь в дальнейшем в пределах 12,50 ± 3,03*109/л - 58,60 ± 4,74*109/л. Классической пострадиационной динамики с опустошением кроветворной ткани после лучевого повреждения, транзиторным подъемом за счет задействования сохранных очагов кроветворения, повторным уменьшением общей клеточности отмечено не было. Абсолютное количество клеток-предшественниц в пробах оставалось на достаточно высоком уровне, статистически выше во всех контрольных точках такового в контрольной группе животных.
Численность мегакариоцитов после воздействия ионизирующей радиации на фоне дикарбамина сократилась в среднем вдвое в течение первой недели опыта (р < 0,05, р2 < 0,05). Затем наблюдалось восстановление мегака-риоцитарного ростка. Так, на седьмые сутки эксперимента абсолютное количество мегакариоцитов уже статистически значимо не отличалось от значения показателя в группе интактных животных и до конца эксперимента удерживалось на высоком уровне в пределах 111,23 ± 19,70*106/л - 181,25 ± 21,90*106/л. В контрольной группе первоначальный двухнедельный дефицит мегакариоцитов был значительно более глубоким.
Пострадиационное снижение митотической активности миелокариоци-тов на фоне дикарбамина на третьи сутки после облучения уменьшилось в два раза, но оставалось выше в три раза значения показателя в контрольной группе, составив 0,06 ± 0,01*109/л р < 0,05, р2 < 0,05) (рис. 1). На седьмой день опыта пролиферативная активность миелокариоцитов была полностью восстановлена - 0,09 ± 0,02*109/л (р\ = 0,531, р2 < 0,05). В дальнейшем интенсивность пролиферативных процессов не снижалась, оставалась на весьма высоком уровне - от 0,12 ± 0,02*109/л до 0,88 ± 0,07*109/л на различных этапах эксперимента. В контрольной группе животных отмечалось более длительное и более глубокое торможение митотической активности миелокарио-цитов (рис. 1).
Medical sciences. Theoretical and experimental medicine
Таблица 1
Пострадиационная динамика абсолютного количества клеток костного мозга кроликов при курсовом лечебно-профилактическом введении дикарбамина в дозе 4 мг/кг, М(У)
Показатель Сутки
3-є сутки 5-е сутки 7-е сутки 10-е сутки 14-е сутки 21-е сутки 28-е сутки
1 2 3 4 5 6 7 8
Миелокариоциты х 109/л 16,00 (3,41) 19,50 (3,41) 1 1,50 (4,83) 10,20 (2,34) 12,40 (2,80) 11,50 (2,19) 19,20 (2,76)
1,70(0,29)* 2,50 (0,34)* 2,00(0,34)* 3,00 (0,43)* 4,50 (0,63)* 84,00(12,63)* 26,00(5,20)*
10,50 (2,25)*# 15,40 (3,02)*# 14,40 (3,06)# 12,50 (3,03)*# 11,80 (3,02)# 58,60 (10,74)*# 35,30 (7,23)*#
Мегакариоциты х103/л 133,77(22,03) 200,00 (34,63) 120,00(16,12) 102,00 (22,45) 150,00 (23,50) 115,00(14,21) 174,00 (20,46)
32,10(5,88)* 25,00(4,98)* 27,78 (4,80)* 35,00 (4,68)* 45,89 (6,18)* 842,36 (103,59)* 491,67 (64,90)*
68,75 (8,1)*# 81,25 (8,1)*# 92,50 (7,9)*# 93,75 (8,8)* 111,25 (19,7)*# 181,25 (21,9)*# 133,75 (11,3)#
Митоз хЮ9/л 0,112(0,021) 0,098 (0,022) 0,115 (0,027) 0,112 (0,022) 0,112(0,019) 0,115 (0,011) 0,154 (0,013)
0,017 (0,011) * 0,025 (0,011) * 0,044 (0,009)* 0,060(0,078)* 0,090 (0,01) 1,978(0,443)* 0,390(0,066)*
0,063 (0,008)*# 0,092 (0,020)# 0,115 (0,021)# 0,163 (0,068)*# 0,194 (0,073)*# 0,879 (0,066)*# 0,565 (0,03)*#
Властные клетки Х10% 0,595 (0,021) 0,623 (0,018) 0,432 (0,013) 0,558 (0,075) 0,481 (0,040) 0,581 (0,067) 0,612(0,080)
0,120(0,016)* 0,180 (0,015) * 0,150(0,024)* 0,250(0,067)* 0,385 (0,058) 6,640 (1,50)* 0,720 (0,111)
0,422 (0,101)*# 0,546 (0,101)*# 0,578 (0,108)*# 0,409 (0,110)*# 0,266 (0,096)*# 1,849 (0,59)*# 1,495 (0,332)*#
№ 3 (27), 2013 Медицинские науки. Теоретическая медицина
University proceedings. Volga region
LO
oo
Продолжение табл.
1 2 3 4 5 6 7 8
Промиелоциты х109/л 0,986 (0,182) 1,365 (0,103) 0,690 (0,184) 0,816(0,155) 0,868 (0,147) 0,805 (0,171) 1,152 (0,130)
0,124 (0,084)* 0,185 (0,053)* 0,193 (0,046)* 0,253 (0,089)* 0,367 (0,094)* 4,768(0,540)* 0,239(0,041)*
0,367 (0,084)*# 1,371 (0,244)# 0,921 (0,073)*# 0,714 (0,14)# 0,703 (0,162)*# 4,098 (0,856) # 2,199 (0,433)*#
Миелоциты X 1 09/л 0,602 (0,098) 0,585 (0,096) 0,460 (0,085) 0,306 (0,087) 0,620 (0,095) 0,460 (0,068) 0,576 (0,091)
0,030(0,045)* 0,081 (0,070)* 0,168(0,097)* 0,211 (0,051)* 0,279 (0,059)* 2,996(0,430)* 0,551 (0,145)
0,346 (0,047)*# 1,037 (0,047)*# 0,563 (0,087)*# 0,436 (0,25)*# 0,463 (0,22)*# 2,565 (0,43)* 1,289 (0,175)*
Метамиелоциты х 109/л 0,587 (0,091) 0,780 (0,059) 0,575 (0,108) 0,612 (0,127) 0,744 (0,121) 0,460 (0,071) 0,960 (0,091)
0,100 (0,016)* 0,159 (0,045) * 0,173 (0,027)* 0,232 (0,041)* 0,395 (0,049)* 2,389 (0,294)* 0,500(0,067)*
0,237 (0,033)*# 0,806 (0,203)# 0,549 (0,087)# 0,425 (0,112)*# 0,425 (0,21)* 2,443 (0,422)* 1,257 (0,185)*#
Палочкоядерные нейтрофилы хЮ9/л 0,999 (0,120) 1,560 (0,074) 0,920 (0,112) 0,714(0,165) 0,868 (0,128) 0,920 (0,114) 1,536 (0,186)
0,090(0,012)* 0,130 (0,034) * 0,109(0,018)* 0,194 (0,028)* 0,231 (0,041)* 4,501 (0,720)* 0,753 (0,089)*
0,449 (0,056)*# 0,819 (0,216)*# 0,934 (0,218)# 0,724 (0,147)# 0,820 (0,207)# 4,749 (1,0 24)*# 2,139 (0,358)*#
Известия высших учебных заведений. Поволжский регион
Medical sciences. Theoretical and experimental medicine
Продолжение табл. 1
1 2 3 4 5 6 7 8
Сегментоядерные нейтрофилы ХІ0 /л 1,419(0,250) 2,535 (0,220) 1,380 (0,220) 1,428 (0,209) 1,488 (0,210) 1,495 (0,214) 2,304 (0,224)
0,190 (0,023)* 0,150 (0,034) 0,043 (0,006)* 0,094 (0,012)* 0,134 (0,024)* 2,490 (0,41)* 3,087 (0,540)*
0,616 (0,123)*# 2,172 (0,451)*# 1,426 (0,421)# 0,912 (0,231)# 0,812 (0,93)*# 6,900 (1,47)*# 4,037 (1,029)*#
Эозинофильные нейтрофилы х109/л 0,174 (0,024) 0,195 (0,031) 0,230 (0,011) 0,102 (0,018) 0,124 (0,022) 0,230 (0,016) 0,192 (0,011)
0,010 (0,001)* 0,028 (0,021) 0,027(0,005)* 0,036(0,003)* 0,048(0,010)* 0,720(0,094)* 0,279(0,045)*
0,087 (0,01)*# 0,022 (0,01)* 0,097 (0,025) *# 0,072 (0,022)*# 0,050 (0,066)* 0,624 (0,053)*# 0,069 (0,047)*#
Базофильные нейтрофилы х109/л 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0
0,105 (0,009)*# 0,184 (0,034)*# 0,140 (0,012)*# 0,051 (0,014)*# 0,301 (0,009)*# 2,584 (0,328)*# 0,206 (0,038)*#
Пронормобласты х 109/л 0,524 (0,125) 0,975 (0,105) 0,460 (0,089) 0,306 (0,076) 0,496 (0,069) 0,575 (0,105) 0,960 (0,194)
0,107(0,018)* 0,188 (0,045) 0,184 (0,020)* 0,248(0,041)* 0,328 (0,048)* 4,381 (1,06)* 1,298 (0,23)*
0,442 (0,067)# 0,522 (0,122)*# 0,519 (0,180)# 0,545 (0,0131)*# 0,440 (0,091)# 1,937 (0,432)*# 1,276 (0,409)*
LO
ID
№ 3 (27), 2013 Медицинские науки. Теоретическая медицина
University proceedings. Volga region
Продолжение табл. 1
1 2 3 4 5 6 7 8
Нормоциты базофильные х 109/л 1,588 (0,290) 0,975 (0,050) 0,460 (0,125) 0,612 (0,159) 0,744 (0,180) 0,460 (0,128) 0,768 (0,169)
0,08(0,018)* 0,094 (0,021) * 0,054 (0,012)* 0,097 (0,030)* 0,181 (0,029)* 4,624 (0,970)* 2,626 (0,780)*
1,434 (0,312)# 1,552 (0,342)*# 1,543 (0,35)*# 1,620 (0,26)*# 1,309 (0,69)*# 5,760 (0,52)*# 3,678 (0,809)*
Нормоциты полихроматофильные х 109/л 1,482 (0,2) 1,755 (0,05) 1,150(0,27) 0,816 (0,19) 0,868 (0,21) 1,150 (0,2) 1,728 (0,23)
0,220 (0,034)* 0,156 (0,059) 0,256 (0,033)* 0,411 (0,088)* 0,531 (0,079)* 9,188(1,47)* 3,668 (0,890)*
1,464 (0,34)# 1,406 (0,344)# 1,467 (0,65)*# 1,541 (0,808)*# 1,245 (0,83)*# 5,472 (1,73)* 3,396 (0,75)*#
Нормоциты оксифильные х109/л 2,683 (0,518) 3,120 (0,050) 1,610 (0,380) 1,224 (0,428) 1,860 (0,380) 1,610 (0,489) 2,688 (0,489)
0,210 (0,045)* 0,256 (0,059) 0,180 (0,026)* 0,267 (0,058)* 0,377 (0,056)* 5,453 (1,005)* 1,527 (0,238)*
2,586 (0,409)# 2,714 (0,807)# 2,656 (0,637)# 2,790 (0,606)*# 2,255 (0,319)# 5,914 (1,091)* 4,334 (1,307)*#
Моноциты х 109/л 0,210(0,021) 0,195 (0,045) 0,115 (0,028) 0,102 (0,018) 0 0,115 (0,023) 0,384 (0,048)
0,040 (0,005)* 0,038 (0,008)* 0,050 (0,009)* 0,065 (0,077)* 0,090(0,011) 2,481 (0,660)* 0,520(0,078)*
0,057 (0,017)*# 0,058 (0,015)*# 0,151 (0,090)*# 0,046 (0,011)*# 0,051 (0,015)# 2,225 (0,523)*# 0,789 (0,152)*#
Известия высших учебных заведений. Поволжский регион
Medical sciences. Theoretical and experimental medicine
Окончание табл. 1
1 2 3 4 5 6 7 8
3,746 (0,790) 4,290 (0,760) 2,415 (0,615) 2,346 (0,614) 2.976 (0,679) 2,530 (0,860) 4,224 (0,750)
Лимфоциты X 10% 0,470 (0,085)* 0,740 (0,078)* 0,537 (0,072)* 0,569(0,102)* 1,220(0,104)* 29,815 (3,070)* 9,553 (1,659)*
1,651 (0,401)# 1,941 (0,431)# 2,623 (0,482)*# 2,007 (0,431)*# 2,581 (0,480)# 8,810 (2,460)*# 6,417 (1,820)*#
0,208 (0,048) 0,195 (0,0340) 0,230 (0,038) 0,204 (0,025) 0 0 0,384 (0,032)
Плазмоциты х 10ч/л 0,030 (0,008)* 0,025 (0,004)* 0,028(0,005)* 0,038 (0,062) 0,042 (0,004) 0,843 (0,179) 0
0,048 (0,011)*# 0,111 (0,021)*# 0,140 (0,013)*# 0,114 (0,012)*# 0,088 (0,03)*# 0,489 (0,11)# 0,485 (0,101)
0,84 (0,02) 0,84 (0,01) 0,85 (0,02) 0,84 (0,016) 0,83 (0,011) 0,84 (0,02) 0,87 (0,03)
Индекс созревания нейтрофилов (ИСН) 0,91 (0,2) 1,51 (0,20) * 3,54(0,11)* 2,42 (0,12)* 2,88 (0,16)* 1,61 (0,11)* 0,34(0,03)*
0,85 (0Д9) 0,97 (0,20)*# 1,08 (0,21)*# 0,86 (0,09)# 0,96 (0,08)*# 1,05 (0,18)*# 0,67 (0,12)*#
0,65 (0,012) 0,65 (0,013) 0,64 (0,016) 0,65 (0,02) 0,66 (0,01) 0,65 (0,1) 0,65 (0,1)
Индекс созревания эритроцитов (ИСЭ) 0,55 (0,14) * 0,59 (0,12) 0,63 (0,1) 0,66 (0,12) 0,65 (0,11) 0,62 (0,12) 0,57 (0,06)*
0,64 (0,12) * 0,69 (0,12) * 0,67 (0,12) * 0,67 (0,12) * 0,67 (0,12) * 0,67 (0,12) * 0,60 (0,12) *
Примечание. Обычный шрифт - группа интактных животных; курсив - облучение без коррекции; жирный шрифт - облучение с введением дикарбамина; различия статистически значимы относительно: * — р\< 0,05 - интактной группы; # — р2 < 0,05 - группы с облучением без лекарственной коррекции.
№ 3 (27), 2013 Медицинские науки. Теоретическая медицина
*■
#
= t#
■f-f *11 * Aif * **# * * птан im _ im n nn„e imrS гкяШ m
исход 3-е сут 5-сут 7-е сут 10-сут 14-е сут21-е сут 28-сут
□ ,1-та:т-з1е Boc.-y^e-.is Воблучение + Д 4 мг х 15-кратно
Рис. 1. Динамика количества митозов в пунктате костного мозга кроликов при радиационном воздействии и фармакологической коррекции дикарбамином.
Различия статистически значимы относительно: * -р < 0,05 интактной группы;
# - р < 0,05 контрольной группы
В группе с использованием дикарбамина у всех животных через три дня после лучевого повреждения сократилось абсолютное содержание бласт-ных клеток от 0,59 ± 0,07*109/л до 0,42 ± 0,10*109/л.
На седьмой день опыта этот пострадиационный дефицит был ликвидирован полностью, в пробах определялось 0,58 ± 0,08*109/л бластных клеточных форм (0,43 ± 0,01*109/л у интактных животных; р1 < 0,05, р2 < 0,05). На 21-е сутки отмечено максимальное значение показателя, который составил 1,84 ± 1,50*109/л; р1 < 0,05, р2 < 0,05), в конце эксперимента - 1,50 ± 0,12*109/л (0,62 ± 0,08*109/л у интактных животных; рх < 0,05, р2 = 0,001). В миелограм-ме существенные изменения имели место только в конце периода наблюдения. В группе контроля отмечался более продолжительный период послелу-чевого дефицита бластных клеток в сочетании с двукратным повышением их относительного содержания.
Абсолютное количество костномозговых промиелоцитов на фоне ди-карбамина на третьи сутки после лучевого воздействия было меньше первоначального, равняясь 0,38 ± 0,08*109/л (0,99 ± 0,12*109/л у интактных животных, р! < 0,05, р2 < 0,05), однако уже на пятые сутки статистически значимо не отличалось от такового в группе интактных животных, сохраняясь на высоком уровне до конца наблюдения. В миелограмме наблюдалось постепенное медленное уменьшение процентного содержания данных клеток от 6,25 ± 1,12 до 2,85 ± 0,15 %. С аналогичной закономерностью развивались пострадиационные изменения абсолютного и относительного содержания в кроветворной ткани костного мозга миелоцитов и метамиелоцитов. При сравнении полученных данных с результатами группы контроля было отмечено, что на фоне дикарбамина существенно уменьшается глубина и продолжительность пострадиационной цитопении, устраняется феномен повторного падения абсолютных показателей миелокариоцитов пролиферативного гранулоцитарного пула.
Дикарбамин препятствовал снижению уровня лейкоцитов на третьи сутки опыта, в дальнейшем способствовал более интенсивному восстановлению показателя (рис. 2).
50 40
-ЕЕ30 020
исход 3-е сут 5-сут 7-е сут 10-сут 14-е сут21-е сут 28-сут шинтактные а облучение Эоблучение + Д 4 мг х 15-кратно
Рис. 2. Динамика абсолютного количества лейкоцитов в костном мозге кроликов при радиационном воздействии и фармакологической коррекции дикарбамином. Различия статистически значимы относительно:
* - р\ < 0,05 интактной группы; # - р2 < 0,05 контрольной группы
В частности, абсолютное количество костномозговых палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов на фоне дикарбамина было меньше значения показателя в группе интактных животных на третьи и пятые сутки опыта (р1 < 0 ,05, р2 < 0,05), однако уже на седьмые сутки не отличалось от него статистически значимо, составив соответственно 0,93 ± 0,22*109/л (р1 = 0,899, р2 < 0,05) и 1,43 ± 0,42*109/л (р1 = 0,743, р2 < 0,05). В дальнейшем до конца наблюдения у всех кроликов показатели оставались на достаточно высоком уровне. В миелограмме относительное содержание данных клеток было стабильным на всех этапах эксперимента. В группе контроля отмечался более глубокий и более продолжительный (до трех недель) период послелучевого дефицита зрелых гранулоцитов в костном мозге.
ИСН через трое суток после повреждения и использования дикарбамина составил 0,85 ± 0,19 (р1 > 0,05, р2 > 0,05), оставался до конца эксперимента в пределах 0,67 ± 0,12 - 1,08 ± 0,21. Таким образом, наблюдаемая динамика ИСН свидетельствовала о нормализации нарушенных вследствие облучения процессов дифференцировки гранулоцитов на фоне дикарбамина.
Период пострадиационной цитопении для клеток эозинофильного ряда продолжался в течение двух недель после лучевого повреждения с максимальной глубиной 0,02 ± 0,01*109/л на пятые сутки. В миелограмме существенных сдвигов не отмечалось. В серии без коррекции цитопенический эффект был более выражен и более продолжителен (до трех недель). Динамика абсолютного количества костномозговых клеток базофильного ряда была волнообразной с наименьшим значением на десятые сутки наблюдения, составив 0,05 ± 0,01*109/л.
Дикарбамин удерживал количество клеток эритроидного рядя на протяжении всего эксперимента не ниже уровня интактных животных (рис. 3).
В частности, абсолютное число пронормобластов удерживалось в течение всего периода наблюдения на высоком уровне, статистически значимо
снизилось относительно значения показателя в группе интактных животных лишь на пятые сутки наблюдения, составив 0,52 ± 0,12х109/л (0,96 ±
0,11х109/л у интактных животных, р1 < 0,05, р2 < 0,05) (табл. 1). В миелограм-ме на третий день относительное количество данных клеток было уменьшено в два раза по отношению к исходным данным. В дальнейшем до 14-х суток процентное содержание пронормобластов превышало первоначальное, во второй половине эксперимента постепенно снизилось практически до исходного. Аналогичные данные были получены при определении абсолютного и относительного содержания в костном мозге базофильных нормоцитов (см. табл. 1). Таким образом, дикарбамин заметно снижал степень и тяжесть пострадиационного абсолютного дефицита пронормобластов и базофильных нормоцитов кроветворной ткани костного мозга.
25
исход 3-е сут 5-сут 7-е сут 10-сут 14-е сут 21-е сут 28-сут
ш-и-тактн ые воблучеьие ^облучение + Д 4 мг х 15-кратно
Рис. 3 Динамика абсолютного количества клеток эритроидного ряда в костном мозге кроликов при радиационном воздействии и фармакологической коррекции дикарбамином. Различия статистически значимы относительно:
* - р1 < 0,05 интактной группы; # - р2 < 0,05 контрольной группы
Применение дикарбамина позволило полностью устранить абсолютную и относительную костномозговую цитопению нормоцитов полихромато-фильной генерации (см. табл. 1). Показатель удерживался в течение всего периода наблюдения на высоком уровне, статистически значимо снижался относительно значения такового в группе интактных животных лишь на пятые сутки наблюдения, составив 1,41 ± 0,342 х 109/л (1,76 ± 0,50х109/л у интактных животных, р! < 0,05, р2 < 0,05), на 21-е и 28-е сутки превышал абсолютное количество нормоцитов полихроматофильной генерации у интактных животных 3,5 и 2 раза р < 0,05, р2 < 0,05). В миелограмме процентное содержание полихроматофильных нормоцитов также постоянно было выше исходного значения. Цитопенический период в группе контроля продолжался до конца третьей недели наблюдения с десятикратным дефицитом.
Закономерности пострадиационных изменений абсолютного и относительного количества оксифильных нормоцитов после использования дикар-бамина были в целом аналогичны таковым других миелокариоцитов (см. табл. 1). Показатель удерживался в течение всего периода наблюдения на высоком уровне, статистически значимо не снижался относительно значения такового в группе интактных животных. У животных контрольной группы после радиоактивного воздействия отмечались значительные потери клеток данной генерации в костном мозге.
На фоне использования дикарбамина существенных изменений индекса созревания эритрокариоцитов не отмечалось.
Динамика абсолютного количества костномозговых промоноцитов и моноцитов в опытной группе после облучения была волнообразной: снижение показателя наблюдалось на 3-и, 5-е, 10-е, 14-е сутки, подъем - на 7-е, 21-е и 28-е сутки (см. табл. 1). В миелограмме на всех этапах эксперимента относительное содержание клеток моноцитарного ряда было не ниже первоначального или выше в 1,5-2 раза. В контрольной группе без коррекции наблюдалась глубокая двухнедельная костномозговая промоно- и моноцитопения.
В лимфоцитарном ряду на третьи и пятые сутки после облучения абсолютное количество клеток снизилось с 3,75 ± 0,78*109/л до 1,65 ± 0,31*109/л и 1,93 ± 0,31*109/л соответственно (табл. 1). На седьмой день содержание в пунктате пролимфоцитов и лимфоцитов составило статистически значимо не отличалось от такового в группе интактных животных, составив 2,62 ± ± 0,48*109/л (р\ = 0,430, р2 < 0,05). На 21-е сутки численность пролимфоцитов и лимфоцитов существенно превысила первоначальное значение, равняясь 8,81 ± 2,70*109/л. Относительное количество данных клеток на третьи сутки от интактных животных достоверно не отличалось, с 7-го по 14-й день уменьшилось до 11,74 ± 1,76 % (23,77 ± 3,80 % у интактных кроликов). В конце третьей недели после облучения показатель равнялся 21,47 ± 3,25 %, в конце наблюдения у 80 % животных вновь понизился до 13,28 ± 2,10 %. По сравнению с результатами серии без коррекции дикарбамин обеспечивал достаточную защиту лимфоцитарного ростка костномозговой кроветворной ткани.
Первоначальная реакция проплазмоцитов и плазмоцитов на лучевое повреждение в опытной группе выражалась в снижении абсолютного содержания этих клеток в пунктате в течение двух недель наблюдения, показатель варьировал от 0,05 ± 0,01*109/л до 0,14 ± 0,01*109/л, превышал значение такового в контрольной группе животных (р1 < 0,05, р2 < 0,05) (табл. 1). В дальнейшем абсолютное количество проплазмоцитов и плазмоцитов в пробах кроветворной ткани костного мозга было достаточно высоким: 0,49 ± ± 0,11х109/л - 0,49 ± 0,10*109/л. Относительное содержание данных клеток в течение всего периода наблюдения было уменьшено в среднем вдвое по отношению к первоначальному. Сравнительно с результатами контрольной группы у получавших препарат кроликов абсолютный дефицит плазматических клеток был менее глубоким.
Выводы
1. Дикарбамин обеспечивал высокий уровень защиты пролиферирующих кроветворных предшественников в ранние сроки после лучевого воздействия, что выражалось в статистически значимом уменьшении глубины и длительности пострадиационного дефицита клеток кроветворной ткани костного мозга.
2. Дикарбамин способствовал нормализации процессов пролиферации и дифференцировки субпопуляций миелокароцитов; протективное действие препарата охватывало все ростки кроветворения.
Список литературы
1. Окончательные результаты кооперативных исследований препарата дикарбамин в качестве гемапротектора при комбинированной химиотерапии у онкологических больных / М. Б. Бычков, Н. С. Бесова, С. В. Топчиева и др. // Вопросы онкологии. -2009. - Т. 55, № 5. - С. 627-633.
2. Влияние дикарбамина на костномозговое кроветворение в условиях экспериментального костномозгового синдрома / И. Я. Моисеева, Л. В. Ионичева, С. А. Никишин, А. И. Зиновьев, В. Е. Небольсин // Вопросы онкологии. - 2012. - Т. 58, № 5. -С. 663-666.
3. Яр моненко, С. П. Радиобиология - ответы на запросы времени / С. П. Ярмо-ненко // Медицинская радиология и радиационная безопасность. - 2006. - Т. 51, № 1. - С. 8-14.
4. Механизмы протективного действия «Дикарбамина» в отношении системы крови при цитостатическом воздействии / В. Е. Небольсин, В. В. Жданов, Г. Н. Зюзьков и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010. - Т. 150, № 9. -С. 312-316.
5. Модификация миелосупрессивного действия противоопухолевых цитостатиков с помощью перорального гематокорректора дикарбамина (экспериментальное исследование) / И. Д. Трещалин, Д. А. Бодягин, Э. Р. Переверзева и др. // Вопросы онкологии. - 2009. - Т. 5, № 6. - С. 769-744.
References
1. Bychkov M. B., Besova N. S., Topchieva S. V. et al. Voprosy onkologii [Problems of
oncology]. 2009, vol. 55, no. 5, pp. 627-633.
3. Moiseeva I. Ya., Ionicheva L. V., Nikishin S. A., Zinov'ev A. I., Nebol'sin V. E. Voprosy onkologii [Problems of oncology]. 2012, vol. 58, no. 5, pp. 663-666.
3. Yarmonenko, S. P. Meditsinskaya radiologiya i radiatsionnaya bezopasnost’ [Medical radiology and radiation safety]. 2006, vol. 51, no. 1, pp. 8-14.
4. Nebol'sin V. E., Zhdanov V. V., Zyuz'kov G. N. et al. Byulleten’ eksperimental’noy bi-ologii i meditsiny [Bulletin of experimental biology and medicine]. 2010, vol. 150, no. 9, pp. 312-316.
5. Treshchalin I. D., Bodyagin D. A., Pereverzeva E. R. et al. Voprosy onkologii [Prob-
lems of oncology]. 2009, vol. 5, no. 6, pp. 769-744.
Никишин Сергей Александрович
врач, Пензенский областной онкологический диспансер (Россия, г. Пенза, пр. Строителей, 37а)
E-mail: nikishins@rambler.ru
Моисеева Инесса Яковлевна доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой общей и клинической фармакологии, Медицинский институт, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40)
E-mail: moiseeva_pharm@ mail.ru
Nikishin Sergey Aleksandrovich Doctor, Penza Province Oncological Centre (37a Stroiteley avenue, Penza, Russia)
Moiseeva Inessa Yakovlevna Doctor of medical sciences, professor, head of sub-department of general and clinical pharmacology,
Medical Institute, Penza State University (40 Krasnaya street, Penza, Russia)
Ионичева Любовь Владимировна
кандидат медицинских наук, доцент, кафедра физиологии человека, Медицинский институт, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40)
E-mail: dvilv@mail.ru
Водопьянова Ольга Александровна старший преподаватель, кафедра общей и клинической фармакологии, Медицинский институт, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40)
E-mail: ol.vodopjanova@yandex.ru
Небольсин Владимир Евгеньевич генеральный директор,
ООО «Фарминтерпрайсез»
(Россия, г. Москва,
пр. Вернадского, 86, стр. 5)
E-mail: nve1970@mail.ru
Ionicheva Lyubov' Vladimirovna
Candidate of medical sciences, associate professor, sub-department of human physiology, Medical Institute, Penza State University (40 Krasnaya street, Penza, Russia)
Vodop'yanova Ol'ga Aleksandrovna Senior lecturer, sub-department of general and clinical pharmacology, Medical Institute, Penza State University (40 Krasnaya street, Penza, Russia)
Nebol'sin Vladimir Evgen'evich CEO, “Farminterprises” Ltd.
(86 bldg 5 Vernadsky avenue, Moscow, Russia)
УДК 615.273.3+614.84 Никишин, С. А.
Влияние дикарбамина на клеточный состав кроветворной ткани костного мозга при курсовом лечебно-профилактическом введении в условиях экспериментального радиогенного повреждения системы крови / С. А. Никишин, И. Я. Моисеева, Л. В. Ионичева, О. А. Водопьянова, В. Е. Небольсин // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2013. - № 3 (27). - С. 34-47.
