CC BY
150
ЗАЩИТА РАСТЕНИЙ
Известия ТСХА, выпуск 2, 2010 год
УДК 635.153
ВИРУСНЫЕ И ВИРОИДНЫЕ БОЛЕЗНИ КАРТОФЕЛЯ НА ДАЛЬНЕМ ВОСТОКЕ И МЕТОДЫ ИХ ДИАГНОСТИКИ В СЕМЕНОВОДСТВЕ
Р.В. ГНУТОВА, К.А. МОЖАЕВА
Приводя тся данные о выявлении, географическом распространении и вредоносности вирусов и вироида веретеновидности клубней картофеля, поражающих картофель в ДФО. Рассматриваются основные мероприятия по выращиванию семенного материала картофеля, свободного от этих инфекций, которые сочетают полевые методы отбора лучших клонов картофеля и лабораторные. Приведены современные методы иммунохимической и молекул рной диагностики вирусов и вироида, используемые в семеноводстве картофеля.
Ключевые слова: вирусы картофеля, странение, семеноводство.
В настоя щее время в России осуществляется проект, направленный на улучшение качества семенного картофеля, важнейшей частью которого является создание банка здоровых сортов картофеля. Он будет поддерживаться в относительно чистых фитосанитарных услови х северных территорий в сочетании с современными лабораторными методами диагностики вирусов и других фитопатогенов, поражающих картофель, основанных на молекул рной и им-мунохимической основе. Это позволит повысить урожайность картофеля.
Известно, что при вегетативном способе размножения картофель подвержен вырождению в основном вследствие быстрого накоплени вирусов, поэтому первостепенное значение приобретают возделывание вирусоустойчивых сортов и использование эффективных технологий в семеноводстве.
К сожалению, сейчас контроль качества семенного картофел элитных
ВВКК, методы идентификации, распро-
и последующих репродукций недостаточно эффективен, поскольку прово-дитс в основном путем визуальной оценки. Формирование цивилизованного рынка семенного картофел в России обя зательно должно включать лабораторную диагностику вирусов и других патогенов картофеля, например, вироидных и бактериальных болезней. Это вл етс ключевым звеном в производстве оздоровленного семенного картофел . Особенно опасна тенденци наблюдаетс в св зи с отсутствием в стране эффективного контроля «тяжелых форм» вирусного и вироидного заражения (усиленно проя вля ющихся в последние годы) и отсутствием мониторинга и прогноза численности насекомых-переносчиков вирусов на картофеле.
В мире описано около 40 вирусов, поражающих картофель [ 18], но только 6-9 из них являются экономически значимыми из-за широкого рас-пространени и вредоносности. К таким вирусам относят: вирус скручи-
вани листьев картофел (ВСЛК), У-, А-, М-, Х- и Б-вирусы картофеля (УВК, АВК, МВК, ХВК и БВК). Именно против них, а вернее их штаммов, вызывающих «тяжелые формы»> вирусных заболеваний, направлен весь комплекс меропри тий по защите картофеля. Но «легкие формы»> поражения слабопатогенными штаммами ХВК и БВК при смешанной инфекции с АВК и УВК в результате синергического действия также могут значительно повышать вредоносность этих вирусов и резко снижать урожайность. «Тя желые формы»> заболевания картофел вызывают некоторые некротические штаммы УВК. Поскольку большинство вирусов передаютс инфицированными клубнями, то даже в первой репродукции урожайность может снизиться на 25%.
При выращивании продовольственного картофел боротьс с вирусными болезнями можно регулярным приобретением сертифицированно-
го семенного картофел и посадкой вирусоустойчивых сортов. Без регул рной покупки сертифицированного посадочного материала рентабельное производство картофеля невозможно.
Методика
Семеноводство картофел на «без-вирусной»> основе я вля ется важным приемом повышения урожайности и улучшения качества клубней. Удаление больного растения картофеля — основа в системе борьбы с вирусами. Для оздоровления картофеля различных сортов, представляющих ценность по ряду признаков, но пораженных вирусами, используют сочетание полевых методов отбора лучших клонов и лабораторных методов оздоровлени семенного материала методами культуры апикальной меристемы, термотерапии и подавление репликации вирусов химическими препаратами [15]. Однако меристем-ные растения не всегда освобождают-с от вирусов. Без вирусологического
контрол с помощью иммунофермент-ного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР) получить без-вирусный материал нельз . Отмечена неодинакова эффективность вышеназванных методов при оздоровлении различных сортов от разных вирусов и даже штаммов одного вируса. Меристемы обычно свободны от ВСЛК, УВК и АВК, в меньшей степени — от МВК и ХВК [14]. Поскольку размножение в клоновом питомнике длится несколько лет, то риск появления новых инфекций значителен. Все этапы получени безвирусного семенного материала обязательно должны сопровождаться анализами, по крайней мере, с помощью ИФА. Метод культуры апикальной меристемы не освобождает картофель также и от вироида веретеновидности клубней картофеля (ВВКК), поэтому наличие его должно контролироваться на всех этапах получени безвирусного материала с использованием биотеста, электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ), ПЦР и других методов.
Впервые в России в 80-е годы прошлого столети метод культуры апикальной меристемы был внедрен на Дальнем Востоке. За эти прошедшие три дес тилети этим методом в сочетании с термо- и химиотерапией здесь было оздоровлено несколько дес т-ков сортов картофел . Дл выращи-вани элиты и суперэлиты картофел было передано более сотни пробирочных растений и микроклубней [3].
Визуального осмотра посадок семенного материала или дел нок в грунт- контроле дл анализа на поражение вирусами недостаточно из-за латентной инфекции или маскировки вирусных симптомов. Это наиболее характерно не только дл слабопатогенных штаммов ХВК и БВК, но и штаммов некротической группы УВК. Кроме того, таким способом невозможно точно определить групповую принадлежность штамма вируса, поэтому применение ИФА и ПЦР очень
актуально. Показано, что европейские штаммы БВК не вызывают ощутимых потерь урожая картофеля, но выя в-ленна на родине картофел в Перу андийская группа штаммов БВКАпй вл етс очень вирулентной и значительно вли ет на продуктивность картофеля. БВКАпй считается карантинным объектом в Европе и выя вить его можно только с использованием ПЦР [15].
В последние три дес тилети были идентифицированы новые штаммы УВК, природа поя вления которых пока не я сна. В Америке они известны давно и в Европу они завезены, скорее всего, с селекционным материалом. Первоначально в 50-е годы прошлого века там было отмечено широкое распространение некротических штаммов (группа УВКК), в 70-е годы — УВККТ¥, а в 90-е — YВКNW (штамм впервые был обнаружен на сорте Wilga). Два последних штамма вируса отличаютс особой вредоносностью, вызывая некроз клубней в конце вегетации, в результате картофель тер ет свою товарную ценность. Сейчас известно около десятка штаммов УВК, свойства некоторых хорошо изучены. Так, штамм УВКет¥ по антигенным свойствам неразличим от штаммов УВК^ Отличия можно определить только ПЦР. Штамм YВКNW по антигенным свойствам также относится к УВК^ а по симптомам и по результатам ПЦР — к обычной группе штаммов УВКО. Поэтому идентификаци штамма вируса очень важна не только для селекции на устойчивость, но и в семеноводстве. Из изложенного следует, что сейчас, например, не только для УВК, но и БВК и ХВК недостаточно вы вить сам вирус в семенном материале, целесообразно это делать на уровне его штамма.
Потер сортом со временем первоначальной продуктивности и других хоз йственно ценных свойств вл -етс результатом прогрессирующего
накоплени при репродукции растений не только вирусных, вироидных, но и грибных и бактериальных патогенов. Система безвирусного семеноводства основываетс на оздоровлении сортов и ускоренном размножении исходного семенного материала в услови х, исключающих повторное заражение, что позволяет успешно решать многие проблемы семеноводства картофел . При выращивании безвирусного семенного картофел основные меропри ти направлены на удаление источников инфекции и прерывание цепи растение-резерватор (естественные растения-хозяева — дикая флора, сорняки, некоторые овощные и декоративные растения) ^ насекомые-переносчики ^ инфицируемое растение. От взаимо-действи этих составл ющих зависит экономический ущерб, наносимый вирусами. Огромное значение при этом имеет способ передачи вируса, который вли ет на результат инфи-цировани картофел . В отличие от грибных и бактериальных патогенов, заражение которыми происходит в результате пр мого взаимодействи между патогеном и растением, для инфицировани картофел вирусом, как правило, необходим вектор (насекомое или другой организм). Так, ВСЛК, АВК, МВК, УВК передаются на картофель главным образом дес т-ками видов тлей (чаще всего — персиковой), но есть и другие переносчики, например, свободно живущие в почве нематоды или почвенные грибы. Вирусы также распространяются посредством прививок, механического контакта (ХВК, ВТМ), с помощью инфицированной пыльцы и насто -щих сем н и др.
Фитопрочистка дл выбраковки больных растений и посторонних сортов до сих пор не утратила своего значени и вл етс одной из основ в современном безвирусном семеноводстве картофел . Поскольку вирусная инфекция может маскироваться,
лабораторная апробация клубней после уборки семенного картофеля обя зательна. В схему сертификации семенного картофеля введены методы, основанные на выявлении ви-русспецифических белков с помощью ИФА и нуклеиновых кислот — ПЦР и молекулярной гибридизацией. Они позвол ют вы вл ть вирусы и вирои-ды как в я вной, так и скрытой форме про влени .
Итак, сейчас фитопрочистка дополняется ИФА и ПЦР, а не заменяет-с ими. В насто щее врем в странах с развитым картофелеводством лабораторна диагностика вирусов осущест-вля ется в основном с помощью ИФА и его различных модификаций. Метод позвол ет количественно определ ть вирусы в экстракте зараженного сока до 1 нг/мл. Важнейшее достоинство ИФА — его производительность, которая дает возможность проанализировать дес тки и сотни образцов за короткое время (двое суток). Сейчас иммуноспецифические реагенты, диагностические наборы и приборы для ИФА производя т многие широко представленные на рынке фирмы. Однако методы ИФА и ПЦР достаточно сложны и дорогостоя щи. Их использование имеет смысл только на самых начальных стади х семеноводческого процесса — при получении исходных оздоровленных растений и контроле генбанка, поддерживаемого на искусственных питательных средах (in vitro). В то же время опыт показывает, что экономия на этом этапе может привести к несравнимо более высоким потер м на последующих стади х размножения семенного материала. Поэтому применение лабораторных методов контрол за качеством семенного картофел не только оправдано, но и абсолютно необходимо.
В насто щее врем дл лабораторной проверки оригинального семенного материала (микрорастений, миниклубней, первого полевого по-колени из миниклубней) и супер-
элиты используютс новые технологии, такие как иммунохроматогра-фи на тест-полосках, молекул рно-гибридизационный анализ (МГА) в сочетании с ИФА на мембранах (МГА-ИФА), ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) в сочетании с МГА-ИФА [4, 5]. Технология МГА-ИФА позволя ет выя вить до 100 молекул вироидной РНК на клетку и может быть применена и для диагностики вирусов картофел . Получены кДНК-копии РНК р да вирусов: УВК, АВК, БВК, МВК, ВСЛК, ВМВК, ВАМК и клонированы рекомбинантные плазмиды со вставками кДНК этих вирусов.
Облада высочайшей чувствительностью, ПЦР имеет в то же время такие недостатки, как высокая стоимость анализов и трудность идентификации амплифицированной вирусной нуклеиновой кислоты из-за при-сутстви артефактных зон. Поэтому в МГУ разработатываетс комбинированная схема ОТ-ПЦР-МГА-ИФА. Совокупность этих методов позволит обнаруживать экспериментально одиночные молекулы РНК-патогенов. Разработчики советуют дл анализа большого числа образцов проводить вы вление вируса в два этапа: сначала более дешевым способом ИФА или МГА-ИФА для выбраковки я вно зараженных образцов; на втором этапе использовать ПЦР и более мощный комбинированный способ ОТ-ПЦР-МГА-ИФА. Дальнейшее совершенствование технологий молекул рной диагностики патогенов будет определяться техническим упрощением каждого этапа технологии, начиная от подготовки образца к анализу и заканчива регистрацией полученных данных, чтобы адаптировать их дл массового применени . Однако даже при упрощении технологий эти методы трудоемки и сложны, требуют высококвалифицированного персонала и дорогосто щего оборудования и реактивов, что ограничивает
их применение. Сейчас в условиях практического сельского хозяйства РФ и развити частного предпринимательства существует потребность в простых и доступных дл широко круга методах, позвол ющих проводить анализы в мало оборудованных лабораториях, полевых и даже домашних услови х. Дл этих целей предложен метод хроматографии. В результате совместных усилий кафедры вирусологии МГУ и лаборатории иммунобиохимии Института биохимии РАН были разработаны тест-полоски (пористые мембранные носители) дл экспресс-диагностики пока только ХВК и УВК. На них в определенных местах нанесены иммуноградиенты (специфические антитела или конъюгаты с окрашенными коло-идными частицами и др.), способные специфически взаимодействовать с гомологичным вирусом. При погружении полоски в экстракт, содержащий вирус, последний образует иммунный комплекс, встречаясь со специфическими антителами и формиру окрашенную зону. Таким образом о наличии вируса и его концентрации свидетельствует количество и интенсивность окрашенных зон, образовав-шихс на тест-полоске. Дл контрол на тест-полоске имеетс контрольна зона. Результат анализа может быть получен через 5 мин, минимально определ ема концентраци вируса до 0,2 мкг/мл [4]. Пока стоимость планшета с тест-полоской довольно высока, но авторы работают над снижением стоимости метода.
Результаты исследований
На Дальнем Востоке наиболее хорошо изучен видовой и штаммовый состав вирусов картофел в Приморском, Хабаровском (вдоль реки Амур) краях и Амурской обл., но хуже — в отдаленных от материка территориях: на Сахалине, полуострове Камчатка и в Магаданской обл. Маршрутные обследовани показа-
ли, что вирусы на картофеле встреча-ютс во всех регионах возделывани картофеля [11]. Идентифицировано 11 вирусов, которые чаще всего перенос тс тл ми (таблица). Помимо тлей дальневосточные изол ты вирусов на картофель перенося т 28-точечная картофельная коровка, полевой клоп и некоторые виды цикадок [7].
Успешно внедрить на Дальнем Востоке семеноводство картофел на безвирусной основе помог простейший при постановке метод иммунодиагностики — капельна агглютинаци . Разработанные нами методические подходы по изучению антигенных свойств капсидных белков [2] многие годы служили основой для получе-ни поликлональных антисывороток ко всем изучаемым дальневосточным изоля там вирусов, поражающим картофель.
Своеобразие различных почвенноклиматических условий в Дальневосточном федеральном округе (ДФО) вли ет на инфекционный фон в агроценозах. Самый агрессивный фон отмечен в Приморском крае. Темпы нарастания вирусных инфекций с каждым последующим полевым поколением довольно высокие. Это снижает семенные качества картофеля уже после двух-трех вегетаций, а у восприимчивых сортов — даже после первой. В последние годы суровое проявление вирусных инфекций отмечаетс чаще всего в коллекционном материале и в массовых товарных репродукция х картофеля [13]. На Сахалине в 2007 г. во врем полевых обследований мы наблюдали подобную ситуацию. В условиях полуострова Камчатки по результатам фитосанитарного мониторинга, проведенного нами в 2005 и 2008 гг., наибольшее распространение имеют ХВК и МВК. Часто вирусная инфекция носит латентный характер. Так, в посадках оздоровленного от вирусов картофеля, латентная форма заражения составляет для ХВК —
Вирус (симптомы на картофеле) Штамм вируса Вредоносность, %
Вирус мозаики люцерны, калико* (желто-белая мозаика сформировавшихся листьев) — Невысокая
Вирус огуречной мозаики (хлоротичность и крапчатость листьев) Обычный Невысокая
А-вирус картофеля (складчатая мозаика) — 5-20
У-вирус картофеля (мозаичность и полосатая мозаика) Обычный, некротический 30-90
М-вирус картофеля (мозаичное закручивание листьев) Среднепатогенный 25-40
Б-вирус картофеля (крапчатая или обыкновенная мозаика, бессимптомно) Среднепатогенный 0-20
Вирус аукуба мозаики картофеля (яркая желтая пятнистость листьев) — 20-70
Х-вирус картофеля (обыкновенная мозаика, бессимптомно) Таежный — сильно патогенный, уссурийский — среднепатогенный 10-15
Вирус погремковости табака (различные типы мозаик и деформация листьев) Картофельный 5-20
Вирус табачной мозаики (желтая пятнистость листьев) Картофельный 0-15
Вирус скручивания листьев картофеля (хлороз и сильное скручивание листьев вокруг центральной жилки) 20-70
* Штаммовую принадлежность вируса не устанавливали.
6%, для БВК — 2% [12]. По данным [12], тля не играет существенной роли в переносе вирусов, так как из-за низких температур и короткого вегетационного периода численность ее на Камчатке незначительна.
Принимая во внимание положительный опыт многих стран и России, в насто щее врем в ДФО дл вы-ращивани семенного картофел ре-комендуютс северные территории,
центральна и юго-восточна части Камчатского кра с более суровым климатом, поздней затяжной весной, частыми обильными осадками, посто нными и сильными ветрами и более прохладными почвами, что подавля ет размножение и лёт тлей-переносчиков. Вегетационный период
у растений на Камчатке очень короткий. Характерна дл северных широт долгота дня создает хорошие услови дл быстрого роста и развития растений, особенно в начальный период вегетации, относительно низкий фон насекомых-переносчиков, что вполне благопри тно дл выра-щивани качественного безвирусного семенного материала.
Впервые характеристика вироидов как класса фитопатогенов была дана в конце 1960-х годов [16]. Патоген я в-ляется низкомолекулярной, кольцевой, с большим количеством спаренных оснований, инфекционной РНК, репликаци которой осуществл етс полностью за счет растени -хоз ина. Вироиды — очень контагиозные и
устойчивые к действию физических и химических факторов патогены. Наиболее типичным и хорошо изученным я вля ется ВВКК. В ря де стран с теплым климатом он может значительно снижать продуктивность картофеля. В Америке и большинстве стран Западной Европы вироид — объект внутреннего и внешнего карантина. В бывшем СССР он встречался в основном в Поволжье и на Украине и был возбудителем так называемой «готики» картофеля. Это заболевание было ограничено распространенным и мало вли ло на продуктивность картофел . В насто щее врем ВВКК — распространенный
патоген, вредоносность которого возрастает в случае массового инфицирования картофеля, особенно при последующих репродукциях зараженных клубней [8]. Обычно наблюдается его смешанна инфекци с вирусами.
Для идентификации вироидов применяют, по крайней мере, 4 метода: биотест, когда в качестве растений-индикаторов ВВКК используют ско-полию китайскую (Scopolia sinensis Hemsl.) и томат (Lycopersicum escu-lentum L.) чаще всего сорта Rutgers. На инокулированых листь х скопо-лии по вл ютс местные некрозы на 14-18-й день и системная реакция на 30-40-й день. На томатах системная реакция развивается через 2-3 недели. Электрофорез в ПААГ используют, потому что вироидная РНК имеет специфическую электрофоретическую подвижность. Наиболее надежные результаты получают при применении возвратного электрофореза. При гибридизации нуклеиновых кислот (вироидной РНК с кДНК) используют как радиоактивную, так и нерадиоактивную метку (биотин, диен-платина и др.). ПЦР вл етс наиболее чувствительным, но и доро-госто щим методом.
В начале 90-х годов в ряде регионов России было отмечено резкое снижение продуктивности безвирус-
ного картофеля, полученного с использованием метода апикальной меристемы. Было доказано, что причиной снижения урожайности я вля ется инфицирование картофел ВВКК,
освобождение от которого не предусматривалось данной технологией [6].
На Дальнем Востоке, в Приамурье заболевание картофел с симптомами поражения вироидом было описано И.Н. Абрамовым еще в 50-е годы прошлого века [1]. В 1975 г. на юге Приморского кра вироидна инфекци по характерным для заболевания симптомам была отмечена на ботве и клубнях сорта Ора, позднее в образцах безвирусного семенного кар-тофел сорта Пауль Вагнер (клубни, меристема), а затем выявлен и на Камчатке на сорте Повировец [9]. Дл идентификации дальневосточных изолятов ВВКК, выявленных в 1989-1996 гг., использовались биотест, электрофорез в ПААГ и молекулярная гибридизация с кДНК [6]. ВВКК был выделен из сортов Ора, Сантэ, Невский, Луговской, Весна и меристемных растений сортов Пауль Вагнер, Фаленский, Луговской и Невский. С помощью электрофореза в ПААГ были проанализированы 18 ме-ристемных линий картофел разных сортов НПО «Уссури»> Приморского кра и в 10 лини х и в клубн х сорта Синева. В 2004 г. ВВКК был выделен из клубней сорта Весна белая . В на-сто щее врем ВВКК широко распространен в ДФО [8, 10].
В 2006 г. ВНИИФ возобновил изучение ВВКК по программе МНТЦ, в т.ч. его изол тов (штаммов) из разных регионов России. Патоген иден-тифицируетс с использованием ПЦР и молекул рной гибридизации. В 2006-2007 гг. ВВКК выя влен в разных районах ДФО: Амурской обл., Приморском и Хабаровском кра х, на Камчатке. Изол ты ВВКК выделены из сортов Адретта, Аксамит, Андроид, Жуковский ранний, Удача, Ветеран, Санте, Приморский 12, кото-
рые имели характерные симптомы на клубнях: веретеновидность, груше-видность, трещины, выпуклые глазки и др. У двух дальневосточных изол тов определена нуклеотидна последовательность вироидной РНК [17].
Выводы
1. Вироид веретеновидности клубней картофеля распространен не только во многих европейских регионах РФ, но и на Дальнем Востоке и остаетс опасным или потенциально опасным патогеном, поражающим картофель.
2. Основными мероприятиями, которые могут сдержать распространение вироидной инфекции, являются: применение технологий, исключающих инфицирование и распространение патогена как при использовании культуры апикальной меристемы, так и при клоновом отборе; улучшение фитосанитарного состо ни посадок картофеля, в т.ч. при размножении меристем-ных растений в теплицах; посто нный контроль за реализацией семенного
картофеля особенно из регионов, где уже выявлен ВВКК.
3. Для получения безвирусного семенного материала в современной практике оригинального и элитного семеноводства картофел примен ют два основных способа. Первый — культура апикальной меристемы с отбором лучших меристемных линий; их клональное размножение методом черенкования в лабораторных условиях; выращивание безвирусных микроклубней в вегетационных сооружениях (теплицы, гидропонные модули и др.). Второй — отбор здоровых исходных растений и клонов в полевых услови х на основе фитопрочисток и современных технологий тестировани листовых и клубневых проб на наличие вирусной, вироидной и бактериальной инфекций с помощью молекул рных (ПЦР) и иммунохими-ческих (ИФА) методов.
4. Современным требовани м почвенно-климатических условий дл вы-ращивани элитного семенного карто-фел в ДФО соответствуют территории центральной и юго-восточной части Камчатского кра .
Библиографический список
1. Анненков Б.Г. Развитие исследований по вирусологии и оздоровлению картофеля в ДальНИИСХ // В кн.: Аграрная наука — с.-х. производству Дальнего Востока. Владивосток: Дальнаука, 2005. С. 397-404.
2. Гнутова Р.В. Серология и иммунохимия вирусов растений. М.: Наука, 1993.
3. Гнутова Р.В. Стратегия подходов изучения вирусов, поражающих картофель в Дальневосточном регионе // С.-х. биология, 2005. N 1. С. 46-54.
4. Дрыгин Ю.Ф. и др. Высокочувствительные технологии молекулярной диагностики вирусных и вироидной инфекций картофел // Картофелеводство России: актуальные проблемы науки и практики. М.: ФГНУ: «Росинформагротех», 2007. С. 17-25.
5. Завриев С.К., Рязанцев Д.Ю., Кошкина Т.Е., Абрамов Д.Д. Эффективный и экономичный метод чувствительной диагностики и идентификации патогенов картофеля // Там же. С. 17-25.
6. Кастальева Т.Б. и др. Вироид веретеновидности клубней и оздоровление картофеля // Вестник РАСХН. 1992. N 3. С. 22-24.
7. Лебедева Е.Г., Дьяконов К.П., Немилостива Н.И. Насекомые — переносчики вирусов растений на Дальнем Востоке // Владивосток: ДВ книжное изд. 1982.
8. Можаева К.А., Кастальева Т.Б., Гирсова Н.В. Вироид веретеновидности клубней в России: распространение, диагностика, элиминирование из семенного материала // Матер. конф. «Научное обеспечение и инновационное развитие картофелеводства». РАСХН, ВНИИКХ. М., 2008. Т. 2. С. 48-58.
9. Романова С.А. и др. Вироид веретеновидности клубней картофеля на Дальнем Востоке / / Проблемы фитовирусологии на Дальнем Востоке. Владивосток: Дальнаука, 199б. С. 41-46.
10. Романова С.А., Леднева В.А, Волков Ю.Г. Современное состояние зараженности картофеля вирусными и вирусоподобными заболеваниями на Дальнем Востоке // В кн.: Аграрная наука- с.-х. производству Дальнего Востока. Владивосток: Дальнаука, 2005. С. 387-389.
11. Рейфман В.Г., Гнутова Р.В., Романова С.А. Физико-биологические свойства вирусов, поражающих картофель, и меры оздоровления семенного материала на Дальнем Востоке // С.-х. биология, 1996. N 3. С. 93-106.
12. Ряховская Н.И., Власенко Г.П., Гайнатулина В.В., Стружкина Т.М. и др. Система ведения агропромышленного производства Камчатской области / / П-К: Изд. РАСХН ДВНМЦ, 2005.
13. Толмачева И.А. , Анненков Б.Г. Фитопатогенные вирусы на картофеле в Приамурье и защита новых сортов от вирусного поражения // В кн.: Теоретические и прикладные аспекты растениеводства на Дальнем Востоке. Хабаровск: ДВНИИСХ, 2003. С. 102-111.
14. Трофимец Л.Т. и др. Безвирусное семеноводство картофеля // Рекомендации. М.: Росагропромиздат, 1990.
15. Шпаар Д. и др. Картофель (ред. Д. Шпаар) // М.: ИД ООО «ДЛВ Агродело». 2007.
16. Diener T.O. Viroid and viroid diseases // Wiley Interscience.- N.-Y., Toronto, 1979.
17. Girsova N. et al. Molecular structure of Russian isolates of potato spindle tuber viroid // Zemdirbyste-Agriculture, 2008. Vol. 95. N 3. P. 266-269.
18. Salazar L. Potato viruses after the XX centry: effects, dissemination and their control // Mater. Partici pants in Pyongyang Intern. Scientific Simpos. on Potato, Peohangan, DPRK, 2003. P. 35-42.
Рецензент — д. б. н. Ф.С. Джалилов
SUMMARY
Data on determination, geographical spreading and harmfulness of potato viruses and potato spindle tuber viroid, which infect potatoes in the Far East Region of RF are presented. Major measures to produce potato seeds free from infection, including clone selection and laboratory elimination are discussed. Up-to date immunochemical and molecular methods of virus and viroid diagnosis are described.
Key words: potato viruses, BBKK, identification methods, spreading, seed-growing.
Гнутова Раиса Васильевна — д. б. н., Биолого-почвенный институт Дальневосточного отделения РАН. Эл. почта: ibbs@eastnеt.febras.ru.
Можаева Карина Алексеевна — к. с.-х. н., Всероссийский институт фитопатологии РАСХН. Эл. почта: mozhaeva@vniif.rosmail.com.
