CC BY
76
УДК 615.22./322.074:581.192
А. П. Потанина (асп.), С. Р. Хасанова (к.фарм.н., доц.), Н. В. Кудашкина (д.фарм.н., проф.)
Валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в растительном сборе «Кардиофит»
Башкирский государственный медицинский университет, кафедра фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии 450000, Уфа, ул. Ленина, 3; тел. (347) 712285, e-mail: svet-khasanova@yandex.ru
A. P. Potanina, S. R. Khasanova, N. V. Kudashkina
Validation of method for quantitative determination of total flavonoids in the plant species «Oardiophytum»
Baskir State Medical University 3, Lenina Str., 450000, Ufa, Russia; ph. (347) 712285, e-mail: svet-khasanova@yandex.ru
Статья посвящена вопросам валидации методики количественного определения суммы флавоноидов в растительном сборе «Кардиофит», разработанном на кафедре фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии Башкирского государственного медицинского университета. Валидация методики проводилась по показателям линейности, повторяемости, воспроизводимости и правильности методики. Установлено, что разработанная методика спектрофотометри-ческого количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин является правильной и воспроизводимой. Это позволит включить ее в проект фармакопейной статьи и контролировать качество данного сбора.
Ключевые слова: валидация; «Кардиофит»; количественное определение; линейность; нормативная документация; повторяемость; прецизионность; рутин; спектрофотометрия; флаво-ноиды.
Создание национальных стандартов качества лекарственных средств на основе объективных методов — гарантия эффективности и безопасности лекарственных средств. Установление соответствия качества лекарственных средств регламентируемым нормам предлагает применение различных аналитических методов. При этом окончательный вывод о качестве лекарственного средства в значительной степени зависит от качества самого метода, который должен отвечать определенным требованиям 1.
Общепринятые в мире рекомендации по производству лекарств содержат требования к методам испытаний, которые используются
The article deals with the validation techniques of quantitative determination of the amount of flavonoids in the plant collection «Cardio-phyitum», developed at the Department of Pharmacognosy with kurom botany and herbal medicine framework of the Bashkir State Medical University. Validation procedures performed in terms of linearity, repeatability, reproducibility and accuracy of methods. Found that the method developed spectrophotometric quantification of the amount of flavonoids in terms of routine is correct and reproducible. This will enable it to project pharmacopoeia article and control the quality of the collection.
Key words: «Cardiophyitum»; flavonoids; linearity; precision; quantification; regulatory documentation; repeatability; routines; spectro-photometry; validation.
для оценки соответствия фармацевтической продукции установленным спецификациям в отношении точности и достоверности, поэтому необходимо проведение пригодности или вали-дации тех или иных аналитических методов для предполагаемого их применения в оценке качества лекарственных средств. Валидация фармакопейных методов проводится на этапе подготовки нормативной документации на новые лекарственные средства и при пересмотре их в дальнейшем. Оценка аналитических методов в зависимости от предполагаемого применения в фармакопейном анализе по параметрам валидации служит основой для формирования системного подхода к выбору методов
Дата поступления 03.09.13
оценки количества лекарственного средства и повышения уровня его стандартизации, что не может не отразиться на качестве нормативной документации, а, следовательно, и на качестве фармацевтической продукции 1.
Целью настоящей работы является проведение валидации методики количественного определения суммы флавоноидов в растительном сборе «Кардиофит», разработанном на кафедре фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии Башкирского государственного медицинского университета. Для данного сбора была разработана методика количественного определения суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофотомерии с
комплексообразующей добавкой в пересчете 2
на рутин .
Материалы и методы исследования. Ва-
лидация методики проводилась на спектрофотометре Shimadzu иУ-1800 при длине волны 402 нм по показателям линейности, повторяемости, воспроизводимости и правильности методики 3. Определение линейности проводили на 5 уровнях концентраций от теоретического содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин в сборе (рис. 1). Растворы готовили путем разбавления аликвоты и увеличения аликвоты для измерения количественного содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин в растворах, имеющих концентрацию 50, 75, 100, 125 и 150%. Повторяемость методики определяли на одном образце в 6 повтор-ностях (табл. 1). Определение воспроизводимости методики выполняли два аналитика. Исследование проводили на 3 образцах в 3 повторностях (табл. 2). Правильность методики устанавливали путем измерения количественного содержания суммы флавоноидов в растворах, полученных путем добавления необходимого количества стандарта к исследуемому раствору для концентраций 115, 140, 175 % в пересчете на рутин и определения критерия приемлемости (табл. 3). Он представляет собой средний процент восстановления при использовании растворов заданных концентраций, скорректированных на 100%, и его средняя величина должна находиться в пределах 100±5 %.
Результаты и их обсуждение
Критерием приемлемости линейности является коэффициент корреляции, если его величина не ниже 0.99 (рис. 1).
0,117 0,178 0,218 0,29 0,36
Оптическая плотность (Д)
Рис. 1. Определение линейности методики
Критерий приемлемости повторяемости методики выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не должно превышать 10%. Он составил 9.2%, что свидетельствует о прецизионности методики в условиях повторяемости (табл. 1).
Таблица 1
Содержание флавоноидов в зависимости от повторяемости методики
Повторяемость Содержание флавоноидов, %
1 2.68
2 2.34
3 2.33
4 2.97
5 2.55
6 2.66
Среднее значение 2.58
Относительное 9.3
стандартное
отклонение, %
Критерий приемлемости воспроизводимости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не должно превышать 15%. Он составил в среднем 8.7%, что указывает на прецизионность методики в условиях воспроизводимости (табл. 2).
При определении правильности методики в разработанной методике критерий приемлемости находился в пределах 93.4—105.5 %, и его средняя величина составила 100±4.83 % (табл. 3).
Таким образом, нами проведена валидаци-онная оценка методики количественного определения суммы флавоноидов в сборе «Кардио-фит» по линейности, воспроизводимости, повторяемости и правильности. Установлено, что разработанная методика спектрофотометри-ческого количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин является правильной и воспроизводимой, что позволяет включить ее в проект фармакопейной статьи и позволит контролировать качество данного сбора.
Таблица 2
Содержание флавоноидов в зависимости от воспроизводимости
Повторность Аналитик Содержание флавоноидов, %
Образец 1 Образец 2 Образец 3
1 1 2.68 1.89 2.13
2 2.34 1.97 2.16
3 2.33 1.92 2.09
4 2 2.96 2.32 2.57
5 2.54 2.11 2.16
6 2.66 2.28 2.28
Среднее значение 2.58 2.08 2.23
Отклонение ,% 9.2 8.9 7.9
Таблица 3
Определение правильности методики
Объем экстракта в аликвоте, мл Содержание флавоноидов в аликвоте, мг Добавлено ГСО рутина, мг Ожидаемое содержание, мг Полученное содержание, мг Ошибка, (отн., %)
0.5 0.3289 0.5 0.8289 0.7828 -0.00461 (5.5%)
1 0.6578 0.5 1.1578 1.2343 +0.0765 (6.6%)
1.5 0.9867 0.5 1.7367 1.6945 -0.0422 (2.4%)
Среднее значение 100± 4.83%
Литература
1. Арзамасцев А. П., Садчикова Н. П. , Харитонов Ю. Я.// Фармация.- 2006.- №4.- С.8.
2. Потанина А. П., Хасанова С. Р., Кудашкина Н. В. // Баш. хим. ж.- 2013.- Т. 20, №2.- С. 61.
3. Евдокимова О. В.// Фармация.- 2008.- №7.-С.14.
References
1. Arzamastsev A. P. Sadchikova N. P., Kharito-nov Y. Y. Pharmacy.— 2006.— no.4.— P.8.
2 Potanina A. P. Khasanova S. R., Kudashkina N. V. Bash. khim. zh.- 2013.- V. 20, no.2.- P. 61.
3 . Evdokimova O. V. Pharmacy.— 2008.- no.7.-
P.14.
