CC BY
104
обзоры литературы
УДК 616.36-008.64
Х.П. Монголов, А.Н. Плеханов, А.и. товаршинов
ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ГЕПАТОЦИТОВ ПРИ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ: ОТ ЭКСПЕРИМЕНТА К КЛИНИКЕ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
ГП РБ «Бурят-Фармация» (Улан-Удэ) Бурятский филиал НЦРВХ СО РАМН (Улан-Удэ)
В настоящем обзоре освещаются успехи использования для профилактики и лечения острой печеночной недостаточности, алло- и ксеногенных гепатоцитов донора, а также указываются, существующие в настоящее время проблемы, трансплантации, гепатоцитов и. других клеток печени.
Ключевые слова: гепатоциты, печеночная недостаточность, лечение
TRANSPLANTATiON HEPATOCYTES AT HEPATiC iNSUFFiCiENCY: FROM EXPERiMENT TO CLiNiC (LiTERATURE REViEW)
H.P. Mongolov, A.N. Plekhanov, A.I. Tovarshinov
GP RB «Buryat-Pharmacy» (Ulan-Ude) Buryat Branch of SC RRS SB RAMS (Ulan-Ude)
This article describes successful application of donor's allo-and xenogenic isolated, hepatocytes for prevention and treatment of hepatic insufficiency. The article also points at present-day problems concerning transplantation of hepatocytes and other hepatic cells.
Key words: hepatocytes, hepatic failure, treatment
Известно, что печеночная недостаточность может осложнять течение не только заболеваний гепато-панкреатодуоденальной зоны, но и других органов и систем организма. Имеется описание случаев молниеносной печеночной недостаточности при миллиарном туберкулезе, раке легкого, болезни Альцгеймера и другой патологии [33].
По данным ВОЗ, смертность от хронической печеночной недостаточности, занимает пятое место среди других заболеваний, а от острой печеночной недостаточности (ОПН) достигает 70 — 90 % [25, 30]. Клиническое применение традиционных методов временной поддержки функции печени (гемодиализ и перитонеальный диализ, перекрестное кровообращение с человеком или бабуином, экстракорпоральное подключение гомо- и гетеропечени, плазмаферез, гемосорбция, лимфосорбция, обменное переливание крови и плазмы и др.) не всегда приносит желаемые результаты.
По мнению ряда исследователей [7, 12, 48], наиболее перспективным направлением в лечении печеночной недостаточности является трансплантация изолированных ксено- или аллогепа-тоцитов.
Принципиально трансплантация гепатоцитов близка к вспомогательной трансплантации доли печени и отличается от нее технической простотой вмешательства, экономным расходованием материала, использованием криоконсервированных клеток. Она может рассматриваться как вспомога-
тельный метод подготовки пациента к ортотопиче-ской трансплантации печени [9]. В США ежегодно около 5000 человек нуждаются в трансплантации печени по тем или другим причинам, но менее чем четверти таких больных выполняют спасительную операцию. Остальные пациенты, находящиеся в «листе ожидания», умирают из-за отсутствия совместимой донорской печени [53]. В Германии, Англии, Франции в год около 15000 пациентов умирают, не дождавшись операции [47]. Дефицит качественных донорских органов, рост числа пациентов в «листе ожидания», большая стоимость операций, разнообразные послеоперационные осложнения заставляют университеты и фирмы заниматься трансплантацией гепатоцитов как альтернативным методом пересадке целого органа.
Как известно, гепатоциты составляют 90 — 95 % массы и 2/3 объема популяции клеток печени. В них содержится 98 % митохондрий печени, поэтому в энергетическом и функциональном отношении они наиболее важны в метаболизме органа [4].
В настоящее время не существует общепринятой методики получения изолированных гепатоцитов. Методы получения изолированных печеночных клеток предусматривают двухэтапную перфузию с целью разрушения межклеточных контактов [40]. Оценка жизнеспособности изолированных клеток печени по окраске трипановым синим, основанная на проникновении красителя через поврежденную клеточную мембрану, пока-
зала, что количество жизнеспособных гепатоцитов стабильно составляет 60 — 80 % [37].
В эксперименте и в клинике было доказано, что белково-синтетическая функция печени также сохранялась в изолированных гепатоцитах. Так, после их инкубации в течение 7 суток в альгинате кальция были выявлены синтез и секреция протромбина, плазменного протеина, холестерола, ацилтрансферазы и холинэстеразы [11]. Также отмечена способность культивируемых гепатоцитов синтезировать ДНК и а-фетопротеин [4].
Результаты исследований показали, что трансплантированные гепатоциты включаются в метаболические и детоксицирующие процессы [21], нормализуют биохимические показатели, снижают деструкцию в органе, а также благоприятствуют развитию репаративных процессов в печени реципиента. Это достигается путем изменения гуморальных и молекулярных механизмов за счет секреции факторов пролиферации, что также является критерием оценки функциональной активности изолированных гепатоцитов [51]. Важным в познании природы синтеза фактора роста явился факт взаимодействия не паренхиматозных клеток печени с гепатоцитами при совместной их культивации [31].
Исследователями была произведена оценка жизнеспособности изолированных гепатоцитов на основании общепринятых морфологических и биохимических тестов. При этом они вводили взвесь печеночных клеток внутрисосудисто и вну-трибрюшинно крысам с моделированной острой печеночной недостаточностью [2].
При исследовании функциональной активности полученных изолированных клеток была выявлена высокая скорость эндогенного дыхания, подтверждающая сохранившиеся энергетические и функциональные свойства гепатоцитов [5]. При инкубации изолированные клетки были способны потреблять О2, синтезировать глюкозу из лактата, конъюгировать свободный билирубин, связывать аммиак с последующим превращением его в мочевину, синтезировать и накапливать гликоген, связывать кортикостероиды и фенобарбитал цитохромом Р-450 (т.е. биотрансформировать ксенобиотики), производить кетоновые тела из жирных кислот. Кроме того, содержание адениловых нуклеотидов в изолированных гепатоцитах было выше, чем в изолированной перфузируемой печени [6, 19].
Как in vivo, так и in vitro зарегистрирован детоксицирующий эффект суспензии микросомальных ферментов, полученной из изолированных гепатоцитов. Ферментативная оксидация позволила превратить высокотоксичный жирорастворимый эндотоксин диметилсульфоксид в нетоксичное водорастворимое соединение этилметилсульфида и диметилсульфида, а также отмечена глюкурони-зация фенола [52].
В некоторых публикациях отмечена эффективность использования не целых гепатоцитов, а их ферментных микросомальных систем [50].
В других исследованиях доказано, что при острой печеночной недостаточности более выраженный
клинический эффект достигается использованием свежевыделенных, а не криоконсервированных изолированных гепатоцитов. Их жизнеспособность оценивается на основании теста с трипановым синим и составляет 40 — 50 % [6]. Вышесказанное диктует необходимость использования изолированных гепатоцитов с достаточно высоким уровнем сохранности функционально-метаболических характеристик. В зависимости от характера и тяжести заболевания требования к функциональному состоянию и количеству изолированных гепатоцитов могут варьировать и быть не столь строгими.
В настоящее время разрабатываются два направления использования изолированных гепатоцитов для лечения печеночной недостаточности: трансплантация гепатоцитов и их экстракорпоральное подключение. В резюме симпозиума по острой печеночной недостаточности Национального института здоровья США среди других перспективных методов лечения, наряду с трансплантацией печени были перечислены трансплантация ксено- и аллогенных гепатоцитов, экстракорпоральное подключение гепатоцитов. Есть прямые указания на то, что только чужеродные функционирующие гепатоциты могут обеспечивать эффективную поддержку печени реципиента [12, 18].
Большинство авторов считают, что наиболее эффективным является применение изолированных гепатоцитов в экстракорпоральных системах [1, 7, 26]. Более того, в случаях, когда ортотопи-ческая трансплантация печени недоступна из-за ограниченности ресурсов или по другим причинам, пересадка изолированных гепатоцитов или 3 — 6дневное подключение пациентов с острой печеночной недостаточностью к колонке с «искусственной печенью» дает время для поиска подходящего донорского органа [17].
Таким образом, применение экстракорпоральных биоискусственных поддерживающих систем способствует восстановлению функции печени пациента, и позволяют выиграть время перед орто-топической трансплантацией печени [17].
Применение ксеногенных изолированных гепатоцитов в «искусственной печени» является методом выбора при острой печеночной недостаточности, если исключается риск инфицирования пациента. Так, одним из преимуществ «искусственной печени» является отсутствие необходимости проведения иммуносупрессии у пациентов [14]. С другой стороны вид терапии с центрифужным способом требует значительного количества изолированных гепатоцитов (до 250 — 500 мл густой взвеси клеток), специального оборудования и обученного персонала. Он может вызывать иммунные осложнения при повторном использовании с образованием свободных иммунных комплексов.
Уже через 8 — 12 часов инкубации в перфу-зионных системах отмечено, так называемое, «утомление печени», что проявлялось уменьшением метаболической активности гепатоцитов [44]. Для обеспечения жизнедеятельности клеток в искусственной системе необходимы стабильная
температура (37 — 38 °С), строгий баланс ингредиентов в перфузате и высокое рО2, то есть должен сохраняться эффект, так называемого, «ненасытного метаболизма печени» [17].
Одной из трудных задач при применении гемо-сорбционной системы является надежная фиксация гепатоцитов в сорбционной колонке [3].
Применение сохраненных изолированных печеночных клеток дает возможность выполнять их трансплантацию от одного донора нескольким реципиентам в течение короткого времени. Для клинического применения изолированных гепа-тоцитов необходимо создание банка клеток, чтобы разобщить во времени забор и выделение клеток с их применением.
Среди существующих способов хранения суспензии изолированных гепатоцитов на первый план выходит консервация гепатоцитов, улучшение ее техники [41, 45]. Наиболее приемлемой для создания банка изолированных гепатоцитов оказалась криоконсервация клеток в жидком азоте. При низкотемпературном хранении (—196 °С), практически не развивается процесс повреждения клеток из-за полного прекращения обменных процессов в них. Это делает возможные сроки хранения больших количеств суспензии изолированных гепатоцитов практически неограниченными.
Современное развитие методов криозащиты существенно уменьшило повреждение клеток [5]. В частности, среди консервирующих растворов предпочтение отдается раствору UW, эмбриональной бычьей (телячьей) сыворотке, DMSO. Этот метод обеспечивает жизнеспособность 90 % дифференцированных первичных человеческих гепатоцитов через 8 месяцев после криоконсервации, что подтверждено тестом с трипановым синим. Так, подвергнутые криоконсервации изолированные клетки в сравнении с фрагментами ткани печени показали отсутствие существенных различий как в морфологическом строении, так и в их биохимической функции. Криоконсервированные клетки синтезировали глюкозу, мочевину и протромбин [23].
Использование этих клеток в клинике у больных с острой и хронической печеночной недостаточностью выявило высокий лечебный эффект [8].
Примечательно, что, несмотря на использование в опытах человеческих гепатоцитов, консервированных в течение 4 недель при температуре —80 °С, они проявляли свои функциональные свойства в полном объеме [34]. Применение криоконсер-вированных изолированных ксеногепатоцитов у пациентов с острой печеночной недостаточностью и обострением хронических заболеваний печени позволило долговременно поддерживать и обеспечивать синтетическую и детоксицирующую функции печени, пока не восстановилась печень реципиента. Указанная методика показала превосходную выживаемость пациентов, ожидавших трансплантацию печени, чего не отмечалось в группе с обострением хронических заболеваний печени [20].
Несмотря на низкую приживаемость донорских гепатоцитов в печени или селезенке, они размно-
жаются и формируют устойчивые ростки новой паренхимы в матриксе селезенки или печени крыс с острой печеночной недостаточностью. Количество пересаженных клеток печени увеличивалось в 7 раз между 3—14 днями после трансплантации. То есть, печень как бы вновь «заселяется» гепатоцитами, хотя для перепрофилирования плазматических мембран и увеличения массы и количества новых гепатоцитов нужно определенное время, которым будет определяться стратегия лечения [35]. Для увеличения эффективности имплантации донорских гепатоцитов создают условия повышенной регенерации гепатоцитов реципиента стимуляцией апоптоза или частичной ишемии органа [36].
В эксперименте была разработана модель ОПН у свиней, путем обратимой хирургической ишемии. При этом 77 % животных погибли от печеночной комы через 22,5 ± 1,9 часа от начала ишемии. В анализах отмечалось прогрессивное снижение фибриногена, тромбоцитов, протромбинового времени, нарушение пяти из семи факторов свертывания крови. Некроз печеночных клеток составил у выживших животных 74 ± 4,7 %, у погибших от печеночной комы — 86 ± 5,5 %. Данная модель может быть использована для количественной оценки использования трансплантации гепатоци-тов у человека [10].
Инкапсулированные изолированные алло- и ксеногенные гепатоциты, трансплантированные в брюшину после 95 % резекции печени у крыс, снижали смертность до 39 и 36 % соответственно и сохранялись в организме в течение 2 месяцев после трансплантации [52]. Введение в селезенку 2 х 107 гепатоцитов в 0,3 мл среды DMEM за 24 часа до резекции 90 % печени увеличило выживаемость крыс, значительно увеличило отношение веса остаточных долей печени к весу тела, улучшило биохимические показатели через 24 часа после гепатэктомии. Гепатоциты активно выделяли глюкозо-6-фосфатазу [16]. Внутриселезеночная трансплантация 2 х 106 OUMS — 29 (клонированная культура высокодифференцированных человеческих гепатоцитов) защитила животных от гипераммониемии и связанной с ней печеночной энцефалопатии, значительно увеличило выживаемость при 90 % резекции печени у крыс [38].
После индукции в течение 4 недель декомпенси-рованного цирроза печени на фоне CCL4 выполнялась трансплантация изогенных гепатоцитов крысы в селезенку, внутрибрюшинно, внутрибрюшинная трансплантация гомогената изогенных гепатоцитов крысы, трансплантация изогенных клеток костного мозга и введение в селезенку среды DMEM. Во всех группах, кроме группы с трансплантацией гепато-цитов в селезенку, снижалась масса тела и уровень сывороточного альбумина. Протромбиновое время, уровень общего билирубина, сывороточного аммиака были значительно ближе к нормальным показателям в этой группе. Выживаемость животных составила от 15 до 128 дней [32].
Ранее отмечено, что эмбриональная ткань печени крысы богата клетками, которые являются
предшественниками гепатоцитов. Они высоко пролиферативны, восприимчивы к ретровираль-ной трансдукции, выживают и функционируют во взрослой печени, если имеется печеночный регенеративный стимул [З9]. Интрапортально трансплантированные фетальные гепатоциты синтезировали существенное количество белка при стимуляции фактором роста гепатоцитов [4З].
Также было показано, что фетальные гепато-циты могут быть успешно пересажены в селезенку реципиента с формированием через 4 — 10 недель после трансплантации балкоподобных структур в красной пульпе, а к 6—10 неделе определялись ци-тохромы P 450LaW, P 4501А1 , P 45011В1 , P 450р, P 450 HLp без любой предшествующей индукции [22].
Изолированные эмбриональные гепатоциты на основе хитозана, обработанном эндотелиальным фактором роста (ECGF), были пересажены крысам в подкожно-жировую клетчатку паховой области. Хитозан использовался как структурное подобие гликозаминогликанам, которые играют ведущую роль в процессе деления, дифференцировке и морфогенезе клетки. Имммуногистохимическим анализом было показано разрастание пересаженных гепатоцитов в течение 2 недель с формированием подобия печеночной ткани. Напротив гепатоциты, пересаженные без предварительного ECGF-стимулированного ангиогенеза погибали через 1 сутки после трансплантации. Этим было доказано, что хитозан, как биологическая матрица, имеет хорошие свойства для приживаемости трансплантированных клеток печени, а кроме того адекватная васкуляризация важна для выживаемости гепатоцитов в эктопических очагах [56].
В эксперименте на зародышах приматов и ягнят была показана относительно безопасная трансплантация через пупочную вену криоконсервированных эмбриональных, преобразованных генетически ретровирусом гепатоцитов, в объеме 1—2 x 107 клеток. После введения отмечалось сосудистый спазм, брадикардия у 2 зародышей, которые погибли. При дальнейшем гистохимическом исследовании и методом П^ не выявлено пересаженных клеток в печени, однако выявлены пересаженные гепатоциты в легком, головном мозге, надпочечнике, плаценте [28]. Тем самым, увеличивая количество пересаживаемых клеток и используя эффективные вирусные векторы (ретровирусы мышиный, птичий, свиной и ДНК-вирусы). Это может быть использовано для внутриутробной коррекции многих наследственных заболеваний печени [44].
Последние исследования показывают значимость трансплантации гепатоцитов для генной терапии ex vivo наследственных гепатаргий и коррекции печеночной недостаточности [2З, З5, 49].
Трансплантация гепатоцитов у человека нередко ведет к иммунному конфликту между реципиентом и донором в виде реакции отторжения. Применение цитостатика FK 506 в эксперименте при трансплантации фетальных, алло- и ксеногенных гепатоцитов у крыс породы NAR показало высокие уровни сывороточных белков через 4 недели после
трех выполненных видов трансплантации, чем у животных без иммуносупрессии [13].
Решением этой проблемы может стать применение полимерных микропористых носителей гепатоцитов, что улучшит их выживание, а мембрана капсулы эффективно защитит гепатоциты, несмотря на иммунизацию хозяина [56].
Имеется гистологическое подтверждение сохранения ультраструктуры изолированных крио-консервированных аллогенных гепатоцитов при их трансплантации в портальную вену или в селезенку мышей линии CBA в течение 21 дня. В этих случаях не отмечалось реакции отторжения и не потребовалось иммуносупрессии реципиента [46].
В настоящее время выделено и идентифицировано более 10 факторов, влияющих на пролиферацию клеток печени. Среди них наиболее изучены гепатопоэтины, эпидермальный (EGF), трансформирующий (TGF), тромбоцитарный (PDGF), инсулиноподобный (IGF) и гепатоцитарный факторы роста (HGF) [27].
Наиболее митогенным эффектом обладает фактор роста гепатоцитов, содержание которого в эмбриональной ткани в 10 раз больше, чем у взрослых особей, однако он наиболее эффективен при концентрации 1—2 нг/мл в сыворотке крови [27].
Несмотря на оптимистические и обнадеживающие результаты применения трансплантации клеток печени в эксперименте и в клинике остается достаточно проблем далеких от своего решения на современном этапе. Это, прежде всего: 1) недостаточное количество пригодных органов для получения изолированных клеток; 2) недостаточно эффективные методы получения изолированных клеток; 3) противоречивые методы консервации изолированных клеток; 4) ограниченное понимание на данный момент механизмов, управляющих ростом и пролиферацией пересаженных клеток; 5) современные неадекватные методы оценки роста и отторжения пересаживаемых клеток [29].
Сюда следует отнести наличие иммунологического барьера при использовании алло- и ксеногенных клеток, пусть и меньшего, чем при орототопической трансплантации печени. Хотя в данном случае может проявляться, так называемый, феномен иммунотолерантности и с успехом применяются иммуносупрессоры, инкапсулирование изолированных клеток, обработка ферментами [24]. Ограничением трансплантации гепатоцитов также является то, что изолированные клетки могут плохо выживать в новой среде и нужно определенное время для их оптимального функционирования. Потенциальным ограничением может стать обеспечение секреции желчи при трансплантации гепатоцитов в различные эктопические очаги, кроме печени [37]. Существенным физиологическим барьером является несоответствие между человеческими белками и белками, вырабатываемыми ксеногенными гепатоцитами [42].
В настоящее время неясен полностью механизм действия изолированных гепатоцитов, применяемых для лечения печеночной недостаточности.
Коррекция врожденных печеночных энзимопатий трансплантацией изолированных алло- и ксеноген-ных гепатоцитов доказывает важность выполнения метаболических функций собственно пересаженными клетками [12]. Кроме того, предварительная сенсибилизация реципиента к донорским клеткам не снижает эффективность пересадки изолированных гепатоцитов [54].
Насущные нужды клинической гепатологии требуют углубленного изучения всего спектра факторов и механизмов, оказывающих лечебный эффект при использовании изолированных гепатоцитов. Остается много белых пятен в современном знании ассимиляции и пролиферации пересаженных клеток. Однако актуальность широкого клинического применения живых изолированных гепатоцитов несомненна. В недалеком будущем их использование в качестве временной поддержки функции печени и ее энергозамещение станет одним из важнейших лечебных методов современной медицины.
литература
1. Бельков А.В. Живые изолированные клетки печени: их свойства и клиническое применение Х А.В. Бельков, А.А. Писаревский ХХ Анест. и реа-ним. - 1991. - № З. - С. 75-77.
2. Бруслик В.Г. Трансплантация изолированных клеток аллогенной печени в лечении острой печеночной недостаточности Х В.Г. Бруслик. - М.,
1984. - 168 с.
3. Гемоперфузия через взвесь живых донорских гепатоцитов при лечении тяжелой печеночной недостаточности Х М.С. Маргулис [и др.] ХХ Хирургия. - 1987. - № 2: - С. 107-110.
4. Гулак П.В. Гепатоцит: функциональнометаболические свойства Х П.В. Гулак. - М.,
1985. - 148 с.
5. Данилов М.А. Вопросы трансплантологии и искусственных органов Х М.А. Данилов. - М., 1989. - 221 с.
6. Корухов Н.Ю. Первый клинический опыт применения аппарата «вспомогательная печень» Х Н.Ю. Корухов, М.А. Полоцкий, А.А. Писаревский ХХ Трансплантация и искусственные органы Х под ред. В.И. Шумакова. - М., 1986. - 209 с
7. Опыт применения консервированных ксе-ногепатоцитов в комплексном лечении больных желтухами Х Э.Г. Абдуллаев [и др.] ХХ Вестн. хир. - 1991. - № 4. - С. 101-10З.
8. Шиманко И.И. Детоксикация в хирургии Х И.И. Шиманко. - Махачкала, 1989. - 189 с.
9. Шумаков В.И. Лечение печеночной недостаточности методами трансплантации и экстракорпорального подключения печени и других тканей: (биологические и клинические аспекты) f В.И. Шумаков, Н.А. Онищенко. - М., 1994. - 211 с.
10. A reversible model of acute hepatic failure by temporary hepatic ischemia in the pig Х S. Benoist [et al.] ХХ J. Surg. Res. - 2000. - Vol. 88. - P. 6З-69.
11. Allan J.S. Xenotransplantation at a crossroads: Prevention versus progress Х J.S. Allan ХХ Nat. Med. -1996. - N 2. - P. 18-21.
12. Allogeneic and xenogeneic hepatocyte transplantation in experimental liver failure / L. Ma-kowka [et al.] // Transplantation. — 1980. — Vol. 30. — P. 429-435.
13. Allogenic hepatocyte and fetal liver transplantation and xenogenic hepatocyte transplantation for Nagase's analbuminemic rats / N. Kokudo [et al.] // Transplantation Cells. -2006. — N 5. — P. 21—22.
14. Bismuth H. What should we expect from a bioartificial liver in fulminant hepatic failure? / H. Bismuth, J. Figueiro, D. Samuel // Artif. Organs. —
2008. — Vol. 22. — P. 26 — 31.
15. Brief report: T reatment of hepatic failure with ex vivo pig-liver perfusion followed by liver transplantation / R.S. Chary [et al.] // N. Engl. J. Med. — 1994. — Vol. 331. — P. 234 — 237.
16. Can clamping of splenic vessels prevent abrupt increase of portal vein pressure and migration of transplanted hepatocytes to the liver after intrasplenic hepatocyte transplantation? / W.H. Kim [et al.] // Hepatogastroent. — 2000. — Vol. 32. — P. 371 — 374.
17. Clinical experience with a bioartificial liver in the treatment of severe liver failure. A phase I clinical trial / F.D. Watanabe [et al.] // Ann. Surg. — 2007. — Vol. 225. — P. 484 — 491.
18. Clinical trials and projected future of liver xenotransplantation / J. Fung [et al.] // Word J. Surg. — 1997. — Vol. 21. — P. 956 — 961.
19. Control of hepatocyte replication by two serum factors / G.K. Michalopoloulos [et al.] // Cancer Res. — 1984. — Vol. 44. — P. 4414 — 4419.
20. Demetriou A.A. Synthetic livers of a support system / A.A. Demetriou, F. Watanabe, J.P. Rozga // Hepatology Dis. — 2005. — Vol. 13. — P. 331 — 348.
21. Detoxifying activity in pig livers and hepatocytes intended for xenotherpy / M. Desille [et al.] // Transplantation. — 1999. — Vol. 10. — P. 1437 — 1443.
22. Effect of hepatocyte growth factor on the proliferation of transplanted hepatocytes in the spleen / K. Kato [et al.] // Transplant. Proc. — 2007. — Vol. 29, N 4. — P. 2029 — 2031.
23. Effective cryopreservation and long-term storage of primary human hepatocytes with recovery of viability, differentiation, and replicative potential / R.M. Adams [et al.] // Cell Transplant. — 1995. — N 6. — P. 579 — 586.
24. Enzymating remodelling of the carbohydrate surface of a xenogeneic cell substantially reduces human antibody binding and complement-mediated cytolysis / M.S. Sandrin [et al.] // Nat. Med. —
2005. — N 1. — P. 1261 — 1267.
25. Evaluation of a simplified staging system for prognosis of hepatocellular carcinoma / W.Y. Lui [et al.] // J. Formos Med. Assoc. — 2009. — Vol. 98, N 4. — P. 248 — 253.
26. Extracorporeal liver perfusion system successful hepatic support pending liver regeneration or liver transplantation: a pre-clinical controlled trial
/ G.M. Abouna [et al.] // Transplantation. — 2009. — Vol. 67. - P. 1576-1583.
27. Fausto N. Biology of disease: Regulation of liver growth: Protooncogenes and transforming growth factors / N. Fausto, J.E. Mead // Lab. Invest. —
2009. — Vol. 60. — P. 4 — 13.
28. Feasibility of hepatocellular transplantation via the umbilical vein in prenatal and perinatal lambs / O.H. Soriano [et al.] // Fetal Diagn. Ther. — 2003. — Vol. 8, N 5. — P. 293 — 304.
29. Fox I.J. Cell liver transplantation / I.J. Fox // Gastroenterogy. —1999. — Vol. 45. — P. 7—14.
30. Hepatic resection for hepatocellular carcinoma. An. audit of 344 patients / E.C. Lai [et al.] // Am. Surg. — 2005. — Vol. 221, N 3. — P. 291 —298.
31. Hepatocyte growth factor protes liver regeneration with prompt improvement of hyperbilirubinemia in hepatomized cholestatic rats / A. Yoshikawa [et al.] // J. Surg. Res. — 2008. — N 1. — P. 54 — 59.
32. Hepatocyte transplantation in rats with decompensated cirrhosis / N. Kobayashi [et al.] // Hepatology. — 2000. — N 4. — P. 851 —857.
33. Hoopes C.W. Hepatocyte transplantation: history, immunology and potential for clinical application / C.W. Hoopes, J.L. Platt // Biotech. Lab. International. — 1998. — N 3. — P. 11 — 14.
34. Human immune reactions against pig antigens / F. Citterio [et al.] // V. Congr. Eur. Soc. for Organ Transplantation. — 2001. — P. 308 — 310.
35. Integration and proliferation of transplanted cells in hepatic parenchyma following D-galactosamine-induced acute injury in F344 rats / S. Gupta [et al.] // J. Pathol. — 2000. — Vol. 190, N 2. — P. 203 — 210.
36. Jacobson M. Programmed cell death in animal development / M. Jacobson, M. Weil, M. Raff // Cell. — 2007. — Vol. 88. — P. 347 — 354.
37. Kanai N. Xenotransplantation of the liver / N. Kanai, L. Jeffrey, M.D. Platt // Clinics in Liver Disease. — 2000. — N 3. — P. 1234 — 1256.
38. Kobayashi N. Transplantation of highly differentiated immortalized human hepatocytes to treat acute liver failure / N. Kobayashi, M. Miyazaki, K. Fukaya // Transplantation. — 2000. — N 2. — P. 202 — 207.
39. Koch K.S. Increased sodium ion influx in necessary to initiate rat hepatocyte proliferation / Koch K.S., Leffert H.L. // Cell. — 1979. — Vol. 12, N 2. — P. 821 —832.
40. Lake J. Hepatocyte transplantation / J. Lake // N. Engl. J. Med. — 1998. — Vol. 338. — P. 1463—1465.
41. Lawrence J.N. Development of an optimal method for the cryopreservation of hepatocytes and their subsequent monolayr culture / J.N. Lawrence, D.J. Ben-ford // Toxicol. In Vitro. — 2001. — N 5. — P. 39 — 51.
42. Lawson J.H. The evaluation of thrombomodulin activity in porcine to human xenotransplantation
Х J.H. Lawson, L. Daniels, J.L. Platt ХХ Transplant. Proc. - 2007. - Vol. 29. - P. 884-885.
43. Lilja H. Response of cultured fetal and adult rat hepatocytes to growth factors and cyclosporine Х H. Lilja, P. Blanc, A.A. Demetriou ХХ Cell transplantation. - 2008. - Vol. 2З. - P. 257-266.
44. No evidence of pig DNA or retroviral infection in patients with short-term extracorporeal connection to pig kidneys Х C. Patience [et al.] ХХ Lancet. — 2008. - Vol. З52. - P. 699-701.
45. Optimization of cryopreservation procedures for rat and human hepatocytes Х L.J. Lopetz [et al.] ХХ Xenobiotica. — 1989. — Vol. 19. — P. 489 — 498.
46. Ostrowska A. Histological identification of purified and cryopreserved allogeneic hepatocytes following transplantation in a murine model without host immunosuppression Х A. Ostrowska, F.M. Karrer, B.M. Bilir ХХ Transpl. Int. - 1999. - Vol. 12, N З. -P. 188-194.
47. Pereira S.P. Limits to liver transplantation in the UK Х S.P. Pereira, R. Williams ХХ Gut. — 2008. — Vol. 42. - P. 88З — 885.
48. Permanent engraftment and function of he-patocytes delivered to the liver: implication for gene therapy and liver repopulation Х S. Gupta [et al.] ХХ Hepatol. - 2004. - Vol. З2. - P. З4-4З.
49. Platt J.L. Genetic therapies in xenotransplantation Х J.L. Platt ХХ Expert Opinion in Investigational Drugs. - 2009. - N 8. - P. 165З-1662.
50. Purfication and subunit structure of hepatocyte growth factor from rat platelets Х T. Nakamura [et al.] ХХ FEBS lett. - 1987. - Vol. 224. - P. З11-З16.
51. Sperimentazione in vitro di un nuovo modello di bioreattore a flusso radiale contenente epatociti isolati Х E. Morsiani [et al.] ХХ Ann. Ital. Chir. — 2000. - Vol. 71. - P. ЗЗ7 — З45.
52. Tanigushi S. Clinical xenotransplantation — a brief re view of the world experience Х S. Tanigushi, D.K.C. Cooper ХХ In: Xenotransplantation Х Eds.: D.K.S. Cooper [et al.]. — Berlin, Springer — Verlag. — 2007. - P. 776-784.
53. The UNOSOPTN waiting list and donor registry Х A.M. Harper [et al.] ХХ Clin. Transpl. — 2008. — Vol. З. - P. 7З — 90.
54. Transplantation of discordant xenografts: a challenge revisited Х W. Parker [et al.] ХХ Immunol. Today. - 2006. - P. З7З-З78.
55. Un bon modele d'insuffisance hepatique aigue: l'hepatectomie de 95 %. Traitement par la transplantation d'hepatocytes Х V. Roger [et al.] ХХ Chirurgie. —
2006. - Vol. 121. - P. 470 — 47З.
56. Xenotransplantation of fetal porcine hepa-tocytes in rats using a tissue engineering approach Х Y.M. Elcin, V. Dixit, K. Lewin, G. Gitnick ХХ Artif Organs. - 2009. - Vol. 2З, N 2. - P. 146-152.
Сведения об авторах:
Монголов Ханхай Пурбоевич - канд.фарм.наук, Генеральный директор ГП РБ «Бурят-Фармация». Тел. 8 (3012) 43-90-56. Плеханов Александр Николаевич - д.м.н., профессор, главный хирург МЗ РБ, г Улан-Удэ, Дом Правительства. Тел. 8(3012) 21-49-20
