CC BY
68
УДК 619:616.995.132.6
Сравнительная характеристика методов подготовки мышечных срезов для компрессорной трихинеллоскопии
Шестакова Светлана Викторовна, кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры эпизоотологии и микробиологии
e-mail:shestakovas65@mail.ru
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина»
Воеводина Юлия Александровна, кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры эпизоотологии и микробиологии
e-mail:yulkavo@mail.ru
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина»
Новожилова Анна Викторовна, студентка факультета ветеринарной медицины и биотехнологий
e-mail: ankavri@mail.ru
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина»
Аннотация. В статье рассмотрены методы подготовки проб для компрессорной трихинеллоскопии. Представлены результаты изысканий наиболее эффективных методов подготовки мышечных срезов для компрессорной диагностики трихинеллеза.
Ключевые слова: ветеринарно-санитарная экспертиза; гельминтозы; зооно-зы; дикие животные; мышечные ткани; мясопродукты; трихинеллоскопия; трихинеллез.
Oдним из наиболее опасных зоонозов, заражение которым человека происходит через мясо и мясопродукты, является трихинеллез.
Среди диких промысловых животных трихинеллез наиболее широко распространен у медведя и кабана, которые являются ценными продуктами охотничьего промысла. Высокая экстенсивность трихинеллезной инвазии регистрируется у диких плотоядных животных, таких как волк, лисица, енотовидная собака, рысь и др., а также мышевидных грызунов, которые способствуют сохранению этого гельминтоза в природе [1].
В последнее время трихинеллез представляет особый интерес как природно-очаговый гельминтозооноз, что связано с возможностью заражения людей этим опасным заболеванием от продуктов убоя диких животных.
Решающим этапом в системе мероприятий, направленных на профилактику трихинеллеза у человека, является своевременное выявление туш животных, зараженных личинками трихинелл. При неправильной или некачественной подготовке проб для проведения исследования снижается процент выявляемости данного гельминтоза в тушах, что в свою очередь влечет за собой риск заболевания трихинеллезом людей.
Особую важность это представляет для охотохозяйств и охотников-любителей, которые, не обладая достаточными навыками и знаниями, зачастую самостоятельно проводят исследования туш добытых ими на охоте животных на трихинеллез.
В связи с этим актуальным является изыскание наиболее доступных и эффективных способов подготовки проб мышечной ткани для компрессорной трихинел-лоскопии с целью повышения результативности диагностических исследований.
Актуальность работы. Одним из методов диагностики трихинеллеза является компрессорная трихинеллоскопия. Однако в замороженном мясе свиньи и диких животных обнаружить трихинелл трудно, так как при его консервировании низкими температурами вода из капсул паразита вымораживается, а после дефростации они заполняются мясным соком. Мясной сок имеет цвет мяса, поэтому трихинеллы становятся незаметными, что снижает эффективность трихинеллоскопии и соответственно повышается риск заражения людей.
Цель работы - выявить наиболее эффективные методы окраски мышечных срезов при диагностике трихинеллеза.
Задачи исследования:
испытать различные методы обработки мышечных срезов для диагностики трихинеллеза;
определить наиболее эффективные способы подготовки мышечных срезов для индикации личинок трихинелл.
Материалы и методы
Компрессорной трихинеллоскопии были подвергнуты мышцы сгибателей-разгибателей задней конечности и мышца языка 12 диких плотоядных животных, в том числе восьми волков и четырех лисиц, полученные из ветеринарных лабораторий Вологодской области с диагнозом «трихинеллез». Работу проводили в течение 2013-2014 года.
Пробы для исследования подготавливали по общепринятой методике. Для этого мороженое мясо оттаивали и делали тонкие срезы толщиной 1-2 мм изогнутыми глазными ножницами по ходу мышечных волокон.
Для выявления наиболее эффективных методов подготовки мышечных срезов для компрессорной трихинеллоскопии мы провели сравнительный анализ окраски
и просветления проб, рекомендованных «Методическими правилами по лабораторной диагностике трихинеллеза животных» и предложенных Янченко А.Е., Черниго-вым В.Д., Крыжевич С.М. (Витебский ветеринарный институт, 1987 г.); Прониным В.В., Могутовой М.О., Могутовым А.В. (Ивановская ГСХА, 2003 г.), а также испытали эффективность окрашивания срезов мышц с применением рабочего раствора генцианвиолета, раствора Люголя, 5%-ого спиртового раствора йода, рабочего раствора фуксина. Для этого от каждого исследуемого животного готовили не менее 960 срезов мышц (по 96 срезов для каждого метода окрашивания мышечной ткани). Микроскопию с одновременным фотографированием личинок трихинелл в приготовленных препаратах проводили с помощью микроскопа модели Микмед 6 и проекционного трихинеллоскопа Partner DT-10M.
Результаты и обсуждение
При просветлении срезов мышц раствором глицерина, с последующим нанесением раствора Люголя было определено, что мышечные волокна, капсула, личинки трихинелл окрашиваются в светло-оранжевый цвет. Личинка была плохо видна, соответственно данный способ не рекомендуется применять для выявления личинок трихинелл.
При окраске мышечных срезов 5%-ым спиртовым раствором йода, личинка приобрела черный цвет на фоне равномерно-окрашенных красновато-коричневых мышечных волокон, что акцентирует на ней внимание и облегчает проведение диагностического исследования.
При обработке проб 1%-ым раствором риванола, было установлено, что мышцы приобрели светло-желтый цвет, капсула - оранжевый и личинка хорошо просматривается, что позволяет исключить пропуск слабо инвазированных туш.
При использовании насыщенных растворов метиленового синего и фуксина установлено окрашивание мышечных волокон, капсулы и личинки соответственно в синий и красный цвета. Личинка при этом сильно перекрашивалась и была плохо видна. Поэтому данные методы окраски не рекомендуются для диагностических исследований.
При применении в качестве красителя насыщенного раствора генцианвиолета волокна мышц, капсула и сама личинка приобретают темно-малиновый цвет, а грануляционная ткань наружных полюсов капсулы не окрашивается, что облегчает лабораторную диагностику трихинеллеза. Однако, данный метод может быть применен для диагностики трихинеллеза лишь в тех случаях, когда капсула находится на стадии обызвествления.
При окрашивании срезов мышц 1%-ым раствором риванола с последующим просветлением 50%-ым водным раствором глицерина мышечные волокна приобретают серо-оранжевый цвет, капсула хорошо видна, личинка четко просматривается. Данный метод окраски и просветления тканей дает наибольшую контрастность между мышечной тканью и личинкой.
Через 1 минуту после обработки проб 5%-ым раствором молочной кислоты мышцы приобретали сероватый цвет, становились прозрачными, более рыхлыми, капсула трихинелл набухала и хорошо просматривалась, а жидкость в полости капсулы просветлялась. В этом случае личинки трихинелл легко обнаруживаются.
В результате окрашивания срезов мышц 1%-ым водным раствором метиленового синего мышечные волокна приобретают голубой цвет, капсула - синий. При проведении микроскопии в течение первых 20 минут после применения данного красителя личинки не окрашивались и были хорошо видны. В дальнейшем они,
также как и капсула, приобретали синий цвет и становились менее заметными. В связи с этим, при использовании данного метода окраски необходимо проводить микроскопию в течение короткого промежутка времени после нанесения красите-
Заключение
Для повышения эффективности диагностики трихинеллеза нами был испытан ряд способов, включающих просветление и окраску мышечных срезов.
Наиболее информативными из них, по нашему мнению, является окраска 1%-ым раствором риванола с последующим просветлением 50%-ым водным раствором глицерина, что дает наибольшую контрастность между мышечной тканью и личин-
Максимальное просветление мышечных волокон мяса достигается с помощью 5%-го раствора молочной кислоты.
Высокую диагностическую эффективность имеет также окраска мышечных срезов 5%-ым раствором йода и 1%-ым водным раствором метиленового синего.
Данные методы могут быть использованы для диагностики трихинеллеза в условиях ветеринарных лабораторий и охотхозяйств.
Список литературных источников:
1. Глушнев, А. Г. Распространенность трихинеллеза среди синантропных и промысловых животных Вологодской области за 1998-2011 гг. / А. Г. Глушнев, Ю. А. Воеводина, И. А. Симанова // Материалы XI Сибирской ветеринарной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины». - 2012. - С. 66-67.
2. Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных (утв. Минсельхозом РФ 28.10.1998 № 13-7-2/1428). - М., 1998.
3. Пронин, В. В. Дифференциальная диагностика трихинеллеза / В. В. Пронин, М. О. Могутова, A. B. Могутов // Ветеринария. - 2003. - №10. - С. 36-38.
4. Янченко, А. Е. Сравнительное изучение методов обработки срезов для трихинеллоскопии мяса и мясных продуктов / А. Е. Янченко, В. Д. Чернигов, С. М. Кры-жевич // Современные проблемы иммунологии, ветеринарии и животноводства. - 1987. - С. 77-78.
References:
1. Glushnev A.G., Voevodina Yu. A., Simanova I.A. Prevalence of trichinosis among synanthropic and hunting animals in the Vologda region during 1998-2011. Materialy XI Sibirskoj veterinarnoj konferencii «Aktual'nye problemy veterinarnoj mediciny» [Proc. 11th Siberian Vet. Conf. "Relevant problems of the veterinary"]. Novosibirsk, 2012, pp. 66-67. (in Russian)
2. Metodicheskie ukazanija po laboratornoj diagnostike trihinelleza zhivotnyh [Methodical instructions on laboratory diagnosis of trichinosis. Adopted by Ministry of Agriculture of RF 28.10.1998 № 13-7-2/1428]. Moscow, 1998.
3. Pronin V.V., Mogutova M.O., Mogutov A.V. Differential diagnosis of trichinosis. Veterinarija [Veterinary], 2003, no. 10, pp. 36-38. (in Russian)
4. Yanchenko A.E., Chernigov V.D., Kryzhevich S.M. Comparative studying of methods to process the cuts for meat and meat products trichinoscopy. Sovremennye problemy immunologii, veterinarii i zhivotnovodstva [Modern immunology, veterinary and animal husbandry problems]. Vitebsk, Veterinarnyi Inst., 1987, pp. 77-78. (in Russian)
Comparative characteristic of methods for the preparation of muscle cuts for compressor trichinoscopy
Shestakova Svetlana Viktorovna, Candidate of Science (Veterinary), Associate Professor of the Epizootology and Microbiology Chair
e-mail:shestakovas65@mail.ru
the Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education the Vereshchagin State Dairy Farming Academy of Vologda
Voevodina Yuliya Aleksandrovna, Candidate of Science (Veterinary), Associate Professor of the Epizootology and Microbiology Chair
e-mail:yulkavo@mail.ru
the Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education the Vereshchagin State Dairy Farming Academy of Vologda
Novozylova Anna Viktorovna, student of the Veterinary Medicine and Biotechnology Faculty
e-mail: ankavri@mail.ru
the Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education the Vereshchagin State Dairy Farming Academy of Vologda
Abstract: the article consideres the methods for the preparation of the tests for the compression trichinoscopy. It gives the results of the determination of the most effective methods to prepare the muscle cuts for the compression trichinoscopy diagnosis.
Keywords: veterinary and sanitary expertise, helminthosis, zoonosis, wild animals, muscle tissues, meat products, trichinoscopy, trichinosis.
