CC BY
284
УДК 15.00.02
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ АНАЛИЗА АЦИКЛОВИРА
Е.Т. ЖИЛЯКОВА1 А.В. БАСКАКОВА2 М.Ю. НОВИКОВА1 О. А. КУЗЬМИЧЕВА1
Белгородский государственный национальный исследовательский университет
2) ОАО «Верофарм»
e-mail: haitelle@gmail.com
В последнее время диагностике и лечению вирусных офтальмологических патологий как у нас в стране, так и за рубежом уделяется большое внимание. По данным статистики Министерства здравоохранения и социального развития РФ, болезнями глаз и глазного аппарата страдают около 4,7 млн человек в России [1]1. На долю вирусных конъюнктивитов приходится около трети всех офтальмологических патологий, при этом по результатам проведенного маркетингового анализа установлено, что одной из наиболее эффективных противовирусных субстанций на российском рынке является ацикловир. Поэтому весьма важной является разработка методики анализа ацикловира в водных растворах на основании современных требований, предъявляемых к методам анализа ацикловира.
Возможности методов идентификации и количественного определения ацикловира определяются его принадлежностью к производным пуриновых нуклеозидов. Однако поиски и разработка новых модифицированных методов анализа данного вещества не теряют своей актуальности и по сей день. В научной литературе широко представлены методики количественного определения содержания ацикловира в различных лекарственных формах, поэтому целью работы является обзор методов анализа субстанции ацикловира.
Методы исследования: ВЭЖХ, ТСХ, УФ-спектрофотометрия.
Результаты. Ввиду своей широкой распространенности, ацикловир, как активная фармацевтическая субстанция, представлен в основных фармакопеях мира. Результаты обзора представлены в табл. 1.
Таблица 1
Сравнительная характеристика распространенности методов анализа ацикловира в основных мировых фармакопеях
Фармакопеи, страна Методы определения ацикловира
ВЭЖХ ТСХ УФ Потенциометри- ческий Вид ЛФ в фармакопее
1 2 3 4 5 6
ГФ XII + + - + субстанция
УФ (украинская фармакопея) + + - + субстанция
БФ (белорусская фармакопея) + + + субстанция
ВР 2009 (британская фармакопея) + + + Субстанция, ацикловира крем, ацикловира глазная мазь, ацикловира инъекционный для инфузий, ацикловира оральная суспензия, таблетки ацикловира, дисперсные таблетки ацикловира
В статье изложены данные о сравнении методов анализа ацикловира в ведущих мировых фармакопеях. Установлено, что ведущим методом количественного анализа ацикловира является ВЭЖХ, требования к которому вариабельны в зависимости от вида лекарственной формы.
Ключевые слова: глазные капли, ацикловир, вирусные конъюнктивиты, УФ-спектрофотометрия, ВЭЖХ
1 Жилякова Е.Т., Новикова М.Ю., Новиков О.О., Баскакова А. В. (Ткачева А.С.), Придачина Д.В. Изучение ассортимента противовирусных глазных лекарственных форм // Фундаментальные исследования. - 2012. - № 1 . - С. 179-183;
Окончание табл. 1
1 2 3 4 5 6
USP 29 (американская фармакопея) + Субстанция; ацикловира капсулы, ацикловира мазь,ацикловира суспензия для орального употребления
JP 16 (японская фармакопея) + + Субстанция; Сироп с ацикловиром; Ацикловир для инъекций
EPh 2010 + - - + субстанция
Как видно из табл. 1, основным методом анализа ацикловира в различных лекарственных формах в общемировой практике является высокоэффективная жидкостная хроматография. При этом требования к проведению анализа несколько отличаются в нормативной документации различных стран. Так, ГФ XII [2]2 предлагает метод обращенно-фазовой ВЭЖХ для субстанции ацикловира, от него не отличаются методики, представленные в Украинской фармакопее (УФ) [э]з, Белорусской фармакопее (БФ) [4]4, Британской фармакопее (ВР) [б]5. При этом в БФ и ВР приведено описание возможных примесей в субстанции ацикловира, как и в Японской УР) [6]67 и Американской (ШР) [7] фармакопеях.
Сравнительная характеристика методов анализа ацикловира методом высокоэффективной жидкостной хроматографии представлены в табл. 2.
Таблица 2
Сравнительная характеристика методов анализа ацикловира способом ВЭЖХ в различных фармакопеях мира
Фарма- копеи, страна Условия х роматографирования
Подвижная фаза Колонка Скорость потока, объем пробы Детектор, длина волны Количество примесей Время хромато- графиро- вания Число теоре- тиче- ских тарелок
1 2 3 4 5 6 7 8
ГФ XII 6,0 натрия дигидрофосфата, 1,0 натрия дисульфоната до рН 3+/-1 кислотой фосфорной, 40 мл ацетонитрила и до 1000 мл воды Длина 0,10 м внутренний диаметр 4,6 мм Октаде-цильный силикагель 3 мкм для хроматографии 2 мл/мин, проба 20 мкл Спектрофотометрический, 254 нм Не более 0,7% гуанина Не более 0,5% любой другой примеси 7-кратное удержи- вание время ацикло- вира
УФ (укра- инская фарма- копея) Не отличается от ГФ XII
БФ (бело- русская фарма- копея) Не отличается от ГФ XII
2 XII Государственная фармакопея РФ. Ч. 1, Ацикловир ФС 42-0221-07. - С. 513.
3 Государственная Фармакопея Украины. 1-изд., «Ацикловир - 1.1». - С. 329.
4 Государственная фармакопея Республики Беларусь. В 3 т. - Т. 3. Контроль качества фармацевтических субстанций / УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под общ. ред. А. А. Шеряко-ва. - Минск: Минский государственный ПТК полиграфии им. В. Хоружей, 2009. - Ацикловир. - С.179.
5 British Pharmacopoeia Volume III, Formulated Preparations: Specific Monographs. - Aciclovir Eye Ointment.
6 Japan Pharmacopoeia 16 Aciclovir.
7 USP 29. Volume 1. Aciclovir. - Р. 1998.
Окончание табл. 2
1 2 3 4 5 6 7 8
ВР 2009 (британская фармакопея) Не отличается от ГФ XII
ТОР 29 (американская фармакопея) Раствор уксусной кислоты профильтрованный и дегазированный (1:1000) Длина 0,25 м Внутренний диаметр 4,6 мм Сорбент типа Ь1 (для капсул внутренний диаметр 4,2 мм) 3 мл/мин. Проба 20 мкл (в инъекционном растворе 1 мл/мин.) для капсул 1,5 мл/мин., Спектрофотометрический, 254 нм Гуанина не более 0,7% Время хроматографирования 56 минут Не указано
УР 16 (японская фармакопея) Мобильная фаза А: ацетонитрил И, фосфатный буфер раствора с pH 2,5 Длина колонки 0,15 м, внутренний диаметр 4,6 мм Сорбент - октаде-цильный силикагель для хроматографии 3 мл/мин. Объем пробы 5 мл Спектрофотометрический, 254 нм Гуанина не более 0,7% Время удержания 7 минут Не указано
ЕРЬ 2010 Смесь растворителей: ДМСО И, И вода (20:80 V / У).Фосфатны й буферный раствор рН 2,5- 3,48 г дикалия гидрофосфата И в 1000 мл воды И рН до 2,5 с фосфорной кислотой до рН 3,1. Длина колонки 0.25 м, внутренний диаметр 4,6 мм Сорбент - октаде-цильный силикагель для хроматографии, 5 мкм 1 мл/мин. Объем пробы 10 мкл Спектрофотометрический, 254 нм Гуанина не более 0,7% Время удержания 7 минут Не указано
Как видно из табл. 2, в силу распространения ацикловира в различных лекарственных формах в этих странах требования к проведению анализа методом ВЭЖХ несколько разнятся. Европейская фармакопея 2010 (ЕРИ) [8]8 предлагает использование колонки 25x0,46 см против требований в ГФ XII 10x0,46 см, отличается также скорость потока в минуту: 1мл против 2 мл соотвественно, отличается и объем пробы, составляющий 10 мкл раствора для ЕРИ и 20 мкл для ГФ XII. При этом в ГФ XII в качестве одного из компонентов подвижной фазы предложено ис-
8 ЕРИ5 Лсісіоуіг.
пользование натрия фосфата в ацетонитриле против калия дигидрофосфата в диметилсульфок-сиде и ацетонитриле. Требования к ВЭЖХ между собой ГФ XII и ВР 2009 не отличаются.
Несколько отличаются между собой методики ГФ XII и ИБР 29, в первую очередь, длиной хроматографической колонки, что объединяет требования ИБР 29 и ЕРИ, однако скорость подачи потока, согласно требованиям ИБР 29, составляет 3 мл в минуту, что отличает эту методику от прочих. При этом скорость потока для различных лекарственных форм вариабельна в силу химических и технологических особенностей приготовления. Так, малая скорость подачи потока сольвента для инъекционного раствора ацикловира характеризуется необходимостью особенно высокой точности разделения пиков на хроматограмме, что возможно удлиняет время хроматографирования.
Второе место по распространенности среди методов анализа ацикловира занимает потенциометрическое титрование, которое не предусматривают ИБР 29 и ТР 16. Требования к нему не отличаются среди приведенных государственных фармакопей: в качестве титранта выступает 0,1 М хлорная кислота, при растворении навески субстанции в ледяной уксусной кислоте.
Третью позицию занимает метод тонкослойной хроматографии, который распространен лишь в странах СНГ и ВР 2009. Требования к нему едины: субстанция растворяется в диметил-сульфоксиде, в качестве системы растворителей применяется раствор аммиака концентрированный 25%-метанол-метиленхлорид (1:10:40). Хроматографируют восходящим методом при проявлении в УФ-свете при 254 нм. Пятно посторонней примеси не должно превышать пятно на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%).
УФ-спектроскопия для ацикловира описана только в ТР16, для ацикловира для инъекций и ацикловира в сиропе. Ацикловир в количестве, эквивалентном 25 мг, растворяется в 0,5 М хлорной кислоте, максимум наблюдается между 254 и 258 нм.
Установлено, что наиболее распространенными методами анализа ацикловира являются ВЭЖХ и потенциометрическое , что является актуальным для разработки методики обра-щенно-фазовой ВЭЖХ при анализе ацикловира в разрабатываемых составах пролонгированных глазных капель.
При анализе ацикловира в растворах, согласно ТР 16, используется метод УФ-спектроскопии, что также обусловливает необходимость разработки метода анализа ацикловира в модельных смесях глазных противовирусных капель.
1. Жилякова, Е.Т. Изучение ассортимента противовирусных глазных лекарственных форм / Е.Т. Жилякова, М.Ю. Новикова, О.О. Новиков, А.В. Баскакова (А.С. Ткачева), Д.В. Придачина // Фундаментальные исследования. - 2012. - № 1. - С. 179-183.
2. XII Государственная фармакопея РФ. Ч. 1, Ацикловир ФС 42-0221-07. - С. 513.
3. Государственная Фармакопея Украины, 1-е изд. «Ацикловир - 1.1». - С. 329.
4. Государственная фармакопея Республики Беларусь. В 3 т. Т. 3. Контроль качества фармацевтических субстанций / УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под общ. ред. А. А. Шеря-кова. - Минск: Минский государственный ПТК полиграфии им. В. Хоружей, 2009. - Ацикловир. - С.179.
5. British Pharmacopoeia Volume III, Formulated Preparations: Specific Monographs, -Aciclovir Eye Ointment
6. USP Pharmacopeia; edition 29.
7. JP 16, Pharmaceuticals and Medical Devices Agency, Shin-Kasumigaseki Building, 3-3-2 Kasu-migaseki, Chiyoda-ku, Tokyo 100-0013 Japan.
8. European Pharmacopoeia 5.0: Vol-2. Author, Council of Europe. Edition, 5. Publisher, Council of Europe, 2004. Length, 2727 pages.
COMPARATIVE CHARACTERISTICS OF THE METHODS OF ANALYSIS OF ACICLOVIR
Е.Т. ZHILYAKOVA1, M. BASKAKOVA2 M.U. NOVIKOVA3, O.A. KUSMICHEVA4
Выводы.
Литература
1) Belgorod National
2) LLC «Veropharm»
Research University
The article presents data on the comparison of methods of analysis of aciclovir in the the world leading pharmacopoeias. It is established that HPLC is the leading quantitative analysis of aciclovir, the requirements for which are variable depending on the dosage form.
3) Belgorod National
Research University
Key words: eye drops , aciclovir , viral conjunctivitis , UV- spectrophotometry.
4) Belgorod National
Research University
e-mail: haitelle@gmail.com
