Скорость летального действия флураланера (Бравекто™) на клещей Ixodes ricinus у собак Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

PHARMA

VetPharma №2 | АПРЕЛЬ 2015

СКОРОСТЬ ЛЕТАЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ ФЛУРАЛАНЕРА (БРАВЕКТО™) НА КЛЕЩЕЙ

IXODES RICINUSУ СОБАК

На правах рекламы

Christina Wengenmayer,

Heike Williams,

Eva Zschiesche,

Andreas Moritz,

Judith Langenstein,

Rainer KA Roepke,

Anja R. Heckeroth

I I ключевые слова I

ЖЕВАТЕЛЬНЫЕ ТАБЛЕТКИ БРАВЕКТО™ • ФЛУРАЛАНЕР •

СКОРОСТЬ УНИЧТОЖЕНИЯ • СОБАКА • КЛЕЩ • IXODES RICINUS • КЛЕЩЕВЫЕ БОЛЕЗНИ • ЭФФЕКТИВНОСТЬ

реферат

Общие сведения. Переносимые клещами возбудители болезней собак, в частности бабезиоза, анаплазмоза, боррелиоза и эрлихиоза, являются всё более серьёзной проблемой во всём мире. Одним из методов профилактики этих трансмиссивных заболеваний является уничтожение клещей до передачи возбудителя собаке. Флураланер (Бравекто™) - новый изоксазолиновый инсектицид и акарицид системного действия, обладающий длительным и устойчивым противопаразитарным эффектом. В настоящем исследовании изучается скорость летального действия флураланера на клещей у собак.

Методы. В общей сложности 48 собак случайным образом распределили на 8 групп по 6 собак, каждую собаку заразили 50 самками и 10 самцами клещей I. ricinus. Два дня спустя (на 0-й день) 4 группы однократно получили флураланер в дозе 25 мг/кг массы тела в форме жевательных таблеток Бравекто™; собаки в других 4 группах остались без лечения. Для оценки эффективности уничтожения клещей в каждый момент времени (4, 8, 12 и 24 часа после лечения) использовалась отдельная пара контрольной и экспериментальной группы. Через 4, 8 и 12 недель после лечения всех собак снова заразили 50 самками I. ricinus, а осмотр на наличие живых или мёртвых клещей проводили через 4, 8, 12 и 24 часа после каждого повторного заражения. Эффективность рассчитывалась для каждого времени оценки путём сравнения экспериментальной группы с соответствующей контрольной группой. Результаты. Эффективность уничтожения клещей составила 89,6% через 4 часа, 97,9% через 8 часов и 100% через 12 и 24 часа после лечения. Через 8 часов после повторного заражения эффективность составила 96,8%, 83,5% и 45,8% через 4, 8 и 12 недель после заражения соответственно. Через 12 и 24 часа после повторных заражений в течение всего 12-недельного периода исследования эффективность уничтожения клещей составляла не менее 98,1%. Выводы. После применения флураланер уничтожает клещей быстро - через 4 часа, - а на протяжении всего 12-недельного срока действия он обеспечивает почти полное уничтожение клещей в течение 12 часов после заражения клещами. Благодаря быстрому акарицидному эффекту в совокупности с большой продолжительностью действия флураланер помогает предотвратить заболевания, переносимые клещами.

50

ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE

VetPharma №2 | АПРЕЛЬ 2015

PHARMA

Общие сведения

Клещи являются серьезной проблемой для человека и животных, так как не только питаются кровью хозяев, но и переносят многочисленных возбудителей болезней, в частности вирусов, бактерий и паразитов. При питании инфицированные клещи могут передавать возбудителей заболеваний как человеку, так и домашним животным, в частности собакам. Векторные заболевания становятся всё более острой проблемой по всему миру, что связано с ростом числа домашних животных, их перемещением при путешествиях владельцев; а также с заселением новых ареалов обитания членистоногими - переносчиками заболеваний. Клещи и переносимые ими заболевания распространяются по всему миру и более не ограничиваются определёнными областями.

Переносимые клещами заболевания можно предотвратить, если избегать места, заселенные клещами, и физически удалять клещей с тела поражённых собак. Более разумным подходом является использование репеллентных препаратов или средств, способных быстро уничтожать клещей до передачи возбудителей, предпочтительно с большой продолжительностью действия.

Флураланер (Бравекто™) - инновационный эктопаразитицид, принадлежащий к новому классу соединений, изоксазолинам, - эффективен против Ixodes ricinus, Ixodes scapularis, Dermacentor reticulatus, Dermacentor variabilis и Rhipicephalus sanguineus, т.е. против всех видов клещей, способных переносить наиболее важных возбудителей болезней человека и домашних животных, в частности анаплазмоз, бабез-иоз, боррелиоз и эрлихиоз.

Механизм действия флуралане-ра основан на блокаде лигандза-висимых хлоридных каналов (как

ГАМК-рецепторов, так и глутаматных рецепторов), приводящей к подавлению нервной системы членистоногих, что приводит к параличу и гибели блох и клещей. Флураланер обладает высокой селективностью в отношении нейронов членистоногих в сравнении с нейронами млекопитающих и хорошо переносится собаками начиная с 8-недельного возраста, включая собак с мутацией в гене MDR-1 (-/-).

У собак флураланер характеризуется длительным временем полувыведения, длительным временем удержания, относительно высоким объёмом распределения и низким клиренсом. Длительное время удержания флураланера в плазме крови собаки обусловливает стабильную летальную активность в отношении блох и клещей на протяжении 12 недель после однократного перорального применения. Для действия флураланера необходимо, чтобы клещи прикрепились к коже хозяина и, таким образом, проглотили активный компонент. Продолжительное питание повышает риск передачи возбудителей от клещей собакам, однако заражение, как правило, не происходит непосредственно после прикрепления клеща к собаке. Для передачи большинства заболеваний, переносимых клещами, необходимо первоначальное прикрепление и период кровососания продолжительностью не менее 24-48 часов, во время которого происходит реактивация возбудителей. Этот срок между прикреплением клеща и передачей патогена позволяет флура-ланеру оказать своё действие. Если инфицированные клещи погибнут в течение этого периода, то передачу возбудителей, вероятнее всего, удастся предотвратить. Таким образом, скорость уничтожения, определяемая как время, необходимое для уничтожения уже прикрепившихся клещей или для уничтожения

клещей после повторной инвазии, является важным фактором профилактики переносимых клещами заболеваний.

Исходя из обоснования, указанного выше, было проведено 2 исследования для оценки скорости уничтожения клещей флура-ланером. Для этого эффективность уничтожения клещей измеряли через 4 и 8 часов (исследование 1) или через 12 и 24 часа (исследование 2) после однократного применения, а также через различные промежутки времени после повторного заражения этих собак на протяжении 12 недель действия препарата.

В обоих исследованиях для заражения собак выбраны клещи I. ricinus.

Методы

Оба исследования проведены в соответствии с германским законодательством по защите животных, а до начала исследования получено одобрение Управления по исследованиям земли Рейн-ланд-Пфальц (Landesuntersuch-ungsamt RheinLand-PfaLz). Исследования проводились в соответствии с Принципами надлежащей лабораторной практики (GLP) ОЭСР и принципами GLP, изложенными в немецком Законе о химических веществах (ChemikaLiengesetz). Оба исследования являлись слепыми рандомизированными исследованиями с отрицательным контролем.

Дизайн исследования

В исследованиях изучалась скорость летального действия флура-ланера на клещей I. ricinus у собак. В исследование включено в общей сложности 48 здоровых взрослых собак породы бигль (<7 лет), не получавших лечение каким-либо противопаразитарным препаратом

ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE

51

PHARMA

VetPharma №2 | АПРЕЛЬ 2015

в течение как минимум 12 недель до начала исследования. Перед распределением по группам собак взвесили (размах 9,3-19,9 кг) и провели клиническое обследование. Собак-участников до этого заразили 80 блохами (CtenocephaLides feLis), чтобы продемонстрировать их восприимчивость к паразитарной инвазии и подтвердить отсутствие эктопаразитицидов. Собаки были ранжированы в порядке уменьшения количества блох (в диапазоне 63-80 блох/собаку) и случайным образом распределены по 8 группам (4 группы терапии и 4 соответствующие контрольные группы) по 6 собак с помощью сгенерированного на компьютере рандомизаци-онного списка.

Все собаки содержались в помещении. Во время периодов без паразитарной инвазии собак содержали в тех группах, в которые они были распределены, а в периоды паразитарной инвазии все собаки содержались по отдельности. Температура в виварии с собаками составляла 17-22 °С, а относительная влажность - 40-90%. Собак кормили стандартным коммерчески доступным сухим собачьим кормом один раз в день, а доступ к воде не ограничивался. Наблюдения за общим состоянием здоровья проводились один раз в день в течение всего исследования.

Применение препарата

На 0-й день (т.е. день применения препарата) собаки в 4 экспериментальных группах получили жевательные таблетки флураланера исходя из массы тела конкретного животного и минимальной дозы в 25 мг флураланера/кг массы тела. Жевательные таблетки флураланера помещались в заднюю часть ротовой полости на язык для стимуляции глотания. Собаки получали половину суточного рациона пищи не ранее

20 минут до применения препарата, а остальную часть - непосредственно после этого. За каждой собакой непрерывно наблюдали в течение 1 часа после применения препарата, чтобы определить, не выплюнет ли и не срыгнёт ли собака жевательную таблетку; таких случаев не происходило. Собаки в 4 контрольных группах остались без лечения.

Заражение клещами и его оценка

Клещей I. ricinus, использовавшихся в исследовании, выращивали в лаборатории на протяжении как минимум 2-х поколений после отбора из естественных условий обитания в Европе. Собак, находящихся под действием седативного препарата медетомидина, заражали клещами на -2, 28 (4 недели), 56 (8 недель) и 84 (12 недель) дни. При каждом заражении непосредственно на шерсть каждой собаки вдоль спины, на бок и на голову помещали 50 некормленных взрослых самок клещей. Кроме того, на собак помещали по 10 самцов Ixodes ricinus для обеспечения самкам оптимальных условий для прикрепления. Заражённые клещами собаки содержались в индивидуальных загонах до удаления паразитов. Клещевая нагрузка (количество самцов и самок клещей) у всех собак в каждой паре экспериментальной и контрольной группы оценивали через 4 (±0,75), 8 (±0,75), 12 (±1,5) или 24 (±1,5) часа после лечения (0-я неделя) или после повторного заражения (на 4-й, 8-й и 12-й неделе). Осмотру подвергалось всё тело каждой собаки, а клещей тщательно удаляли щипцами. Клещи классифицировались как мёртвые или живые, прикреплённые или неприкреплённые и подсчитывались. Персонал, проводивший классификацию и подсчёт клещей, не был осведомлён о лечении, назначенном каждой собаке.

Статистический анализ

Статистический анализ проведён с помощью пакета программного обеспечения SAS® (SAS Institute Inc., Кэри, Северная Каролина, США, версия 9.2). Во всех статистических расчётах статистической единицей было отдельное животное. Процентная эффективность в отношении клещей рассчитывалась для каждой группы,получавшей лечение, и каждого времени оценки в соответствии с формулой Эбботта:

Эффективность (%) = 100 x (MC -MT) / MC, где Мс - среднее геометрическое количество живых клещей на собаках в контрольной группе, а МТ - среднее геометрическое количество живых клещей на собаках в группе, получавшей лечение. В случае нулевого количества клещей среднее геометрическое количество клещей (xg) рассчитывалось следующим образом:

где n - количество животных, i - индекс, а х. - количество клещей на i-м животном.

Достоверность различий оценивали, сравнивая логарифм количества живых клещей в каждой получавшей лечение группе с логарифмом количества клещей в соответствующей контрольной группе для каждого времени оценки. Группы лечения и контрольные группы сравнивали в рамках смешанной линейной модели, в которой группа животных была фиксированным эффектом, а блок - случайным эффектом. Двусторонний уровень достоверности для F-критериев эффектов модели был выбран равным а = 0,05.

Результаты

Ни у одной из 24 собак, получавших флураланер, в течение 12-не-

52

ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE

VetPharma №2 | АПРЕЛЬ 2015

PHARMA

дельного периода после лечения не обнаружено связанных с лечением нежелательных явлений. Средние количества клещей и подробные результаты изучения эффективности представлены в табл. 1. Эффективность уничтожения клещей составила 89,6% через 4 часа, 97,9% через 8 часов и 100% через 12 и 24 часа после лечения. Через 8 часов после повторного заражения эффективность составила 96,8%, 83,5% и 45,8% через 4, 8 и 12 недель после заражения соответственно. Через 12 и 24 часа после повторных заражений в течение всего 12-недельного периода исследования эффективность уничтожения клещей составляла не менее 98,1%.

У собак, получавших флурала-нер, количество клещей через 4, 8, 12 или 24 часа после лечения было достоверно ниже (р < 0,0001), чем у контрольных собак, не получавших лечение. У собак, получавших флураланер, количество клещей через 8, 12 и 24 часа после повторного заражения также было достоверно ниже (во все моменты времени р < 0,0001; через 8 часов после повторного заражения на 12-й неделе р < 0,004), чем у котрольных собак. Через 4 часа после повторного заражения на 4-й неделе также зафиксировано достоверно меньшее количество клещей (р < 0,03).

Обсуждение результатов

Флураланер (Бравекто™) - первый эктопаразитицид для перорального применения, демонстрирующий значительную продолжительность действия против клещей. Настоящее исследование чётко показывает, что флураланер быстро уничтожает клещей с возрастающей со временем эффективностью, причём полный эффект достигается через 12 часов и сохраняется на протяжении всего 12-недельного периода действия.

Флураланер является системным паразитицидом и действует на клеща с началом кормления на теле хозяина. Быстрый летальный эффект ограничивает период кормления. Обычно передача возбудителей заболеваний хозяину происходит не немедленно после прикрепления клеща, а после продолжительного кровососания.

Перед передачей возбудители активируются непосредственно в слюнных железах, либо для размножения и миграции в слюнные железы им необходим период реактивации. Этот период реактивации начинается после прикрепления к хозяину, а передача происходит, когда клещ отрыгивает излишки жидкости в рану от укуса.

Для оценки времени, требующегося для передачи возбудителя, проведено несколько исследований. Заражённым клещам позволяли питаться на теле хозяина в течение определённых промежутков времени. После удаления клещей хозяина проверяли на наличие или отсутствие возбудителя или специфической иммунной реакции. Если данные указывали, что хозяин контактировал с возбудителем, то время, проведённое клещом на хозяине, считалось достаточным для передачи возбудителя.

Так, передача B. burgdorferi мышам нимфами иксодовых клещей происходила не ранее, чем через 24 часа после прикрепления: 0 из 18 мышей заразились после контакта с нимфами I. ricinus, инфицированными B. burgdorferi, в течение 24 или 48 часов, и ни одна из 58 мышей не заразилась после контакта с нифмами I. scapular's, инфицированными B. burgdorferi, в течение 24 часов. Передача собакам Babesia canis от инфицированных клещей D. reticulatus происходит не ранее, чем через 48 часов. Более того, PruLLage et aL. заключили, что частота передачи B. burgdorferi, A. phagocytophilum

и B. microti существенно снижается, если клещам не давать кормиться более 24 часов.

После того, как передача становится возможной, вероятность передачи возбудителя существенно возрастает и продолжает расти с увеличением продолжительности кровососания. При сравнении данных о времени передачи возбудителей с результатами нашего исследования можно сделать вывод, что флураланер уничтожает клещей до того, как начинается передача болезнетворных боррелий и бабезий.

Такие возбудители, как A. phagocytophilum и E. canis, накапливаются в желудке, однако могут встречаться и в слюнных железах, что обусловливает возможность более ранней передачи. Так, передача мышам A. phagocytophilum от нимф I. scapularis происходит в течение первых 24 часов, а передача E. canis происходит в течение первых 3-6 часов. Таким образом, риск передачи этих возбудителей нельзя полностью исключить с учётом скорости уничтожения клещей флура-ланером и опубликованных значений времени передачи, по данным лабораторных исследований. Однако эти исследования проводились в лабораторных условиях; воспроизвести все имеющиеся переменные естественного состояния переносчика и хозяина (напр., инвазионное давление со стороны переносчика и распространённость инфекции среди переносчиков, прерывание кормления клеща, различия в возрасте, породе и иммунном статусе хозяина, а также наличие других резервуарных хозяев) в лаборатории невозможно. Что более важно, в некоторых исследованиях, проведённых на собаках, использование коммерчески доступных ака-рицидных препаратов защищало от заражения A. phagocytophilum или E. canis. Согласно описанию, у этих препаратов скорость уничтожения

ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE

53

PHARMA

VetPharma №2 | АПРЕЛЬ 2015

Таблица 1

Среднее количество клещей и эффективность уничтожения клещей (%) после перорального применения флураланера у собак

ВРемя °ценки I I 4 часа I 8 часов I 12 часов I 24 часа

0 неделя Среднее количество клещейь (контроль/лечение) [n] 33.0/3.4 30.6/0.6 28.1/0 15.8/0

Эффективность (%) 89.6# 97.9# 100# 100#

4 неделя Среднее количество клещейь (контроль/лечение) [n] 36.5/24.4 40.5/1.3 36.7/0.1 30.6/0

Эффективность (%) 33.2* 96.8# 99.7# 100#

8 неделя Среднее количество клещейь (контроль/лечение) [n] 38.6/31.8 31.2/5.2 32.0/0.3 29.8/0.1

Эффективность (%) 17.5 83.5# 99.2# 99.6#

12 неделя Среднее количество клещейь (контроль/лечение) [n] 37.4/34.5 30.0/16.2 34.3/0.6 32.7/0.6

Эффективность (%) 7.8 45.8§ 98.3# 98.1#

а Оценка клещей в часах после лечения или повторного заражения. b Среднее геометрическое.

* Логарифм количества живых клещей в получившей лечение группе достоверно отличался (р < 0,03) от логарифма количества клещей в соответствующей контрольной группе.

§ Логарифм количества живых клещей в получившей лечение группе достоверно отличался (р < 0,004) от логарифма количества клещей в соответствующей контрольной группе.

# Логарифм количества живых клещей в получившей лечение группе достоверно отличался (р < 0,0001) от логарифма количества клещей в соответствующей контрольной группе.

меньше (т.е. время, необходимое для уничтожения >90% прикрепившихся клещей, после лечения/ повторного заражения больше), чем у флураланера. Таким образом, флураланер, по всей видимости, обладает не меньшей способностью защищать собак от заражения A. phagocytophilum и E. canis.

Системный механизм действия флураланера обусловливает дополнительные преимущества для пользователя по сравнению с веществами, предназначенными для местного нанесения или применяющимися в составе ошейников и остающимися на поверхности тела собаки. При использовании этих препаратов возможно снижение эффективности против клещей из-за потери ошейника или после купания. Кроме того, тот факт, что клещи погибают после кормления на собаке, получившей флураланер, снижает также вероятность заражения другой собаки, что может произойти при применении веществ с исключительно репел-лентным эффектом.

В дополнение к высокой скорости уничтожения паразитов и системному механизму действия, большая продолжительность действия флу-раланера приносит владельцам дополнительную пользу, так как позволяет реже использовать препарат по сравнению с другими коммерчески доступными акарицидами для ежемесячного применения. Частое и регулярное применение эктопа-разитицидов - важный инструмент профилактики клещевых заболеваний. Однако владельцы недостаточно хорошо соблюдают режим применения, что приводит к периодам отсутствия защиты собак от эктопаразитов, т.е. случаям неприменения средств для ежемесячного использования с рекомендованной периодичностью. Это подвергает риску не только здоровье собаки, но и других собак и людей, так как незащищённая собака является потенциальным резервуаром возбудителей. Поэтому эктопаразитицид с высокой скоростью уничтожения паразитов и большой продолжи-

тельностью действия - флураланер (Бравекто™) - помогает предотвращать и контролировать заболевания, переносимые клещами.

Выводы

После применения флураланер уничтожает клещей быстро - через 4 часа, а на протяжении всего 12-недельного срока действия он обеспечивает почти полный летальный эффект против клещей в течение 12 часов после заражения. Системный механизм действия флу-раланера является преимуществом, так как он позволяет избежать снижения эффективности. 12-недельная продолжительность действия является дополнительным преимуществом, так как позволяет преодолеть проблему несоблюдения режима повторных обработок. Благодаря быстрому акарицидному эффекту в совокупности с большой продолжительностью действия флураланер помогает предотвратить заболевания, переносимые клещами. ■

54

ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE