CC BY
265
УДК 579.66:577.114
Н. И. Петухова (к. биол. н., доц.), С. А. Колобова (студ.), Р. Р. Назмутдинова (студ.), В. В. Зорин (чл.-корр. АН РБ, д.х.н., проф., зав. каф.)
синтез целлюлозы изолятами уксуснокислых
бактерий из «чайного гриба»
Уфимский государственный нефтяной технический университет 450062, г. Уфа, ул. Космонавтов, 1; тел. (347) 2431935; email: bio@rusoil.net
N. I. Petukhova, S. A. Kolobova, R. R. Nazmutdinova, V. V. Zorin
cellulose synthesis by acetic acid bacteria isolates from mushroom tea
Ufa State Petroleum Technological University 1, Kosmonavtov Str, 450062, Ufa, Russia; ph. (347) 2431935; e-mail:bio@rusoil.net
Из различных образцов «чайного гриба» выделены три бактериальные культуры, образующие полимерные гель-пленки при культивировании на среде Хестрина-Шрамма, содержащей 1% этанола, с выходом 3.8—5.1 г/л (по сухому весу). На основании результатов исследования фенотипических свойств микроорганизмов установлена их принадлежность к бактериям родов 01исопасе1оЪас1ет (1 культура) и Котада1ае1-ЪасЬет (2 культуры). Методами ферментативного гидролиза полимеров с помощью целлюлолити-ческих препаратов, тонкослойной хроматографии продуктов химического гидролиза, ИК-Фурье спектроскопии показано, что синтезируемые гель-пленки представляют собой целлюлозу. Обнаружено, что этанол оказывает существенное влияние на биосинтез целлюлозы уксуснокислыми бактериями.
Ключевые слова: биосинтез; бактериальная целлюлоза; внеклеточные полимеры; уксуснокислые бактерии.
Известно, что протеобактерии могут синтезировать различные практически важные вещества, в том числе ферменты для биокатализа 1-4 полимерные материалы низкомолекулярные соединения
Особый интерес представляют уксусно кислые бактерии, которые могут синтезиро вать целлюлозу — внеклеточный полимер глю козы с ^-1,4-гликозидной связью 9-10.
4 6, фармакозначимые 4, 7, 8
Three bacterial cultures forming polymer gel films on Hestrin-Schramm medium containing 1% of ethanol with 3.8—5.1 g/L yield (dry weight) were isolated from different samples of mushroom tea. The study of phenotypical properties of these microorganisms suggests that they belong to the genera Gluconacetobacter (1 culture) and Komagataeibacter (2 cultures). By the means of enzymatic hydrolysis of polymers by cellulolytic preparations, thin layer chromatography and FTIR spectroscopy it is shown that synthesized gel films are cellulose. It is found that ethanol makes a significant impact on cellulose biosynthesis by acetic acid bacteria.
Key words: acetic acid bacteria; bacterial cellulose; biosynthesis; extracellular polymers.
Дата поступления 24.01.16
В отличие от растительной целлюлозы бактериальный полимер имеет более тонкую структуру волокон (наноцеллюлоза) и высокую химическую чистоту. Благодаря своим свойствам (механической прочности, пористости, влагоудерживающей способности, пластичности, совместимости с тканями человека) бактериальная целлюлоза и ее разнообразные композиты могут широко использоваться в электротехнике, медицине, сельском хозяйстве, биотехнологии, фармацевтической, текстильной, бумажной и пищевой промышленности 9-13.
С целью поиска новых эффективных продуцентов целлюлозы в настоящей работе из различных образцов «чайного гриба» выделены четыре изолята уксуснокислых бактерий НЦ-7, НЦ-8, НЦ-12, НЦ-13, изучены их морфологические и физиолого-биохимические
Таблица 1
Морфологические и физиолого-биохимические свойства культур микроорганизмов*
Признак Культуры мик роорганизмов
НЦ-7 НЦ-8 НЦ-12 НЦ-13
Форма клеток палочки палочки палочки палочки
Подвижность - + - -
Окраска по Граму - - - -
Отношение к кислороду аэробы аэробы аэробы аэробы
Образование каталазы + + + +
Рост на 30% О-глюкозы + + + +
Рост в присутствии 0.35% уксусной кислоты + - + +
Рост без уксусной кислоты + + + +
Рост при 3% этанола и 6% уксусной кислоты - - - -
Рост на этаноле + + + +
Рост на глицерине + + + +
Рост на метаноле - - - -
Рост на сахарозе + + + +
Рост на О-манните + + + +
Окисление уксусной кислоты до СО2 и воды + + + +
Окисление молочной кислоты до СО2 и воды + + + +
Образование водорастворимого коричневого пигмента - - - -
*(—) — результат отрицательный, (+) — результат положительный.
свойства, исследована их способность синтезировать целлюлозу.
Выделение бактерий осуществляли высевом образцов «чайного гриба» на агаризованную среду Хестрина-Шрамма (среда ИБ), предложенную для культивирования уксуснокислых бактерий, синтезирующих бактериальную целлюлозу 14. На основании результатов исследования морфологических и физиолого-биохимических свойств изолятов, представленных в табл. 1, культура НЦ-8 была отнесена к уксуснокислым бактериям рода 01исопасв1оЬас1вт 15, а культуры НЦ-7, НЦ-12, НЦ-13 — к уксуснокислым бактериям рода КошадаЬав1ЬасЬвт 16-18.
Способность выделенных культур уксуснокислых бактерий синтезировать внеклеточные полимеры изучали в процессе их культивирования в статических условиях при 30 оС в течение 12 сут на жидкой среде Хестрина-Шрамма (среда ИБ) 14, а также на модифицированной среде, содержащей дополнительно 1% этанола
(среда ИБ-Е). В результате исследования было обнаружено, что бактерии НЦ-7 активно растут на обеих средах, но не образуют внеклеточные полимеры. Остальные культуры уксуснокислых бактерий (НЦ-12, НЦ-13 и НЦ-8) при культивировании на среде ИБ образуют очень тонкие полимерные гель-пленки на поверхности среды, (толщина не превышает 1—2 мм). Внесение в среду ИБ 1% этанола стимулирует синтез полимера: толщина пленок значительно увеличивается и достигает 18—25 мм (рис. 1).
Исследование мономерного состава очищенных образцов внеклеточных полимеров методом тонкослойной хроматографии про-
14
дуктов их химического гидролиза позволило выявить, что во всех образцах присутствует только одно соединение (рис. 2). Значения Я^ продуктов гидролиза полимеров (0.42—0.43) соответствуют коэффициенту хроматографи-ческой подвижности стандартного образца
Рис. 1. Фотография внеклеточных полимеров, синтезированных уксуснокислыми бактериями при культивировании на среде И8-Е: а — культура НЦ-8; б — культура НЦ-12; в — культура НЦ-13.
глюкозы (0.42). Это свидетельствует о том, что полимеры, синтезируемые исследуемыми культурами уксуснокислых бактерий, являются гомополимерами глюкозы и характеризуются высокой чистотой.
НЦ-12 НЦ-13 НЦ-8
глюкоза
Рис. 2. ТСХ продуктов гидролиза внеклеточных полимеров уксуснокислых бактерий
В пользу целлюлозной природы исследуемых полимеров свидетельствуют результаты исследования их ферментативного гидролиза с помощью целлюлолитических ферментных препаратов Целловиридин Г2Х и Целлолюкс Р, широко использующихся для гидролиза растительной целлюлозы с образованием редуцирующих сахаров (целлобиозы и глюкозы) 20' 21. Обнаружено, что внеклеточные полимеры уксуснокислых бактерий (культур НЦ-8, НЦ-12 и НЦ-13) являются субстратами для использованных препаратов. Полимеры практически полностью разрушаются в течение 20—40 ч, что коррелирует с накоплением в гидролизатах редуцирующих веществ (рис. 3 и 4). Выход редуцирующих веществ в расчете на исходный субстрат (внеклеточный полимер) в конце трансформации достигает высоких значений — 91—100 %.
100
75
50 -
25
-- 2
10 20 -масса (НЦ-8) — -масса (НЦ-13) — РВ (НЦ-12) —
30 40
-масса (НЦ-12) РВ (НЦ-8) РВ (НЦ-13)
Рис. 3. Кинетика ферментативного гидролиза внеклеточных полимеров уксуснокислых бактерий при 50 оС в 0.1 М ацетатном буфере (рН 5) с помощью ферментного препарата Целловиридин Г2Х
50 -
25
3
2
Время, ч
-масса (НЦ-8) РВ (НЦ-8)
масса (НЦ-12) РВ (НЦ-12)
масса (НЦ-13) РВ (НЦ-13)
Рис. 4. Кинетика ферментативного гидролиза внеклеточных полимеров уксуснокислых бактерий при 50 оС в 0.1 М ацетатном буфере (рН 5) с помощью ферментного препарата Целлолюкс Г
Изучение свойств очищенных полимеров методом ИК-спектроскопии в области 400— 4000 см-1, показало, что спектры полученных полимеров (рис. 5) соответствуют имеющимся в литературе спектрам бактериальной и растительной целлюлозы 22-24. В области 3600-3000 см-1 присутствуют полосы поглощения, соответствующие валентным колебаниям гидроксильных групп, а при-
4
3
0
0
0
4
3
1 5
0
0
сутствие полос в диапазоне 3000—2800 см-1 указывает на наличие валентных колебаний —СН и —СН2 групп. Пик поглощения при 1428 см-1 соответствует деформационным колебаниям —СН2 групп. Частота валентных колебаний 1168 см-1 указывает на вероятность присутствия в полимерах С—О—С групп. Колебания связей С—С и С—О представлены в диапазоне 1200—900 см—1. Полоса колебания при частоте 897 см—1 подтверждает присутствие в полимерах ^-гликозидных связей 22-24.
Таким образом, полученные результаты показывают, что культуры НЦ-8, НЦ-12 и НЦ-13 способны синтезировать целлюлозу. Выход полимеров, полученных при культивировании бактерий на среде Хестрина-Шрамма с 1% этанола, достигает 3.4—5.0 г (асв)/л (табл. 2), что соответствует уровню перспективных продуцентов бактериальной целлюлозы 9.
Таблица 2
Выход внеклеточных полимеров, полученных при культивировании уксуснокислых бактерий на среде Хестрина-Шрамма без добавления (среда HS) и с добавлением 1% этанола (среда HS-Е)
Среда Выход внеклеточных полимеров, г(асв)/л
культура НЦ-8 культура НЦ-12 культура НЦ-13
ИБ-Е 4.1 5.1 3.4
ИБ 0.12 0.2 0.18
Известно, что оптимизация условий (состава среды, температуры, аэрации) позволяет
9 25
значительно увеличить выход целлюлозы . В случае исследованных культур уксуснокислых бактерий, одним из существенных факторов, влияющих на синтез полимера, очевидно, является концентрация этанола в среде. Выход биополимеров, полученных на среде Хест-рина-Шрамма, содержащей 1% этанола, был в 2—10 раз больше, чем на среде без спирта (табл. 2).
Экспериментальная часть
Объектом исследования служили культуры уксуснокислых бактерий (НЦ-7, НЦ-8, НЦ-12, НЦ-13), выделенные из различных образцов «чайного гриба» путем высева на агари-зованную среду Хестрина-Шрамма (глюкоза — 2%, пептон — 0.5%, дрожжевой экстракт — 0.5%, натрий фосфорнокислый двухзамещен-ный — 0.27%, лимонная кислота — 0.15%, агар-агар — 1.5%) для получения отдельных колоний микроорганизмов 14.
Исследование морфологических, физиоло-го-биохимических свойств чистых культур микроорганизмов осуществляли в соответствии с известными методами 15-18. Для идентификации микроорганизмов использовали определитель бактерий Берги (второе издание) 15, а также оригинальные научные работы, описывающие свойства бактерий рода Котада1ав1Ъас1вт 16-18.
Синтез внеклеточных полимеров осуществляли на жидкой среде Хестрина-Шрамма (глюкоза — 2%, пептон — 0.5%, дрожжевой экстракт — 0.5%, натрий фосфорнокислый дву-замещенный — 0.27%, лимонная кислота — 0.15%) 14, а также на модифицированной среде, содержащей дополнительно 1% этанола. Питательные среды стерилизовали в автоклаве в течение 30 мин при температуре 120 оС. Биосинтез полимера проводили в статических условиях при 30 оС в колбах на 250 мл, содержащих 100 мл среды НБ или НБ-Е, в течение 12 сут. По окончании синтеза пленки полимера извлекали из культуральной жидкости, промывали дистиллированной водой и помещали в 0.5 М раствор КаОН для разрушения клеток бактерий. Разрушение клеток осуществляли в автоклаве при температуре 121 оС в течение 30 мин. Затем полимерные пленки промывали дистиллированной водой и высушивали при 100 оС до постоянной массы. Для полной очистки полимеров от примесей, придающих им темную окраску, высушенные образцы подвергали регидратации и повторной промывке дистиллированной водой. Очищенные полимеры высушивали при 100 оС до постоянной массы.
Гидролиз полимерных пленок и ТСХ -анализ продуктов гидролиза проводили по методике, приведенной в работе 19.
Ферментативный гидролиз очищенных сухих пленок внеклеточных полимеров (массой по 100 мг) осуществляли в 30 мл ацетатного буфера (рН 5) при 50 оС в присутствии коммерческих целлюлолитических препаратов Целлолюкс Е (НПО «Сиббиофарм», Россия) или Целловиридин Г2Х (Бердский завод, Россия). Изменение массы полимера в ходе реакции контролировали взвешиванием сухого остатка, полученного после центрифугирования реакционной смеси при 5000 об/мин в течение 10 мин. Концентрацию редуцирующих веществ в реакционной смеси определяли по методу Нельсона-Шомодьи 26.
ИК спектры записаны в тонком слое на ИК Фурье-спектрофотометре ШРге8^е-21 БЫшаёги.
Рис. 5. ИК-Фурье спектры внеклеточных полимеров, синтезированных уксуснокислыми бактериями:
а — культура НЦ-8; б — культура НЦ-12; в — культура НЦ-13 при культивировании на среде НБ-Б.
Литература
1. Зорин В.В., Петухова Н.И., Халимова Л.Х. Регио- и стереоселективная биотрансформация органических соединений // Панорама современной химии России. Современный органический синтез: Сб. обзорных статей.— М.: Химия, 2003.- С. 439-462.
2. Gupta A., Singh VK., Qazi GN., Kumar A. Gluconbacter oxydans: its biotechnological applications // J. Mol. Microbiol. Biotechnol.-2001.- V. 3, №3.- P.445-456.
3. Xiao-Hong Chen, Wen-Yong Lou, Min-Hua Zong, Thomas J Sith. Optiization of culture conditions to produce high yields of active Acetobacter sp. CCTCC M209061 cells for anti-Prelog reduction of prochiral ketones // BMC Biotechnology.- 2011.- V. 11.- P.110.
4. Зорин В.В., Петухова Н.И., Шахмаев Р.Н. Перспективные направления утилизации глице-ринсодержащих отходов в производстве биодизельного топлива // Российский химический журнал. ЖВХО им. Д.И. Менделеева.-2011.- №55.- С.77.
5. Rosalam S., England R. Review of xanthan gum production from unmodified starches by Xanthomonas comprestris sp. // Enzyme and Microbial Technology.- 2006.- V. 39.- P. 197-207.
6. Dams-Kozlowska H., Mercaldi M.P., Panilaitis B.J., Kaplan D.L. Modifications and applications of the Acinetobacter venetianus RAG-1 exopolysaccharide, the emulsan complex and its components // Appl Microbiol Biotechnol.-2008.- V. 81.- P. 201-210 .
7. Комлева E. В., Петухова Н. И., Хузина А. В., Фай-зрахманова Л.^, Муслухов Р. Р., Зорин В. В. Исследование влияния ультрафиолетового облучения на синтез продигиозина Serratia sp. NS-R1 // Баш. хим. ж.- 2009.- Т. 16, №1.- С. 106.
8. Ramachandran S., Fontanille P., Pandey A., Larroche C. Gluconic Acid: Properties, Applications and Microbial Production // Food Technol. Biotechnol.- 2006.- V. 44, №2.- P. 185-195.
9. Chawla P.R., Bajaj I.B., Survase S.A., Singhal R.S. Microbial cellulose: fermentative production and applications // Food Technology and Biotechnology.- 2009.-- V. 47, №2.- P. 107-124.
10. Lee K-Y., Buldum G., Mantalaris A., Bismarck A. More Than Meets the Eye in Bacterial Cellulose: Biosynthesis, Bioprocessing, and Applications in Advanced Fiber Composites // Macromol. B iosci.- 2014.- V. 14.- P. 10-32.
11. Shah N., Ul-Islam M., Khattak W.A., Park J.IK Overview of bacterial cellulose composites: A multipurpose advanced Material // Carbohydrate Polymers.- 2013.- V. 98.- P. 1585-1598.
12. Mohite BV., Patil SV. A novel biomaterial: bacterial cellulose and its new era applications / / Biotechnology and Applied Biochemistry.-2014.- V. 61, №2.- Р. 101-110.
13. Keshk SMAS Bacterial Cellulose Production and its Industrial Applications // J. Bioprocess Biotech.- 2014.- doi: 10.4172/21559821.1000150.
14. Hestrin S., Schramm M. Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum: preparation of freeze dried cells capable of polymerizing glucose to cellulose // Biochem. J.- 1954.- V. 58.- Р. 345-352.
References
1. Zorin V.V., Petukhova N.I. Regio- i stereoselek-tivnaya biotransformatsiya organicheskikh soedinenii [Regio- and stereoselective biotransformation of organic compounds] Panorama sovremennoi khimii Rossii. Sovremennyi organicheskii sintez [Panorama of modern Russian chemistry. Modern Organic Synthesis], Moscow, Khimiya Publ., 2003, pp. 439-462.
2. Gupta A., Singh VK., Qazi GN., Kumar A. [Gluconobacter oxydans: its biotechnological applications]. J. Mol. Microbiol. Biotechnol., 2001, v. 3, no. 3, pp. 445-456.
3. Xiao-Hong Chen, Wen-Yong Lou, Min-Hua Zong, Thomas J Smith. [Optimization of culture conditions to produce high yields of active Acetobacter sp. CCTCC M209061 cells for anti-Prelog reduction of prochiral ketones]. BMC Biotechnology, 2011, v. 11, p. 110.
4. Zorin V.V., Petukhova N.I., Shakhmaev R.N. Perspektivnye napravleniya utilizatsii glitserin-soderzhashchikh otkhodov v proizvodstve biodi-zel'nogo topliva [Perspective directions of utilization of glycerol-containing wastes in the production of biodiesel] Zhurnal Ross.Khim.Ob-va im D.I.Mendeleeva [Russian chemical Journal (Journal of the Russian Chemical Society named after DI Mendeleev)], 2011, v. 55, no. 1, p. 77.
5. Rosalam S., England R. [Review of xanthan gum production from unmodified starches by Xanthomonas comprestris sp. ]. [Enzyme and Microbial Technology], 2006, v. 39, pp. 197-207.
6. Dams-Kozlowska H., Mercaldi M.P., Panilaitis B.J., Kaplan D.L. [Modifications and applications of the Acinetobacter venetianus RAG-1 exopolysaccharide, the emulsan complex and its components]. Appl Microbiol Biotechnol, 2008, v. 81, pp. 201-210.
7. Komleva E.V., Petukhova N.I., Khuzina A.V., Faizrakhmanova L.S., Sultanova L.M., Zorin V.V. Issledovanie vliyaniya ul'trafioletovogo obluche-niya na sintez prodigiozina Serratia sp. NS-R1 [Research of the influence of ultraviolet radiation on the prodigiosine synthesis by Serratia sp. HC-P1]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir Chemical Journal], 2009, v. 16, no. 1, pp. 106-108.
8. Ramachandran S., Fontanille P., Pandey A., Larroche C. [Gluconic Acid: Properties, Applications and Microbial Production]. Food Technol. Biotechnol., 2006, v. 44, no. 2, pp. 185-195.
9. Chawla P.R., Bajaj I.B., Survase S.A., Singhal R.S. [Microbial cellulose: fermentative production and applications]. Food Technology and Biotechnology, 2009, v. 47, no. 2, pp. 107-124.
10. Lee K-Y., Buldum G., Mantalaris A., Bismarck A. [More Than Meets the Eye in Bacterial Cellulose: Biosynthesis, Bioprocessing, and Applications in Advanced Fiber Composites]. Macromol. B iosci., 2014, v. 14, pp. 10-32.
11. Shah N., Ul-Islam M., Khattak W.A., Park J.IK [Overview of bacterial cellulose composites: A multipurpose advanced Material]. Carbohydrate Polymers, 2013, v. 98, pp. 1585-1598.
12. Mohite BV., Patil SV. [A novel biomaterial: bacterial cellulose and its new era applications]. Biotechnology and Applied Biochemistry, 2014, v. 61, no 2, pp. 101-110.
13. Keshk SMAS [Bacterial Cellulose Production and its Industrial Applications]. J Bioprocess
15. Garrity G. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (Second Edition). Springer.— 14 2005.- V. 2.- P. 1414.
16. Yamada Y., Yukphan P., Vu H.T.L., Muramatsu Y., Ochaikul D., Tanasupawat S., Nakagawa Y. Description of Komagataeibacter gen. nov., with 15. proposals of new combinations (Acetobactera-ceae) // J. Gen. Appl. Microbiol.- 2012.- 16 V. 58.- P. 397-404.
17. Yamada Y. Transfer of Gluconacetobacter kakiaceti, Gluconacetobacter medellinensis and Gluconacetobacter maltaceti to the genus Komagataeibacter as Komagataeibacter 17. kakiaceti comb. nov., Komagataeibacter medellinensis comb. nov. and Komagataeibacter maltaceti comb. nov. // International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology.-2014.- V. 64.- P. 1670-1672.
18. Yamada Y., Yukphan P., Vu H.T.L., Muramatsu Y., Ochaikul D., Nakagawa Y. Subdivision of the genus Gluconacetobacter Yamada, Hoshino and 18. Ishikawa 1998: the proposal of Komagatabacter gen. nov. , for strains accommodated to the Gluconacetobacter xylinus group in the a-Proteobacteria // Ann Microbiol.- 2012.- V. 62.- P. 849-859
19. Bhavna V. Mohite, Satish V. Patil Investigation of Multi functional nature of fascinating biopolymer 19. «Bacterial Cellulose» // Carbohydrate Polymers.-
2014.- V. 106.- P. 132-141.
20. Торлопов M.A., Тарабукин Д.В., Фролова C.B., Щербакова Т.П., Володин В.В. Сульфатирован- 20. ные и карбоксиметилцеллюлозы производные микрокристаллической целлюлозы // Химия растительного сырья.- 2007.- №3.- С. 69-76.
21. Горячковская Т.Н., Старостин К.Г., Мещерякова H.A., Слынько Н.М., Пельтек С.Е. Технология осахаривания биомассы при помощи коммерческих ферментных препаратов // Вави- 21. ловский журнал генетики и селекции.- 2014.—
Т. 18, №4.- С. 983-988.
22. Neera, Karna Venkata Ramana, Harsh Vardhan Batra. Occurrence of Cellulose-Producing Gluconacetobacter spp. in Fruit Samples and Kombucha Tea, and Production of the Biopolymer // Appl Biochem Biotechnol.-
2015.- V. 176.- P. 1162-1173. 22.
23. Goh W.N., Rosma A., Kaur B., Fazilah A., Karim A.A., Bhat R. Microstructure and physical properties of microbial cellulose produced during fermentation of black tea broth (Kombucha) // International Food Research Journal.- 2012.- 23.
V. 19, №1.- P. 153-158.
24. Rani M.U., Appaiah K.A.A. Production of bacterial cellulose by Gluconacetobacter hansenii UAC09 using coffee cherry husk // J. Food Sci. Technol.-2013.- V. 50, №4.- P. 755-762.
25. Гладышева Е.К., Скиба E.A. Влияние углеродно- 24. го состава питательных сред на продуктивность целлюлозосинтезирующих бактерий // Ползу-новский вестник.- 2014.- №3.- С.168-173.
9 Ч
26. Хазиев Ф.Х. // Методы почвенной энзимоло-гии.— М.: Наука, 2005.- C. 189.
26.
Biotech, 2014, doi: 10.4172/2155-9821.1000150. Hestrin S., Schramm M. [Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum: preparation of freeze dried cells capable of polymerizing glucose to cellulose]. Biochem. J., 1954, v. 58, pp. 345-352. Garrity G. [Bergey's Manual of Systematic Bacteriology]. Springer, 2005, v. 2, pp. 1414. Yamada Y., Yukphan P., Vu H.T.L., Muramatsu Y., Ochaikul D., Tanasupawat S., Nakagawa Y. [Description of Komagataeibacter gen. nov., with proposals of new combinations (Acetobacteraceae)]. J. Gen. Appl. Microbiol., 2012, v. 58, pp. 397-404. Yamada Y. [Transfer of Gluconacetobacter kakiaceti, Gluconacetobacter medellinensis and Gluconacetobacter maltaceti to the genus Komagataeibacter as Komagataeibacter kakiaceti comb. nov., Komaga-taeibacter medellinensis comb. nov. and Komaga-taeibacter maltaceti comb. nov.]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2014, v. 64, pp. 1670-1672. Yamada Y., Yukphan P., Vu H.T.L., Muramatsu Y., Ochaikul D., Nakagawa Y. [Subdivision of the genus Gluconacetobacter Yamada, Hoshino and Ishikawa 1998: the proposal of Komagatabacter gen. nov., for strains accommodated to the Gluconacetobacter xylinus group in the a-Proteobacteria]. Ann Microbiol, 2012, v. 62, pp. 849-859. Bhavna V. Mohite, Satish V. Patil. [Investigation of Multi functional nature of fascinating biopolymer «Bacterial Cellulose»]. Carbohydrate Polymers, 2014, v. 106, pp. 132-141. Torlopov M.A., Tarabukin D.V., Frolova S.V., Schcerbakova T.P., Volodin V.V. Sul'fatirovannye i karboksimetiltsellyulozy proizvodnye mikrokris-tallicheskoi tsellyulozy [Sulfated and carboxyme-thyl derivatives of microcrystalline cellulose] Khimiya rastitel'nogo syr'ya [Vegetable raw materials Chemistry], 2007, v. 3, pp. 69-76. Goryachkovskaya T.N., Starostin K.G., Meshche-ryakova I. A., Slyn'ko N.M., Pel'tek S.E. Tekhnologiya osaharivaniya biomassy pri pomoshchi kommercheskikh fermentnykh preparatov [The technology of biomass saccharification using commercial enzyme preparations] Vavilovskij zhurnal genetiki i selektsii [Vavilov Journal of Genetics and Breeding], 2014, v. 18, no. 2, pp. 983-988. Neera, Karna Venkata Ramana, Harsh Vardhan Batra [Occurrence of Cellulose-Producing Gluconacetobacter spp. in Fruit Samples and Kombucha Tea, and Production of the Biopolymer]. Appl. Biochem. Biotechnol., 2015, v. 176, pp.1162-1173. Goh W.N., Rosma A., Kaur B., Fazilah A., Karim A. A., Bhat R. [Microstructure and physical properties of microbial cellulose produced during fermentation of black tea broth (Kombucha)]. International Food Research Journal, 2012, v. 19, no 1, pp. 153-158.
Rani M.U., Appaiah K.A.A. [Production of bacterial cellulose by Gluconacetobacter hansenii UAC09 using coffee cherry husk]. J. Food Sci Technol, 2013, v. 50, no. 4, pp. 755-762. Gladysheva E.K., Skiba E.A. Vliyanie uglerodnogo sostava pitatel'nykh sred na produktivnost' tsellyulozosinteziruyushchikh bakterii [Influence of carbon composition of nutrient media on productivity cellulose synthesizing bacteria] Polzunovskij vestnik [Polzunovsky Gazette], 2014, v. 3, pp.168-173. Khaziev F.H. Metody pochvennoi ehnzimologii [Methods of soil enzymology]. Moscow, Nauka Publ., 2005, 189 p.
