CC BY
108
УДК 579.66:547.94
Н. И. Петухова (к.биол.н., доц.), Д. В. Щербакова (студ.), А. А. Шараева (асп.), В. В. Зорин (чл.-корр. АН РБ, д.х.н., проф., зав. каф.)
СИНТЕЗ ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ ГРИБОМ MORTIERELLA ALPINA ГР-1 ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ НА ПИВНОЙ ДРОБИНЕ
Уфимский государственный нефтяной технический университет, кафедра биохимии и технологии микробиологических производств 450062, г. Уфа, ул. Космонавтов, 1; тел. (347) 2431935, e-mail: biocatNP@yandex.ru
N. I. Petukhova, D. V. Shcherbakova, A. A. Sharaeva, V. V. Zorin
SYNTHESIS OF POLYUNSATURATED FATTY ACIDS BY FUNGUS MORTIERELLA ALPINA GR-1 WHILE CULTURING ON BREWERS SPENT GRAIN
Ufa State Petroleum Technological University 1, Kosmonavtov Str, 450062 Ufa, Russia; ph. (347) 2431935, e-mail: biocatNP@yandex.ru
Изучена возможность использования пивной дробины в качестве субстрата для получения полиненасыщенных жирных кислот при твердофазном культивировании гриба Mortierella alpina ГР-1. Показано, что на агаризованной пивной дробине в качестве основной полиненасыщенной жирной кислоты образуется арахидо-новая кислота (40% от суммы кислот), тогда как эйкозапентаеновая кислота синтезируется в незначительных количествах (около 1%). При этом содержание липидов в воздушном мицелии не превышает 7.5% (от асв). Внесение в среду с пивной дробиной льняного масла (10%) или глицерина (2%) и овсяной крупы существенно увеличивает содержание липидов в воздушном мицелии (до 21—30.6 % от асв). В присутствии льняного масла протекает биосинтез липидов, содержащих в значительных количествах эйко-запентаеновую кислоту (21.9% от суммы кислот). На глицеринсодержащих средах с пивной дробиной и овсяной крупой (в различных соотношениях) эйкозапентаеновая кислота практически не образуется, тогда содержание арахидо-новой кислоты в липидах достигает 55.3—68.3 % (от суммы кислот).
Ключевые слова: арахидоновая кислота; микробиологический синтез липидов; Mortierella alpina; пивная дробина; эйкозапентаеновая кислота.
Brewers' spent grain was evaluated as substrate for the production of polyunsaturated fatty acids by solid-state fermentation with Mortierella alpina GR-1. It is shown that the main polyunsaturated fatty acid on agar brewer's spent grain is arachidonic acid (40% of total fatty acids) with insignificant yield of eicosapentaenic acid (about 1%). Wherein the content of lipids in aerial mycelium doesn't exceed 7.5% of dry weight. The addition of linseed oil (10%) or glycerol (2%) with oat significantly increase the content of lipids in biomass (up to 21—30.6 % of dry weight). In presence of linseed oil biosynthesis of lipids containing significant amounts of eicosapentaenic acid (21.9% of total fatty acids) occurs. On glycerol-containing media with brewer's spent grain and oat in various ratios eicosapentaenic acid is almost absent while the content of arachidonic acid in lipids is as high as 55.3—68.3 % of total acids
Key words: arachidonic acid; brewer's spent grain; eicosapentaenic acid; lipids microbiological synthesis; Mortierella alpina.
Работа выполнена при финансовой поддержке Минобрнауки России в рамках базовой части гос. задания
This work was financially supported by the Ministry of Education and Science of Russia in the framework of the base part of the state task
Дата поступления 29.09.14
В лабораторных условиях на основе микроорганизмов — продуцентов биологически активных веществ разработаны эффективные методы получения препаратов медицинского назначения, в том числе перспективных противораковых соединений, индуцирующих избирательную гибель раковых клеток 1-4. Однако реализация многих биотехнологических процессов в промышленных масштабах ограничивается их высокой себестоимостью.
Одним из подходов к снижению стоимости биотехнологической продукции является использование в качестве сырья для биосинтеза отходов переработки растительной биомассы. В настоящее время на полигонах пивоваренных предприятий России скопились сотни тысяч тонн пивной дробины — гущи, остающейся после приготовления сусла из проросшего ячменя (солода) 5. В составе высушенной и гранулированной пивной дробины по различным оценкам может содержаться 17.9—19 % белка, 4.8—9 % липидов, около 70.5% углеводов, а также 2.6% минеральных веществ 5,6. Это позволяет рассматривать пивную дробину как перспективное сырье для микробиологического синтеза.
Недавно было показано, что некоторые представители грибов рода Mortierella при твердофазном культивировании на пивной дробине способны синтезировать незаменимую эйкозапентаеновую кислоту 6, которая, как известно, участвует в регуляции иммунной, сердечно-сосудистой, пищеварительной и нервной системы человека, а также проявляет противораковую активность 6-9.
Ранее нами было установлено, что гриб Mortierella alpina 18-1 и его глицеринустойчи-вый мутант Mortierella alpina ГР-1 при культивировании на овсяных средах с глицерином синтезируют липиды с высоким содержанием арахидоновой кислоты (65—67 % от суммы жирных кислот) — предшественника эйкоза-пентаеновой кислоты 10-13. Однако эйкозапен-таеновая кислота в изученных условиях не синтезировалась.
В настоящей работе исследована возможность синтеза эйкозапентаеновой кислоты грибом Mortierella alpina ГР-1 в процессе его поверхностного культивирования на средах, содержащих пивную дробину.
Пивную дробину использовали как для полной, так и для частичной замены овсяной крупы в средах для культивирования гриба. При полной замене пивную дробину (120 г) вносили в 1 л воды, содержащей 1.5% агара для связывания свободной воды. В случае час-
тичной замены пивную дробину (в различных соотношениях к овсяной крупе) добавляли в овсяную среду, содержащую 20 г/л глицерина и 0.3 г/л сульфата цинка. Выращивание культуры осуществляли при 28 оС в течение 20 сут.
Исследование жирнокислотного состава липидов воздушного мицелия гриба Mortierella alpina ГР-1, полученного на агари-зованной среде с пивной дробиной, показало, что содержание в них арахидоновой кислоты не превышает 40% (от суммы жирных кислот), а эйкозапентаеновая кислота не синтезируется в этих условиях (рис. 1).
40 35н 30 25н 20 15 105 0
II
II.I.ÍI.
о VO
m »n
ООО <N <N <N
Рис. 1. Жирнокислотный состав липидов воздушного мицелия гриба Mortierella alpina ГР-1, полученного на агаризованной среде с пивной дробиной:
С16:0 — пальмитиновая кислота; С18:0 — стеариновая кислота; С18:1 — олеиновая кислота; С18:2 — линолевая кислота; С18:3 — у-линоленовая кислота; С20:3 — дигомо-у-линоленовая кислота; С20:4 — арахидоновая кислота; С20:5 - эйкозапен-таеновая кислота.
При этом на агаризованной пивной дробине гриб формирует очень скудный воздушный мицелий (рис. 2а), в котором содержание ли-пидов составляет не более 7.5% (от асв). В то же время при культивировании гриба на овсяных средах, содержащих глицерин и сульфат цинка, с добавлением пивной дробины, происходит более активное развитие воздушного мицелия. Наиболее обильно воздушный мицелий формируется на среде 1, содержащей 60 г/л пивной дробины и 60 г/л овсяной крупы (рис. 2б). В этих условиях выход биомассы воздушного мицелия в расчете на одну чашку Петри составляет 0.29 г (асв) (среда 1, табл. 1).
Увеличение содержания пивной дробины в среде с 60 г/л (среда 1, табл. 1) до 120 г/л (среда 2, табл. 1) приводит к снижению выхода биомассы воздушного мицелия до 0.18 г (асв) с одной чашки Петри. Внесение большего количества овсяной крупы (90 г/л и 120 г/л) в среды, содержащие 120 г/л пивной дробины
а б
Рис. 2. Рост гриба Мог^вгвИа а1рта ГР-1: а — на агаризованной пивной дробине (пивная дробина — 120 г/л, агар — 15 г/л); б — на овсяной среде с добавлением пивной дробины (пивная дробина — 60 г/л, овсяная крупа — 60 г/л, глицерин — 20 г/л, сульфат цинка — 0.3 г/л (среда 1)).
(среды 3 и 4), не оказывает компенсирующего эффекта на развитие воздушного мицелия.
Содержание липидов в воздушном мицелии, полученном на глицеринсодержащих средах с пивной дробиной и овсяной крупой, достигает 21—24.4 % (табл. 1).
При исследовании жирнокислотного состава липидов воздушного мицелия обнаружено, что гриб МотИвтвИа а1р1па ГР-1 способен синтезировать эйкозапентаеновую кислоту при культивировании на глицеринсодержащих средах с пивной дробиной и овсяной крупой, однако ее содержание не превышает 1% от суммы жирных кислот (табл. 2).
Вместе с тем, установлено, что на этих средах основной кислотой в составе липидов
воздушного мицелия является арахидоновая кислота, являющейся предшественником в синтезе ряда низкомолекулярных биорегуляторов, а также применяющейся в качестве лекарственного средства, пищевой и кормовой добавки, стимулятора роста и индуктора неспецифической устойчивости растений 8,14-16. В случае среды 1 содержание арахидоновой кислоты в липидах воздушного мицелия было сопоставимо с наилучшим его показателем (67% от суммы жирных кислот), достигнутым ранее при культивировании гриба на глице-ринсодержащей овсяной среде (120 г/л овсяной крупы) без добавления пивной дробины 10.
Следует отметить, что при культивировании гриба на среде 1 помимо воздушного мице-
Таблица 1
Выход биомассы грибного мицелия (в расчете на одну чашку Петри) и содержание в нем липидов при культивировании Mortierella alpina ГР-1 на глицеринсодержащих средах с овсяной крупой и пивной дробиной при 28±2 оС в течение 20 сут
Номер среды Компоненты среды, г/л Биомасса, г (асв) Липиды, % (от асв)
пивная дробина овсяная крупа глицерин сульфат цинка ВМа СМб ВМ СМ
1 60 60 20 0.3 0.29 1.25 24.4 18.5
2 120 60 20 0.3 0.18 н 21.4 н
3 120 90 20 0.3 0.11 н 21.0 н
4 120 120 20 0.3 0.12 н 22.6 н
аВМ — воздушный мицелий, бСМ — субстратный мицелий, вн — не определяли
Таблица 2
Содержание арахидоновой и эйкозапентаеновой кислот в липидах мицелия Mortierella alpina ГР-1, полученного при культивировании гриба на глицеринсодержащих средах с овсяной крупой и пивной дробиной при 28±2 оС в течение 20 сут
Номер среды Компоненты среды, г/л ААг, % от суммы ЖК8 ЭПКд, % от суммы ЖК
пивная дробина овсяная крупа глицерин сульфат цинка ВМа СМб ВМ СМ
1 60 60 20 0.3 68.3 36.1 1.0 1.6
2 120 60 20 0.3 60.9 н 0.1 н
3 120 90 20 0.3 55.3 н 0.3 н
4 120 120 20 0.3 59.8 н 0.1 н
аВМ — воздушный мицелий, бСМ — субстратный мицелий, вн — не определяли, гАА — арахидоновая кислота, дЭПК — эйкозапентаеновая кислота, еЖК — жирные кислоты.
лия на поверхности среды формируется плотная мицелиальная пленка (субстратный мицелий), которую можно отделить от субстрата. Масса субстратного мицелия, собранного с одной чашки Петри, достигает 1.25 г (асв), что в 4.3 раза превышает биомассу воздушного мицелия, полученную в тех же условиях (табл. 1). В других вариантах используемых сред формировалась тонкая пленка субстратного мицелия, что может быть связано с более низкой влажностью альтернативных сред из-за более высокого содержания в них твердого субстрата (пивной дробины и овсяной крупы) 17.
В субстратном мицелии, при культивировании гриба на среде 1, накапливается 18.5% (от асв) липидов, содержащих небольшое количество эйкозапентаеновой кислоты (1.6% от суммы жирных кислот). Однако уровень ара-хидоновой кислоты в них достигает относительно высокого значения (36.1% от суммы жирных кислот).
Таким образом, полученные результаты показывают, что пивная дробина может быть использована для частичной замены овсяной крупы в составе глицеринсодержащей среды для культивирования гриба МотИетеНа а1р1па ГР-1 с целью получения практически важной арахидоновой кислоты. Однако, для синтеза эйкозапентаеновой кислоты с помощью этого продуцента глицеринсодержащие среды на основе пивной дробины и овсяной крупы, вероятно, малоперспективны.
Известно, что грибы МотИетвИа а1р1па могут синтезировать эйкозапентаеновую кислоту не только путем окисления эндогенной арахидоновой кислоты, но и путем трансформации экзогенной -линоленовой кислоты под действием грибных ферментов, участвующих в биосинтезе арахидоновой кислоты из линоле-вой кислоты 18.
Обнаружено, что в используемой пивной дробине содержится около 10% липидов, однако в них отсутствует а-линоленовая кислота. Основными жирными кислотами являются пальмитиновая (31.3%), стеариновая (3.5%), олеиновая (12.6%) и линолевая (52.5%) кислоты. Это позволяет предполагать, что при росте гриба МотИетеНа а1р1па ГР-1 в присутствии пивной дробины эйкозапентаеновая кислота синтезируется только путем окисления эндогенной арахидоновой кислоты.
С целью увеличения содержания эйкозапентаеновой кислоты в липидах МотИетеНа а1р1па ГР-1 исследован синтез полиненасыщенных жирных кислот при культивировании гриба на агаризованной пивной дробине, а так-
же смесях дробины и овсяной крупы, в присутствии а-линоленовой кислоты. В качестве источника -линоленовой кислоты использовали льняное масло, в котором содержание этого соединения может составлять 44—61 % 18. Показано, что внесение льняного масла в пивную дробину в концентрации 10% значительно увеличивает содержание эйкозапентаеновой кислоты в липидах ряда представителей рода МотИетеНа 6.
В результате исследования обнаружено, что на средах с высоким содержанием пивной дробины (среды 5 и 6, табл. 3) в присутствии льняного масла формируется более обильный воздушный мицелий, нежели на аналогичных по содержанию твердой фазы глицеринсодер-жащих средах (среды 2 и 4, табл. 1). В то же время, на среде 7, содержащей вдвое меньше пивной дробины и 60 г/л овсяной крупы, образуется более скудный воздушный мицелий, чем на среде 5 или 6 (табл. 3). Вероятно, для формирования воздушного мицелия важно оптимальное соотношение содержания льняного масла и пивной дробины с овсяной крупой в питательной среде.
Выход биомассы воздушного мицелия, полученной на среде 7, в 2 раза ниже, чем на аналогичной глицеринсодержащей среде 1 (табл. 1), хотя субстратный мицелий в обоих случаях образуется с сопоставимым выходом (1.16 г и 1.25 г в расчете на одну чашку Петри).
Содержание липидов в воздушном и субстратном мицелии, полученных на средах с льняным маслом (24.9—30.6 % и 39%, соответственно), немного выше, чем на соответствующих глицеринсодержащих средах (табл. 1 и 3).
В составе всех препаратов грибных липи-дов, полученных на средах с льняным маслом, обнаружена эйкозапентаеновая кислота (табл. 4). Наибольшее ее содержание (21.9% от суммы жирных кислот) достигается при культивировании гриба на агаризованной пивной дробине (среда 5, табл. 4). Внесение овсяной крупы в количестве 120 г/л в среду с пивной дробиной (120 г/л) снижает содержание эйкозапентае-новой кислоты в липидах воздушного мицелия более чем в 4 раза (среда 6, табл. 4). Использование среды с пониженным содержанием твердой фазы при аналогичном соотношении пивной дробины и овсяной крупы (1:1) приводит к увеличению уровня эйкозапентаеновой кислоты в липидах воздушного мицелия до 14.6% от суммы жирных кислот (среда 7, табл. 4). Содержание эйкозапентаеновой кислоты в субстратном мицелии, полученном на среде 7, не превышает 2.5% (от суммы жирных кислот).
Таблица 3
Выход биомассы грибного мицелия (в расчете на одну чашку Петри) и содержание в нем липидов при культивировании гриба на средах с овсяной крупой и/или пивной дробиной, содержащих льняное масло, при 28±2 оС в течение 20 сут
Номер среды Компоненты среды, % Биомасса, г (асв) Липиды, % (от асв)
пивная дробина овсяная крупа льняное масло агар ВМа СМб ВМ СМ
5 120 - 100 15 0.29 н 24.9 н
6 120 120 100 - 0.38 н 30.6 н
7 60 60 100 - 0.11 1.16 27.7 39.0
аВМ — воздушный мицелий, бСМ — субстратный мицелий, вн — не определяли
Таблица 4
Содержание арахидоновой и эйкозапентаеновой кислот в липидах мицелия Mortierella alpina ГР-1, полученного при культивировании гриба на средах с овсяной крупой и/или пивной дробиной, содержащих льняное масло, при 28±2 оС в течение 20 сут
Номер среды Компоненты среды, % ААг, % от суммы ЖКе ЭПКд, % от суммы ЖК
пивная дробина овсяная крупа льняное масло агар ВМа СМб ВМ СМ
5 120 - 100 15 41.6 н 21.9 н
6 120 120 100 - 7.3 н 4.3 н
7 60 60 100 - 26.7 7.4 14.6 2.5
аВМ — воздушный мицелий, бСМ — субстратный мицелий, вн — не определяли, гАА — арахидоновая кислота, дЭПК — эйкозапентаеновая кислота, еЖК — жирные кислоты.
Содержание арахидоновой кислоты в липидах гриба, полученных на средах с льняным маслом, коррелирует с содержанием в них эйкозапентаеновой кислоты: нибольший уровень арахидоновой кислоты (41.6% от суммы жирных кислот) получен на среде 5 с агаризован-ной пивной дробиной, а наименьший (7.3% от суммы жирных кислот) — на среде 6 с максимальным содержанием твердой фазы (табл. 4). При этом следует отметить, что на всех средах с льняным маслом содержание арахидоновой кислоты в липидах значительно ниже, чем на аналогичных глицеринсодержащих средах (табл. 2 и 4).
Таким образом, пивная дробина может быть использована в качестве твердого питательного субстрата для культивирования гриба МотИвтвИа а1р1на ГР-1 с целью получения полиненасыщенных жирных кислот. На среде с пивной дробиной и льняным маслом (10%) могут быть получены липиды с высоким содержанием эйкозапентаеновой кислоты (21.9% от суммы кислот). На глицеринсодержащих средах с пивной дробиной и овсяной крупой (в различных соотношениях) могут быть синтезированы липиды, содержащие 55.3—68.3 % (от суммы кислот) арахидоновой кислоты.
Экспериментальная часть
Выращивание грибов проводили в чашках Петри диаметром 10 см методом поверхностного культивирования на пивной дробине (120 г
на 1 л воды) и 2% агара, а также на средах, содержащих пивную дробину (60 или 120 г/л) и добавки: овсяную крупу (60, 90 или 120 г/л), глицерин (20 г/л), сульфат цинка семиводный (0.3 г/л) или льняное масло (100 г/л). Варианты составов сред представлены в табл. 1—4. Питательные среды стерилизовали в автоклаве в течение 30 мин при температуре 120 оС. В качестве инокулята использовали 10-ти суточный воздушный мицелий гриба, полученный на овсяной среде. Культивирование осуществляли при температуре 25оС в течение 20 сут. Все эксперименты выполняли в трех повторностях.
Биомассу воздушного и субстратного мицелия собирали и высушивали в сушильном шкафу до постоянного веса при температуре 65 оС. Липиды экстрагировали из сухого мицелия трехкратной обработкой гексаном. Экстракты объединяли, удаляли мелкие частицы биомассы центрифугированием и высушивали. Количество собранной сухой биомассы и выделенных липидов оценивали гравиметрически.
Для определения жирнокислотного состава грибных липидов получали метиловые эфи-ры жирных кислот, как описано в работе 19. Идентификацию метиловых эфиров ЖК проводили на хроматомасс-спектрометре GCMS-SQP2010S Shimadzu (электронная ионизация при 70 эВ, диапазон детектируемых масс 33— 380 Да). Использовали капиллярную колонку HP-IMS (30 м х 0.25 мм х 0.25 мкм), температура испарителя 280 oC, температура ионизационной камеры 200 oC. Анализ проводили в
режиме программирования температуры от 50 до 300 0С со скоростью 10 0С/мин, газ-носитель — гелий (1.1 мл/мин). Отнесение хрома-тографических сигналов к соответствующим метиловым эфирам ЖК проводили с помощью библиотеки масс-спектров №8Т. Количественный анализ состава полученных препаратов метиловых эфиров жирных кислот осуществ-
Литература
1. Reichenbach H. // Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology.- 2001.- V.27.- P.149.
2. Jing C., Xin S., Hui Z., Yinbo Q. // Enzyme and Microbial Technology.- 2006.- V.39.- P.501.
3. Zhao X., Wakamatsu Y., Shibahara M., Nomura N., Geltinger C., Nakahara T, Murata T., Yokoyama K. // Cancer Res.- 1999.- V. 59.- P.482.
4. Петухова Н. И., Хузина А. В., Файзрахмано-ва Л. C., Муслухов Р. Р., Комлева Е. В., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.- 2009.- Т.16, №1.-С.106.
5. Волотка Ф. Б., Богданов В. Д. // Известия Дальневосточного федерального университета. Экономика и управление.- 2013.- №1(65).-C. 114.
6. Jacobs A., Botha A., Van Zyl W.H. // Biologia.- 2009.- V.64, №5.- Р.871.
7. Nordoy A. // Drugs.- 1991.- V.42.- P.331.
8. Gill I., Valivety R. // TIBTECH.- 1997.-V.15.- P.401.
9. Senzaki H., Iwamoto S., Ogura E., Kiyozuka Y., Arita S., Kurebayashi J., Takada H., Hioki K., Tsubura A. // Anticancer Res.- 1998.- V.18.-P.1621.
10. Петухова Н. И., Ландер О. В., Рахматулли-на Ю. Р., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.- 2013.-Т.20, №1.- С.94.
11. Рахматуллина Ю. Р., Петухова Н. И., Авдеева Е. Н., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.-2005.- Т.12, №1.- С.49.
12. Петухова Н. И., Рахматуллина Ю. Р., Яхуто-ва Я. Р., Спирихин Л. В., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.- 2006.- Т.13, №1.- С.95.
13. Петухова Н. И., Митягина А. В., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.- 2010.- Т.17, №5.- С.50.
14. Stella N., Schweltzer P., Plomelli D. // Nature.- 1997.- V.388.- P.773.
15. Безуглов В. Н., Маневич Е. М., Арчаков А. В., Бобров М. Ю., Куклев Д. В., Петрухина Г. Н., Макаров В. А., Бузников Г. А. // Биоорг. Химия. — 1997.- Т.23.- С.211.
16. Петухова Н. И., Ландер О. В., Щербакова Д. В., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.- 2013.- Т.20, №1.- C.75.
17. Barrios-Gonzalez J. // Process Biochemistry.-2012.- V.47.- P.175.
18. Shimizu S., Kawashima H., Akimoto K., Shinmen Y., Yamada H. // JAOCS.- 1989.- V.66 (3).-P.342.
19. А.с. 968072. СССР/ Султанович Ю. А., Нечаев А. П., Барсукова И. А. //Б.И.- 1982.- №39.-С.223.
ляли на хроматографе Хроматэк Кристалл с пламенно-ионизационным детектором на капиллярной колонке 60m х 0.32mm ID Solgel-Wax x 0.5мт. Режим анализа: температура термостата колонки — 250 оС, температура детектора — 320 оС, температура испарителя — 320 оС, скорость газа-носителя (азот) — 27.5 мл/мин.
References
1. Reichenbach H. [Myxobacteria, producers of novel bioactive substances]. Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology, 2001, v. 27, pp.149—156.
2. Jing C., Xin S., Hui Z., Yinbo Q. [Production, structure elucidation and anticancer properties of from Wickerhamiella domercqiae]. Enzyme and Microbial Technology, 2006, v. 39, pp. 501—506.
3. Zhao X., Wakamatsu Y., Shibahara M., Nomura N., Geltinger C., Nakahara T, Murata T., Yokoyama K. [Mannosylerythritol lipid is a potent inducer of apoptosis and differentiation of mouse melanoma cells in culture]. Cancer Res. 1999, v. 59, pp. 482.
4. E.V. Komleva, N.I. Petukhova, A.V. Khuzina, L.S. Faizrakhmanova, L.M. Sultanova, V.V. Zorin. Issledovanie vlijanija ul'trafioletovogo obluchenija na sintez prodigiozina Serratia sp. NS-R1 [Research of the influence of ultraviolet radiation on the prodigiosine synthesis by Serratia sp. HC-P1] Bashkirskiy khimicheskiy zhurnal [Bashkir Journal of Chemistry], 2009, v. 16, по.1, pp. 106-108.
5. Volotka F.B., Bogdanov V.D. Tekhnologicheskaja i khimicheskaja kharakteristika pivnoi drobiny [Technological and chemical characteristics of spent grains] Izvestiya Dal'nevostochnogo fede-ral'nogo universiteta. Ekonomika i upravlenie [Proceedings of the Far Eastern Federal University. Economics and Management], 2013, v. 65, по.1, pp. 114-124.
6. Jacobs A., Botha A., Van Zyl W.H. [The production of eicosapentaenoic acid by representatives of the genus Mortierella grown on brewers' spent grain]. Biologia, 2009, v. 64, по.5, pp. 871-876.
7. Nordoy A. [Is there a rational use for n-3 fatty acids (fish oils) in clinical medicine]. Drugs, 1991, v. 42, pp. 331-342.
8. Gill I., Valivety R. [Polyunsaturated fatty acids, part 1: occurrence, biological activities and applications]. TIBTECH, 1997, v.15, pp. 401-409.
9. Senzaki H., Iwamoto S., Ogura E., Kiyozuka Y., Arita S., Kurebayashi J., Takada H., Hioki K., Tsubura A. [Dietary effects of fatty acids on growth and metastasis of KPL-1 human breast cancer cells in vivo and in vitro]. Anticancer Res., 1998, v. 18, pp. 1621-1627.
10. Petukhova N. I., Lander O. V., Rakhmatullina Yu. R., Zorin V.V. Dinamika zhirnokislotnogo sostava lipidov griba Mortierella alpina 18-1 — produ-tsenta arakhidonovoi kisloty i ego glitserinus-toichivogo mutanta pri kul'tivirovanii na srede s glitserinom [Fatty acids composition dynamics of lipids of fungus Mortierella alpina 18-1 -
arachidonic acid producer and its glycerol-resistant mutant under glycerol-containing medium cultivation]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemical journal], 2013, v. 20, nol, pp. 94-98.
11. Rakhmatullina Yu. R., Petukhova N. I., Avde-eva E. N., Zorin V. V. Vlijanie tsitrata natriya i gli-tserina na rost griba Mortierella alpina 18-1 — produtsenta arakhidonovoi kisloty pri tverdofaz-nom kul'tivirovanii na rastitel'nykh substratakh [Effect of sodium citrate and glycerol in growth of the fungus Mortierella alpina 18-1 — producing arachidonic acid in the solid phase by culturing plant substrates]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemical journal], 2005, v.12, no 1, pp. 49-53.
12. Petukhova N. I., Rakhmatullina Yu. R., Yakhutova Ya. R., Spirikhin L. V., Zorin V. V. Issledovanie korrelyatsii TTH-reduktaznoi aktivnosti s soderzhaniem arakhidonovoi kisloty v lipidakh griba Mortierella alpina 18-1 [Correlation studies of TTH-reductase activity with arachidonic acid content in Mortierella alpina 18-1 fungi lipids]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemical journal], 2006, v. 13, no 1, pp. 95-97.
13. Petukhova N. I., Mityagina A. V., Zorin V. V. Sintez polinenasyshhennykh zhirnykh kislot glitserinustoichivym mutantom Mortierella alpina GR-1 [Synthesis of polyunsaturated fatty acids by glycerol-resistant mutant Mortierella alpina GR 1] Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemical journal], 2010, v.17, no.5, pp. 50-52.
14. Stella N., Schweltzer P., Plomelli D. [A second endogenous cannabinoid that modulates long-term potentiation]. Nature, 1997, v. 388, pp. 773-778.
15. Bezuglov V.N., Manevich E.M., Archakov A.V., Bobrov M.Yu., Kuklev D.V., Petruhina G.N., Makarov V.A., Buznikov G.A. Iskusstvenno funktsionalizirovannye polienovye zhirnye kisloty — novye lipidnye bioregulyatory [Artificially functionalized polyene fatty acids — the new lipid bioregulators]. Bioorg. Khimiya [Bioorg. Chemistry], 1997, v. 23, no. 3, pp. 211-220.
16. Petukhova N.I., Lander O.V., Shherbakova D.V., Zorin V.V. Stimulirovanie rosta i antistressovoi ustoichivosti rastenii s pomoshh'yu proizvodnykh polinenasyshhennykh lipidov griba Mortierella alpina GR-1 [Stimulation of plants growth and antiistress resistance by polyunsaturated lipids derivatives of fungus Mortierella alpina GR-1] Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemical journal], 2013, v. 20, no.1, pp. 75-78.
17. Barrios-Gonzalez J. [Solid-state fermentation: Physiology of solid medium, its molecular basis and applications]. Process Biochemistry, 2012, v.47, pp.175—185.
18. Shimizu S., Kawashima H., Akimoto K., Shinmen Y., Yamada H. [Microbial conversion of an oil containing -linolenic acid to an oil containing eicosapentaenoic acid]. JAOCS, 1989, v. 66, no.3, pp.342-347.
19. Sultanovich Yu.A., Nechaev A. P., Barsuko-va I.A. Sposob kolichestvennogo opredelenija zhirnookislotnogo sostava lipidov mikroorganiz-mov [A method of quantitative determination of fatty acid lipid composition of microorganisms]. Patent USSR, no. 968072, 1982.
