CC BY
62
Сер. 4 2007 Вып. 3
ВЕСТНИК САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
УДК 547.92+542.91
Е. В. Гриненко, И. Ю. Каменева, Ш. Н. Абусалимов, Е. М. Марченко, С. И. Селиванов, С.Н. Морозкина, А. Г. Шавва
СИНТЕЗ И ИССЛЕДОВАНИЕ ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ НЕКОТОРЫХ 8А-АНАЛОГОВ СТЕРОИДНЫХ ЭСТРОГЕНОВ
Известно, что дислипопротеидемии атерогенного характера являются одним из главных факторов риска развития атеросклероза [1, 2]. Использование эстрогенов для заместительной гормональной терапии позволяет проводить коррекцию липидного обмена, но при этом часто наблюдаются значительные побочные эффекты. Наиболее опасными из них считают повышение частоты возникновения рака молочной железы [3] и рака эндометрия [4]. В связи с этим встает задача создания новых лекарственных препаратов на основе эстрогенов, имеющих пониженную утеротропную активность и способных нормализовать спектр липидов сыворотки крови.
8а-Аналоги стероидных эстрогенов могут обладать улучшенным соотношением между гиполипидемической и утеротропной активностями по сравнению с соединениями с «природным» сочленением колец [5-10], однако, имеются лишь немногочисленные данные о детальном исследовании аналогов этого стереохимического ряда [7, 9, 11]. Представлялось необходимым синтезировать несколько подобных эстрогенов и оценить их гиполипидемические свойства.
В качестве модельных соединений мы избрали стероиды (I), (II а), (II б), (III), (IV а) и (IV б), имеющие дополнительные алкильные группы в кольцах А и D. Причины выбора таких модификаций обсуждались ранее [10].
8а-Аналог (IV б) синтезировали предложенным ранее методом [10]. Пути получения остальных модельных соединений представлены на схемах 1 и 2. При синтезе 5-нораналога (I) мы приняли во внимание, что ключевая стадия получения подобных соединений—прямая конденсация винилкарбинолов типа (VI) с циклическими 1,3-ди-кетонами—проходит достаточно легко [15-18], тоща как для получения аналогов с шес-тичленным кольцом В перспективнее использовать изотиурониевые соли типа (XI) [20-23]. Строение всех впервые синтезированных соединений установлено на основании спектральных характеристик, которые близки к таковым сходных по структуре веществ [10, 12-14].
Результаты изучения биологических свойств модельных стероидов представлены в таблицах 1 и 2. При оценке гиполипидемического действия исследованных соединений мы принимали во внимание не только их влияние на содержание холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и в печени, но и на содержание в сыворотке крови антиатерогенных липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) и атерогенных ли-попротеидов низкой плотности (ЛПНП).
Как и предполагалось, все соединения проявляют пониженную гормональную активность, однако у стероидов (I), (И а) и (И б) гиполипидемическое действие полностью
© Е.В. Гриненко, И.Ю. Каменева, Ш.Н. Абусалимов, Е.М. Марченко, С.И. Селиванов, С.Н. Морозкина, А. Г. Шавва, 2007
Схема 2. а: Ю = СНЗ, Я2 = Н Ь: Ю =Н, Я2 = СНЗ
Схема 3.
отсутствует. Соединение (IV б) оказалось наиболее интересным. Уже при дозе 0,3 мг/кг при аналитическом ультрацентрифугировании в градиенте плотности КВг выявлено нормализующее влияние на спектр липопротеидов сыворотке крови, а при дозе 3 мг/кг
Г
из сыворотки крови исчезают «аномальные» липопротеиды, которые обычно появляются после овариэктомии. Близкими свойствами обладает и стероид (IV а). Любопытно, что оба соединения имеют пропильную группу при С-13. Важно отметить, что при дозах соответственно 0,3 мг/кг и 0,5 мг/кг сохраняется достаточно высокое содержание антиатерогенных ЛПВП. Преимуществом соединений (IV а) и (IV б) является отсутствие у них гипертриглицеридемического эффекта в сыворотке крови, который часто наблюдается у типичных эстрогенов [24]. В то же время следует отметить и негативный момент, а именно, отсутствие нормализации содержания в печени холестерина и триглицеридов под действием этих стероидов.
В последние годы наблюдается изменение стратегической линии в создании средств заместительной гормональной терапии—ориентация на комбинированные препараты, содержащие эстрогенный и антиэстрогенный компоненты [25, 26]. В связи с этим небольшая утеротропная активность модифицированных эстрогенов, обладающих гиполипидемическими свойствами, не может служить препятствием для их практического применения. Целью дальнейших исследований должно быть выявление аналогов, проявляющих активность при возможно меньших дозах.
Экспериментальная химическая часть. Спектры ЯМР 'Ни 13С регистрировали при 295 К на спектрометре Bruker DPX-300 соответственно на частотах 300,130 и 75,468 МГц при 295 К. Химические сдвиги измерены по отношению к ТМС путем присвоения сигналу растворителя (CDC13/CHC13 = 99,9/0,1) стандартных значений 7,26 м. д. ('Н) и 76,90 м. д. (,3С) с точностью не хуже ±0,01 м. д. Гомоядерные КССВ измерены с точностью ±0,02 Гц из спектров 'Н ЯМР, полученных после дополнительной обработки линий с помощью Лоренц-Гауссова преобразования [27]. Масс-спектры сняты на приборе МХ-1321 при температуре ионизационной камеры 200-210° С и энергии ионизирующего излучения 70 eV.
Метиловый эфир В-нор-18-этил-8а-эстрадиола (I).
а) З-Метокси-18-этил-В-норэстра-1,3,5(10),8,14-пентаен-17-он (VIII). К раствору винилмагнийбромида, приготовленному из 13 г магния и соответствующего количества винилбромида, прикапывали при -20° С раствор 26 г 5-метоксииндан-1-она (V) в смеси 200 мл ТГФ и 60 мл абсолютного эфира. Реакционную смесь перемешивали при той же температуре 3 ч, а затем оставляли на ночь при комнатной температуре. Утром реакционную смесь нагревали до 40° С, перемешивали 1 ч, после чего раствор охлаждали до 5° С и осторожно выливали при сильном перемешивании в 500 г льда, 120 мл воды и 35 г хлористого аммония. Через 1 ч органический слой отделяли, водный экстрагировали тремя порциями эфира по 400 мл. Объединенную органическую фазу трижды промывали равным объемом воды, сушили сульфатом натрия. Растворитель удаляли на ротационном испарителе при температуре не выше 30° С. Полученный винилкарбинол (VI) растворяли в 100 мл «-ксилола и использовали в синтезе без дальнейшей очистки.
В колбу, снабженную насадкой Дина-Старка с обратным холодильником, закрытым хлоркальциевой трубкой, мешалкой и капельной воронкой, помещали тритон В (приготовленный из 2,5 г бромистого триметилбензиламмония), 30 г 2-пропилцикло-пентан-1,3-диона и 300 мл «-ксилола. Содержимое колбы нагревали до кипения, после чего к нему медленно прикапывали при перемешивании приготовленный ранее раствор винилкарбинола (VI) в «-ксилоле. Кипячение продолжали до прекращения отделения воды в насадке Дина-Старка. Затем реакционную смесь охлаждали
Таблица 1
Гиполипидемические свойства 8а-аналогов стероидных эстрогенов (I) и (II а, б)
Группа животных Доза, мг/кг веса тела Липиды сыворотки крови Липиды печени Утеротропная активность, ЕЭ2к (мг/кг веса тела)
Холестерин, ммоль/л Тригли-цериды, ммоль/л лпвп, ммоль/л Холестерин, мг/г Тригли-цернды, мг/г
Интакгные - 1,79 ±0,10* 0,94 ±0,10 1,27 ±0,07 1,49 ±0,06 12,5 ± 1,2 -
Овариэкгомированные - ■ 2,30 ± 0,09 0,75 ± 0,04 1,25 ±0,05 1,86 ±0,07 12,8 ± 1,2 -
Овариэктомированные, получавшие стероид (I) 30 2,32 ± 0,05 2,04 ±0,16* 1,32 ±0,06 не определяли не определяли 25
Овариэктомированные, получавшие стероид (II а) 25 1,69 ±0,08 0,81 ±0,05 1,20 ±0,05 1,88 ±0,06 14,9 ± 1,3 25
Овариэктомированные, получавшие стероид (II6) 30 1,87 ±0,10* 0,94 ± 0,07 1,14 ±0,09 2,34 ± 0,09* 10,5 ± 1,1 25
Знак * означает достоверное различие с группой овариэктомированных животных, р<0,05; знак **—достоверное различие с группой овариэктомированных животных, р < 0,01. В каждой группе по 8 крыс.
Таблица 2
Гиполипидемические свойства 8а-аналогов стероидных эстрогенов (III) и (IV а, б)
Группа животных Доза, мг/кгвеса тела Липиды сыворотки крови Липиды печени Утеротропная активность, ЕЭ2к (мг/кг веса тела)
Холестерин, ммоль/л Тригли-цериды, ммоль/л ЛПВП, ммоль/л Холестерин, мг/г Тригли-цериды, мг/г
Интакгные - 1,86 ±0,12* 0,94 ±0,11 1,25 ±0,06 1,69 ±0,06* 13,5 ± 1,1 -
Овариэктомированные 2,34 ± 0,08 0,73 ± 0,04 1,28 ±0,05 1,93 ±0,08 13,4 ± 1,2 -
Овариэкгомированные, получавшие стероид (III) 1,0 1,42 ±0,07* 0,53 ± 0,05* 0,50 ± 0,04** 2,70 ± 0,08** 15,1 ±0,7 0,5
5,0 0,64 ± 0,05* 0,56 ± 0,09* не определяли 2,91 ±0,08** 13,6 ±0,4
Овариэктомированные, получавшие стероид (IV а) 0,5 1,99 ±0,12 0,76 ± 0,05 1,20 ±0,06 2,14 ±0,07* 17,1 ±0,6* 5
5,0 0,99 ± 0,07** 0,68 ± 0,08 0,57 ±0,04** 2,68 ±0,12* 17,0 ±0,5*
Овариэкгомированные, получавшие стероид (IV 6) 0,3 1,84±0,11* 0,71 ± 0,09 1,19 ±0,08 2,26 ± 0,08 18,6 ± 1,1* 5
3,0 0,66 ± 0,04** 0,81 ±0,08 0,30 ± 0,04** 3,01 ±0,12** 17,5 ±0,6*
Знак * означает достоверное различие с группой овариэктомированных животных, р<0,05; знак **—достоверное различие с группой овариэктомированных животных, р < 0,01. В каждой группе по 10 крыс.
до комнатной температуры, добавляли 250 мл эфира. Через 12 ч отфильтровывали не прореагировавший 2-пропилциклопентан-1,3-дион.
Раствор промывали сначала равным объемом водного 3%-ного едкого натра, а затем водой до нейтральной реакции. Растворители отгоняли на ротационном испарителе при возможно меньшей температуре, к остатку добавляли 350 мл этанола и 10,5 мл концентрированной соляной кислоты. Реакционную смесь кипятили 20 мин, затем оставляли на 48 ч при 0° С. Выпавший осадок отфильтровывали, промывали на фильтре охлажденным гексаном, а затем эфиром. Выход целевого соединения (VIII)—21,5 г (70%), ^=105-106° С. Найдено, %: С-81,40; Н-7,77. С^С^. Вычислено, %: С-81,60; Н-7,53.
б) 17Р-Ацетокси-3-метокси-18-этш-В-норэстра-1,3,5(10), 8,14-пентаен (IX). К взвеси 10 г кетостероида (VIII) в 400 мл этанола добавляли при перемешивании 4 г боргидрида натрия, реакционную смесь нагревали 1 ч при 60-70° С. Избыток восстановителя разлагали уксусной кислотой, продукт восстановления ацетилировали уксусным ангидридом в пиридине [18]. После перекристаллизации из смеси хлороформ-метанол получали 8,9 г (79%) целевого соединения (IX), 117-119° С. Найдено, %: С-78,22; Н-7,51. С22Н2603. Вычислено, %: С-78,08; Н-7,74™
в) 17(3-Ацетокси-3-метокси-18-этил-В-нор-8а-эстра-1,3,5(10)-триен (X) получали после гидрирования 5 г ацетата (IX) в 100 мл тетрагидрофурана в присутствии 1 г 10 %-ного Р<3/С, целевой продукт выделяли методом препаративной ТСХ на силикагеле, элюировали в системе растворителей этилацетат-гексан (1:8). После кристаллизации из этанола выход целевого продукта 5,8 г (65%), 1гш= 113,5-114,5° С. Спектр ЯМР 13С, 6, м.д.: 18,1, 23,8, 27,4, 2,0, 29,2, 33,2, 33,9, 42,0, 44,4, 44,6, 45,5, 83,7, 110,6, 112,1, 124,5, 140,7, 144,1, 158,7. Найдено, %: С-76,88; Н-8,80. С22Нз0О3. Вычислено, %: С-77,16; Н-8,83.
г) Гидролиз 17^-ацетокси-3-метокси-18-этш-В-нор-8а-эстра-1,3,5(10)-триена (X). К раствору 5 г соединения (X) в 100 мл смеси бензол-метанол (1:1) добавляли 2 г метилата натрия, реакционную смесь оставляли на 24 ч при комнатной температуре. После обычной обработки целевой продукт (I) получали кристаллизацией из смеси этанол-вода, выход 3,32 г (76%), ^ = 93,5-94,5° С. Найдено, %: С-79,52; Н-9,32. С20Н28О2. Вычислено, %: С-79,95; Н-9^39.
2,18-Диметил-3-метокси-8а-эстра-1,3,5(10)-триен-17р-ол (II а).
а) 2,18-Диметил-3-метоксиэстра-1,3,5(10),8,14-пентаен-17-он (XIII а). 20 г известной изотиурониевой соли (XI а) [23], 20 г 2-этилциклопентан-1,3-диона, 400 мл этанол-вода (1:1) перемешивали при комнатной температуре 50 ч. Выпавший осадок отфильтровывали, сушили на воздухе, растворяли в минимальном количестве бензола. Полученный раствор пропускали через колонку, содержавшую 10 г окиси алюминия 2-ой активности по Брокману, элюировали бензолом. Растворитель удаляли на роторном испарителе, остаток кристаллизовали из метанола. Получали 11,6 г (60%) секосоединения (XII а), 112,5-114° С. Спектр ЯМР 'Н, 6, м.д.: 0,76 т (ЗН, 1 = 7 Гц, С18Н3), 2,15 с (3 Н, С-Щ), 3,78 с (ЗН, ОВД, 5,65 т (1Н, 1 = 8,5 Гц, С"-Н), 6,51 д и 7,24 д (по 1Н, 1 = 8 Гц). Найдено, %: С-77,18; Н-8,24. С21Н2603. Вычислено, %: С-77,27; Н-8,03.
К раствору 11 г секостероида (XII а) в 800 мл бензола добавляли 1 г и-толуол-сульфокислоты, смесь кипятили 20 мин, затем охлаждали её до комнатной температуры и промывали 5%-ным раствором поташа в воде, а потом водой до нейтральной реакции. После обычной обработки продукт циклодегидратации (XIII а) очищали кристаллизацией из гексана, выход 9,5 г (91%), 127,5-128,5° С. Спектр ЯМР 'Н, 5, м.д.: 0,83 т (ЗН, 1 = 7 Гц, С18Н3), 2,19 с (ЗН, С2-СН3), 3,83 с (3 Н, СН30), 5,92 т (1Н, 1 = 2,5 Гц, С15-Н), 6,68 с (1Н, С4Н), 7,13 с (1Н, С'Н). Найдено, %: С-81,93; Н-7,86. С^О,. Вычислено, %: С-81,78; Н-7,84.
б) 170-Ацетокси-2,18-диметил-3-метоксиэстра-1,3,5(10),8,14-пентаен (XIV а). К раствору 11 г соединения (XIII а) в 250 мл тетрагидрофурана добавляли 40 мл 1 М раствора алюмогидрида лития в эфире, реакционную смесь кипятили 2 ч. После обычной обработки [18] продукты реакции растворяли в 100 мл уксусного ангидрида и 100 мл пиридина, реакционную смесь оставляли на сутки при комнатной температуре, а затем выливали при сильном перемешивании в 1000 г льда и 300 мл воды. Выпавший осадок отфильтровывали, промывали на фильтре водой до нейтральной реакции, сушили на воздухе при температуре не более 60° С. После кристаллизации осадка из метанола получали 11,0 г (86,5%) целевого стероида (XIV а), ^ = 152— 152,5° С. Спектр ЯМР 'Н, 6, м. д.: 0,89 т (ЗН, 1 = 7 Гц, С18-СН3), 2,01 с и 2,16 с (по ЗН, С2-СН3 и С17-ОСОСН3), 3,78 с (ЗН, СН30), 4,72 т (1Н, 1 = 7 Гц, С17-Н), 5,50 т (1Н, 1 = 2,5 Гц, С|5-Н), 6,50 с и 6,98 с (по 1Н, протоны ароматического кольца). Найдено, %: С-78,11; Н-8,27. С23Н2803. Вычислено, %: С-78,38; Н-8,01.
в) 17/}-Ацетокси-2,18-диметт-3-метокси-8а-эстра-1,3,5(10)-триен (XV а). К раствору 10 г соединения (XIV а) в 260 мл бензола добавляли 7,5 г свежеприготовленного никеля Ренея, тщательно промытого перед реакцией бензолом. Гидрирование проводили при давлении 60-120 атм и температуре 60-120° С. После обычной обработки продукт реакции кристаллизовали из этанола, получали 8,48 г (84%) целевого продукта, ^ = 113-114° С. Спектр ЯМР 'Н, 5, м.д.: 0,99 т (ЗН, 1 = 7,5 Гц, С18-СН3), 2,04 с и 2,Г7 с (по ЗН, С2-СН3 и С17-ОСОСН3), 3,79 с (ЗН, СН30), 4,70 т (1Н, I = 8,2 Гц, С17-Н), 6,51 си 6,93 с (по 1Н, протоны ароматического кольца). Спектр ЯМР 13С, 6, м.д.: 9,7, 15,9, 19,8, 21,3, 22,0, 22,5, 27,9, 29,0, 31,9, 34,2, 38,6, 41,4, 44,0, 48,8, 55,4, 84,4, 110,2, 124,3, 131,6, 133,0, 135,1, 155,8, 171,2. Найдено, %: С-77,52; Н-9,00. С23Н3203. Вычислено, %: С-77,49; Н-9,01.
г) 17Р-Ацетокси-2,18-диметил-3-метокси-8а-эстра-1,3,5(10)-триен (II а). Раствор 1,50 г ацетата (XV а) и 4 г едкого натра в 120 мл смеси бензол-метанол (1:1) кипятили 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой, бензольный слой отделяли, вод-
'ный экстрагировали тремя порциями диэтилового эфира по 30 мл. После обычной обработки целевой продукт (II а) получали кристаллизацией из смеси метанол-вода. После высушивания над пятиокисью фосфора выход 1,20 г (92%), ^ = 78-88° С. Найдено, %: С-79,90; Н-9,45. С2)Н30О2. Вычислено, %: С-80,21; ^9,62™
З-Метиловый эфир 4,18-диметил-8а-эстрадиола (II б).
а) 4,18-Диметт-3-метоксиэстра-1,3,5(10),8,14-пентаен-17-он (XIII б) получали из 28 г изотиурониевой соли (XI б) [23] и 28 г 2-этилциклопентан-1,3-диона в тех же условиях, что и аналог (ХШ а). Выход целевого продукта—15,8 г (61,6 %), ^^ 120-121° С.
б) 170-Ацетокси-4,18-диметил-3-метоксиэстра-1,3,5(10),8,14-пентаен (XIV б) синтезировали из 15 г соединения (XIII б) в тех же условиях, что и аналог (XIV а). После очистки кристаллизацией из метанола выход целевого продукта 15,55 г (88%), ^ = 147-149° С. Спектр ЯМР 'Н, 6, м. д.: 0,92 т (ЗН, I = 7 Гц, С18-СН3), 2,12 с и 2,18 с^по ЗН, С-СНз и С17-ОСОСН3), 3,83 с (ЗН, О^О), 5,16 т (1Н, 1 = 7 Гц, С'7-Н), 5,60 м (1Н), 6,76 д и 7,20 д (по 1Н, 1 = 8 Гц, протоны ароматического кольца). Найдено, %: С-78,55; Н-7,83. С23Н2803. Вычислено, %: С-78,38; Н-8,01.
в) 17Р-Ацетокси-4,18-дгшетш-3-метокси-8а-эстра-1,3,5(10)-триен (XV б). После обычной обработки целевое соединение очищали кристаллизацией из смеси хло-роформ-этанол (1:5), выход 8,62 г (85%), ^ 167,5-168° С. Спектр ЯМР 'Н, 5, м.д.: 0,91 т (ЗН, ) = 7,5 Гц, С18-СН3), 2,05 с и 2^5 с (по ЗН, С4-СН3 и С17-ОСОСН3), 3,80 с (ЗН, СН30), 4,70 т (1Н, 1 = 8,3 Гц, С17-Н), 6,74 д и 7,01 д (по 1Н, 1 = 8,5 Гц, протоны ароматического кольца). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 9,6, 11,1, 19,7, 21,2, 21,5, 22,3,
г
27,7, 28,9, 29,0, 34,0, 37,6, 41,9, 43,7, 48,5, 55,6, 84,1, 108,4, 124,0, 127,1, 133,6, 136,5, 155,2, 171,0. Найдено, %: С-77,82; Н-9,00. С23Н3203. Вычислено, %: С-77,49; Н-9,05.
г) Гидролиз 17ß-aifemoKCU-4,18-диметш-3-метокси-8а-эстра-1,3,5(J 0)-триена (XV б). Раствор 6,24 г ацетата (XV б) и 2 г едкого натра в 60 мл смеси бензол-метанол (1:1) кипятили 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой, бензольный слой отделяли, водный экстрагировали тремя порциями эфира по 30 мл. После обычной обработки целевой продукт (II б) получали кристаллизацией из смеси метанол-вода. После высушивания над пятиокисью фосфора выход 4,7 г (82%), t^ 131-132° С. Найдено, %: С-80,46; Н-10,02. С21Н30О2. Вычислено, %: С-80,21; Н-9,62.
17р-Ацетокси-18-метил-3-метокси-6-окса-8а-эстра-1,3,5(10)-триен (Ш). К раствору 10 г известного 6-оксасоединения (XVI) [28] в 400 мл смеси диоксан-вода (1:1) присыпали 1,5 г боргидрида натрия, реакционную смесь перемешивали 3 ч при 30° С, затем избыток восстановителя разлагали уксусной кислотой. После обычной обработки продукты реакции ацетилировали, как при синтезе аналога (XIV а) [18]. Полученный nß-аце-токси-18-метил-3-метокси-6-оксаэстра-1,3,5(10),8,14-пентаен (XVII) очищали кристаллизацией из этанола. Выход 9,65 г (84%), ^ = 97-99° С. Спектр ЯМР 'Н, 5, м. д.: 0,92 т (ЗН, J = 7,4 Гц, С^-СНу, 2,11 с (ЗН, СОСТуГз.78 с (ЗН, C^O), 4,74 д (1Н, J= 13,4 Гц, C7-Hß), 4.91 д (1Н, J= 13,4 Гц, С7-На), 5,09 т (1Н, J = 8,4 Гц, С17-Н), 5,41 с (1Н, С15-Н), 6,41 д (1Н, J = 2,4 Гц, С4-Н), 6,47 дц (1Н, J = 8,5 Гц, J24 = 2,4 Гц, С2-Н), 7,09 д (1Н, Ju = 8,5 Гц, С'-Н). Найдено, %: С-74,02; Н-7,19. С21Н2404. Вычислено, %: С-74,09; Н-7,11.
4 г полученного выше стероида гидрировали в тех же условиях, что и соединение (XIV а). Катализатор отфильтровывали, растворитель удаляли на роторном испарителе, остаток кристаллизовали из метанола. Получали 3,3 г (82%) целевого продукта (III), t^ = 117 -118,5° С (по литературным данным, tM= 112-113° С [29]). Спектр ЯМР 13С, 5,"м. д.: 20,1 (т), 20,6 (кв), 21,6 (т), 27,0 (т), 27,8 (т), 32,5 (т), 36,4 (д), 36,5 (д), 42,8 (с), 46,4 (д), 54,6 (кв), 63,8 (т), 83,0 (д), 100,9 (д), 106,9 (д), 119,0 (с), 129,7 (д), 155,1 (с), 158,4 (с), 170,2 (с). Масс-спектр, m/z (Iotii, %): 344 (100), 301 (3), 285 (8), 255 (17), 243 (4), 229 (3), 213 (4), 201 (6), 188 (30)" 175 (14), 162 (51), 161 (50), 137 (24). Найдено, %: С-73,39; Н-8,24. С21Н2804. Вычислено, %: С-73,23; Н-8,19.
З-Метиловый эфир 6-окса-18-этил-8а-эстрадиола (TV а). К раствору 7 г известного соединения (XVIII) [30] в 270 мл бензола добавляли 5 г свежеприготовленного никеля Ренея, перед реакцией тщательно промытого бензолом. Гидрирование проводили в тех же условиях, что и при синтезе аналога (III), основной продукт реакции очищали кристаллизацией из метанола. Выход соединения (XIX) 3.,45 г (49%), t^ = 113-114,5° С. Спектр ЯМР 'Н, 5, м.д.: 0,84 т (ЗН, J = 7 Гц, С18!^), 2,11 с (ЗН, СН^СО), 4,18 м (2Н, С7^), 4,70 т (1Н, J = 7,5 Гц, С17-Н), 6,37 д (1Н, J = 2,6 Гц, С4-Н), 6,49 дц (1Н, J12 = 8,5 Гц, J24 = 2,5 Гц, С2-Н), 7,02 д (1Н, Ju = 8,5, С'-Н). Спектр ЯМР 13С, 5, м.д.: 14,9, 17,6, 20,3, ¿1,6, 27,0, 27,9, 30,4, 33,2, 36,3, 36,5, 43,1, 46,6, 54,3, 63,5, 82,3, 100,9, 107,0, 118,6, 129,4, 155,1, 158,5, 169,1. Масс-спектр, m/z (1^, %): 358 (100, М+), 315 (3) 299 (7), 298 (7), 269 (7), 255 (8), 230 (2), 213 (2), 201 (4), 188 (20), 175 (10), 162 (44), 137 (16), 43 (38). Найдено, %: С-73,88; Н-8,45. С22Н30О4. Вычислено, %: С-73,71; Н-8,44.
1 г стероида (XIX) гидролизовали в тех же условиях, что и соединение (XV а). Выход целевого продукта (IV а)—0,78 г (88%), t^ 129-132° С. Спектр ЯМР 'Н, 5, м.д.: 0,87 т (ЗН, J = 6,7 Гц, СН3СН2), 3,76 м (4Н,Ш'СН30 и С17Н), 4,20 м (2Н, С7^), 6,38 д (1Н, J= 1,8 Гц, С4-Н), 6.49 дц (1Н, J, 2 = 8,3 Гц, J24 = 1,8 Гц, С2-Н), 7,02 д (1Н, Ju = 8,5, С'-Н). Найдено, %: С-75,85; Н-8,97.'С^Н^. Вычислено, %: С-75,91; Н-8,92.
З-Метиловый эфир 18-этил-8а-эстрадиола (IV б) синтезировали предложенным ранее методом [10], t^ = 120—121° (по литературным данным, t^ = 120-121° С).
Спектр ЯМР 'Н соответствует ожидаемому. Найдено, %: С-80,30; Н-9,78. С21Н30О2. Вычислено, %: С-80,21; Н-9,62.
Экспериментальная биологическая часть. Препараты вводили внутримышечно в оливковом масле в течение 10 суток, в контрольных опытах в качестве вещества «отрицательного» контроля использовали оливковое масло.
Влияние аналогов стероидных эстрогенов на содержание липидов липопротеи-дов сыворотки крови овариэктомированных крыс проводили методом аналитического ультра-центрифугирования в условиях, предложенных в работе [7]. Равные объемы крови крыс из одной экспериментальной группы смешивали, после чего брали алик-воту для проведения соответствующих процедур.
Для определения утеротропной активности использовали неполовозрелых мышей линии SNR массой 6-8 г, которым ежедневно в течение 3 суток вводили растворы исследуемых веществ в оливковом масле, контрольные животные получали только растворитель в том же объеме. На 4 день мышей забивали, определяли «влажный» вес матки. Результаты обрабатывали методом регрессионного анализа. Вычисляли величину ED2k (доза в мг препарата в сутки/кг веса тела животного), при которой происходит увеличение веса матки в два раза [31].
Авторы благодарят проф. A. Meijere за предоставление персональной стипендии студентке Е. М. Марченко.
Summary
GrinenkoE. V, Kameneva I. Yu„ Abusalimov Sh.N., Marchenko E. M., Selivanov S.I., MorozkinaS.N., ShawaA. G. Synthesis and investigation of hypolipidemic activity of some 8a-steroid estrogen analogues.
8a—Steroid estrogen analogues have been synthesized and their structure was confirm by 'H and . 13C NMR data. The investigation of biological properties of obtained compounds on ovariectomized rats has shown that 18-ethyl-8a-estradiol 3-methyl ether and 18-ethyl-6-oxa-8a-estradiol 3-methyl ether possess best hypolipidemic activity.
Литература
1. Климов A. H., Никульчева Н.Г. Липопротеиды, дислипопротеидемии и атеросклероз. Л., 1984. 2. Barrett-Connor Е., CoxD.A., Anderson P. W. IIТЕМ. 1999. Vol. 10. N 8. P. 319-325. 3. BrintonLA.il Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 1997. Vol. 26. N 2. P. 361-378. 4. SulakP.J. //Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 1997. Vol. 26. N 2. P. 399-412. 5. Tomarelli R.M., Dougherthy T.M., Bernhart F.W./П. Pharm. Sci. 1966. Vol. 55, N 12. P. 1392-1395. 6. РыженковВ.Е., ПрокопъевА.А., КаменеваИ.Ю., НерсисянГ.Г., ШавваА.Г.1 /Вопр. мед. хим. 1987. N 2. С. 65. 7. КаменеваИ.Ю., ШавваА.Г., Лозовский В. Т., РыженковВ.Е. I /Бюлл. эксп. биол. мед. 1994. N 3. С. 262-264. 8. Шавва А.Г., ВласоваК.В., Цогоева С.Б., Егоров М. С., Якуцени П. П. //Биоорг. хим. 2002. Т. 28. N 3. С. 236-241. 9. РыженковВ.Е., Чистякова A.M., Фролова Ю. В., Лозовский В. Т., Каменева И. Ю„ Васильева Л. Е. //Паталог. физиол. эксп. терапия. 1994. N 4. С. 33-36. 10. Елисеев И. И., Андреева Е. Н., Каменева И. Ю., Шавва А. Г. II Вестн. Ленингр. ун-та. Сер. 4. 1991. Вып. 4. С. 74-79. 11. Patent N 3407217 (USA) / Hughes G.A., Smith H. Substituted 8-isogonanes. 1968. II Chem. Abstr. 1969. Vol. 70. 88089q.
12. Шавва А. Г., Селиванов С. И., СтароваГ.Л., Бороноева Т. Р., ИщенкоИ.В., ГлуздиковИ.А., Шарецкш А.Н., Исаева В.Г., СуриновБ.П. II Биоорган, химия. 2002. Т. 28. N 3. С. 242-250.
13. Селиванов С. И, Цогоева С. Б., ШавваА.Г. II Журн. орг. хим. 1998. Т. 34. Вып. 9.
С. 1350-1354. 14. Селиванов С. И., Шавва А. Г. II Биоорган, хим. 2002. Т. 28. N 3. С. 220-235. 15. Burckhalter J. H., Sciavolino F. С /П. Org. Chem. 1967. Vol. 32. N 12. P. 3968-3873. 16. Heidepriem H., Rufer C„ Schröder E., Kieslich К. II Ami. Chem. 1968. Bd. 712. S. 155-167. 17. Sub-ba Rao G. S. R„ Shy ama S., SrinivasaR.il Ind. J. Chem. 1975. Vol. 13. N 7. P. 644-647. 18. Крылова E. Б., Мартынов В.Ф., ШавваА.Г. II Журн. орг. хим. 1978. Т. 14. Вып. 12. С. 2518-2523.
19.КиоС.Н., TaubD., Wendler N.L. II i. Org. Chem. 1968. Vol. 32. N 12. P. 3126-3132.
20. Könst W.M.B., Bruynsvoort J. von, Specamp W.N., Huisman H. О. II Reel. Trav. Chim, Pays-Bas. 1972. Vol. 91. N 7. P. 869-882. 21. JogdeoP.S., Bhide G. V. II Steroids. 1980. Vol. 34. N 6. P. 619-629. 22. Magriotis P.A., Johnson Fill. Org. Chem. 1984. Vol. 49. N 8. P. 1460-1461. 23. Абусали-мовШ.Н., Елисеев И. И., Гриненко Е.В., ГлуздиковИ.А., Марченко Е.М., Селиванов С. И., ШавваА.Г. И Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 4.2003. Вып. 4. С. 121-124. 24. Assmcmn G., Schulte H. II Am. J. Cardiol. 1992. Vol. 70. P. 733-737. 25. Hoffman G.E., ZupS.L.II Endocrinology. 2003. Vol. 144. N 11. P. 4698-4699. 26. LabrieF., Al-AlfyM., Berger L., LabrieC., Martel С., BülangerA., Candas В., Pelletier G. Il Endocrinology. 2003. Vol. 144. N 11. P. 4700-4706. 27. LindonJ.C., Ferrige A. G. //Prog. NMR Spectrosc, 1982, Vol. 14. P. 27. 28. Patent N 1069844 (England) (1967)/Smith H.IIC.A. 1968. 68. 114835k. 29. Patent N 1069845 (England) (1967)/Smith H. 30. Патент РФ 2057140 (1996)/ШавваА.Г, Елисеев И. И., Абусалимов Ш. Н. и др. Способ получения 6-окса-8-изоаналогов стероидных эстрогенов.//Бюлл. изобр. N 9. 1996. 31. Иваненко Т. И., Пивнщкий К. К, Федотов В. П. II Пробл. эндокринол. 1979. Т. 25. N 1. С. 62-67.
Статья принята к печати 18 декабря 2006 г.
