CC BY
57
УДК 619:616.98:578.835.2:636.32/.38:616-085.37
Ключевые слова: вирус ящура, поствакцинальный иммунитет, вируснейтрализующие антитела, индекс защиты, инфекционный титр
Key words: FMD virus, postvaccinal immunity, virus neutralizing antibody, protective index, infectious titer
Диев В. И., Старов С. К., Аноятбеков М. А., Константинов А. В., Басова Д. К.
результаты КОНТРОЛЯ НАПРЯЖЕННОСТИ поствакцинального иммунитета у овец против ящура типа о различными методами
RESULTS OF TESTING POSTVACCINAL TYPE О FMD IMMUNITY STRESS IN SHEEP USING DIFFERENT METHODS
'ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») Адрес: 600901, Россия, г. Владимир, мкр. Юрьевец
'FGBI "Federal Centre for Animal Health " (FGBI "ARRIAH") Address: 600901, Russia, Vladimir, Yur 'evets 2НПП «Биологические препараты» Таджикской академии сельскохозяйственных наук Адрес: Республика Таджикистан, г. Душанбе, Гипроземгородок
2 Research and Production Enterprise "Biological Preparations" of the Tajik Academy of Agricultural Science Address: Republic of Tajikistan, Dushanbe, Giprozemgorodok
Диев Вячеслав Иванович, д. в .н., проф.1. E-mail: diev@arriah.ru
Diev Vyacheslav I., Doctor of Veterinary Medicine, Professor1. E-mail: diev@arriah.ru Старов Сергей Константинович, к. в. н., зам. директора по качеству, ст. научн. сотрудник1. E-mail: starov@arriah.ru Starov Sergey K., Ph.D. in Veterinary Science, Deputy Director for Quality, Senior Researcher1. E-mail: starov@arriah.ru Аноятбеков Музаффарбек Косимбекович, д. в. н., проф., чл.-корр. Таджикской академии сельскохозяйственных наук, директор2. E-mail: baytor@mail.ru Anoyatbekov Muzaffarbek K., Doctor of Veterinary Medicine, Professor, Corresponding Member of the Tajik Academy of Agricultural Science, Director2. E-mail: baytor@mail.ru Константинов Алексей Владимирович, к. в. н., нач. отдела биологического и технологического контроля1. E-mail: konstantinov@arriah.ru Konstantinov Alexey V., Ph.D. in Veterinary Science, Head of the Dept. for Biological and Technological Control1. E-mail: konstantinov@arriah.ru Басова Дарья Константиновна, к. в. н., ст. научн. сотрудник отдела биологического и технологического контроля1. E-mail: basova@arriah.ru Basova Darya K., Ph.D. in Veterinary Science, Senior Researcher of the Department for Biological and Technological Control1. E-mail: basova@arriah.ru
Аннотация. Проведены исследования напряженности иммунитета у овец против ящура типа О после иммунизации вакциной против ящура А, О, Азия-1. Установлена возможность оценки иммунитета после заражения овец 104 ИД50/см3 адаптированным вирусом ящура типа О определением индекса защиты и по титрам вируснейтрали-зующих антител в крови вакцинированных животных.
Summary. Tests of Type О FMD immunity stress in sheep following immunization with Type A, O, Asia-1 FMD vaccine were performed. It was determined that the immunity following sheep immunization with 104 ID50/cm3 of adapted Type О FMD virus was possible to be estimated by means of protective index determination and by virus neutralizing antibody titer in blood of vaccinated animals.
Введение
По данным МЭБ, эпизоотическая ситуация по ящуру в различных странах мира, вызванная антигенно измененными штаммами вируса различных типов, остается напряженной. Особенно это касается государств Восточной Азии, где ящуром болели все виды домашних животных, в том числе овцы и козы. В последние годы о заболева-
нии мелкого рогатого скота ящуром сообщали Северная и Южная Корея, Япония, Китай, Монголия и др. [1, 3, 4]. По данным МЭБ, в течение 2012-2013 гг. в 23 из 56 неблагополучных в мире стран болели ящуром овцы и козы. Некоторые исследователи сообщают о том, что ящур у мелкого рогатого скота протекал в легкой форме и бессимптомно. Однако в других случаях отмечалась злокачествен-
ная форма с гибелью 50-100 % заболевших животных, с поражением сердечной мышцы, кровоизлияниями в легких, желудке и кишечнике. Нередко ягнята и козлята погибали от ящура без видимых симптомов болезни [1, 6].
Мелкий рогатый скот является опасным источником инфекции, особенно при отгонном ведении животноводства, когда перегоняемые на летние пастбища стада овец пользуются одними перегонными трассами и поэтому играют решающую роль в возникновении и распространении ящура среди восприимчивых животных.
Опыт борьбы с ящуром показывает, что путем иммунизации всех восприимчивых животных можно добиться относительной стабильности эпизоотической обстановки.
Напряженность иммунитета у крупного рогатого скота и свиней оценивают по результатам заражения вирулентным вирусом. В этих случаях животное считается иммунным, если у него отсутствуют клинические проявления генерализованной ящурной инфекции [2, 5].
При разработке методов профилактической вакцинации овец и коз против ящура предложены различные способы оценки иммунного состояния животных, однако достаточно достоверных критериев пока нет.
У овец и коз оценка иммунного состояния затруднена из-за отсутствия вируса, адаптированного к организму этих видов животных. Некоторыми исследователями предлагались различные методы контроля иммунитета, в том числе определением виремии после заражения вирулентным вирусом, изучением гуморального иммунитета, а также по индексу защиты [1, 5, 6, 7].
Отсутствие единого мнения об объективности оценки иммунного состояния овец послужило основанием для проведения исследований в этом направлении с использованием вируса ящура типа О, адаптированного к организму овец, определением титра вируснейтрализующих антител и индекса защиты.
Материалы и методы
Для иммунизации овец применяли поливалентную вакцину против ящура типов
А, О, Азия-1 из вируса, выращенного с использованием культуры клеток ВНК-21 (почка сирийского хомячка), которую вводили овцам, размещенным в 2 группах по 4 головы в каждой, подкожно в области внутренней поверхности бедра в дозах по 0,33 и 0,11 см3 соответственно. Контролями служили 2 неиммунные овцы. Через 21 день после вакцинации всех животных заражали вирусом ящура типа О штамм 1618, прошедший 10 пассажей на овцах, вводя по 0,1 см3 вирусной суспензии в 10 точек слизистой языка в дозе 104 ИД50/см3. Перед заражением от всех вакцинированных овец отбирали пробы крови для получения сыворотки, которую исследовали в реакции нейтрализации в культуре клеток ВНК-21 на наличие противоя-щурных антител по общепринятой методике. Результаты заражения овец вирусом ящура учитывали по наличию первичных и вторичных афт.
После определения устойчивости вакцинированных овец к ящуру проведены исследования по определению индекса защиты на 6 овцах, размещенных в 2 группах по 3 в каждой, иммунизированных в тех же дозах, как указано ранее. Контролями служили 2 неиммунные овцы.
С этой целью через 21 день после вакцинации готовили десятикратные разведения суспензии вируса ящура типа О, адаптированного к организму овец, с 102 по 105 включительно и вводили каждое разведение вакцинированным и контрольным овцам под слизистую оболочку языка по 0,1 см3 в 4 точки. Через 24 часа после инокуляции разведений вируса по образованию первичных афт на слизистой оболочке языка определяли инфекционный титр вируса. Рассчитывали индекс защиты, который представлял разницу инфекционных титров вируса, выраженных в ИД50/см3 на контрольных неиммунных и вакцинированных овцах. Перед введением разведений вируса ящура от всех вакцинированных овец брали пробы крови для получения сыворотки, которую исследовали на наличие антител в реакции нейтрализации в культуре клеток ВНК-21. Титр антител выражали в log2.
Результаты и обсуждение
Было установлено, что все овцы, иммунизированные в дозах 0,33 и 0,11 см3, были устойчивы к заболеванию генерализованной формой ящура, в то время как контрольные заболели с генерализацией процесса с образованием первичных и вторичных афт на конечностях. Все вакцинированные животные реагировали на введение вируса образованием первичных афт на слизистой оболочке языка. Повышение температуры тела до 40,5 и 41,0 °С отмечено только у контрольных овец.
Выявлена зависимость специфической активности сыворотки крови от дозы введенной вакцины. Титр антител в крови животных, которым вводили вакцину по 0,33 см3, был в пределах 4,0-5,33 1о§2, а в дозе 0,11 см3 - 2,76-4,76 1о§2, а средние титры антител соответствовали 4,48±0,02 и 3,88±0,30 1о§2 (табл. 1).
При анализе результатов, полученных при изучении напряженности иммунитета методом определения индекса защиты, установлена разница между титрами инфекционного вируса у неиммунных и вакцинированных животных (табл. 2).
Таблица 1.
Устойчивость вакцинированных овец к вирусу ящура типа О
№ группы № животных Доза введен- Титр антител, log2 Наличие афт
животных ной вакцины, см3 индивидуальный средний первичных вторичных
I 1 0,33 4,0 4,48±0,02 + -
2 4,21 + -
3 5,33 + -
4 4,33 + -
II 5 0,11 4,76 3,88±0,30 + -
6 4,32 + -
7 2,76 + -
8 3,66 + -
III 9 контроль (без 0 + 1
10 вакцинации) 0 + 1
№ группы животных № животных Доза введенной вакцины, см3 Титр антител, l0g2 Титр вируса, lg ИД50/см3 Индекс защиты
индивиду -альный средний индивидуальный средний индивиду -альный средний
I 1 0,33 4,66 4,88±0,41 2,88 2,84±0,12 1,60 1,63±0,11
2 5,50 3,00 1,50
3 4,50 2,66 1,80
II 4 0,11 4,48 4,68±0,43 3,33 3,21±0,22 1,17 1,28±0,21
5 5,33 2,88 1,60
6 4,23 3,43 1,07
III 7 контроль (без вакцинации) 0 4,37 4,50±0,20
8 0 4,73
Примечания: «+» - наличие первичных афт; в графе «вторичные афты» - количество пораженных конечностей.
Таблица 2.
Результаты изучения поствакцинального иммунитета против ящура типа О по титрам вируснейтрализующих антител в крови овец и индексу защиты
Титр вируса на овцах, привитых вакциной в дозе 0,33 и 0,11, колебался в пределах 2,66-3,43 ^ ИД50/см3, а средний титр соответствовал 2,84±0,12 ^ ИД50/см3, титр вируса на контрольных овцах был 4,37 и 4,73, а средний - 4,50±0,20 ^ ИД50/см3. Индекс защиты, рассчитанный для каждого животного, колебался в пределах 1,17-1,80, а средний - 1,28±0,21-1,63±0,11 ^ ИД50/см3.
Титр антител в крови всех овец был в пределах 4,23-5,50, а средний - практически на одном уровне 4,68±0,43-4,88±0,41 и не зависел от прививной дозы, что свидетельствует о высокой иммуногенной активности использованной вакцины.
Выводы
1. С использованием адаптированного вируса ящура типа О установлена возможность изучения напряженности поствакцинального иммунитета у овец методом введения 1,0 см3 суспензии в 10 точек под слизистую оболочку языка по 104 ИД50/см3 и определением индекса защиты по разнице инфекционной активности вируса на слизистой оболочке языка вакцинированных и неиммунных овец.
2. В зависимости от дозы введенной вакцины титр вируснейтрализующих антител
в крови овец колебался в пределах 2,76-5,33 log2. При наличии такого уровня антител все животные были устойчивы к заболеванию генерализованной формой ящура.
Список литературы
1. Бурдов, А. Н. Ящур / А. Н. Бурдов, А. И. Дудников, П. В. Малярец [и др.]; под ред. А. Н. Бурдова -М. : Агропромиздат, 1990. - 320 с.
2. Диев, В. И. Зависимость клинических проявлений ящура А22 у овец от степени адаптации вируса и заражения различными методами / В. И. Диев, С. А. Ашуров, А. В. Константинов, Д. К. Басова // Ветеринария и кормление. - 2013. - № 5. - С. 14-16.
3. МЭБ. Кодекс здоровья наземных животных. Т. 2. - 22-е изд. - Париж, 2013. - 433-756 с.
4. Рахманов, А. М. Программа совместных действий государств - участников СНГ по профилактике и борьбе ящуром / А. М. Рахманов // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2011. - Т. IX. - С. 29-46.
5. Madhanmohan, S. M. Immune response in goats to different payloads of FMDV monovalent vaccine: protection against virulent challenge and development of carrier status / S. M. Madhanmohan, S. B. Nagendrakumar, P. Santhakumar [et. al.] // Indian J. of Microbiology. -2011. - Vol. 51, № 1. - P. 88-93.
6. Rohrer, H. Maul-und-Klauenseuche / H. Rohrer, A. F. Olechnowitz. - Jena : Fisher, 1980. - P. 409.
7. Rout, M. Serosurveillance of foot-and-mouth disease in sheep and goat population of India / M. Rout, M. R. Senapati, J. K. Mohapatra [et al.] // Preventive Veterinary Medicine. - 2014. - Vol. 113. - P. 273-277.
Ветеринарное Дерматологическое Общество стран СНГ Российский ветеринарный журнал Журнал JSAP /Российское издание реклама
Уважаемые коллеги! Представляем вашему вниманию Российскую версию официального издания Европейского Общества Ветеринарной Дерматологии, Американской Академии Ветеринарной Дерматологии, Всемирной Ассоциации Ветеринарной Дерматологии -
журнал «Veterinary Dermatology». Главный редактор российского издания - Дипломант Европейского колледжа Ветеринарной Дерматологии, Президент Ветеринарного Дерматологического Общества стран СНГ, Заведующая дерматологическим отделением сети клиник «Белый клык» Кузнецова Е. С. E-mail: info@logospress.ru Тел/факс: (495) 220-4816, 689-0575 йж) ВЦ JSAP *°КЧС1ШГН1Т«1 ^ РОССИЙСКИЕ НЭЛЛНКЕ
