CC BY
143
УДК: 616.33/35-006:612.112.94
РЕГУЛЯТОРНЫЕ Т-ЛИМФОЦИТЫ У БОЛЬНЫХ С НОВООБРАЗОВАНИЯМИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА
Е.В. Курганова1, М.А. Тихонова1, Д.Н. Егоров2, Р.В. Шорохов2,
И.М. Перфильева2, А.А. Останин1, Е.Р. Черных1
НИИ клинической иммунологии СО рАМН, г. Новосибирск1 Городская клиническая больница № 1, г. Новосибирск2 630099, г. Новосибирск, ул. ядринцевская, 14, e-mail: ct_lab@mail.ru1
Проведена оценка субпопуляций регуляторных Т-клеток (Трег) в периферической крови и лимфатических узлах больных раком желудка (РЖ, n=13) и колоректальным раком (КРР, n=10) на различных стадиях заболевания. Установлено, что при РЖ увеличение CD4+CD25+ и CD4+CD25high клеток наблюдалось только в периферической крови. Напротив, пациенты с КРР характеризовались увеличением CD4+CD25+/CD4+CD25high клеток в лимфатических узлах и снижением их в кровотоке. Выявленные изменения были наиболее выражены при поздних стадиях заболевания. Как у больных РЖ, так и у пациентов с КРР наблюдалось увеличение CD4+FOXP3+ клеток в периферической крови и еще в большей степени - в региональных лимфоузлах. Количество CD4+FOXP3+ клеток обратно коррелировало с функциональной (пролиферативной) активностью Т-клеток. Таким образом, при раке желудка и колоректальном раке наблюдаются разнонаправленные изменения субпопуляций Трег на системном и локорегиональном уровне, при этом угнетение функциональной активности Т-лимфоцитов ассоциировано только с CD4+FOXP3+ субпопуляцией клеток.
Ключевые слова: регуляторные Т-клетки, FOXP3, рак желудка, колоректальный рак, периферическая кровь, лимфатические узлы.
REGULATORY T LYMPHOCYTE CELLS IN PATIENTS WITH GASTROINTESTINAL MALIGNANCIES E.V Kurganova1, M.A. Tikhonova1, |D.N. Egorov2, |R.V Shorohov2, I.M. Perfilyeva2, A.A. Ostanin1, E.R. Chernykh1
Institute of Clinical Immunology RAMS SB1,
Municipal clinical hospital № 1, Novosibirsk2 14, Yadrintsevskaya Street, 630099 Novosibirsk, e-mail: ct_lab@mail.ru1
The subpopulations of regulatory T cells (Treg) were investigated in peripheral blood and lymph nodes of patients with different stages of gastric (GC, n=13) and colorectal carcinomas (CRC, n=10). It was revealed that in patients with GC the CD4+CD25+ and CD4+CD25high cells were increased only in peripheral blood. On the contrary, patients with CRC were characterized by increased level of CD4+CD25+/CD4+CD25high Treg in the lymph nodes and decreased level in bloodstream. These changes were strongly pronounced in III-IV stages of disease. The population of CD4+FOXP3+ Treg was increased in peripheral blood and, particularly, in the lymph nodes of patients with gastrointestinal malignancies (GC and CRC). The number of CD4+FOXP3+ cells was inversely correlated with functional (proliferative) activity of T cells. Thus, we conclude that patients with gastric and colorectal carcinomas are characterized by contradictory changes of Treg subsets on systemic and locoregional levels, nevertheless, the decrease in T-cell proliferative activity is associated with expansion of CD4+FOXP3+ T-cells.
Key words: regulatory T cells, FOXP3, gastric carcinoma, colorectal carcinoma, peripheral blood, lymph nodes.
Наличие Т-клеточноопосредованной иммуносупрессии при опухолевом росте является хорошо известным фактом, однако четко идентифицировать источник супрессорной активности долгое время не удавалось. Открытие CD4+CD25+ регуляторных Т-клеток (Трег) явилось переломным моментом в истории супрессорных Т-клеток и позволило существенно продвинуться в понимании механизмов Т-клеточной иммуносупрессии при онкопатологии. И хотя впервые Трег были описаны как клетки, способные поддерживать перифериче-
скую толерантность к аутоантигенам, впоследствии выяснилось, что эти клетки подавляют также противоопухолевый иммунный ответ, способствуя опухолевой прогрессии [10, 14, 17, 23]. Так, у мышей-опухоленосителей было обнаружено повышенное содержание CD4+CD25+ клеток, а удаление этих лимфоцитов приводило к отторжению опухолевого субстрата [16, 20].
На сегодняшний день выделяют, по меньшей мере, два типа Трег - естественные и индуцированные регуляторные Т-клетки. Первые представлены CD4+ Т-клетками с высокой экс-
прессией рецептора к интерлейкину-2 (CD25), имеют тимическое происхождение, анергичны и в культуре in vitro обладают контактзависимым супрессорным эффектом. Вторые - могут быть представлены как CD4+, так и CD8+ Т-клетками, генерируются на периферии при «особых» условиях активации Т-лимфоцитов и реализуют супрессорный эффект через продукцию растворимых факторов. Специфичным маркером Трег является внутриклеточный транскрипционный фактор FOXP3. Экспрессия данного белка определяет способность регуляторных Т-клеток ингибировать промоторную часть генов провос-палительных цитокинов [7, 15].
Увеличение регуляторных Т-лимфоцитов у человека выявлено при многих формах солидных опухолей (рак легкого, яичников, поджелудочной железы и др.) и гемобластозах. Более того, в ряде исследований (при раке яичников, груди и поджелудочной железы) продемонстрирована обратная взаимосвязь количества Трег с выживаемостью пациентов [3, 8, 22].
При колоректальном раке (КРР) и раке желудка (РЖ) также показано увеличение CD4CD25+ Трег [4, 5, 9, 12]. При этом большинство исследований было сосредоточено на анализе Трег в популяции опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов. В то же время содержание этих клеток в лимфатических узлах, дренирующих опухоль, исследовано недостаточно. Кроме того, до сих пор отсутствуют данные, характеризующие количество CD4+fOxP3+ и CD8+FOXP3+ клеток при РЖ. Остается открытым вопрос о сопряженности Трег с прогрессией заболевания.
Поэтому целью работы явилась оценка количественного содержания различных субпопуляций Трег в периферической крови и лимфатических узлах больных РЖ и КРР на различных стадиях заболевания.
Материал и методы
В обследование было включено 13 больных РЖ (включая 1 пациента с I, 3 - со II, 5 - с III и 4 - с IV стадией заболевания) и 10 больных с КРР (2 пациента с I, 1 - со II, 2 - с III и 5 - с IV стадией заболевания). Возраст обследуемых варьировал от 45 до 72 лет (в среднем 59,7 ± 1,6 года). Для иммунологического исследования у больных перед оперативным вмешательством забирали 20 мл периферической крови, во время
операции - регионарные лимфатические узлы. Обследование всех пациентов проводилось после получения информированного согласия. Контрольную группу составили 30 здоровых доноров, сопоставимых по возрасту.
Мононуклеарные клетки периферической крови (МНК-ПК) выделяли стандартно путем центрифугирования гепаринизированной венозной крови в градиенте плотности фиколла-верографина. МНК лимфоузлов получали аналогичным способом, наслаивая на градиент плотности клеточную суспензию, полученную путем мягкого механического выдавливания лимфоцитов из фрагментированной ткани лимфоузлов. МНК в концентрации 0,1х106/лунку культивировали в 96-луночных круглодонных планшетах в среде RPMI-1640 (Sigma-Aldrich), дополненной 0,3 мг/мл L-глютамина, 5мМ HEPES-буфера, 100 мкг/мл гентамицина и 10 % инактивированной сыворотки доноров AB(IY) группы крови при 37°С в СО2-инкубаторе. Для стимуляции клеток использовали моноклональные анти-CD3 антитела ICO-90 (анти-CD3, «Медбиоспектр», Москва) в концентрации 1 мкг/мл. Интенсивность пролиферации оценивали через 72 ч по включению 3Н-тимидина (1 мкКю/лунку), вносимого за 18 ч до окончания культивирования.
Относительное содержание CD4CD25+ и CD4+CD25high Т-клеток определяли методом проточной цитофлюориметрии на лазерном клеточном сортере-анализаторе FACSCalibur (Becton Dickinson, США) с использованием фикоэретрин (РЕ)-меченных анти-CD4 («Сорбент», Москва) и FITC-меченных анти-CD25 моноклональных антител (BD PharMingen, США). Для оценки экспрессии внутриклеточного транскрипционного белка FOXP3 в CD4- и в CD8+-Т-лимфоцитах МНК обрабатывали FITC-меченными анти-CD4 или анти-CD8 антителами («Сорбент», Москва). Пермеабилизацию клеток проводили с использованием 0,2 % раствора Твин-20, после чего клетки культивировали 30 мин с PE-меченными анти-FOXP3-антителами (eBioscience, San Diego, США). Образцы анализировали на проточном цитофлюориметре с использованием программы Cellquest. Математическую обработку полученных результатов проводили с использованием программы «Statistica 6.0».
Результаты и обсуждение
Оценка относительного количества CD4+CD25+ клеток в периферической крови больных РЖ выявила их достоверное увеличение (табл. 1). Учитывая, что у человека супрессорной активностью обладают преимущественно CD4+Т-клетки с высокой экспрессией CD25 молекулы [2], было также проанализировано содержание CD4+CD25high клеток. Доля этих клеток практически в 2 раза превышала донорские значения. Возрастание CD4+CD25+ и cD4+CD25high Т-клеток было обусловлено, главным образом, за счет пациентов с Ш-1У стадией заболевания (рис. 1), составляющих большую часть исследуемой группы (9 из 13 больных РЖ). В то же время у больных с 1-11 стадиями (п=4) увеличение Трег было менее выраженным и проявлялось в виде тенденции. Содержание CD4+CD25+ и CD4+CD25high Т-клеток в регионарных лимфоузлах больных РЖ находилось на уровне периферического кровотока здоровых доноров и не различалось в подгруппах пациентов с 1-11 и Ш-1У стадиями заболевания (CD4+CD25+ Т-клеток - 5,0 ± 1,7 % и 5,3 ± 0,9 % соответственно; CD4+CD25high Т-клеток - 1,3 ± 0,3 % в обеих подгруппах).
Анализ CD4+FOXP3+ и CD8+FOXP3+ клеток показал (табл. 1), что в целом по группе больные РЖ характеризовались отчетливой тенденцией к увеличению их количества в системном кровотоке. При этом более выраженный прирост CD4+FOXP3+Т-клеток регистрировался у больных с Ш-1У стадиями (до 4,8 ± 0,9 %, п=9; Ри=0,08), тогда как у пациентов с 1-11 стадиями количество CD4+F0XP3+ клеток находилось на нормальном уровне (3,5 ± 1,0 %, п=4). Содержание CD4+FOXP3+ клеток в региональных лимфоузлах больных РЖ было достоверно выше, чем в периферической крови. Локорегионарное увеличение количества CD4+FOXP3+ Т-клеток выявлялось уже на ранних стадиях РЖ (8,0 ±
2,3 %, п=3), а в подгруппе больных с Ш-1У стадиями достигало уровня 11,7 ± 2,8 % (п=5). Относительное число CD8+FOXP3+ клеток в периферической крови и лимфоузлах больных РЖ также было повышенным и прямо коррелировало с количеством CD4+FOXP3+ Т-клеток (г8=0,57, р=0,03; п=14 и г8=0,62, р=0,01; п=8 соответственно). В этом случае локорегиональ-
ное увеличение CD8+FOXP3+ Т-лимфоцитов отмечалось также у больных с Ш-1У стадиями РЖ (17,8 ± 7,9 %, п=5) и не выявлялось у пациентов на начальных стадиях заболевания (6,8 ±
4,3 %, п=3).
В группе больных КРР увеличение относительного количества CD4+CD25+ и CD4+CD25high клеток регистрировалось только в регионарных лимфоузлах, тогда как в крови их содержание было достоверно снижено по сравнению с уровнем здоровых доноров (табл. 1). Локорегио-
Рис. 1. Относительное содержание CD4+CD25+ и CD4+CD25Ыgh клеток у здоровых доноров и больных РЖ. Представлены индивидуальные и средние (М) значения относительного количества CD4+CD25+ и CD4+CD25Ыgh клеток в крови здоровых доноров (п=30), больных с 1-11 стадиями (п=4) и 111-1У (п=9) стадиями рака желудка. * - различия статистически значимы по сравнению с группой здоровых доноров (и-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни, Рц<0,05)
Таблица 1
Содержание различных субпопуляций Трег в крови и лимфоузлах больных РЖ и КРР
Группы Субпопуляции Трег
CD4+CD25+ CD4+CD25high CD4+FOXP3+ CD8+ FOXP3+
Здоровые доноры ПК 4,9 ± 0,3 % (п=30) 1,1 ± 0,1 % (п=30) 3,4 ± 0,4 % (п=24) 6,9 ± 1,6 % (п=10)
Рак желудка ПК 6,5 ± 0,8 %* (п=13) 1,8 ± 0,2 %* (п=12) 4,4 ± 0,7 % (п=13) 13,1 ± 4,0 % (п=13)
ЛУ 5,2 ± 0,8 % (п=10) 1,3 ± 0,2 % (п=10) 10,3 ± 1,9 %*# (п=8) 13,7 ± 5,3 % (п=8)
Колоректальный рак ПК 3,5 ± 0,5 %* (п=10) 0,9 ± 0,3 %* (п=9) 4,9 ± 0,7 %* (п=10) 9,9 ± 2,6 % (п=10)
ЛУ 6,5 ± 0,8 %# (п=9) 1,8 ± 0,4 %*# (п=9) 9,8 ± 1,8 %*# (п=9) 6,7 ± 1,7 % (п=9)
Примечание: ПК - периферическая кровь, ЛУ - лимфатические узлы. * - различия статистически значимы по сравнению с группой здоровых доноров (ри<0,05), # - различия статистически значимы между ПК и ЛУ (ри <0,05, и - критерий Вилкоксона-Манна-Уитни).
Таблица 2
Пролиферативная активность Т-клеток здоровых доноров и больных РЖ и КРР
Группы Пролиферация (имп/мин)
Спонтанная Анти-CD3-индуцированная
Здоровые доноры ПК (п=30) 270 ± 50 34970±2220
Рак желудка ПК (п=13) 220 ± 50 13450±3880*
ЛУ (п=8) 275 ±130 3560 ± 880#
Колоректальный рак ПК (п=11) 165 ± 30 9950 ±2710*
ЛУ (п=8) 110 ± 50 2170±1180#
Примечание: ПК - периферическая кровь, ЛУ - лимфатические узлы. * - различия статистически значимы по сравнению с группой здоровых доноров (ри<0,05), # - различия статистически значимы между ПК и ЛУ (ри <0,05, и - критерий Вилкоксона-Манна-Уитни).
нальное увеличение CD4+CD25+и CD4+CD25Ыgh клеток было характерным для больных с 111-1У стадиями (7,0 ± 0,9 % и 2,5 ± 0,5 % соответственно; п=5) и не выявлялось у пациентов с начальными стадиями (4,6 ± 1,2 % и 0,8 ± 0,4 % соответственно; п=3). В целом по группе больных КРР относительное количество циркулирующих CD4+FOXP3+ было достоверно повышенным, причем у больных с 111-1У стадией (рис. 2) изменение было статистически значимым (5,2 ± 1,0 %; п=6; Ру=0,04), а у больных с 1-11 стадиями проявлялось в виде тенденции (4,3 ± 0,9 %, п=3; Ру=0,07). Содержание CD4+FOXP3+Т-клеток в лимфоузлах было еще выше и в 2 раза превышало их уровень в кровотоке. Повышенное количество CD4+FOXP3+ клеток выявлялось как в региональных лимфоузлах больных с 1-11, так и с 111-1У стадиями (10,0 ± 3,1 %, п=4 и 9,0 ± 2,9 %, п=5). Статистически значимых изменений в популяции CD8+FOXP3+ Трег в группе больных КРР выявлено не было.
Учитывая, что Трег характеризуются супрессорной активностью, на заключитель-
ном этапе было проведено сравнительное исследование пролиферативного потенциала Т-лимфоцитов больных РЖ и КРР. Уровень анти-CD 3 -стимулированного пролиферативного ответа Т-клеток в культурах МНК периферической крови больных был достоверно снижен (табл. 2). При этом интенсивность пролиферации у больных РЖ была наиболее низкой в подгруппе пациентов с 111-1У стадиями, характеризующимися наибольшим увеличением CD4+CD25+ и CD4+CD25Ыgh Т-клеток (данные не представлены). Кроме того, у больных КРР интенсивность пролиферации МНК обратно коррелировала с количеством CD4+FOXP3+ клеток (г3=-0,58, р=0,03; п=10). Наиболее глубокое угнетение пролиферативного ответа Т-клеток отмечалось в популяции МНК лимфоузлов. Как было показано ранее, лимфоузлы больных РЖ и КРР характеризовались наиболее высоким содержанием CD4+FOXP3+ Т-клеток. Более того, важная роль этих клеток в угнетении пролиферации лимфоцитов подтверждалась наличием достоверной обратной корреляци-
онной связи между относительным содержанием CD4FOXP3+ клеток и интенсивностью пролиферации в общей группе обследованных пациентов (rS = -0,69, p=0,005; n=15).
Полученные нами данные, с одной стороны, однозначно свидетельствуют о возрастании количества регуляторных Т-клеток при онкопатологии желудочно-кишечного тракта, с другой - позволяют сделать заключение о некоторых различиях в характере изменений Трег у больных РЖ и КРР. Так, у больных РЖ значимое возрастание CD4+CD25+ и CD4+CD25high Т-клеток выявлялось только в периферической крови. В то же время у больных КРР увеличение CD4+CD25+ и CD4+CD25high отмечалось в региональных лимфоузлах, а доля этих клеток на периферии была, напротив, снижена. Полученные данные позволяют предполагать, что при КРР естественные Трег мигрируют из периферической крови в лимфатические узлы и что важную роль в этом процессе играет вовлечение лимфоузлов в опухолевый процесс, поскольку наиболее выраженное перераспределение клеток наблюдается у больных c III-IV стадиями заболевания. Миграция Трег в зону опухолевого микроокружения продемонстрирована при раке яичников и поджелудочной железы и обусловлена экспрессией/продукцией опухолевыми клетками молекул, являющихся хемоаттрактан-тами для Трег. Например, опухолевые клетки при раке яичников экспрессируют CCL22, а при раке поджелудочной железы - ССL5, взаимодействие которых, соответственно, с CCR4 и CCR5 на Трег определяет миграцию последних в опухолевое микроокружение [6, 21]. Другим механизмом накопления Трег в метастатических лимфоузлах при КРР может быть экспансия и генерация этих клеток de novo. Так, известно, что опухолевые клетки при КРР продуцируют простагландин E2, способный индуцировать экспрессию FOXP3 и активировать регуляторные Т-клетки [19, 24]. При РЖ избирательного накопления Трег в дренирующих опухоль лимфоузлах, похоже, не происходит, что может быть связано с особенностями экспрессии хемокинов или других гуморальных факторов опухолевыми клетками. При этом увеличение CD4CD25+ и CD4+CD25hlgh Т-клеток на периферии сопряжено, по-видимому, с размером опухолевой
массы, поскольку отмечается у больных с более распространенными стадиями заболевания.
Изменения CD4+FOXP3+ клеток при РЖ и КРР схожи и проявляются увеличением количества этих клеток в периферической крови и еще в большей степени - в региональных лимфоузлах. Возрастание CD4+FOXP3+ клеток в крови при обеих формах рака выявляется при Ш-1У стадиях, тогда как высокое содержание в региональных лимфоузлах регистрируется, начиная с 1-11 стадии, и сравнимо с таковым у пациентов с более распространенным процессом.
Рис. 2. Содержание CD4+FOXP3+ клеток в периферической крови больных КРР при различных стадиях заболевания. Представлены индивидуальные значения относительного количества CD4+FOXP3+ клеток в периферической крови больных КРР. А - пациент с I стадией, Б - пациент с III стадией КРР CD4+FOXP3+ определяли методом двуцветной проточной цитометрии, используя FITC-меченные анти-CD4- (FL1-канал) и PE-меченные анти-FOXP3-антитела (FL2-H-канал)
Учитывая, что численность этой субпопуляции находится в обратной корреляционной связи с интенсивностью пролиферации лимфоцитов, можно полагать, что CD4+FOXP3+ клетки играют важную роль в подавлении иммунных реакций в дренирующих опухоль лимфоузлах с самых начальных этапов опухолевого роста, еще до момента метастатического вовлечения региональных лимфоузлов. Следует отметить, что возрастание CD4+FOXP3+ клеток в лимфоузлах при РЖ не сопровождалось увеличением численности CD4+cD25+/CD4+CD25Ыgh клеток, а увеличение CD4+FOXP3+ клеток в крови больных КРР ассоциировалось даже с уменьшением доли циркулирующих CD4+CD25+/CD4+CD25Ыgh Т-лимфоцитов. В этих случаях количество CD4+FOXP3+ клеток существенно превышало содержание CD4+CD25+ Т-лимфоцитов. Можно полагать, что популяция CD4+FOXP3+ клеток является гетерогенной и включает не только CD4+FOXP3+CD25+ (естественные Трег), но и CD4+FOXP3+CD25" клетки, представляющие, по-видимому, индуцированные Трег. Существование подобной субпопуляции было описано нами в периферической крови больных раком яичников [1]. При таком допущении можно полагать, что при РЖ естественные Трег в большей степени накапливаются в периферической крови, а при КРР - в регионарных лимфоузлах.
В свою очередь, возрастание индуцированных Трег при РЖ происходит преимущественно в регионарных лимфоузлах, а при КРР эти клетки накапливаются как в периферической крови, так и лимфоузлах.
Достоверных изменений в субпопуляции CD8+FOXP3+ не было выявлено ни при РЖ, ни при КРР. Тем не менее у больных РЖ отмечалась выраженная тенденция к увеличению данной субпопуляции в периферической крови и лимфоузлах, а у пациентов с КРР - в периферической крови. Численность CD8+FOXP3+ лимфоцитов у больных РЖ достоверно коррелировала с количеством CD4+FOXP3+ клеток в периферической крови. Кроме того, отмечалась довольно выраженная тенденция, указывающая на взаимосвязь между содержанием CD8+FOXP3+ клеток и стадией заболевания (г3=0,53, р=0,1; п=10), что также указывает на возможное вовлечение данной субпопуляции в патогенез опухолевого
роста, однако это предположение требует дальнейших исследований.
Полученные нами результаты в целом согласуются с данными большинства авторов о возрастании в периферической крови больных РЖ субпопуляций Сб4+СБ25+ и СВ4+СБ25ЬщЬ клеток по мере прогрессии заболевания [9, 11, 18]. В то же время мы не выявили увеличения данных субпопуляций в периферической крови больных КРР, количество которых, по данным некоторых авторов, также возрастало [12]. Вместе с тем нами впервые исследовано содержание СБ4+СБ25+ и Св4+СБ25Ы^ клеток в регионарных лимфоузлах больных КРР и показано их существенное возрастание.
Что касается исследований FOXP3-экспрес-сирующих клеток, выявленные нами факты согласуются с данными других авторов об увеличении СБ4+СБ25^0ХР3+, СБ8+СБ25^0ХР3+ клеток в периферической крови [4, 5, 24] и возрастании FOXP3-экспрессирующих клеток в дренирующих опухоль лимфоузлах при КРР [24]. Более того, нами было показано, что достоверное возрастание FOXP3+-клеток в регионарных лимфоузлах происходит в субпопуляции СБ4+ лимфоцитов. Кроме того, нами впервые охарактеризовано содержание СБ4+РОХР3+ и СБ8+Р0ХР3+ клеток у больных РЖ. Ранее Т Mizukami е! а1. продемонстрировали увеличение общей популяции БОХР3-экспрессирующих клеток в лимфатических узлах и среди опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов [13]. Однако эти данные не позволяли сделать заключение, за счет какой субпопуляции Т-клеток (СЭ4+ или СЭ8+) происходило увеличение численности БОХР3+ и каково содержание этих клеток в периферической крови. Полученные нами результаты свидетельствуют, что значимое возрастание БОХР3-экспрессирующих клеток происходит в субпопуляции СЭ4+ лимфоцитов и увеличение данной субпопуляции наблюдается не только в региональных лимфоузлах, но и в периферической крови больных РЖ.
Наконец, при ответе на вопрос, какая из анализируемых субпопуляций Трег наиболее тесно связана с угнетением функциональной активности Т-клеток, нами впервые показано, что наиболее выраженное угнетение пролиферативного
ответа лимфоцитов коррелирует с численностью CD4FOXP3+ клеток и наблюдается в популяции МНК региональных лимфоузлов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Курганова Е.В., Тихонова М.А., Коваленко В.Ф и др. Характеристика регуляторных Т-клеток у больных раком яичника // Сибирский онкологический журнал. 2008. № 6 (30). С. 40^5.
2. Baecher-Allan C., Hafler D.A. Suppressor T cells in human diseases // J. Exp. Med. 2004. Vol. 200 (3). P. 273-276.
3. Bates G.J., Fox S.B., Han C. et al. Quantification of regulatory T cells enables the identification of high-risk breast cancer patients and those at risk of late relapse // J. Clin. Oncol. 2006. Vol. 24. P. 5373-5380.
4. Chaput N., Louafi S., Bardier A. et al. Identification of CD8+CD25+Foxp3+ suppressive T cells in colorectal cancer tissue // Gut. 2009. Vol. 58. P. 520-529.
5. Clarke S.L., Gareth J.B., Plant A. et al. CD4+CD25+FOXP3+ regulatory T cells suppress anti-tumor immune responses in patients with colorectal cancer // PLoS ONE. 2006. Vol. 1(1). P. 129-137.
6. Curiel T.J., Coukos G., Zou L. et al. Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival // Nature Medicine. 2004. Vol. 10 (9). P. 942-950.
7. Fontenot J.D., GavinM.A., RudenskyA.Y. Foxp3 programs the development and function of CD4+CD25+ regulatory T cells // Nat. Immunol. 2003. Vol. 4. P. 330-336.
8. HiraokaN., Onozato K., Kosuge T. et al. Prevalence of FOXP3+ regulatory T cells increases during the progression of pancreatic ductal adenocarcinoma and its premalignant lesions // Clin. Cancer Res. 2006. Vol. 12. P. 5423-5434.
9. Ichihara F., Kono K., Takahashi A. et al. Increased populations of regulatory T cells in peripheral blood and tumor-infiltrating lymphocytes in patients with gastric and esophageal cancers // Clin Cancer Res. 2003. Vol. 9. P. 4404-4408.
10. Kiniwa Y., Miyahara Y, Wang H.Y. CD8+FOXP3+ regulatory T cells mediate immunosuppression in prostate cancer // Clin. Cancer Res. 2007. Vol. 13. P. 6947-6958.
11. Kono K., Kawaida H., Takahashi A. et al. CD4+CD25high regulatory T cells increase with tumor stage in patients with gastric and esophageal cancers // Cancer Immunol. Immunother. 2006. Vol. 55 (9). P. 1064-1071.
12. LingK.L., Pratap E.S., Bates G.J. et al. Increased frequency of regulatory T cells in peripheral blood and tumour infiltrating lymphocytes in colorectal cancer patients // Cancer Imm. 2007. Vol. 7. P. 7.
13. Mizukami Y, Kono K., Kawaguchi Y. et al. Localization pattern of Foxp3+ regulatory T cells is associated with clinical behavior in gastric cancer // Br. J. Cancer. 2008. Vol. 98. P 148-153.
14. Najafian N., Chitnis T., Salama A.D. et al. Regulatory functions of CD8+CD28' T cells in an autoimmune disease model // J. Clin. Invest. 2003. Vol. 112. P. 1037-1048.
15. RamsdellF. Foxp3 and natural regulatory T cells: key to a cell lineage? // Immunity. 2003. Vol. 19. P. 165-168.
16. Sakaguchi S., Sakaguchi N., Asano M. et al. Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor а-chains (CD25). Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases // J. Immunol. 1995. Vol. 155. P. 1151-1164.
17. Sakaguchi S. Regulatory T cells: key controllers of immunologic self-tolerance // Cell. 2000. Vol. 101. P. 455-458.
18. Sasada T., KimuraM., Yoshida Y. et al. CD4+CD25+ regulatory T cells in patients with gastrointestinal malignancies // Cancer. 2003. Vol. 98. P. 1089-1099.
19. Sharma S., Yang S.-C., ZhuL. et al. Tumor cyclooxygenase-2/ prostaglandin E2 - dependent promotion of FOXP3 expression and CD4+CD25+ T regulatory cell activities in lung cancer // Cancer Res. 2005. Vol. 65 (12). P. 5211-5220.
20. Somasundaram R., Jacob L., Swoboda R. Inhibition of cytolytic T lymphocyte proliferation by autologous CD4+CD25+ regulatory T cells in a colorectal carcinoma patient is mediated by transforming growth factor-p // Cancer Res. 2002. Vol. 62. P 5267-5272.
21. TanM.C., GoedegebuureP.S., BeltB.A. Disruption of CCR5-dependent homing of regulatory T cells inhibits tumor growth in a murine model of pancreatic cancer // J. Immunol. 2009. Vol. 182. P 1746-1755.
22. WolfD., Wolf AM., Rumpold H. et al. The expression of the regulatory T cell-specific forkhead box transcription factor FoxP3 is associated with poor prognosis in ovarian cancer // Clin. Cancer Res. 2005. Vol. 11 (23). P 8326-8331.
23. Yang Z.-Z., Ansel SM. The role of Treg cells in the cancer immunological response // Am. J. Immunol. 2009. Vol. 5. P 17-28.
24. Yaqub S., Henjum K., Mahic M. et al. Regulatory T cells in colorectal cancer patients suppress anti-tumor immune activity in a COX-2 dependent manner // Cancer Immunol. Immunother. 2008. Vol. 57. P. 813-821.
Поступила 24.11.09
