CC BY
559
ТОМ 5
НОМЕР 1
201 2
КЛИНИЧЕСКАЯ
ОНКО ГЕМАТОЛОГИЯ
КЛИНИКА, ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ И ЛИМФОИДНОЙ ТКАНЕЙ
Flow cytometry in hematology malignancies. Part I. ABC and news in acute leukemia diagnostics
N.N. Tupitsyn, L.Yu. Grivtsova, N.A. Kupryshina SUMMARY
Recent 5 years clinical significance of minimal residual disease in ALL has been proved and practical recommendations of this important prognostical sigh in treatment individualization have been approved. 4-color flow cytometry diagnostics of minimal residual disease is now standardized both in the list of monoclonal antibodies used and in their combinations. It means that primary acute leukemia immunodiagnostics should be adjusted to 4-color flow cytometry standards of residual disease diagnostics. We have illustrated in this paper the most typical, clinically significant situations of flow cytometric diagnosis of acute leukemia variants, the examples of minimal residual disease in T- and B-lineage ALL, and some suggestions of using minimal residual disease standards in primary leukaemia diagnosis.
Keywords: acute leukemia, acute lymphoblastic leukemia, minimal residual disease, flow cytometry.
N.N. Blokhin Cancer Research Center, RAMS, Moscow Контакты: nntca@yahoo.com
Проточная цитометрия в онкогематологии. Часть I. Основы и нововведения в диагностике острых лейкозов
Н.Н. Тупицын, Л.Ю. Гривцова, Н.А. Купрышина
____________________РЕФЕРАТ_________________________
За последние 5 лет доказана клиническая значимость минимальной остаточной болезни (МОБ) при остром лимфобластном лейкозе (ОЛЛ), сделаны практические выводы по использованию этого важнейшего прогностического признака в индивидуализации терапии. Проточноцитометрическая диагностика МОБ стала стандартизованной как по набору используемых антител, так и по их комбинациям. Оптимально применение 4-цветной проточной цитометрии. Это диктует необходимость приведения первичной иммунодиагностики ОЛЛ в соответствие со стандартами выявления МОБ, т. е. внедрения 4-цветной проточной цитометрии уже на этапе установления диагноза острого лейкоза. В работе проиллюстрированы наиболее типичные, клинически значимые ситуации проточно-цитометрической диагностики вариантов острых лейкозов. Кроме того, даны примеры МОБ при Т- и В-линейных ОЛЛ, а также представлены рекомендации по использованию критериев МОБ в первичной диагностике острых лейкозов.
Ключевые слова:
острые лейкозы, острый лимфобластный лейкоз, минимальная остаточная болезнь, проточная цитометрия.
Принято в печать: 27 апреля 2012 г.
С середины 80-х годов ХХ в. проточная цитометрия стала обязательным методом диагностики опухолевых заболеваний крови. Этому предшествовал 10-летний период получения антител к антигенам различных линий и стадий дифференцировки клеток гемопоэза, создания современных проточных цитометров и формирования нового направления научных и диагностических исследований злокачественных клеток крови — иммуно-фенотипирования. Принципиальную роль в зарождении и становлении им-мунофенотипирования клеток крови сыграл профессор George Janossy, основавший первую лабораторию подобного рода в Royal Free Hospital в Лондоне в середине 1970-х годов [1].
В настоящее время роль проточной цитометрии в диагностике лейкозов и лимфом трудно пере-
оценить. Кроме того, метод широко используется как наиболее информативный при контроле эффективности терапии гемобластозов, т. е. становится все более и более востребованным в клинике. Важными вехами на начальных этапах становления иммунофенотипирования стали доказательство M. Borowitz и соавт. [2] возможности отграничения клеток-предшественниц от лимфоцитов на основании экспрессии CD45 и точное соотнесение экспрессии цитоплазматических CD3 и CD22 с Т- и В-линейной принадлежностью клеток лимфоидного ряда [3].
Одним из наиболее важных приложений проточной цитометрии в онкогематологии служит иммунодиагностика, т. е. установление иммунологических подвариантов острых лимфобластных лейкозов (ОЛЛ). Метод проточной цитометрии реже
42
РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
Проточная цитометрия при ОЛ
используется для дифференциальной диагностики ОЛЛ и острых миелоидных лейкозов. Важно помнить, что установление варианта острого лейкоза, как и прежде, базируется на морфо-цитохимическом исследовании пунктата (аспирата) костного мозга. В абсолютном большинстве случаев морфо-цитохимического исследования достаточно, чтобы отграничить ОЛЛ от острого миело-идного лейкоза и установить вариант последнего. Им-мунофенотипирование следует начинать одновременно с морфо-цитохимическим исследованием. На протяжении последних 10 лет мы проводим иммунофенотипическое и морфо-цитохимическое исследования бластных клеток из одной пробирки с минимальным объемом костного мозга (< 0,5 мл). Это позволяет исключить разбавление образца кровью, а также разночтений между данными морфо-цитохимии и иммунологии.
С середины 90-х годов ХХ в. стандартом стала 3-цветная проточная цитометрия, а в настоящее время — 3- и 4-цветная цитометрия с обязательным включением в каждую пробу антител к CD45. Это позволяет разделять бластные клетки и лимфоциты, а также иммунофенотипически точно характеризовать именно популяцию бластных клеток (клеток-предшественниц) на основании слабой экспрессии CD45 (рис. 1).
На первом этапе для установления линейной принадлежности клеток острого лейкоза целесообразно использовать 3- или 4-цветное иммунофлюоресцентное окрашивание с надежными цитоплазматическими маркерами: cytCD3, cytCD22, MPO, CD45. В этом случае наличие МРО (миелопероксидазы в цитоплазме клеток, определяемой иммунологически) будет соответствовать острому миелоидному лейкозу, экспрессия cytCD22 — лейкозам из В-линейных предшественников, а присутствие cytCD3 — лейкозам из Т-линейных предшественников. Уровень CD45 в сочетании с характеристиками светорассеяния позволит отграничить бластные (клетки-предшественницы) от более зрелых лимфоидных и миелоидных элементов. Крайне редко встречаются так называемые острые лейкозы неоднозначной линейности (в классификации ВОЗ 2008 г. — «leukemias of ambiquous lineage»), при которых бластные клетки имеют маркеры различных линий (бифенотипические, трифенотипические) или установить точную линейную принадлежность бластных клеток не представляется возможным. В этих случаях применяется система счета, основанная на диагностической ценности (в баллах) каждого маркера [4].
Достаточно часто наблюдаются ситуации отрицательные или слабоположительные (< 3 % положительных бластных клеток) по цитохимическим реакциям на миелопероксидазу, липиды, неспецифическую эстеразу или PAS-положительное вещество. В этих случаях имму-нофенотипирование с использованием метода проточной цитометрии играет незаменимую роль. Чаще всего речь идет о дифференциальном диагнозе между минимально дифференцированным острым миелоидным лейкозом (вариант М0 по FAB-классификации; рис. 2) и пре-Т-клеточным ОЛЛ (рис. 3). Цитохимические маркеры могут оказаться малоинформативными при редких вариантах острых лейкозов. Типичная, знакомая всем гематологам ситуация касается диагностики острого мегакариоцитар-ного и острого эритроидного лейкозов — в этих случаях всегда необходима иммунологическая верификация диагноза.
Перечень редких вариантов острых лейкозов можно дополнить судан-позитивным ОЛЛ, морфо-цитохимические данные при котором могут привести к ошибочному диагнозу острого миелоцдного лейкоза и, как следствие, к неправильному выбору лечебной тактики [5].
В последние годы диагностическая точность и ценность проточной цитометрии возрастают. Метод стал использоваться не только для первичной диагностики острых лейкозов (разумеется, наряду с морфо-цитохимическим исследованием клеток костномозгового пунктата), но и для мониторинга эффективности терапии ОЛЛ. Быстрое уменьшение количества бластов костного мозга при ОЛЛ у детей, т. е. отсутствие лейкозных клеток (< 1 X 10-4) на 15-й день индукционной терапии, свидетельствует о благоприятном прогнозе и в ряде протоколов лечения служит основанием для снижения дозы антрациклинов. Напротив, сохранение остаточных бластов (> 1 клетки на 1000 миелокариоцитов) после окончания индукционной терапии указывает на плохой прогноз и необходимость усиления терапии вплоть до использования аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Неудивительно, что в силу своей клинической значимости критерии диагностики минимальной остаточной болезни (МОБ) стали стандартизованными значительно раньше, чем панели моноклональных антител для первичной диагностики ОЛЛ. Для 15-го дня индукционной терапии ОЛЛ у детей стандартом в настоящее время считается 4-цветная проточная цитометрия [6]. При ОЛЛ у взрослых исследования МОБ на 15-й день индукционной терапии пока не нашли широкого применения. Для В-линейных ОЛЛ панель антител включает четыре пробы [6]: CD58/CD10/ CD19/CD34, CD20/CD10/CD19/CD34, CD10/CD34/ CD19/CD45 и CD10/CD11a/CD19/CD45 (рис. 4).
На основании процентного содержания лейкозных клеток в костном мозге на 15-й день индукционной терапии выделено три группы больных, различающихся по прогнозу: менее 0,1,0,1 — 10 и более 10 % общего числа миелокариоцитов. Пациенты, у которых остаточные бласты практически отсутствуют (< 0,1 %), имеют очень хороший прогноз. У этих детей возможна редукция дозы
CD 45 CY 5 (5) vs SSC-Height (2)
10» 101 102 103 104
Рис. 1. Разделение бластных клеток (обозначены красным) и лимфоцитов (обозначены зеленым) на основании уровня экспрессии CD45. По оси абсцисс — интенсивность экспрессии CD45; по оси ординат — параметр SSC (side scattering), отражающий гранулярность клеток
wwwmedprint.ru
43
Н.Н. Тупицын и др.
104
103
НО2
100
CD34 + CD7+ - 85%
Л-Л
' ■■ '■.. *-л tijf.i.
101
102 103 104
CD7 FITC
10
10
В
102
TDT FITC
100 1 01 102 1 03 1 04
MPO FITC
Рис. 2. Минимально дифференцированный острый миелоидный лейкоз. Костный мозг клеточный (миелокариоциты — 173 000/мкл). Бластные клетки составляют 71,2 %. Они представлены мономорфно клетками среднего размера с высоким ядерно-цитоплазматическим соотношением, ядра округлые, цитоплазма базофильная, не содержит включений. Цитохимические реакции на миелопероксидазу, липиды, гликоген и неспецифическую эстеразу в бластах отрицательные. (А) По характеристикам светорассеяния и экспрессии клетки CD45 неотличимы от лимфобластов. Дополнительные сложности в дифференциальной диагностике с пре-Т-ОЛЛ создает экспрессия CD7 (Б, по оси Х) и наличие TdT (В, по оси Х) в бластных клетках. Экспрессия cytCD3 отсутствует (В, по оси Y). Клетки положительны на МРО (Г, по оси Х). В целом иммунофенотип характеризуется наличием CD34, CD33, CD13, HLA-DR, CD38, CD56, отсутствием CD64, Т-клеточных маркеров CD5 и мембранных CD3, В-клеточных маркеров CD19, CD20. Таким образом, картина костного мозга соответствует острому миелоидному лейкозу с минимальными признаками дифференцировки (М0 по ФАБ-классификации)
CD45 PE-cy5
Б
104
101
10°J--------------------------------------------------------------------------------1
100 101 102 103 104
TDT FITC
В
Рис. 3. Дифференциальная иммунодиагностика Т-линейного острого лимфобластного лейкоза. Пунктат костного мозга, этап первичной диагностики. Бластоз 95 %, по данным морфо-цитохимии бластные клетки отрицательны в реакциях на миелоперокси-дазу, неспецифическую эстеразу, липиды. Иммунофенотип: CD34+MPOCD13-CD33-CD64CD19-CD20-CD22-CD10-CD7+CD5-sCD3cytCD3+TdT+
A. Гейт бластных клеток. Выявление целевой популяции бластных клеток — гейта — на основании экспрессии общелейкоцитарного антигена CD45. По оси абсцисс — экспрессия CD45 (метка PE-cy5.5, канал детекции FL-3); по оси ординат — показатель SSC, отражающий гранулярность клеток. Область R1 — гейт бластных клеток (обозначены красным)
Б. Экспрессия на клетках образца терминальной дезоксирибонуклеотидилтрансфе-разы (TdT) и цитоплазматическая экспрессия пан-Т-клеточного антигена CD3. По оси абсцисс — клетки TdT+ (метка FITC, канал детекции FL-1); по оси ординат — экспрессия CD3 в цитоплазме (метка PE, канал детекции FL-2). Показаны бластные клетки (обозначены красным) и лимфоциты (обозначены черным). Более 95 % бластов имеют фенотип cytcD3+TdT+
B. Экспрессия на бластных клетках миелопероксидазы (ось абсцисс, метка FITC, канал детекции FL-1) в сопоставлении с экспрессией CD45 (метка PE-cy5, канал детекции FL-3). Показаны все клетки образца; отчетливо видно, что на бластах (обозначены красным) экспрессия MPO слабее, чем на гранулоцитах (обозначены черным; нижний правый квадрант цитограммы); реакция расценена как фоновая
44
Клиническая онкогематология
Проточная цитометрия при ОЛ
Б
100 101 102 103 104
CD19 PE-Cy7
В
103
: 102
Г 10
CD19+CD10+ 27,1% в CD19+
100 101 102 CD58 PE 103 104
“ 100 101 102 CD19 PE-Cy7 103 104
R3
10
CD58 PE
Рис. 4. Выявление минимальной остаточной болезни у детей с острым лимфобластным лейкозом из В-линейных предшественников. 4-цветная проточная цитометрия. Пунктат костного мозга на 15-й день индукционной химиотерапии. В миелограмме: клеточность 7 х 103/мкл, бластные клетки 19 %, лимфоциты 40 %
A. Выявление доли ядросодержащих клеток (ЯСК) среди всех клеток образца на основании экспрессии ядерного красителя syto16+. По оси абсцисс — экспрессия syto16 (канал детекции FL-1); по оси ординат — показатель SSC, отражающий гранулярность клеток. Клетки syto16+ (обозначены красным, область R1) в данном случае составили 87,6 %
Б. Оценка количества клеток CD19+ в пределах ЯСК (клетки syto16+). По оси абсцисс — экспрессия пан-В-клеточного антигена CD19 (метка РЕ-су7, канал детекции FL-3); по оси ординат — показатель SSC. На рисунке представлены только клетки syto16+, т. е. клетки, попавшие в область R1 на рис. 4, А. Число клеток CD19+ (обозначены зеленым, область R2) в пределах клеток syto16+ (т. е. на все миелокариоциты) составило 58,9 %
B. Оценка количества клеток CD10+CD19+. По оси абсцисс — экспрессия CD19 (метка РЕ-су7, канал детекции FL-4); по оси ординат — экспрессия антигена CD10+ (метка FITC, канал детекции FL-1). На рисунке представлены клетки образца, попавшие в область R2 на рис. 4, Б, т. е. только клетки CD19+. Область R3 — клетки CD19+CD10+, которые составляют 27,1 % всех В-клеток образца или 15,9 % всех миелокариоцитов
Г. Оценка количества клеток CD34+CD19+. По оси абсцисс — экспрессия CD58 (метка PE, канал детекции FL-2); по оси ординат — экспрессия антигена CD34+ (метка FITC, канал детекции FL-1). На рисунке представлены клетки образца, попавшие в область R2 на рис. 4, Б, т. е. только клетки CD19+. Область R3 — клетки CD19+ c гиперэкспрессией антигена CD58, которые составляют 27 % всех В-клеток образца или 15,8 % всех миелокариоцитов. Область R4 — клетки CD19+CD34+CD58++, составляющие только 0,15 % всех В-клеток образца
Д. Оценка количества клеток CD10+CD19+ с учетом экспрессии антигена CD58. По оси абсцисс — экспрессия CD58 (метка PE, канал детекции FL-2); по оси ординат — экспрессия антигена CD10+ (метка FITC, канал детекции FL-1). На рисунке представлены клетки образца, попавшие в область R2 на рис. 4, Б, т. е. только клетки CD19+. Область R4 — клетки CD19+CD10+ c гиперэкспрессией антигена CD58, которые составляют большинство клеток гейта R3 (см. рис. 4, В) и 26,3 % всех В-клеток образца или 15,4 % всех миелокариоцитов
Е. Характер экспрессии антигена CD58 (гиперэкспрессия) В-лейкозными лимфобластами. По оси абсцисс — экспрессия клетками образца молекулы CD58; по оси ординат — экспрессия антигена CD19 (метка РЕ-су7, канал детекции FL-3). На рисунке представлены все клетки анализируемого образца. Красным цветом обозначены все клетки CD19+. Клетки CD19+CD58++, обозначенные синим, представляют собой опухолевые лимфобласты
wwwmedprint.ru 45
Н.Н. Тупицын и др.
антрациклинов. Следует отметить, что данный подход [6], основанный на 4-цветной проточной цитометрии, включает панель антител, предусмотренную так называемым упрощенным, 3-цветным окрашиванием [7]. Наши данные свидетельствуют о надежности упрощенного метода диагностики МОБ на 15-й день индукционной терапии [8]. Диагностика МОБ в более поздние сроки, после окончания индукционной терапии, предполагает оценку лейкозного иммунофенотипа (Leukemia-associated Im-munophenotype, LAIP) на основании экспрессии CD58, CD20, CD 11a, что предусмотрено в работе G. Basso и соавт. [6]. Вместе с тем предложенная панель имеет ряд очевидных недостатков. Так, на 15-й день индукционной терапии в костном мозге больных содержится большое количество разрушенных клеток, поэтому определение доли лейкозных бластов следует проводить в пределах ядросодержащих клеток, используя ядерные красители, как это показано на рис. 4, А. Кроме того, чрезвычайно информативно в поздние сроки наблюдения (начиная с 33-го дня индукционной терапии) сочетание маркеров CD58 и CD38, позволяющее достаточно надежно отличать регенерирующие нормальные В-линейные предшественники от лейкозных В-линейных предшественников [9, 10]. По этой причине добавление антител CD38 к панели, предложенной G. Basso и соавт. [6], кажется вполне обоснованным.
Для Т-линейных ОЛЛ итальянская группа AIEOP-BFM [6] предлагает использовать на 15-й день индукционной терапии три пробы: CD99/CD7/CD5/sCD3, CD99/CD7/sCD3/cytCD3 и TdT/CD7/sCD3/cytCD3. Здесь, как и при В-линейных ОЛЛ, целесообразно использовать ядерный краситель syto16.
Наряду с 4-цветным анализом предложены 6-цветные панели антител для диагностики МОБ [9, 10], что представляется чрезвычайно перспективным, особенно в случаях низкой клеточности костного мозга (15-й день индукционной терапии), т. к. позволяет сократить число проб до минимума (1—2 пробирки).
Многоцветная проточная цитометрия в диагностике острых лейкозов активно развивается консорциумом EuroFlow. Эти подходы подробно изложены в лекциях J. van Dongen [11] и A. Orfao [12]. Стандартом проточной цитометрии EuroFlow предлагает сделать 8-цветное окрашивание клеток, и эти положения убедительно обосновываются.
Что касается первичной иммунодиагностики острых лейкозов, то здесь единства мнений относительно перечня антител и их комбинаций до сих пор нет. Исходя из потребностей клиники и опыта нашей работы, можно отметить следующее. Наиболее востребованы первичная диагностика иммунологических подвариантов ОЛЛ и мониторинг МОБ. Первичная диагностика подвариантов ОЛЛ обычно не представляет существенных затруднений и может быть успешно осуществлена даже 3-цветным иммуноцитометрическим методом. Иная ситуация с диагностикой МОБ. На этом этапе анализ существенно более сложный. Необходимо использовать по меньшей мере 4-цветную проточную цитометрию, идентифицировать лимфоидные предшественники с аберрантным иммунофенотипом с высокой точностью (по данным G. Basso и соавт. [6], даже обнаружение 1 лейкозной клетки на 1000 миелокариоцитов свидетельствует о наличии МОБ). Ответственность за результаты исследования многократно возрастает, т. к. они служат основанием 46
для продолжения лечения по той же программе либо видоизменения программного лечения вплоть до использования аллогенной трансплантации костного мозга. Установление МОБ базируется на аберрантных маркерах клеток-предшественниц. Иными словами, нужно не только обнаружить экспрессию аберрантного маркера, но и соотнести его с линейной принадлежностью и стадией дифференцировки клеток. Парадокс состоит в том, что эти маркеры не представляются необходимыми для первичной диагностики иммунологического подварианта ОЛЛ. Вместе с тем отсутствие знаний об экспрессии этих антигенов на бластных клетках при диагностике ОЛЛ создает сложности в интерпретации данных на этапе мониторинга МОБ: при отсутствии четкой популяции аберрантных предшественников всегда остается вопрос, был ли этот маркер (маркеры) экспрессирован при первичной диагностике. Поэтому необходимо ввести все 4-цветные наборы антител [6]1 в панель первичной диагностики ОЛЛ, дополнив В-линейную панель комбинацией антител CD38/CD58/CD19/CD45. Более того, уже при первичной диагностике иммунофенотипирование на предмет выявления аберрантного иммунофенотипа следует выполнять, накапливая большое количество клеток в проточно-цитометрическом анализе (по-видимому, не менее 500 000) с тем, чтобы иметь возможность сравнить уровень экспрессии антигенов на бластах с их уровнем на нормальных предшественниках.
Разумеется, включение в панель первичной диагностики 4-цветных комбинаций антител, используемых для установления МОБ, отнюдь не означает, что этим можно ограничиться. На практике применяется широкая панель антител, включающая антигены миелоидных и моноцитарных клеток, маркеры Т-линии и NK-клеток, антигены эритроидного и мегакариоцитарного рядов, а также HLA-DR, цитоплазматические и мембранные иммуноглобулины. Эти маркеры могут дать полезную информацию при оценке МОБ.
Итак, подводя итог, можно отметить следующее. К азам иммунодиагностики острых лейкозов относятся фенотипирование бластов, гейтируемых на основании слабой экспрессии CD45, оценка линейной принадлежности на основании наиболее надежных маркеров, например цитоплазматических CD3, CD22, MPO. К числу нововведений можно отнести необходимость использования при первичной диагностике по меньшей мере 4-цветной проточной цитометрии, основанной на комбинации маркеров, применимых в дальнейшем для определения МОБ.
Чрезвычайно полезно внедрение 6- и 8-цветных протоколов оценки МОБ. Однако важно помнить, что 6- и 8-цветная проточная цитометрия, несомненно, предпочтительнее 3—4-цветной лишь в том случае, если не нарушается информативность каркасных комбинаций из 3—4 антител в силу особенностей компенсации или нестабильности тандемных красителей. Наиболее актуальной задачей в области проточно-цитометрической иммунодиагностики МОБ и, соответственно, первичной иммунодиагностики острых лейкозов представляется не-
'Мы достаточно часто обращаемся к работе G. Basso (2009), поскольку она выполнена в рамках протоколов BFM (в НИИ детской онкологии и гематологии РОНЦ им.Н.Н. Блохина РАМН лечение ОЛЛ осуществляется по протоколуALL-IC, в основе которого лежит протокол BFM).
КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ
Проточная цитометрия при ОЛ
обходимость использования стандартизованных международных критериев.
ЛИТЕРАТУРА
1. Keating P., Cambrosio A. Biomedical platforms. Realigning the normal and the pathological in late-twenties-century medicine. London: The MIT Press Cambridge, 2003.
2. BorowitzM.J., GuentherK.L., ShultzK.E., Stelzer G.T. Immunophenotyping of acute leukemia by flow cytometric and lysis. Use of CD45 and right angle light scatter to gate on leukemic blasts in 3 color analysis. Am. J. Clin. Pathol. 1993; 100(5): 534-40.
3. Janossy G., Coustain-Smith E., Campana D. The reliability of cytoplasmic CD3 and CD22 antigen expression in immunodiagnosis of acute leukemia: s study of 500 cases. Leukemia 1987; 3(3): 170-81.
4. Matutes E., Morilla R., Farahat N. et al. Definition of acute biphenotypic leukemia. Haematologica 1997; 82(1): 64-6.
5. Купрышина Н.А., Френкель М.А., Андреева Л.Ю. и др. Липиды в бластах при ОЛЛ. Клин. геронтол. 2005; 10: 31-5.
6. Basso G., Veltroni M., Valsecchi M.G. et al. Risk of relapse of childhood acute lymphoblastic leukemia is predicted by flow cytometric measurement
of residual disease on day 15 bone marrow. J. Clin. Oncol. 2009; 27(31): 5168-74.
7. Coustain-Smith E., Ribeiro R.C., Stow P. et al. A simplified cytometric assay identifies children with acute lymphoblastic leukemia who have a superior clinical outcome. Blood 2006; 108(1): 97-102.
8. ГривцоваЛ.Ю., ПопаАВ, СеребряковаИ.Н., ТупицынН.Н. К дальнейшей стандартизации определения остаточных бластных клеток в костном мозге детей с В-линейными острыми лимфобластными лейкозами на 15-й день индукционной терапии. Иммунология гемопоэза 2011; 8(1): 35-54.
9. Боровиц М.Д. Выявление минимальной остаточной болезни у детей с острым лимфобластным лейкозом. Иммунология гемопоэза 2010; 7(2): 8-20.
10. Попов А.М., Вержбицкая Т.Ю., Цаур Г.А. и др. Мониторинг минимальной остаточной болезни методом проточной цитометрии у детей с острым лимфобластным лейкозом из В-линейных предшественников при помощи упрощенного подхода: возможности и ограничения. Иммунология гемопоэза 2010; 7(1): 36-43.
11. Van Dongen J.J.M. EuroFlow достижения и проблемы. Новая концепция проточно-цитометрического обнаружения минимальной остаточной болезни при острых лейкозах. Иммунология гемопоэза 2011; 8(2): 131-61.
12. Orfao A. Стратегии EuroFlow и инструменты анализа данных при злокачественных гематологических опухолях. Иммунология гемопоэза 2011; 8(1): 172-222.
wwwmedprint.ru
47
