Получение рекомбинантного бифункционального полипептида на основе щелочной фосфатазы морской бактерии и галактозосвязывающего лектина морской мидии

Голотин Василий Александрович; Ярмоленко Нина Сергеевна; Балабанова Лариса Анатольевна; Черников Олег Викторович; Чикаловец Ирина Владимировна; Молчанова Валентина Ильинична; Рассказов Валерий Александрович

• Биологически активные вещества из морских гидробионтов в биотехнологии и медицине

Citation: Gershunskaya VV, Abramova L.S., Goferber E.P. Polyunsaturated fatty acids of marine hydrobionts in preschool and school children nutrition. Health. Medical ecology. Science. 2014; 3(57): 20-22. URL: https://yadi.sk/d/J46KUY23USALx

сведения об авторах

Гершунская Валерия Владимировна, к.т.н., ведущий научный сотрудник лаборатории технологии переработки водных биоресурсов ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии», г. Москва; тел.: 8(499)2649032, e-mail: protein@vniro.ru;

Абрамова Любовь Сергеевна, д.т.н., профессор, советник директора ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии», г. Москва; тел. 8(499)2649198, e-mail: abramova@vniro.ru;

Гофербер Екатерина Петровна, аспирант ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии», г. Москва; тел. 8(499)264903, e-mail: protein@vniro.ru.

В.А. Голотин, Н.С. Ярмоленко*, Л.А. Балабанова, О.В. Черников, И.В. Чикаловец, В.И. Молчанова, В.А. Рассказов

получение рекомбинантного бифункционального полипептида

НА ОСНОВЕ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗы МОРСКОЙ БАКТЕРИИ

и галактозосвязывающего лектина морской мидии

ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» Дальневосточного отделения Российской академии наук, Владивосток; ^Дальневосточный федеральный университет, г. Владивосток

Методами генной инженерии построена химерная конструкция, несущая гены щелочной фосфатазы бактерии Cobetia marina и лектина мидии Crenomytilus grayanus. Полученный химерный белок обладает ферментативными и лектин-связывающими свойствами.

Ключевые слова: генная инженерия, химерный белок, галектин, Crenomytilus grayanus, Cobetia marina. Цитировать: Голотин В.А., Ярмоленко Н.С., Балабанова Л.А., Черников О.В., Чикаловец И.В., Молчанова В.И., Рассказов В.А. Получение рекомбинантного бифункционального полипептида на основе щелочной фосфатазы морской бактерии и галактозосвязывающего лектина морской мидии // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2014. №3(57). С. 22-23. URL: https://yadi.sk/d/490wToMMUSAQY

Из мидии Crenomytilus grayanus был выделен и охарактеризован галектин, который может быть использован в реакциях гемагглютинации, в методах очистки биологических жидкостей, а также высокоспецифичной ранней диагностики рака кишечника.

цель исследования: получение рекомбинантного бифункционального пептида на основе щелочной фосфатазы морской бактерии Cobetia marina и галактозосвязывающего лектина морской мидии Crenomytilus grayanus.

Материалы и методы. Для усовершенствования методов очистки лектина и лектин-иммуно-ферментного анализа была разработана генетическая конструкция галектина морской мидии C. grayanus, включающая щелочную фосфатазу морской бактерии C. marina.

результаты. Для построения генетической конструкции были амплифицированы кодирующие участки генов высокоактивной щелочной фосфатазы из хромосомы морской бактерии C. marina и кДНК лектина C. grayanus, которые были последовательно лигированы в плазмиду pET-40b через гибкий лин-

кер (G4S)3. В результате скрининга рекомбинантных колоний было обнаружено, что химерный белок обладает высокой фосфатазной активностью. Наличие ферментативной активности позволяет проводить детекцию рекомбинантного лектина как при хрома-тографической очистке, так и при проведении лек-тин-иммуноферментного анализа по расщеплению хромогенного субстрата п-нитрофенилфосфата. Результаты проведения реакции прямой гемагглютина-ции с использованием рекомбинантного химерного лектина показали наличие его высокой лектин-свя-зывающей активности.

Выводы: впервые полученный активный бифункциональный химерный белок, состоящий из высокоактивной щелочной фосфатазы морской бактерии C. marina и галактозосвязывающего лектина морской мидии C. grayanus, может стать перспективным в методах выявления различий в гликозилировании онкофетальных антигенов (ОФА).

работа была поддержана грантом рФФи № 14-04-00696, программой дальний Восток №»12-!-Ш-10

Биологически активные вещества из морских гидробионтов в биотехнологии и медицине •

Golotin V.A., *Yarmolenko N.S., Balabanova L.A., Chernikov O.V., Chikalovets I.V., Molchanova V.I., Rasskazov V.A.

synthesis of the recombinant chimeric bifunctional polypeptide on the base of marine bacterium alkaline phosphatase and marine mussel galactose-binding lectin

G.B. Elyakov Pacific Institute of Bioorganic Chemistry, Far Eastern Branch, Russian Academy of Sciences, Vladivostok, *Far Eastern Federal University, School of Natural Sciences, Vladivostok.

Using genetic engineering methods, a chimeric plasmid carrying genes of alkaline phosphatase of the marine bacterium Cobetia marina and lectin of the mussel Crenomytilus grayanus has been constructed. Chimeric protein possesses both alkaline phosphatase and lectin-binding activities.

Keywords: genetic engineering, chimeric protein, galectin, Crenomytilus grayanus, Cobetia marina.

Citation: Golotin VA., Yarmolenko N.S., Balabanova L.A., Chernikov O.V, Chikalovets I.V, Molchanova V.I., Rasskazov V.A. Synthesis of the recombinant chimeric bifunctional polypeptide on the base of marine bacterium alkaline phosphatase and marine mussel galactose-binding lectin. Health. Medical ecology. Science. 2014; 3(57): 22-23. URL: https://yadi.sk/dA490wToMMUSAQY

Сведения об авторах

Голотин Василий Александрович, аспирант лаборатории морской биохимии ГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток; тел.: 8(423) 2311430, e-mail:golotin@bk.ru;

Ярмоленко Нина Сергеевна, студентка Дальневосточного Федерального Университета, кафедра биохимии, биотехнологии и микробиологии, г. Владивосток; тел.: 8(964)4455083; e-mail: ninok1993@mail.ru;

Балабанова Лариса Анатольевна, к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории морской биохимии ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток; тел.: 8(423)2311430, e-mail: balaban@piboc.dvo.ru;

Черников Олег Викторович, к.б.н., заведующий лабораторией химии неинфекционного иммунитета ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток; тел.: 8(423)2311430, e-mail: chernikovoleg@gmail.com;

Чикаловец Ирина Владимировна, к.х.н., старший научный сотрудник лаборатории химии неинфекционного иммунитета ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток; тел.: 8(423)2311430, e-mail: ivchik6@mail.ru;

Молчанова Валентина Ильинична, к.х.н., старший научный сотрудник лаборатории химии неинфекционного иммунитета ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток; тел.: 8(423)2311430, e-mail: molchanova@piboc.dvo.ru;

Рассказов Валерий Александрович, к.б.н., заведующий лабораторией морской биохимии ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток; тел.: 8(423)2311430, e-mail: raskaz@piboc.dvo.ru.

Л.С. Долматова, О.А. Уланова

ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ИЗ гОЛОТУРИЙ НА СКОРОСТЬ ЗАЖИВЛЕНИЯ РАНы

поверхностного покрова и динамику концентрации целомоцитов в модельном эксперименте

ФГБУН «Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева», Владивосток

Экстракт из дальневосточных видов голотурий стимулировал более быстрое (до 37%) заживление резаной раны поверхности стенки тела голотурии Eupentacta fraudatrix на фоне более раннего снижения общего количества целомоцитов, но не морулярных клеток, в целомической жидкости, по сравнению с животными, получавшими буферный раствор.

Ключевые слова: экстракт из голотурий, целомоциты, морулярные клетки, резаная рана. Цитировать: Долматова Л.С., Уланова О.А. Влияние экстракта из голотурий на скорость заживления раны поверхностного покрова и динамику концентрации целомоцитов в модельном эксперименте // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2014. №3(57). С. 23-25. URL: https://yadi.sk/d/egiVimjAUSASY