CC BY
33
WAYS OF STORAGE CLOSTRIDIUM BOTULINUM
Mustafina E.N., Mustafin T.R., Sadykov N.S., Yusupov S.A.
Summary
For the first time carried out research and development work on the conservation and use of genetic diversity of microorganisms, pathogens for animal and human rights. To ensure long-term storage to preserve the original biological properties Unique collectable sample Cl . Botulinum, we conducted Studies on detailed study of ways and the time long-term storage.
УДК 619.616.99
ПАТОГЕНЕЗ И ПАТОМОРФОЛОГИЯ КРИПТОСПОРИДИОЗА У ЛАБОРАТОРНЫХ
ЖИВОТНЫХ
*Перфильева Н.П. - д.б.н., профессор; Васильева В.А. - д.в.н., профессор, академик РАЕ; Хохлова Л.А. - к.в.н., доцент, профессор РАЕ; Вилкова М.А. - аспирант Национальный исследовательский Мордовский государственный университет
имени Н. П. Огарева
*Ульяновский государственный педагогический университет имени И.Н. Ульянова
Ключевые слова: мыши, органы, атрофия, дистрофия, саркоплазма, лизис, гемостаз, инфильтрация, лимфоциты, эозинофилы.
Key words: mouse, organs, atrophy, dystrophy, sarcoplasm, lysis, hemostasis, infiltration, lymphocytes, eosinophils.
Известно, что впервые криптоспоридии были обнаружены в начале века [6], в клетках эпителия желез желудка лабораторных мышей ранее не известных одноклеточных паразитов, достигающих на самых крупных стадиях развития 6-7 мкм в диаметре. Принадлежность этих паразитов к кокцидиям не вызывала у Е.Е. Тиццера сомнений, несмотря на их необычайно мелкие размеры, а также кажущуюся внеклеточную локализацию. Свое родовое и видовое название - Cryptosporidium muris - эти кокцидии получили лишь через 3 года. А еще через 2 года в эпителии тонкого кишечника мышей был описан другой вид этого рода - C.parvum, имеющий еще более мелкие ооцисты - 4-5 мкм в диаметре.
Следовательно, белые лабораторные мыши могут быть использованы для воспроизведения этого заболевания. Лабораторные животные могут быт источником инвазии для многих домашних животных, экспериментаторов и обслуживающего персонала.
Использование лабораторных грызунов в научных исследованиях особенно экономично, так как крупные животные часто недоступны из-за дороговизны. Так как крипто-споридии относятся к редчайшей категории гомоксенных, но поликсенных кокцидий - это означает, что все их развитие от ооцисты до ооцисты совершается, как и у эймерий и изо-
спор, в организме одного хозяина, однако число таких хозяев в пределах класса позвоночных может быть достаточно велико.
Исследованием криптоспоридиоза в разные годы занимались ученые за рубежом и в России [2, 3, 4, 5].
Исходя из этого, мы поставили задачу, изучить характер изменений, происходящих у лабораторных животных экспериментально инвазированных ооцистами криптоспоридий.
Материалы и методы. Объектом исследования служили 60 беспородных белых мышей обоего пола массой 12-18 г. До пятидневного возраста их выращивали в лаборатории в условиях, исключающих спонтанное заражение криптоспоридиозом. Мышей раздели по принципу аналогов на две группы. I группа - чистый контроль, мышей не заражали, мышей II группы заражали ооцистами криптоспоридий. Для изучения гистологических изменений в органах мышей II группы их убивали на 5, 8, 10, 12, 16, 20, 24, 26, 28, 30-е сутки после заражения по 3 головы из каждой, а животных I группы - в начале, середине и конце опыта по 10 голов.
После тщательного патологоанатомиче-ского исследования тушек мышей у них отделяли кишечник, желудок, почки, печень, селезенка, сердце, надпочечники и легкие. Одну часть органа помещали во флакон с 10%
нейтральным формалином, а вторую погружали в раствор Карнуа для заливки в парафин. Готовили мазки-отпечатки и окрашивали с целью выявления ооцист Cryptosporidium parvum по Романовскому - Гимзе и Циль-Нильсену. Из парафиновых блоков на микротоме делали гистосрезы толщиной 6-7 мкм, которые затем окрашивали гематоксилин-эозином по общепринятой методике.
Результаты исследований. В период массового выделения ооцист криптоспоридий изменения наблюдались на 8-е, 10-е сутки исследования.
Слизистая 12-ти перстной кишки была с полиморфными, местами деформированными ворсинками с полнокровным кровоизлиянием в строму, с поверхности покрыта призматическим кутикулярным эпителием с примесью прозрачных бокаловидных клеток. Просветы железистых крипт свободны. Собственно мышечный слой слизистой оболочки тонкий, местами еле заметен, представлен гладко мышечными волокнами. Подслизистый слой разрыхлен и состоит из однородных округлых дуоденальных - Брунноровских желез, переплетен артериальными и венозными сосудами, а также единичными клетками, состоящих из лимфоцитов и макрофагов. Мышечная стенка истончена, представлена пластами переплетающих мышечных волокон с мелкими сосудами, серозный слой покрыт тонким слоем клеток мезотелия.
Слизистая тощей кишки имеет утолщенные и укороченные ворсинки, в просвете видны ооцисты C. parvum, которые покрыты призматическим эпителием. Бокаловидные клетки представлены прозрачной цитоплазмой, просвет железистых крипт расширен. В просвете крипт имеются следы слизи и единичные слущенные клетки эпителия. В строме ворсинок признаки слабого отека. Собственно мышечный слой слизистой тонкий, представлен переплетающими гладкомышечными волокнами. Подслизистый слой разрыхлен, где встречаются артерии, вены и лимфатические сосуды, в щелях их обнаруживаются единичные клетки, состоящие из лимфоцитов и гистиоцитов. Мышечный слой представлен двумя слоями гладких мышечных волокон, в межмышечных пространствах встречаются лимфоциты и гистиоциты. Серозная оболочка тонкая, представлена клетками мезотелия.
Слизистая подвздошной кишки представлена удлиненными, полиморфными, местами деформированными ворсинками покрытых призматическим эпителием. Единичные бокаловидные клетки представлены про-
зрачной цитоплазмой. В просвете отдельных ворсинок видны тонкие лимфатические щели и мелкие капилляры с явлениями гемостаза. Просвет люберкюновых желез несколько расширен и содержит единичные клетки слу-щенного эпителия. Собственно мышечный слой слизистой оболочки тонкий, местами разрыхлен, несколько отечен и содержит клетки, состоящие из лимфоцитов и гистиоцитов. Мышечный и серозный слой несколько истончен с очагами клеточной инфильтрации.
Слизистая и железистые крипты в слепой кишке выстланы призматическими клетками. Железистые крипты местами расширены, в просвете содержат следы слизи и единичные клетки слущенного эпителия. Собственно мышечный слой слизистой очень тонкий и местами не виден. Подслизистый слой хорошо выражен с признаками слабого отека, пронизаны кровеносными сосудами. Встречаются явления гемостаза, небольшие инфильтраты, состоящие из лимфоцитов и гистиоцитов. Хорошо выражен мышечный слой, состоящий из двух прослоек. В межмышечных пространствах встречаются мелкие инфильтраты. Серозный слой утолщен с фиб-ринозыми наложениями и клеточной - инфильтрацией из лимфоцитов и тканевых клеток.
Поверхность ободочной кишки покрыта слоем слизи, а в остальном морфологическая картина идентична описанию слепой кишки.
Слизистая прямой кишки представлена железистыми криптами выстланных призматическими клетками с множеством бокаловидных клеток, многие из которых с пустой прозрачной цитоплазмой. В просвете железистых крипт имеются следы слизи, единичные клетки слущенного эпителия и лимфоциты, на отдельных участках слизистая покрыта тонким слоем слизи с примесью клеток слущен-ного эпителия, лимфоцитов и гистиоцитов. Собственно мышечный слой слизистой оболочки тонкий, местами трудно проследить. Подслизистый слой хорошо выражен в нем много кровеносных сосудов. Мышечный слой представлен двумя мышечными прослойками гладких мышечных волокон. В межмышечных пространствах встречаются мелкие клеточные клетки из лимфоцитов и гистиоцитов. Серозный слой несколько утолщен, инфильтрирован жиром, с множеством мелких кровеносных сосудов и клеточной инфильтрацией из лимфоцитов, гистиоцитов и единичных плазматических клеток.
В желудке слизистая оболочка резко отечна с поверхностными некрозами, просвет
железистых крипт сужен, клетки эпителия плохо различимы, в цитоплазме клеток тяжелейшие явления творожистой и гиалиново-капельной дистрофии, ядра полиморфны с явлениями пикноза, кариолизиса, многие клетки эпителия находятся в состоянии лизиса. В подслизистом слое наличие отека и слабый лимфоцитарный инфильтрат.
Печень увеличена. На гистосрезах обнаруживается гиперхроматин в виде гранул средней величины равномерно распределен в кариоплазме. Часть клеток изменена, и ядра в них сплющены и имеют полулунную форму. Большая часть клеток имеет своеобразный пенистый вид. Около кровеносных сосудов скопления лимфоцитоподобных клеток. На периферии дольки найден только один очаг микронекроза с полной стертостью рисунка. По периферии его отмечается зона нейтро-фильных гепатоцитов.
В области триады, там, где расположены желчные протоки, хорошо видны формирующиеся, новые желчные протоки с наличием в них просвета. Эпительная выстилка в них представлена кубическим эпителием, тогда как в основных протоках выявлена пролифе-ративная реакция эпителия. Явления образования ложных протоков, свойственных алиментарному циррозу, не отмечаются.
Также Т.В. Бейер [1], проведя исследования методом цитофотометрии, выявила морфофункциональные изменения печени 2-недельных крыс в норме и экспериментальном криптоспоридиозе. У зараженных животных наблюдалось увеличение отношения массы печени к массе тела на фоне замедления или даже полного прекращения роста животных, что указывает на развитие у них тяжелой патологии. Криптоспоридиоз оказал негативное влияние на состояние паренхимы печени, о чем свидетельствуют увеличение по сравнению с нормой содержание белка в гепатоци-тах и их средней плоидности, а также изменение соотношения количества клеток разных классов плоидности. Степень изменения печени на органном и цитологическом уровнях прямо зависела от интенсивности инвазии.
В почках поверхность ровная, капсула гладкая, ткань набухшая, малокровная, отмечается полиморфизм сосудистых клубочков с гиперемией и повышенным цитозом капиллярных петель. Капсула Шумлянского утолщена, просвет ее сужен, щелевиден, местами содержит белковый выпот и единичные клетки слущенного эпителия. Просвет извитых канальцев их несколько расширен, заполнен белковым выпотом. Клетки эпителия очерче-
ны слабо с гомогенизированной мелко и грубозернистой цитоплазмой с полиморфными ядрами с рыхлым сетчатым хроматином, явлениями выраженной гиалиново-капельной дистрофии. Прямые канальцы обычного вида, в просвете отдельных канальцев встречаются гиалиновые и зернистые цилиндры.
Поверхность надпочечников ровная, капсула гладкая, корковое вещество малокровно, границы коркового и мозгового вещества сглажены, плохо различимы. Мозговое вещество отечно, полнокровное с выраженными клеточными и ядрами полиморфизма, ядра клеток разрыхлены сетчатым хроматином признаками пикноза и кариолизеса, цитоплазма клеток резко набухшая, гомогенезиро-вана, местами с грубой зернистостью, выраженными явлениями творожистой и гиалиново - капельной дистрофии.
Легочная ткань местами маловоздушная, местами эмфизематозно расширена. Межальвеолярные перегородки утолщены за счет клеточной инфильтрации особенно в маловоздушных участках. В содержимом альвеол являются клеточные элементы, состоящие из нейтрофилов, лимфоцитов, единичных плазматических клеток. Среди них отчетливо выступающих макрофагов не видно. Бронхи, как среднего, так и мелкого калибра имеют значительно суженые просветы, их призматический эпителий секретирует муцин. Подсли-зистый слой бронхов и перебронхиальное пространство обильно инфильтрированы лимфоцитами, нейтрофилами, молодыми клетками, типа фибробластов, просветы сосудов содержат увеличенное число нейтрофи-лов.
Селезенка содержит клеточные элементы, которые в фолликулах уменьшены, стенки центральных артерий утолщены. Эндотелий с явлениями пикноза. Трабекулы разрыхлены, в некоторых из них наблюдается инфильтрация бластных клеток. Поверхность относительно ровная, капсула гладкая, структура строения относительно сохранена. Белая пульпа выражена хорошо с большим числом полимерных фолликулов с активными реактивными центрами размножения. Красная пульпа значительно полнокровна с явлениями гемостаза, относительно многоклеточна с явлениями пролиферации элементов ретикулярной стро-мы.
В сердечной мышце картина слабого венозного полнокровия и гемостаза, явления незначительного набухания мышечных волокон с признаками гомогенизации их саркоплазмы, отмечается слабый полиморфизм
ядер с признаками разрыхления и уплотнения хроматина. В межмышечных пространствах отмечается явления отека и единичные клетки (лимфоциты и гистиоциты). Полости сердца переполнены кровью.
Выводы. У лабораторных животных по результатам наших исследований и литературных данных наиболее характерные изменения наблюдаются в кишечнике, особенно в дистальном отделе тонкой (подвздошной) кишки, а при сильном заражении возбудитель колонизирует тонкий кишечник по всей длине, включая крипты. У зараженных животных различной дозой наблюдается увеличение отношения массы печени к массе тела, а также наблюдается зернистая, жировая дистрофия и некроз единичных гепатоцитов со скоплением макрофагов, лимфоцитов.
Криптоспоридиоз лабораторных животных является опасным зоонозом, так как они являются источником распространения этой инвазии у сельскохозяйственных животных.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Бейер, Т.В. Морфофункциональные изменения печени в раннем постнатальном развитии у крыс, экспериментально зараженных кишечным протозойным патогеном
Cryptosporidium parvum (Coccidia, Sporozoa) / О. В. Анацкая, Н. В. Сидоренко // Цитология. - 2002. - № 11. - С. 1046-1057.
2.Васильева, В.А. Криптоспоридиоз (экспериментальное исследование) / В.А. Васильева, Кулясов П.А., Абаева Е.И. // Труды Кубанского государственного аграрного университета. - 2009. - №1 (ч.2.). - С. 99-101.
3.Васильева, В.А. Протозойные болезни свиней / В.А. Васильева, П.А. Кулясов, Л.А. Хохлова // Учебное пособие. - Саранск: издательство Мордовского университета, 2016. -60 с.
4. Васильева, В.А. Клинико-биохимические показатели патологического процесса в организме животных при крипто-споридиозе / В.А. Васильева, П.А. Кулясов, Ю.Е. Курочкина // Фундаментальные исследования. - 2014. - №6 (5). - С. 942 - 945.
5. Никитин, В.Ф. Рекомендации по диагностике и профилактике криптоспоридиоза телят / В.Ф. Никитин // Тр. Всерос. ин-та гельминтологии. - 2001. - Т. 37. - С. 271 -277.
6. Tizzer, E.A. A sporozoan found in the peptic glans of the common mouse / E.A. Tizzer // Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1907. Vol. 5. - P. 12-13.
ПАТОГЕНЕЗ И ПАТОМОРФОЛОГИЯ КРИПТОСПОРИДИОЗА У ЛАБОРАТОРНЫХ
ЖИВОТНЫХ
Перфильева Н.П., Васильева В.А., Хохлова Л.А., Вилкова М.А.
Резюме
Анализ экспериментального материала показывает, что при криптоспоридиозе мышей происходят нарушения в исследованных органах (сердце, печень, почки, легкие, кишечник, желудок, селезенка, надпочечники), которые характеризуются выраженной клеточной реакцией. Глубина нарушений зависит от времени с момента заражения.
PATHOGENESIS AND PATHOMORPHOLOGY OF CRYPTOSPORIDIOSIS IN LABORATORY
ANIMALS
Perfilieva N.P., Vasilieva V.A., Khokhlova L.A., Vilkova M.A.
Summary
Analysis of experimental material shows that there are disorders in organs examined (heart, liver, kidneys, lungs, intestines, stomach, spleen), which are characterized by marked cellular reaction, in mice at cryptosporidiosis.
