Научная статья на тему 'Панели сывороток, содержащие разные субтипы и мутантные формы HBsAg,для оценки диагностической чувствительности наборов реагентов длявыявления HBsAg'

Панели сывороток, содержащие разные субтипы и мутантные формы HBsAg,для оценки диагностической чувствительности наборов реагентов длявыявления HBsAg Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

CC BY
430
108
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ГЕПАТИТ B / ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ / ПАНЕЛИ СЫВОРОТОК ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВГВ / HEPATITIS B / PANEL / IMMUNE ENZYME ANALYSIS / SERUM / VIRUS DIAGNOSTICS

Аннотация научной статьи по прочим медицинским наукам, автор научной работы — Кожанова Татьяна Викторовна, Клушкина В. В., Исаева О. В., Попова О. Е., Нетесова И. Г.

Обнаружение в сыворотке крови HBsAg помощью методов иммуноферментного анализа имеет решающее значение не только для диагностики острой и хронической формы гепатита В, но и при проведении скрининга донорской крови и ее компонентов, контроле за лицами, входящими в группы риска инфицирования вирусом гепатита B (ВГВ). Создание панелей, содержащих широкий спектр образцов сывороток крови с серовариантами и мутантными формами поверхностного антигена ВГВ, распространенными на территории Российской Федерации, необходимо для контроля аналитической и диагностической чувствительности тест-систем для выявления HBsAg. Тестирование наборов реагентов для выявления HBsAg с использованием двух панелей, содержащих рекомбинантные и нативные варианты HBsAg, показало, что данные наборы позволяют выявлять различные сероварианты HBsAg (ayw2, adw2, ayw3 varA, ayw3 varB, adrq+) в концентрации 0,1-0,01 МЕ/мл и так называемые ускользающие мутантные формы HBsAg рекомбинантного и нативного происхождения (G145R, Q129R, Q129H, Q129L, T143K, T126N, T126S, D144A, M133L, К141Е и P142S), при этом чувствительность при определении нативных и рекомбинантных мутантных форм может различаться. Полученные результаты свидетельствуют о важности использования панелей не только с рекомбинантными, но и с нативными образцами, содержащими мутантные формы HBsAg, для оценки чувствительности наборов реагентов.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по прочим медицинским наукам , автор научной работы — Кожанова Татьяна Викторовна, Клушкина В. В., Исаева О. В., Попова О. Е., Нетесова И. Г.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

THE PANELS OF SERUMS, CONTAINING VARIOUS SUBTYPES AND MUTANT FORMS OF HBSAG, TO EVALUATE THE DIAGNOSTICS SENSITIVITY OF KITS O

The detection of HBsAg in blood serum using immune-enzyme analysis techniques decisively matters both for diagnostics of acute and chronic hepatitis B and screening of donor's blood and its components, controls of persons from risk groups of hepatitis B infection. The making of panels containing wide specter of samples of blood serums with sero-variants and mutant forms of surface antigen of hepatitis B virus widespread on the territory of the Russian Federation is necessary to control analytic and diagnostic sensitivity of test systems for detecting HBsAg. The testing of reagents kits to detect HBsAg using twi panels containing recombinant and native variants of HBsAg, demonstrated that these kits enable to detect various sero-vatriants of HBsAg (ayw2, adw2, ayw3varA, ayw3varB, adrq+) in concentration 0.1-0.01 IU/l and the so called elusive mutant forms of HBsAg of recombinant and native origin (G145R, Q129R, Q129H, Q129L, T143K, T126N, T126S, D144A, M133L, K141E and P142S). At that, the sensitivity can differ during the detection of native and recombinant mutant forms. The results testify the importance of using the panels both with recombinant and native samples containing the mutant forms of HBsAg in evaluation of sensitivity of reagents kits.

Текст научной работы на тему «Панели сывороток, содержащие разные субтипы и мутантные формы HBsAg,для оценки диагностической чувствительности наборов реагентов длявыявления HBsAg»

практ. ревматол. - 2010. - № 1. - С. 31-45.

4. Теория и практика иммуноферментного анализа / Егоров А. М., Осипов О. П., Дзантиев Б. Б. и др. - М., 1991. - С. 246-251.

5. AggravalR., LiaoK., NairR. et al. // Arthr. Rheum. - 2009. - Vol. 61, N 11. - P. 1472-1483.

6. AletahaD., Neogi T., Silman A. et al. // Arthr. Rheum. - 2010. - Vol. 62, N 9. - P. 2569-2581.

7. BangH., Luthke K., Gauliard A. et al. // Ann. Rheum. Dis. - 2006. -Vol. 65 (suppl. 11). - P. 144.

8. Blckburn G. F, ShahH. P., Keneten J. H. et al. // Clin. Chem. - 1991. - Vol. 37, N 9. - P. 1534-1539.

9. Boire G, Gosette P., Combe B. et al. // Arthr. Res. Ther. - 2005. -Vol. 7. - P. 529-603.

10. Cai B, Wang B, Liu J. et al. // Clin. Biochem. - 2011. - Vol. 44, N 12. - P. 989-993.

11. Chenevier-Gobeaux C., Simonneau C., Ekindjian O. et al. // Ann. Biol. Clin. - 2009. - Vol. 67, N 4. - P. 405-410.

12. Coenen D., Verschueren P., Westhovens R. et al. // Clin. Chem. -2007. - Vol. 53, N 3. - P. 498-504.

13. Cohen J. // Educ. Psychol. Measurement. - 1960. - Vol. 20. - P. 37-46.

14. Dasmjanovska L., Thabet M. M., Levarht E. W. N. et al. // Ann. Rheum. Dis. - 2010. - Vol. 69, N 4. - P. 730-732.

15. Dejaco C., Klotz V, LarcherH. et al. // Arthr. Res. Ther. - 2006. -

Vol. 8, N 4. - P. 119-125.

16. Egerer K., Bang H., Luthke K. et al. // Z. Rheumatol. - 2005. - Bd 64. - S. 8-9.

17. Guidelines for immunologic laboratory testing in the rheumatic diseases: an introduction. American college of rheumatology ad hoc committee on immunologic testing guidelines // Arthr. Rheum. -2002. - Vol. 47. - P. 429-433.

18. Matsson L., Mullazehi M., WickM. et al. // Arthr. Rheum. - 2008. -Vol. 58. - P. 36-45.

19. NishimuraK., SugiyamaD. et al. // Ann. Intern. Med. - 2007. - Vol. 146. - P. 797-808.

20. RengerF., BangH., FeistE. et al. // Arthr. Res. Ther. - 2010. - Vol. 12. - P. R120.

21. Rodrigues-Mahou M., Lopez-Longo F., Sanchez-Ramon S. et al. // Arthr. Rheum. - 2006. - Vol. 55, N 4. - P. 657-661.

22. Shidara K., Inoue E., Tanaka E. et al. // Rheumatol. Int. - 2011. -Vol. 31, N 5. - P. 617-622.

23. Snijders G. F., den Broeder A. A., Bevers K. et al. // Scand. J. Rheumatol. - 2008. - Vol. 37. - P. 151-154.

24. Soos L., Szekanecz Z., Szabo Z. et al. // J. Rheumatol. - 2007. - Vol. 34, N 8. - P. 1658-1663.

25. Ursum J., SchaardenburgD., NielenM. // Ann. Rheum. Dis. - 2007.

- Vol. 66 (suppl. 11). - P. 339.

26. Wong C. E., TseH. Y. Lateral Flow Immunoassay. - New York, 2009.

- P. 3-5.

Поступила 10.11.11

© КОЛЛЕКТИв АвТОРОв, 2012 удК 616.36-002-022-078.33

Т. в. Кожанова1, в. в. Клушкина1, О. в. Исаева1, О. Е. Попова1, И. Г. Нетесова2, К. К. Кюрегян1, М. И. Михайлов1

панели сыворотоК, содержащие разные субтипы и мутАнтныЕ Формы HBsAg, для оценки диагностической чувствительности наборов реагентов для выявления HBsAg

1Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова РАМН, Москва, 2ЗАО «вектор-Бест», Кольцово, Новосибирская область

Обнаружение в сыворотке крови HBsAg помощью методов иммуноферментного анализа имеет решающее значение не только для диагностики острой и хронической формы гепатита В, но и при проведении скрининга донорской крови и ее компонентов, контроле за лицами, входящими в группы риска инфицирования вирусом гепатита B (ВГВ). Создание панелей, содержащих широкий спектр образцов сывороток крови с серовариантами и мутантными формами поверхностного антигена ВГВ, распространенными на территории Российской Федерации, необходимо для контроля аналитической и диагностической чувствительности тест-систем для выявления HBsAg. Тестирование наборов реагентов для выявления HBsAg с использованием двух панелей, содержащих рекомбинантные и нативные варианты HBsAg, показало, что данные наборы позволяют выявлять различные сероварианты HBsAg (ayw2, adw2, ayw3 varA, ayw3 varB, adrq+) в концентрации 0,1-0,01 МЕ/мл и так называемые ускользающие мутантные формы HBsAg рекомбинантного и нативного происхождения (G145R, Q129R, Q129H, Q129L, T143K, T126N, T126S, D144A, M133L, К141Е и P142S), при этом чувствительность при определении нативных и рекомбинантных мутантных форм может различаться. Полученные результаты свидетельствуют о важности использования панелей не только с рекомбинантными, но и с нативными образцами, содержащими мутантные формы HBsAg, для оценки чувствительности наборов реагентов.

Ключевые слова: гепатит B, иммуноферментный анализ, панели сывороток для диагностики ВГВ

T.V. Kozhanova, V.V. Klushkina, O.V. Isayeva, O.Ye. Popova, I.G. Netesova, K.K. Kyuregyan, M.I. Mikhaylov

THE PANELS OF SERUMS, CONTAINING VARIOUS SUBTYPES AND MUTANT FORMS OF HBSAG, TO EVALUATE THE DIAGNOSTICS SENSITIVITY OF KITS OA REAGENTS DETECTING HBSAG

The detection of HBsAg in blood serum using immune-enzyme analysis techniques decisively matters both for diagnostics of acute and chronic hepatitis B and screening of donor's blood and its components, controls ofpersons from risk groups of hepatitis B infection. The making ofpanels containing wide specter of samples of blood serums with sero-variants and mutant forms of surface antigen of hepatitis B virus widespread on the territory of the Russian Federation is necessary to control analytic and diagnostic sensitivity of test systems for detecting HBsAg. The testing of reagents kits to detect HBsAg using twi panels containing recombinant and native variants of HBsAg, demonstrated that these kits enable to detect various sero-vatriants of HBsAg (ayw2, adw2, ayw3varA, ayw3varB, adrq+) in concentration 0.1-0.01 IU/l and the so called elusive mutant forms of HBsAg of recombinant and native origin (G145R, Q129R, Q129H, Q129L, T143K, T126N, T126S, D144A, M133L, K141E andP142S). At that, the sensitivity can differ during the detection of native and recombinant mutant forms. The results testify the importance of using the panels both with recombinant and native samples containing the mutant forms of HBsAg in evaluation of sensitivity of reagents kits.

Key words: hepatitis B, immune enzyme analysis, panel, serum, virus diagnostics

ИММУНОЛОГИЯ

Основным маркером инфицирования вирусом гепатита В (ВГВ) является поверхностный антиген (HBsAg). Обнаружение в сыворотке крови HBsAg с помощью методов имму-ноферментного анализа (ИФА) имеет решающее значение не только для диагностики острой и хронической формы гепатита В, но и при проведении скрининга донорской крови и ее компонентов, контроле за лицами, входящими в группы риска инфицирования ВГВ. HBsAg является сильным иммуно-геном, который способствует активации гуморального звена иммунитета и выработке нейтрализующих антител, связывающихся с основной иммуногенной доминантой антигена - а-детерминантой, которые обеспечивают протективную защиту в отношении основных субтипов ВГВ [8].

Коинфицирование вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) и вирусом гепатита С (ВГС), а также низкий уровень репликации ВГВ (порядка 102-103 копий/мл) могут сопровождаться концентрацией HBsAg в сыворотке крови ниже предела чувствительности большинства наборов, разрешенных к применению и имеющих диагностическую чувствительность 0,05-0,1 МЕ/мл. Мутации в поверхностном гене ^-гене) генома ВГВ, при которых изменяется структура главной детерминанты HBsAg, представляющей собой основную мишень для вакцины против ВГВ, является причиной сохранения инфекции, несмотря на активную иммунизацию против «дикого» типа вируса («вакцинное бегство»); возникновение в результате таких мутаций аминокислотных замен в поверхностном антигене ВГВ может стать причиной «ускользания» HBsAg от детекции иммуноферментными наборами.

Наиболее часто встречаемой мутацией является замена глицина на аргинин в 145-й аминокислотной позиции региона а-детерминанты S-гена ВГВ (G145R) [5]. Помимо этой замены в настоящее время известен широкий спектр мутаций, являющийся причиной конформационного изменения поверхностного антигена: П10У, Т/П26^ Q129H, M133L, К141Е, P142S, D144A, C149R6, Ш16Т, V118A, А159^ Р183С, V184A и L215Q [4, 6, 7, 9, 10].

Повышение диагностической чувствительности теста для выявления HBsAg до уровня определения маркера в низких концентрациях разных его субтипов и мутантных форм позволяет снизить риск посттрансфузионного гепатита В при скрининге донорской крови. Для сравнительных исследований чувствительности диагностических наборов в последнее время широко используются панели сывороток. Создание таких панелей, содержащих широкий спектр образцов сывороток крови с серовариантами поверхностного антигена, распространенными на территории Российской Федерации, необходимо для контроля аналитической и диагностической чувствительности наборов реагентов для выявления HBsAg.

Цель исследования - оценка способности различных наборов реагентов для определения HBsAg выявлять разные субтипы и мутантные формы HBsAg.

Материалы и методы. Для оценки диагностической чувствительности коммерческих иммуноферментных наборов реагентов для выявления HBsAg использовали две панели сывороток, содержащие различные субтипы и мутантные варианты HBsAg, двух отечественных производителей (НПО «Диагностические системы», ЗАО «Вектор-Бест»). Образцы набора Контрольная панель мутантных вариантов HBsAg субтипов aywl и adw2 (НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород) представляют собой 13 рекомбинантных мутантных вариантов HBsAg, экспрессированных в клетках

Pichia pastoris. Мутантные варианты HBsAg содержат известные точечные мутации в а-детерминанте субтипов aywl и ayw2: G145R, Q129R, Q129H, Q129L, T143K, T126N, T126S, D144A, M133L, K141E и P142S. Каждый мутантный вариант HBsAg в панели представлен в двух разведениях.

Панель производства ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск) представляет собой нативные сыворотки, содержащие разные субтипы и мутантные формы HBsAg. В состав панели входят сыворотки, содержащие 5 субтипов HBsAg: ayw2, adw2, ayw3 varA, ayw3 varB, adrq+, встречающихся в образцах крови доноров России [3], а также 3 мутантные формы HBsAg с аминокислотными заменами в 134, 143, 145-м аминокислотных положениях HBsAg [1]. Каждая сыворотка представлена в трех разведениях. Концентрацию HBsAg в 24 образцах панели определяли против OCO-HBsAg (OCO 42-28-311-06П) с использованием наборов реагентов разных изготовителей. Концентрация HBsAg в образцах с разными его субтипами варьировалась от 0,1 до < 0,05 МЕ/л; в образцах с мутантными формами - от 0,16 до < 0,05 МЕ/мл.

Для аттестации панелей использовали наборы реагентов для выявления HBsAg производства ЗАО "Вектор-Бест" (Век-тогеп В HBsAg, HBsAg-ИФА-Бест), НПО «Диагностические системы» (ДС-ИФА-HBsAg-0,01), "Рош Диагностикс ГмбХ", Германия (Elecsys HBsAg II) и «BIO-RAD" (Monolisa HBsAg Ultra). Для интерпретации результатов определения HBsAg в образцах панели использовали показатель коэффициента по-

Таблица 1

результаты тестирования панели рекомбинантных белков, представляющих мутантные варианты HBsAg субтипов ayw1 и adw2, с использованием различных наборов реагентов для выявления HBsAg

Мутантная форма HBsAg Разведение мутанта ДС-ИФА-HBsAg-0,01 ОП^ = 0,087 HBsAg-ИФА-БЕСТ 0,01 ОП ит = 0,109"" HBsAg II (Elecsys)> 1,0-положи-тельный

КП КП COI

ayw1 G145R 1 37,1 29,3 48,32

ayw1 G145R 2 13,7 24,4 6,91

adw2 G145R 1 22,4 30,1 14,57

adw2 G145R 2 7,3 26,8 5,45

adw2 Q129R 1 8,1 27,9 29,09

adw2 Q129R 2 7,8 19,2 10,44

adw2 Q129H 1 37,3 31,6 32,29

adw2 Q129H 2 14,6 31,5 5,62

adw2 Q129L 1 10,2 31,2 73,51

adw2 Q129L 2 10,2 30,3 13,68

adw2 T123K 1 15,7 26,3 3,65

adw2 T123K 2 3,8 8,7 1,62

adw2 T126N 1 18,0 27,0 12,28

adw2 T126N 2 5,3 22,1 4,65

adw2 T126S 1 7,0 28,3 10,76

adw2 T126S 2 8,5 27,7 6,40

adw2 D144A 1 10,6 10,8 3,37

adw2 D144A 2 5,4 5,6 2,20

adw2 M133H 1 31,1 28,1 13,30

adw2 M133H 2 6,3 17,3 2,92

adw2 M133L 1 35,8 27,8 61,78

adw2 M133L 2 16,7 28,7 9,79

adw2 K141E 1 19,2 31,4 8,47

adw2 K141E 2 8,7 18,5 2,80

adw2 P142S 1 37,7 30,0 247,1

adw2 P142S 2 14,2 31,5 61,14

Для корреспонденции:

Кожанова Татьяна Викторовна, мл. науч. сотр. лаб. эпидемиологии гепатитов

Адрес: 142782, Московская обл., Ленинский р-н, Ин-т полиомиелита, 27 км Киевского шоссе Телефон: 8(495)439-90-12 E-mail:vkozhanov@bk.ru

Таблица 2

результаты тестирования панели сывороток крови, содержащих разные субтипы и мутантные формы HBsAg вгв с использованием различных наборов реагентов

Субтип, мутант HBsAg Концентрация усл. ед./мл 1 усл. ед. = 1 МЕ/мл HBsAg II Elecsys ДС-ИФА- HBsAg 0,01 ОПкр = 0,091 ВектогепВ-HBs-антиген-стрип ОПкр = 0,061 Monolisa HBsAg Ultra ОПкр = 0,075

COI КП КП КП

ayw2 0,1 2,27 14,8 6,6 3,9

ayw2 0,05 1,26 7,6 2,9 1,6

ayw2 < 0,05 0,890* 6,2 2,1 1,4

adw2 0,1 2,07 6,1 4,4 2,8

adw2 0,05 1,14 5,4 1,8 1,5

adw2 < 0,05 0,871 2,8 1,6 1,3

ayw3 varA 0,1 1,72 11,5 3,6 3,8

ayw3 varA 0,05 1,02 6,4 2,5 2,4

ayw3 varA < 0,05 0,639 3,8 1,7 1,4

ayw3 varB 0,1 1,97 11,9 5,4 4,7

ayw3 varB 0,05 1,30 6,8 3,1 2,5

ayw3 varB < 0,05 0,923 4,4 1,8 1,7

adrq+ 0,1 1,77 8,1 3,3 3

adrq+ 0,05 1,01 2,9 2,3 1,6

adrq+ < 0,05 0,665 1,8 2,9 0,8

ayw2 T134P 0,1 1,87 6,5 4,2 2,9

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

ayw2 T134P 0,05 1,55 2,2 5,3 1,8

ayw2 T134P < 0,05 1,03 5,3 2,4 1,6

ayw3 S143L 0,1 12,26 > 20 25,7 19,5

ayw3 S143L 0,05 1,44 8,1 3,6 3,6

ayw3 S143L < 0,05 0,294 1,3 0,21 0,4

adw3 G145R 0,16 4,06 0,67 1,7 4,2

adw3 G145R 0,08 2,12 0,71 1,3 1,9

adw3 G145R < 0,05 0,607 0,42 0,6 0,6

Примечание. HBsAg.

жирным шрифтом выделены отрицательные результаты выявления

зитивности (КП) реакции (отношение значения оптической плотности (ОП) образца к ОП ит).

Результаты и обсуждение. *На первом этапе исследования для оценки диагностической чувствительности наборов реагентов для определения HBsAg была использована Контрольная панель мутантных вариантов HBsAg субтипов ayw1 и adw2. Параллельно было проведено тестирование образцов данной панели с помощью двух наборов ведущих отечественных компаний с чувствительностью 0,01 МЕ/л и коммерческого набора HBsAgII ("Elecsys") с чувствительностью 0,04 МЕ/л.

Результаты тестирования данной панели представлены в табл. 1

Как видно из представленных в табл. 1 результатов, при исследовании данной панели с набором реагентов «Elecsys HBsAgII" были определены все мутантные варианты HBsAg, представленные в ней. При этом коэффициенты позитивности образцов, полученные при использовании данного набора реагентов для некоторых образцов (ayw1 G145R, adw2 Q129R, adw2 Q129L, adw2 M133L, adw2 P142S) превышали аналогичные показатели, полученные с помощью наборов сравнения. Это свидетельствует о достаточно высокой чувствительности данного набора реагентов в отношении исследованных мутантных вариантов HBsAg.

Применение рекомбинантных белков для оценки чувствительности наборов реагентов не всегда отражает ситуацию с на-тивными образцами, полученными от пациентов, поскольку в нативных образцах могут одновременно содержаться как му-тантные формы, так и последовательности дикого типа, кроме того, конформация ре-комбинантных белков может не быть идентичной конформации нативных белков и как следствие эффективность связывания с антителами у нативных и рекомбинантных белков может различаться. Поэтому вторым этапом испытания наборов реагентов являлось тестирование нативных образцов, содержащих мутантные формы HBsAg, вошедших в состав панели, разработанной ЗАО "Вектор-Бест". В табл. 2 приведены результаты тестирования панели нативных образцов, содержащих мутантные варианты HBsAg с наборами реагентов Elecsys HBsAg II, Monolisa HBsAg Ultra, ДС-ИФА-HBsAg-0,01 и Вектогеп B-HBs-антиген-стрип.

При анализе образцов панели было показано, что диагностическая чувствительность набора реагентов Elecsys HBsAg II, заявленная производителем более 0,04 МЕ/л, позволяет выявлять как различные субтипы, так и мутантные формы HBsAg в концентрации не ниже 0,05 МЕ/л. Однако в одном случае данным набором реагентов был определен HBsAg субтипа ayw2 с мутацией T134P даже в концентрации ниже 0,05 МЕ/л. Этот же образец, а также HBsAg субтипов ayw2 и ayw3 varA были определены в концентрации менее 0,05 МЕ/л с использованием набора реагентов Monolisa HBsAg Ultra, что превышает заявленную производителем набора реагентов чувствительность 0,05 МЕ/л.

Всего с помощью набора реагентов Elec-sys HBsAg II были выявлены 17 (71%) из 24 образцов панели, при этом отрицательный результат был получен только для образцов с концентрацией менее 0,05 МЕ/л. Наборы реагентов сравнения с чувствительностью 0,01 и 0,05-0,1 МЕ/л определили соответственно 21 (88%) и 22 (92%) образца сывороток крови, содержащих HBsAg различных субтипов и генетических вариантов.

Обращают на себя внимание результаты определения данными наборами реагентов HBsAg с мутацией в а-детерминанте (G145R) субтипа adw3 - наиболее распространенной и имеющей поэтому важное эпидемиологическое значение. Частота встречаемости этой мутации составила 0,12% при исследовании 2510 хронических носителей ВГВ с высокой концентрацией HBsAg [1]. При исследовании 40 HBsAg-позитивны образцов крови бурят Аларского района Иркутской области в одном из них обнаружена мутация вакцинного бегства в 145 а. п., частота встречаемости данной мутации составила 2,5% [2]. При тестировании таких образцов с наборами Elecsys HBsAg II, Вектогеп B-HBs-антиген-стрип и Monolisa HBsAg Ultra были получены согласованные результаты - реактивными оказались образцы с концентрацией HBsAg 0,08 и 0,16 МЕ/л. При тестировании образцов с мутацией G145R с набором ДС-ИФА-HBsAg 0,01 для всех трех разведений были получены отрицательные результаты, несмотря на то что при тестировании в данном наборе ре-комбинантного HBsAg с этой мутацией был получен положительный результат.

*

МИКРОБИОЛОГИЯ

Таким образом, полученные результаты показали, что диагностические наборы значительно различаются по способности выявлять мутантные формы HBsAg ВГВ. Применение наборов реагентов для выявления HBsAg - Elecsys HBsAg II, Вектогеп B-HBs-антиген-стрип и Monolisa HBsAg Ultra позволяет выявлять различные сероварианты HBsAg (ayw2, adw2, ayw3varA, ayw3varB, adrq+), а также различные мутации рекомбинантного и нативного происхождения в концентрации 0,1-0,05 МЕ/мл. Показано, что тестируемые наборы реагентов способны определять мутантные формы HBsAg с аминокислотными заменами в положении 145 (G145R), 134 (T134P) и 143 (S143L) в концентрации 0,1-0,01 МЕ/мл, содержащиеся в нативных сыворотках, а также широкий спектр рекомбинантных генетических вариантов HBsAg, при этом чувствительность при определении нативных и реком-бинантных мутантных форм может различаться.

Заключение. Создание панелей, содержащих широкий спектр образцов сывороток крови с серовариантами и мутант-ными формами поверхностного антигена ВГВ, распространенными на территории Российской Федерации, необходимо для контроля аналитической и диагностической чувствительности тест-систем для выявления HBsAg. Наборы реагентов с чувствительностью 0,1-0,01 МЕ/мл позволяют выявлять разные субтипы HBsAg и его мутантные формы в низких концентрациях. Полученные результаты свидетельствуют о важности

использования панелей, состоящих не только из рекомбинантных, но и из нативных образцов, содержащих мутантные формы HBsAg, для оценки чувствительности наборов реагентов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Баженов А. И., Коноплева Д. А., Эльгорт А. А. и др. // Журн. микробиол. - 2007. - № 6. - С. 30-37

2. Мануйлов В. А., Осипова Л. П., НетесоваИ. Г. и др. // Молекул. генетика. - 2010. - № 4. - С. 32-36.

3. Нетесова И. Г., Swenson P. D., Калашникова Т. В. и др. // Вопр. вирусол. - 2004. - Т. 49, № 1. - С. 17-20.

4. AraüjoN., Vianna C., Soares C. et al. // Intervirology. - 2008. - Vol. 51. - P. 81-86.

5. Carman W., ZanettiA., KarayiannisP. et al. // Lancet. - 1990. - Vol. 336. - P. 325-329.

6. Carman W. // J. Viral Hepatit. - 1997. - Vol. 4. - P. 11-20.

7. Carman W., Thomas H., Zuckerman A. et al. // Viral hepatitis. - 2-nd Ed. - London, 1998. - P. 141-177.

8. DuongLy T., Servant-DelmasA., BagotS. et al. // J. Clin. Microbiol.

- 2006. - Vol. 44, N 7. - P. 2321-2326.

9. Oon C., Ning C., Shiaun K. et al. // J. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 179.

- P. 259-263.

10. Wallace L., Carman W. // Viral Hepatit. Rev. - 1997. - Vol. 3. - P. 5-16.

Поступила 31.05.11

микробиология

© в. в. Леонов, 2012

УДК 579.22.083.1

в. в. Леонов

КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА СПОСОБНОСТИ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ К ОБРАЗОВАНИЮ БИОПЛЕНКИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Ханты-Мансийская государственная медицинская академия

Предложена методика количественной оценки способности условно-патогенных микроорганизмов к образованию биопленки посредством измерения краевого угла смачивания ее поверхности. Определены удельные скорости образования биопленки госпитальными штаммами микроорганизмов. Показано, что P. aeruginosa лучше, чем S. aureus и C. albicans, образуют биопленку на поверхности стеклянных пластинок.

Ключевые слова: биопленка, удельная скорость образования, госпитальные штаммы, условно-патогенные микроорганизмы

V.V. Leonov

THE QUANTITATIVE EVALUATION OF CAPACITY OF OPPORTUNISTIC PATHOGENIC MICROORGANISMS TO FORM BIOFILMS IN EXPERIMENT

The article discusses the technique of quantitative evaluation of capacity of oppor-tunistic pathogenic microorganisms to form biofilm by means of measuring the contact angle of moistening of its .surface. The specific rates of biofilm formation by hospital strains of microorganisms are determined. It is demonstrated that P. aeruginosa form biofilm on surface ofglass plate better than S. aureus and C. albi-cans do.

Key words: biofilm, specific rate of formation, hospital strain, opportunistic path-ogenic microorganism

Для корреспонденции:

Леонов Вадим Вячеславович, канд. техн. наук, доц. каф. биологии с курсом микробиологии

Адрес: 628011, ХМАО-Югра, Ханты-Мансийск, ул. Мира, 40

Телефон: (3467) 357-612

E-mail:leonovvadim@yandex.ru

Формирование бактериями биопленок на поверхности медицинского оборудования, применяемого в хирургии и стоматологии, может приводить к инфицированию многих пациентов и персонала, а биопленки, образующиеся на различных эндопротезах и катетерах, являются очагом хронического инфекционного процесса в организме больного [4]. Несмотря на очевидную актуальность для практической медицины, кинетика образования и свойства биопленок оста-

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.