CC BY
66
ГИГИЕНА
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015
ОСОБЕННОСТИ ВЛИЯНИЯ ГЕКСИЛОВОГО ЭФИРА 5-АМИНОЛЕВУЛИНОВОЙ КИСЛОТЫ НА РЕПРОДУКТИВНЫЕ ФУНКЦИИ БЕЛЫХ КРЫС
ВЛАСЕНКО Е.К., СЫЧИК С.И., СТЕЛЬМАХ В.А., ИЛЬЮКОВА И.И., ГРЫНЧАК В.А.
РУП «Научно-практический центр гигиены», Республика Беларусь
Резюме.
Проведены токсикологические исследования по изучению влияния перспективного регулятора роста растений - гексилового эфира 5-аминолевулиновой кислоты (ГЭ-АЛК) на функционирование репродуктивной системы белых крыс. В экспериментах на самках белых крыс использовали комбинированную схему, предложенную А.А.Динерманом, которая позволяет регистрировать эмбриотропные и тератогенные эффекты с учетом динамики развития потомства в постнатальном периоде. Наличие аномалий развития внутренних органов эмбрионов определяли с помощью метода сагиттальных срезов, предложенного W.Wilson. Установлено, что при различных режимах одно- и многократного интрагастрального введения препарата в массивных дозах признаков выраженного (тератогенного) влияния на плод не установлено. Однократное внутрижелудочное введение самкам ГЭ-АЛК в дозе, кратной 1/2 от DL50 (3900 мг/кг), на первый и четвертый дни беременности не приводило к развитию эмбриотропных эффектов. В то же время, введение самкам указанной дозы ГЭ-АЛК на девятый день беременности приводило к отставанию физического развития их потомства по показателям массы и длины тела к 60-му дню наблюдения. В условиях ежедневного интрагастрального введения самкам на протяжении всей беременности ГЭ-АЛК в дозе 195 мг/кг эмбриотропные эффекты не выявлены (недействующий уровень воздействия).
Эксперименты по изучению гонадотропного действия проводили на самцах белых беспородных крыс при ежедневном интрагастральном введении доз ГЭ-АЛК, кратных 1/20 от DL50ac и 1/80 от DL50ac (440 мг/кг и 110 мг/кг, соответственно) на протяжении 30 дней. Ежедневное внутрижелудочное введение самцам крыс ГЭ-АЛК в дозе 440 мг/кг оказывало гонадотропное действие, что выражалось в увеличении относительных коэффициентов массы семенников и снижении продолжительности движения сперматозоидов. Определен недействующий уровень ГЭ-АЛК по показателям гонадотропного действия - 110 мг/кг.
Ключевые слова: гексиловый эфир 5-аминолевулиновой кислоты, токсичность, репродуктивные функции.
Abstract.
Toxicological studies concerning the effect of a promising plant growth regulator - hexyl ester of 5-aminolevulinic acid (H-ALA) on the functioning of the reproductive system of white rats have been carried out. In experiments on female white rats the combined scheme proposed by A.A. Dinerman was used, which allows to register embryotropic and teratogenic effects, taking into account the dynamics of the offspring development in the postnatal period. The presence of congenital malformations of the internal organs of embryos has been determined with the use of sagittal sections method proposed by W.Wilson. It has been found out that on different modes of single and repeated intragastric preparation administration in massive doses, there were no signs of marked (teratogenic) effect on the fetus. A single intragastric administration of H-ALA to females in a dose, multiple of 1/2 of DL50ac (3900 mg/kg) on the first and the fourth days of pregnancy did not lead to the development of embryotropic effects. At the same time, the introduction of the indicated dose of H-ALA to females on the ninth day of pregnancy led to the retardation of physical development of their offspring in terms of weight and body length by the 60-th day of observation. Under the conditions of daily intragastric administration to females of H-ALA in the dose of 195 mg/kg throughout the whole period of pregnancy embryotropic effects have not been identified (inactive level of exposure).
The experiments aimed at the study of gonadotropic action were carried out on male mongrel white rats on daily doses of intragastric administration of H-ALA multiple of 1/20 and 1/80 of DL50ac (440 mg/kg and 110 mg/kg, respectively) for 30 days. The daily intragastric administration of H-ALA in the dose of 440 mg/kg to male rats exerted gonadotropic effect, which was manifested in an increase in the relative weight ratios of the testes and the
83
ВЛИЯНИЕ ГЕКСИЛОВОГО ЭФИРА 5-АМИНОЛЕВУЛИНОВОИКИСЛОТЫ
reduction in the duration of spermatozooids movement. Inactive level of H-ALA according to gonadotropic effect indices which made up 110 mg/kg has been determined.
Key words: hexyl ester of 5-aminolevulinic acid, toxicity, reproductive functions.
Применение регуляторов роста растений, способных в малых дозах влиять на метаболизм и развитие сельскохозяйственных культур, рассматривается как экологически чистый и экономически выгодный способ повышения урожайности, позволяющий более эффективно реализовывать потенциальные возможности растительных организмов.
Принципиально новым подходом к созданию экологически чистых регуляторов роста растений является использование для этих целей естественных метаболитов растений, в частности 5-аминолевулиновой кислоты (АЛК). АЛК является исходным интермедиатом всех циклических (хлорофиллов, гемов, корриноидов) и линейных (билинов, фикобилинов) тетрапирролов, которые играют исключительную роль в метаболизме растительных, животных и бактериальных организмов [1]. В конце 80-х годов прошлого столетия впервые было обнаружено, что АЛК обладает свойствами регулятора роста [2]. Ростостимулирующая эффективность АЛК может быть существенно повышена путем ли-пофилизации молекулы при применении ее в виде эфиров с высшими спиртами, что реализовано учеными Института биоорганической химии НАН Беларуси в виде оригинального метода получения гексилового эфира АЛК (ГЭ-АЛК). В полевых экспериментах было установлено, что применение ГЭ-АЛК оказывает ростостимулирующий эффект на рост и развитие растений по ряду показателей, который достигался при концентрациях в 5 и более раз меньших, чем при обработке АЛК [3].
Для обеспечения безопасного обращения и минимизации рисков здоровью работающих на производстве регулятора роста растений и при его агрохимическом применении ГЭ-АЛК подлежит обязательной токсикологической оценке с внедрением в практику гигиенических регламентов и обоснованием мер профилактики профессиональных отравлений. Одним из компонентов изучения возможного отрицательного воздействия вредного химического фактора является идентифика-
ция опасности репродуктивной токсичности и установления на этой основе безопасных уровней воздействия. Указанное достигается путем экстраполяции на человека экспериментальных данных, полученных в опытах на целостном организме животного [4, 5].
Целью настоящих исследований является изучение влияния ГЭ-АЛК на репродуктивную функцию лабораторных животных с учетом изменений, возникающих в постнатальном развитии с определением недействующих уровней доз.
Материал и методы
Изучению подвергали ГЭ-АЛК гидрохлорид, представляющий собой белое кристаллическое вещество, со слабым запахом, хорошо растворимое в воде.
Эксперименты по изучению эмбриотропного действия и тератогенности проводили на 100 рандомбредных половозрелых крысах-самках с массой тела 160-180 грамм. Выбор белых крыс обусловлен тем, что крысы и человек имеют одинаковый гемохориальный тип плаценты, крысы удобны в эксперименте и у них редко возникают спонтанные аномалии развития. При этом длительность беременности у крыс составляет 22 дня. При постановке исследований обращали внимание на полноценность пищевого рациона и тщательность ухода за животными, так как каждый из этих факторов сам по себе может оказать влияние на состояние эмбрионального развития и функциональное состояние плаценты.
При отборе крыс-самок руководствовались наличием у них нормального эстрально-го цикла, включающего все 4 стадии общей продолжительностью 4-6 дней и характеризующегося ритмичностью циклирования. При наличии фазы эструса проводили спаривание самок с самцами. Спаривание проводили в вечернее время. Самок подсаживали к одной и той же группе самцов в соотношении 3:1.
Первый день беременности устанавливали на основании обнаружения сперматозо-
84
ВЕСТНИК ВГМУ, 2015, ТОМ 14, №s3
идов в вагинальном мазке нормально цикли-рующих самок. Изучение эмбриотоксичности проводили по методу, предложенному А.А. Динерманом [6]. Суть данного метода заключается в комбинированной схеме постановки эксперимента по изучению эмбриотоксического и тератогенного действия с учетом состояния потомства в постнатальном периоде.
Схема эксперимента предусматривала внутрижелудочное введение ГЭ-АЛК беременным самкам крыс, распределенным по 20 особей в 5 подопытных группах: I - контрольная (ежедневное введение растворителя - дистиллированной воды); II - однократное введение вещества на 1-й день беременности (стадия бластоцисты), III - однократное введение вещества на 4-й день беременности (начало имплантации с одновременным началом плацентации); IV - однократное введение вещества на 9-й день беременности (начало интенсивного органогенеза), V - многократное введение вещества на протяжении 20 дней беременности. В II-IV группах опытов уровень воздействия составил 1/2 от среднесмертельной дозы при однократном введении DL50 ac, что соответствует 3900 мг/кг ГЭ-АЛК. В V группе опытов уровень воздействия составил 1/40 от DL50 ac (195 мг/кг ГЭ-АЛК).
На 20-й день беременности, когда эмбрион достигает значительных размеров и, в основном, закончен органогенез, проводили умерщвление 10 из 20 самок в каждой группе методом мгновенной декапитации. После вскрытия беременных самок в яичниках подсчитывали число желтых тел. Рога матки вскрывали по наружному краю, подсчитывали число живых и погибших эмбрионов. Эмбрионы фиксировали в растворе Буэна. В протоколе указывали день вскрытия, характер воздействия на самку, дозу препарата, число живых и погибших эмбрионов, а также число желтых тел каждого яичника. Затем определяли среднее число особей в помете, массу и длину каждого эмбриона, визуально регистрировали наличие внешних аномалий развития эмбрионов. Рассчитывали общую эмбриональную, преимплатационную и постимплантационную смертность. Для вычисления этих показателей использовали данные о количестве живых эмбрионов, погибших эмбрионов и числе желтых тел.
Наличие аномалий развития внутренних органов эмбрионов определяли с по-
мощью метода сагиттальных срезов, предложенного W.Wilson в модификации [7]. Все срезы просматривали с помощью бинокулярной лупы МБС-1.
Оставшиеся по 10 самок в каждой группе на 22-й день беременности приносили помет. Изучение состояния потомства в постнатальном периоде проводили с использованием показателей физического развития крысят.
Эксперименты по изучению гонадотропного действия проводили на самцах белых беспородных крыс при ежедневном интрагастральном введении доз ГЭ-АЛК, кратных 1/20 от DL50 ac и 1/80 от DL50 ac (группа II - 440 мг/кг и III - 110 мг/кг, соответственно) на протяжении 30 дней. Контрольным животным (группа I) вводили дистиллированную воду в эквивалентных объемах. В данной серии опытов использовано 24 особи белых крыс массой 160-180 грамм - по 8 животных в каждой группе. Функциональное состояние сперматозоидов определяли по показателям продолжительности подвижности сперматозоидов с учетом количества подвижных и неподвижных сперматозоидов. Фиксировали также изменения ряда функциональных и морфометрических показателей гонад, характеризующих генеративную функцию животных, включая ОКМ (относительные коэффициенты массы) семенников и придатков.
Результаты исследований обрабатывали общепринятыми методами вариационной статистики. При оценке различий между группами использовали параметрический t-критерий Стьюдента с учетом поправки Бон-феррони или непараметрический U-критерий Манна-Уитни. Количественные параметры представлены в виде среднего значения (М) и 95% доверительного интервала (±95%ДИ), либо в виде медианы (Ме) и интерквартиль-ного размаха [25%;75%]. Критическим уровнем значимости при проверке статистических гипотез был принят р<0,05.
Обращение с животными при подготовке и во время проведения экспериментов осуществляли в соответствии с основными этическими принципами надлежащей лабораторной практики [8].
Результаты и обсуждение
На протяжении эксперимента по из-
85
ВЛИЯНИЕ ГЕКСИЛОВОГО ЭФИРА 5-АМИНОЛЕВУЛИНОВОИКИСЛОТЫ
учению эмбриотропного и тератогенного действия гибель беременных самок крыс в опытных группах и контроле отсутствовала. Однократное введение ГЭ-АЛК в дозе, кратной 1/2 от DL50 ac (3900 мг/кг), в различные сроки беременности приводило к слабовыраженному проявлению симптомов интоксикации: угнетенное состояние, малоподвижность крыс, у отдельных животных отмечалась шаткость походки. Крысы плохо поедали корм, их шерстный покров был взъерошенным. Однако уже на следующие сутки после воздействия видимых симптомов интоксикации не регистрировали. Введение ГЭ-АЛК в течение 20 дней в дозе, кратной 1/40 от DL50 ac (195 мг/кг ежедневно), не приводило к развитию у беременных самок клинических проявлений отравления.
При внешнем осмотре эмбрионов контрольной группы крыс отклонений от анатомической нормы не обнаружено. Изучение состояния эмбрионов, полученных от опытных крыс, показало, что при введении ГЭ-АЛК в дозе 3900 мг/кг в первый, четвертый и девятый дни беременности, а также при ежедневном
введении препарата в дозе 195 мг/кг на протяжении всей беременности визуально регистрируемых изменений плода не выявлено.
При изучении состояния внутренних органов эмбрионов методом сагиттальных срезов наличие аномалий развития в опытных группах и контроле не обнаружено. Таким образом, морфологически не выявлены признаки выраженного негативного (тератогенного) действия на плод даже в условиях, когда изучаемое вещество оказывало общетоксическое действие на материнский организм.
Внутрижелудочное введение препарата в различных режимах (ежедневно и однократно в критические периоды беременности) не вызывало изменения показателей, отражающих процессы эмбриогенеза: количество развивающихся плодов, количество погибших эмбрионов и количество плодов на одну самку по сравнению с контролем. При этом масса одного эмбриона в опытных группах III и V достоверно превышала контрольное значение (в III группе - на 52%, в V группе -на 30%, при р<0,05); аналогичная тенденция
Таблица 1 - Показатели эмбрионального развития потомства крыс, получавших ГЭ-АЛК в различные периоды беременности, Ме[25%;75%]
Показатели Группы сравнения, режим введения в течение беременности
I-контрольная П-опытная, однократно на 1-й день Ш-опытная, однократно на 4-й день IV-опытная, однократно на 9-й день V-опытная, ежедневно, 20 дней
Число живых эмбрионов, шт 8,0 [7,5;9,0] 9,0 [8,0;9,5] 8,0 [7,5;9,5] 9,0 [8,0;9,5] 9,0 [7,5;10,5]
Число погибших эмбрионов, шт 0 0 0 0 0
Число желтых тел, шт 9,5 [9,0;10,5] 10,0 [9,5;11,0] 9,0 [7,5;11,5] 10,0 [9,5;11,0] 10,0 [8,5;10,5]
Общая эмбриональная смертность, % 0,12 [0,05;0,2] 0,05 [0;0,13] 0 [0;0,14] 0,15 [0;0,25] 0 [0;0,1]
Преимплантационная смертность, ед. 0,12 [0,05;0,2] 0,05 [0;0,13] 0 [0;0,14] 0,15 [0;0,25] 0 [0;0,1]
По стимплантационная смертность, ед. 0 0 0 0 0
Среднее число особей в помете, шт 8,3 (7,4-9,11) 9,5 (8,5-10,5) 8,4 (7,0-9,7) 8,8 (7,9-9,6) 9,1 (7,6-10,6)
Масса одного эмбриона, г 2,3 (2,2-2,4) 2,3 (2,2-2,3) р=1,0 3,5 (3,3-3,7)* 2,4 (2,3-2,4) 3,0 (2,8-3,1)*
Длина одного эмбриона, мм 33,6 (33,1-34,1) 33,5 (33,1-33,8) 39,1 (38,3-39,9)* 33,3 (32,9-33,8) 36,5 (35,7-37,3)*
Примечание: * - различия статистически достоверны, р<0,05.
86
ВЕСТНИК ВГМУ, 2015, ТОМ 14, №s3
зарегистрирована и по показателю длины эмбрионов (в III группе - на 16,4%, в V группе
- на 8,6%, при р<0,05). Преимплантационная смертность у экспериментальных животных выражена незначительно. Постимплантационная смертность в опытных группах и контроле отсутствует (табл. 1).
Наблюдения за процессом постнатального развития крысят проводили, начиная со дня рождения до 60-дневного возраста. Установлено, что по параметрам физического развития подопытные крысята не отличались от контрольных. Так, независимо от групповой принадлежности отлипание ушной раковины у крысят наступало на 2-3 день жизни, обрастание шерстью на 5-6 дни, прорезывание резцов на 8-9 день жизни, открытие глаз
- на 13-16 день жизни. Подопытные крысята группы V (режим ежедневного введения препарата беременным самкам) на 1-й день жизни весили меньше контрольных на 7%, к 30-дневному возрасту крысята всех подопытных групп, получавших ГЭ-АЛК демонстрировали достоверное снижение массы тела на 9-18%, однако к 60-му дню различия между группами сглаживалась. Крысята опытной группы IV (однократное введение самкам на 9-й день беременности) демонстрировали в
этот срок наблюдения статистически значимое отставание в физическом развитии: масса тела снижена на 13%, длина тела снижена на 5% по сравнению с контролем (табл. 2).
Следовательно, однократное введение ГЭ-АЛК на 9-й день беременности в дозе, кратной от 1/2 от DL50 ac, оказывает не только общетоксическое действие на материнский организм, но и обнаруживает эмбриотроп-ный эффект, проявляющийся в замедлении развития крысят.
При изучении показателей состояния репродуктивной системы самцов в течение эксперимента ни в одной из подопытных групп не зафиксировано случаев гибели. Многократное поступление ГЭ-АЛК в организм самцов группы II в дозе 440 мг/кг приводило к проявлению симптомов интоксикации, что выражалось в беспокойном состоянии и нарушении ориентировочно-координационной активности в течение 1-2 часов после введения препарата. При введении ГЭ-АЛК в дозе 110 мг/кг самцам группы III заметных изменений общего состояния животных не зафиксировано.
На 30-й день эксперимента произведено умерщвление животных подопытных групп методом мгновенной декапитации. Макроскопическое обследование семенников и при-
Таблица 2 - Показатели постнатального развития потомства крыс, получавших ГЭ-АЛК в различные периоды беременности, М(±95%ДИ)
Показатели развития потомства Группы сравнения, режим введения в течение беременности
I-контрольная П-опытная, однократно на 1-й день Ш-опытная, однократно на 4-й день IV-опытная, однократно на 9-й день V-опытная, ежедневно, 20 дней
на 1 сутки
Масса, г 6,1 (5,9-6,2) 6,0 (5,8-6,2) 6,4 (6,1-6,6) 6,1 (5,9-6,2) 5,7 (5,6-5,9)*
Длина, мм 41,0 (40,0-42,0) 41,5 (41,4-43,3) 42,4 (41,4-43,3) 40,6 (40,0-41,3) 40,0 (39,5-40,5)
на 30 сутки
Масса, г 56,5 (53,9-59,1) 51,5 (49,0-54,0)* 50,2 (46,8-53,6)* 46,1 (44,4-47,9)* 48,8 (47,2-50,2)*
Длина, мм 123,8 (96,4-151,3) 105,4 (103,6-107,2) 108,3 (106,3-110,3) 107,7 (106,2-109,1) 113,0 (111,2-114,7)
на 60 сутки
Масса, г 126,5 (14,5-131,5) 122,5 (117,8-127,3) 128,4 (126,5-135,3) 110,6 (104,5-116,5)* 122,2 (116,9-127,4)
Длина, мм 156,9 (154,2-159,6) 153,2 (150,9-155,4) 155,1 (152,3-157,9) 148,4 (145,4-151,4)* 153,8 (151,9-155,8)
Примечание: * - различия статистически достоверны, р<0,05.
87
ВЛИЯНИЕ ГЕКСИЛОВОГО ЭФИРА 5-АМИНОЛЕВУЛИНОВОИКИСЛОТЫ
Таблица 3 - Морфофункциональные показатели гонад самцов крыс, получавших ГЭ-АЛК в течение 30 суток, М(±95%ДИ)
Группы сравнения, уровень доз
Показатели, единицы измерения I-контрольная П-опытная Ш-опытная
440 мг/кг 110 мг/кг
ОКМ семенников, г/кг-3 11,1 (10,2-11,9) 13,0 (11,7-14,3)* 10,9 (9,8-12,1)
ОКМ придатков, г/кг-3 3,52 (3,11-3,94) 3,93 (3,51-4,34) 3,53 (3,08-3,96)
Время движения сперматозоидов, мин 50,0 (42,5-57,5) 31,0 (23,6-38,4)* 52,0 (44,9-59,1)
Количество подвижных сперматозоидов, кл.*106/мл 44,2 (31,6-56,8) 41,2 (29,4-53,4) 43,9 (33,7-54,2)
Количество неподвижных сперматозоидов, кл.*106/мл 75,8 (61,5-89,9) 71,5 (52,7-90,2) 76,7 (61,8-91,5)
Примечание: * - различия статистически достоверны, р<0,05.
датков у животных всех групп не обнаружило видимой патологии. В подопытной группе II наблюдались достоверные отклонения учитываемых показателей: увеличение ОКМ семенников на 12% и снижение времени движения сперматозоидов в 1,6 раза. При воздействии ГЭ-АЛК в дозе 110 мг/кг (кратная 1/80 от DL50 ac) у самцов крыс не обнаружено изменений функциональных и морфометрических показателей гонад, характеризующих генеративную функцию (табл. 3).
Заключение
При однократном внутрижелудочном введении препарата самкам белых крыс в дозе, кратной 1/2 от DL50 ac (3900 мг/кг), в критические сроки беременности на 1-й и 4-й дни и при ежедневной экспозиции в течение всей беременности в дозе, кратной 1/40 от DL50 ac (195 мг/кг), ГЭ-АЛК не обладает эмбриотропным и тератогенным действием, также не оказывает влияния на постнатальное развитие потомства. Введение самкам 3900 мг/кг ГЭ-АЛК на 9-й день беременности приводило к отставанию физического развития их потомства по показателям массы и длины тела к 60-му дню наблюдения.
Доза ГЭ-АЛК 110 мг/кг при многократном введении самцам белых крыс не приводила к изменению функциональных и морфометрических показателей гонад. Введение самцам крыс ГЭ-АЛК в дозе 440 мг/ кг оказывало гонадотропное действие, что выражалось в увеличении ОКМ семенников и снижении продолжительности движения сперматозоидов.
В условиях одно- и многократного внутрижелудочного введения определены недействующие уровни ГЭ-АЛК на репродуктивные функции белых крыс: по показателям, характеризующим эмбриотропное действие - 195 мг/кг, по показателям гонадотропного действия - 110 мг/кг.
Эмбриотропный и гонадотропный эффекты воздействия зарегистрированы только на фоне поступления массивных доз, приводящих к интоксикации родительских организмов, следовательно, изменение показателей репродуктивной системы следует рассматривать как признаки проявления общетоксического действия ГЭ-АЛК.
Литература
1. Beale, S. I. Biochemistry and regulation of photosynthetic pigment formation in plants and algae / S. I. Beale, J. D. Weinstein // Biosynthesis of Tetrapyrroles / еd. P. M. Jordan. - Amsterdam : Elsevier, 1991. - Vol. 19. - P. 155-235.
2. Averina, N. G. Involvement of 5-aminolevulinic acid in the regulation of plant growth / N. G. Averina, E. B. Yaronskaya // Photosynthetica. -1991. - Vol. 25, N 1. - P. 27-31.
3. Стимуляция роста и развития растений ячменя липофильными эфирами 5-аминолевулиновой кислоты / С. Г. Спивак [и др.] // Докл. Нац. акад. наук Беларуси. - 2007. - Т. 51, № 5. - С. 95-99.
4. Assessing Human Health Risks of Chemicals : derivation of guidance values for health-based exposure limits / World Health Organization, International Programme on Chemical Safety. -Geneva : World Health Organization, 1994. - 75 p. - (Environmental Health Criteria 170).
5. Guidelines for Reproductive Toxicity Risk
88
ВЕСТНИК ВГМУ, 2015, ТОМ 14, №s3
Assessment : Risk Assessment Forum. -
Washington, DC : U.S. Environmental Protection Agency, 1996. - 163 p.
6. Динерман, А. А. Роль загрязнителей окружающей среды в нарушении эмбрионального развития / А. А. Динерман. - М. : Медицина, 1980. - 192 с.
7. Дыбан, А. П. Основные методические подходы
к тестированию тератогенной активности химических веществ / А. П. Дыбан, В. С. Баранов, И. М. Акимов // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1970. - Т. 59, № 10. - С. 89-100.
8. ТКП 125-2008 (02040). Надлежащая лабораторная практика = Належная лабараторная прак-тыка. - Введ. с 28.03.08. - Минск : М-во здравоохранения Респ. Беларусь, 2008. - 34 с.
Поступила 13.05.2015 г. Принята в печать 10.06.2015 г.
Сведения об авторах:
Власенко Е.К. - научный сотрудник лаборатории профилактической и экологической токсикологии РУП «Научно-практический центр гигиены»;
Сычик С.И. - к.м.н., доцент, директор РУП «Научно-практический центр гигиены»;
Стельмах В.А. - к.м.н., доцент, ведущий научный сотрудник лаборатории профилактической и экологической токсикологии РУП «Научно-практический центр гигиены»;
Ильюкова И.И. - к.м.н., заведующая лабораторией профилактической и экологической токсикологии РУП «Научно-практический центр гигиены»;
Грынчак В.А. - младший научный сотрудник лаборатории профилактической и экологической токсикологии РУП «Научно-практический центр гигиены».
Адрес для корреспонденции: Республика Беларусь, 220012, г. Минск, ул. Академическая, 8, РУП «Научно-практический центр гигиены». Тел.: +375 (017) 284-13-96, e-mail: evgenii_vlasenko@mail.ru - Власенко Евгений Константинович.
89
