CC BY
19
Bulletin of Medical Internet Conferences (ISSN 2224-6150)
2013. Volume 3. Issue 3
Ю: 2013-03-3930-Т-2613 Тезис
Дубровский В.А., Забенков И.В., Ганилова Ю.А.
Определение размеров агглютинатов эритроцитов проточным методом на основе КСБ разложения
цифровых изображений
ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В. И. Разумовского Минздрава России, кафедра медбиофизики им. проф. В.Д. Зернова
В работе демонстрируется возможность определения распределения эритроцитарных иммунных комплексов по размерам на основе проточной цитометрии с использованием принципов цифровой микроскопии. Биологическим объектом исследования являлись образцы агглютинатов, приготовленных с использованием ультразвуковых волн. Такая пробоподготовка приводила к значительному укрупнению агглютинатов и, следовательно, к облегчению в их регистрации проточным методом. Экспериментально количественно оценена эффективность действия ультразвуковой стоячей волны на формирование иммунных эритроцитарных комплексов. Найдены оптимальные условия, при которых количество эритроцитарных агглютинатов оказывалось максимальным, а их размеры наибольшими: время ультразвукового действия составило 60-90 с, время инкубации образца смеси «кровь-сыворотка» - 3 мин, время регистрации потока исследуемого раствора эритроцитов и их иммунных комплексов - 30 с.
Световой луч, зондирующий исследуемый поток, спектрально фильтровался так, чтобы его спектр совпадал со спектром поглощения света гемоглобином в зеленой области. Тогда достигнутые большие величины размеров эритроцитарных комплексов приводили к тому, что крупные эритроцитарные комплексы в потоке визуально имели красный цвет, а мелкие агглютинаты или одиночные эритроцита представлялись зелеными. Разработанная компьютерная программа позволяла сопоставлять К и С компоненты КСВ разложения изображения регистрируемого потока. На основе такого сопоставления осуществлялась бинаризация изображения: фотокадр представлялся в виде некоторого биообъекта красного цвета (регистрируемый крупный эритроцитарный агглютинат) на черном фоне (растворитель - физраствор, одиночные эритроциты и их мелкие иммунные комплексы). Следующий фрагмент программы позволял оценивать площадь, занимаемую эритроцитарным агглютинатом, его эффективный размер, а также количество агглютинатов, а, следовательно, распределение иммунных эритроцитарных комплексов по размерам.
Разработанная методика регистрации агглютинатов и определения их размеров нашла приложение для определения групповой принадлежности крови человека. Эксперименты показали, что средние площади, занимаемые эритроцитарными комплексами на фотокадрах, при положительных реакциях агглютинации значительно, в 100 -1000 раз превосходят некие площади «наложения» одиночных эритроцитов на фотокадрах при отрицательных реакциях. Это создает предпосылки к созданию варианта метода проточной цитометрии специально для инструментального определения групповой принадлежности крови человека.
Ключевые слова
агглютинация, цитометрия
www.medconfer.com
© Bulletin of Medical Internet Conferences, 2013
