CC BY
58
УДК: 619:576.852.2
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЛЛЕРГИЗИРУЮЩИХ СВОЙСТВ АТИПИЧНЫХ МИКОБАКТЕРИЙ
Н.Н. КОЩЕЕВ, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник
ВНИИБТЖ Россельхозакадемии В.Ф. БОРДЮГ, кандидат ветеринарных наук, главный специалист,
Главное управление ветеринарии Омской области
В.Г. ОЩЕПКОВ, доктор ветеринарных наук, главный научный сотрудник
А.Д. ПАНКРАТОВА, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник
А.Д. СЛЕПЧЕНКО, младший научный сотрудник ВНИИБТЖ Россельхозакадемии E-mail: vniibtg@mail.ru
Резюме. Исследования проводили с целью разработки методики быстрого и надежного выявления сенсибилизирующих свойств у атипичных микобактерий. На первом этапе были изучены аллергизирующие и патогенные свойства одной из наиболее часто выделяемых от крупного рогатого скота и представителей дикой фауны культуры атипичных микобактерий вида М. scrofulaceum на 18 морских свинках массой по 300...350 г, которые были сформированы по принципу аналогов в 5 групп, по 3 гол. в каждой. На основании проведенных экспериментов и производственного опыта авторы пришли к заключению, что разработанный способ повышает достоверность определения сенсибилизирующих свойств у атипичных микобактерии, следовательно, объективность дифференциации неспецифических реакций на ППД-туберкулин у крупного рогатого скота и позволяет тем самым правильно оценить его инфекционный статус и предотвратить преждевременный убой продуктивных животных в хозяйствах.
Ключевые слова: туберкулез, микобактерии, неспецифические реакции.
В благополучных по туберкулезу скотоводческих хозяйствах при плановых аллергических диагностических исследованиях довольно часто регистрируются неспецифические реакции на ППД-туберкулин. Они в большинстве случаев обусловлены сенсибилизацией (аллергизацией) организма животных атипичными микобактериями, которые широко распространены в окружающей среде. Эти реакции в стадах крупного рогатого скота проявляются длительно, приобретая во многих случаях стационарный характер [1...3]. Методом систематических диагностических исследований, как правило, не удается достичь их прекращения и установить истинную природу таких реакций [5.8]. Поэтому животных в большинстве случаев вынуждено сдают на убой
Кроме того, наличие параалергических реакций у исследуемого поголовья требует выполнения большого объема работ по санации помещений и территорий ферм, которые сопровождаются значительными материальными затратами.
Во избежание неоправданных материальных затрат в благополучных по туберкулезу хозяйствах в Наставлении по диагностике [2] предлагается вводить атипичные микобактерии (АМБ), изолированные из организма реагирующего на ППД-туберкулин крупного рогатого скота, двум морским свинкам в дозе 1 мг/мл. И через 21.30 сут. исследовать их ППД-туберкулином для млекопитающих в дозе 25 ТЕ в объеме 0,1 мл. Реакцию на аллерген учитывать через 48 ч. Однако это зачастую не вызывает ответной аллергической, то есть не дает
возможности качественно оценить их способность к индукции сенсибилизации организма хозяина-носителя и, следовательно, оперативно определить причину парааллергических реакций.
В связи с этим цель наших исследований - разработка методики быстрого и надежного выявления сенсибилизирующих свойств у атипичных микобактерий.
Условия, материалы и методы. При разработке методики мы первоначально изучили аллергизирую-щие и патогенные свойства одной из наиболее часто выделяемых от крупного рогатого скота и представителей дикой фауны культуры атипичных микобактерий вида М. всго^іасеит на 18 морских свинках массой по 300.350 г, из которых по принципу аналогов сформировали 5 группы по 3 гол. в каждой.
Для определения оптимальной дозы введения культуры атипичных микобактерий, вызывающей аллергические реакции, морских свинок I группы заражали подкожно атипичными микобактериями вида М. всго^іасеит, выделенными от хорька, в дозе 1 мг/мл на каждое животное; II группы - в дозе 10 мг/гол.;
III группы - в дозе 20 мг/гол.; особям IV группы - вводили культуру М. Ьомв шт. № 14 в дозе 0,00001 мг/гол;
V группа - контрольная (интактная).
Перед началом эксперимента и на 30 сут. после заражения животным внутрикожно вводили туберкулин для млекопитающих (серия 10, госконтроль 10, изготовлен Курской биофабрикой) в дозе 25 ТЕ и объеме
0,1 мл. Учет реакции проводили через 48 ч. Через 32 сут. после заражения опытные и контрольные животные были убиты.
Для изучения влияния кратности введения одной и той же увеличенной дозы атипичных микобактерий на проявление аллергических реакций был поставлен второй эксперимент на 12 морских свинках, из которых сформировали четыре группы: животных I группы заражали подкожно атипичными микобактериями вида М. всгоЛііасеит в дозе 1 мг/мл; II группы - 10 мг/гол., при этом общую заражающую дозу делили на 3 равные части и вводили культуру с интервалом в 24 ч.; III группы - 20 мг/гол. по схеме аналогичной второй группе;
IV группа (интактная) - микобактерий не вводили.
На втором этапе исследований методику 3-кратного введения микобактерий, апробировали на четырех видах атипичных микобактерий (МБ), выделенных от крупного рогатого скота, реагирующего на ППД-туберкулин и находящегося в различных зонах Омской области в благополучных по туберкулезу хозяйствах.
Для изучения сенсибилизирующих свойств этих культур микобактерий было подобрано 24 здоровых морских свинки массой 300.350 г, которых распределили по принципу аналогов в 8 групп по три головы в каждой, а затем заразили двумя дозами.
Животным I, II, III и IV групп вводили 10 мг/гол микобактерий видов М. хепорі, М. іпґгасеііиіаге, М. всго^іа-сеит, М. втедтаґів 3 равными частями с интервалом 24 ч. Морским свинкам V, VI, VII и VIII культуры этих же видов вводили по аналогичной схеме в дозе 20 мг/гол.
Выбор таких схем заражения был обусловлен тем, что атипичные микобактерии широко распространены в окружающей среде и сельскохозяйственные животные имеют постоянный контакт с ними через корма, воду,
Таблица. Результаты аллергических исследований морских свинок, зараженных разными видами атипичных культур микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота благополучных по туберкулезу хозяйств
Культура атипичных микобактерий Оценка аллергических реакций
10 мг/гол 1 20 мг/гол
M.xenopi №1 - отр №1 - пол
№2 - пол №2 - пол
№3 - отр №3 - пол
M.intracellulare №1 - отр №1 - пол
№2 - отр №2 - пол
№3 - пол №3 - пол
M.scrofulaceum №1 - пол №1 - пол
№2 - пол №2 - пол
№3 - пол №3 - пол
M.smegmatis №1 - отр №1 - пол
№2 - пол №2 - пол
№3 - отр №3 - пол
предметы окружающей среды, поэтому, вводя их хотя бы трехкратно, мы старались приблизить условия инфицирования к естественным.
Результаты и обсуждение. Перед началом эксперимента аллергическая реакция на ППД-туберкулин отсутствовала у всех животных. В случае постановки пробы на 30 сут. после заражения у особей I группы аллергическая реакция также не проявилась, во II реагировало на туберкулин одно животное, в III - 2, в
IV - все животные, в V группе (контрольная) - реакция, как и следовало ожидать, отсутствовала.
Таким образом, введение морским свинкам атипичных микобактерий вида М. зсго^1асеит в дозе, регламентированной Наставлением по диагностике туберкулеза животных - 1 мг/мл, не вызвало аллер-гизирующего действия. В то же время более высокие экспериментально подобранные дозы (10 и 20 мг/гол) вызывали аллергические реакции у 33,3.66,6 % подопытных животных.
Патологические изменения, вызванные М. bovis, характеризовались образованием язв на месте введения, увеличением регионарных лимфатических узлов и образованием в селезенке и печени множества серых милиарных узелков (генерализованный туберкулез).
Изменения, вызванные атипичными микобактериями М. scrofulaceum (II, III группы), были менее выражены и характеризовались образованием язв на месте введения только у двух из шести морских свинок, увеличением у трех из шести регионарных лимфатических узлов и образованием единичных некротических узелков в легких.
Во втором эксперименте через 30 дн. после заражения особи I группы (доза 1 мг/мл) на ППД туберкулин не реагировали, животные, получившие заражающие дозы 10 и 20 мг/гол (II, III группа) все реагировали положительно, в контрольной группе — отрицательно.
Аллергическое исследование морских свинок с использованием внутрикожной пробы с ППД туберкулином на 30-е сут. после инфицирования на втором этапе исследований показало, что доза 10 мг/гол. разных видов атипичных микобактерии вызывает сенсибилизацию не у всех животных. Это подтверждает факт разного проявления аллергических реакций на ППД-туберкулин. Доза 20 мг/гол. вызывала появление аллергических реакций у 100 % особей.
На основании проведенных экспериментов и производственного опыта мы пришли к заключению, что разработанный способ повышает достоверность определения сенсибилизирующих свойств у атипичных микобактерий и, следовательно, объективность дифференциации парааллергических реакций у крупного рогатого скота, что позволяет предотвратить преждевременный убой продуктивных животных в хозяйствах.
Выводы. Выявление сенсибилизирующих (ал-лергизирующих) свойств у атипичных микобактерий путём их подкожного введения морским свинкам в общей дозе 10 и 20 мг/гол. трёхкратно, в равных частях, с интервалом 24 ч предпочтительнее, чем в дозе 1 мг/гол. однократно, так как повышает достоверность результатов исследований.
Трёхкратное введение культур атипичных микобактерий в дозе 20 мг/гол. можно использовать не только в научных, но и в практических целях для оперативного уточнения природы (этиологии) появления аллергических кожных реакций на ППД-туберкулин у крупного рогатого скота, находящегося в благополучных по туберкулёзу хозяйствах.
Литература.
1. Туберкулез сельскохозяйственныхживотных. Под редакцией академиков В.П. Шишкова и В.П. Урбана. - М.:Агропромиздат, 1991. - 256 с.
2. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных//Сб. санитарных и ветеринарных правил. Туберкулез. - М.,1996. - C. 160-I75.
3. Наставление по диагностике туберкулеза животных. - М.: МСХ РФ, Департамент ветеринарии, 2002. - 63 с.
4. Дубовой Б.Л., Кулик А.Я., Гуркин А.В. Методы определения сенсибилизации организма животных. - СКЗНИВИ: Новочеркасск, 1987. - С.4.
5. Найманов А.Х. Аллергическая диагностика микобактериальных инфекций крупного рогатого скота: Автореф. дис. докт. вет. Наук. - М.,1993. - 29 с.
6. Ощепков В.Г., Смолянинов Ю.И., ТаллерЛ.А. и др. Видовой спектр микобактерий, персистирующихв организме крупного рогатого скота на территории Западной Сибири //Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера: Мат. 2-й науч. конф. с международным участием. - Новосибирск, 2002. - С. 26
7. Ощепков В.Г., Таллер Л.А., Дюсенова Г.М. Динамика возможного проявления неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота в хозяйствах, благополучных по туберкулезу // Инфекционная патология животных: Сб. науч. тр. Юбилейный выпуск. - СО РАСХН. ВНИИБТЖ. Омск, 2001. - С. 211-215.
8. Кощеев Н.Н., Бажин М.А., Бордюг В.Ф. Способ профилактики парааллергических реакций у крупного рогатого скота: Рекомендации. - РАСХН СО ВНИиБтЖ: Омск, 2006. - 8 с.
THE DETERMINATION OF ALLERGENIC PROPERTIES ATYPICAL MYCOBACTERIA N.N. Koscheev, V.F. Bordug, V.G. Oschepkov, A.D. Pankratova, A.D. Slepchenko
Summary. The aim of research was to develop a rapid and reliable method to identify sensitizing properties of the atypical mycobacteria. In developing the method was initially studied allergenic and pathogenic properties of one of the most frequently isolated from cultures of wild fauna species atypical mycobacteria M. scrofulaceum to 18 guinea pigs weighing 300 - 350g. which have been formed on the basis of analogies in 5 groups, 3 each in the head. On the basis of experiments and industrial experience the authors concluded that the developed method improves the accuracy of determination of sensitizing properties of the atypical mycobacteria, and, therefore, the objectivity of the differentiation of nonspecific reactions in cattle and help prevent premature slaughter of productive animals on the farm.
Key words: tuberculosis, micobacteria, nonspecific reactions.
