CC BY
36
УДК 636.02
DOI 10.18286/1816-4501-2016-4-83-85
МОДЕЛИРОВАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ТРИХИНЕЛЛЕЗА
У ЛАБОРАТОРНЫХ КРЫС
Глухова Марина Валентиновна, кандидат ветеринарных наук, доцент ФГБОУ ВО «Вятская государственная сельскохозяйственная академия» 610017, г. Киров, Октябрьский проспект, д. 133; тел.: 8-905-871-0748 e-mail: maryna.gluhova@yandex.ru.
Ключевые слова: клеточный иммунитет, лабораторные животные, экспериментальное заражение, восприимчивость к заражению, особенности кормления.
В последние годы возрос интерес к изучению трихинелл не только как возбудителей болезни, но и как организмов, способных индуцировать у хозяина иммунитет высокой напряженности вплоть до абсолютного иммунитета, и сохраняющегося всю жизнь. В данной работе изучалась возможность экспериментального заражения крыс трихинеллезом. Предварительное введение 2,5% суспензии гидрокортизона ацетата провоцирует заражение лабораторных крыс не адаптированным для них видом трихинелл, в частности Trichinella nativa.
Введение
В последние годы возрос интерес к изучению трихинелл различных генотипов не только как возбудителей болезни, но и как организмов, способных индуцировать у хозяина иммунитет высокой напряженности вплоть до абсолютного иммунитета, сохраняющегося в течение всей жизни [1, 2].
В связи с этим возникла необходимость поддерживать длительное время жизнеспособность трихинелл различных генотипов путем пассажей на лабораторных животных.
С этой целью в питомниках научных учреждений разводят и поддерживают линии различных лабораторных животных. При постановке контрольных экспериментов лабораторные животные до настоящего времени остаются незаменимыми. Они достигли высокой степени одомашнивания, утратили природную дикость, удобны в обращении. Данные животные являются хорошей моделью биологических процессов, протекающих у различных животных и человека [5].
Наиболее восприимчивыми к трихинеллезу среди лабораторных животных оказались морские свинки и сирийские хомяки [3].
Однако в питомниках научных учреждений гораздо реже занимаются разведением морских свинок и хомяков, чем мышей и крыс, что обусловлено экономической целесообразностью. Это связано с особенностями размножения и кормления животных этих
видов. В частности: беременность у морских свинок протекает 65 дней, а у крыс 25 дней. Хомяки нередко дают только два окота в год. Количество детенышей в помете в среднем 3-4 у морских свинок, 6-8 у хомяков и 8-10 у крыс. Таким образом, за год можно получить до 40 крыс от одной самки и только около 10 морских свинок и 15 хомяков. Рацион этих животных состоит в основном из одних и тех же кормов, но морские свинки поедают гораздо больше зерновых и сочных кормов по сравнению с крысами, а хомякам требуется удвоение рациона ради создания запасов корма [5, 6].
Таким образом, для длительного поддержания трихинелл различных генотипов в лабораторных условиях оптимальным объектом для пассажей являются лабораторные крысы. В то же время в научных публикациях авторов, изучающих биологию трихинелл, встречаются указания на то, что арктический изолят трихинелл (Tríchinella nativa), выделенный от животных, обитающих на территории Чукотского полуострова, вовсе или почти не адаптирован к лабораторным беспородным крысам и мышам, о чем свидетельствует низкий потенциал воспроизводства и наличие вокруг капсул кле-точно-ферментативной резорбции [3, 4].
Известно, что гидрокортизон способен снижать иммунологическую защиту организма [7]. Гидрокортизона ацетат относится к группе глюкокортикостероидов естественного происхождения. При применении суспензии
гидрокортизона ацетата происходит снижение иммунологической реактивности организма, ведущее к обострению хронических очагов инфекции. Так, при лечении кортико-стероидами или в сочетаниях с другими препаратами, подавляющими клеточный, гуморальный иммунитет или функцию нейтрофи-лов, могут проявляться различные вирусные, бактериальные, грибковые, протозойные инфекции и глистные инвазии, протекавшие ранее латентно [7].
Цель и задачи. Целью нашего исследования явилось моделирование экспериментального трихинеллеза у крыс после создания искусственного иммунодефицитного состояния под влиянием гидрокортизона ацетата.
Объекты и методы исследований
Исследования проводили на базе Кировской областной ветеринарной лаборатории совместно с кафедрами диагностики, терапии, морфологии и фармакологии и экологии и зоологии Вятской ГСХА.
Для испытаний были взяты клинически здоровые беспородные крысы одинакового возраста, на которых ранее не проводили никаких исследований. Перед началом эксперимента животных выдерживали на карантине в течение 10 дней.
Для проведения опыта сформировали 6
г w
групп по 5 животных в каждой.
Животным пяти опытных групп подкожно вводили 2,5% суспензию гидрокортизона ацетата. Шестая группа - контрольная. Животным этой группы суспензию гидрокортизона ацетата не вводили (табл. 1).
Через неделю после начала опыта животным всех групп ввели перорально личинки T. nativa в дозе 70 личинок на животное. Личинки были выделены из мышечной ткани кольчатой нерпы Phocahispida, добытой на побережье Берингова моря. После введения личинок за зараженными животными наблюдали 50 дней, в течение которых, если животные заразятся, вокруг личинок в мышцах должна сформироваться капсула.
Эвтаназию лабораторных животных проводили с использованием хлороформного наркоза. Для последующего исследования брали полутушки. Мышечную массу переваривали в искусственном желудочном соке (ИЖС) [8]. Подсчет количества личинок проводили в гельминтологической камере и определяли количество личинок в грамме мышеч-
и
SEIS es »1
Si
р Ü ш ni M ■ i
00 s!
ной ткани.
Статистическую обработку результатов исследований проводили с использованием пакета Statistica 6.0. Пороговый уровень статистической значимости брался р <0,05; в выражении М±м, следует считать: М - среднее, м - ошибка средней.
Результаты исследований
Результаты исследований показали, что со второго дня после начала введения суспензии гидрокортизона ацетата было заметно угнетение животных: они меньше поедали корм, больше спали и хуже реагировали на раздражители.
Согласно данным табл. 1, животные всех опытных групп за неделю потеряли в массе тела. Причем наименьшая потеря массы тела была у животных, получавших самую маленькую дозу гидрокортизона ацетата 1мл/гол в течение пяти дней: 1,8% (Р>0,1), а наибольшая потеря массы у животных, получавших самую большую дозу гидрокортизона ацетата 5мл/ гол в течение двух дней: 12,1% (Р<0,001).
Животные контрольной группы хорошо себя чувствовали, охотно поедали корм, были активны и увеличили массу тела на 5,1% (Р>0,1).
Результаты исследований лабораторных животных опытных групп после заражения их личинками трихинелл по истечении указанного срока показали, что масса тела у большинства животных за время наблюдения продолжала незначительно снижаться (табл. 2). В целом изменения массы тела опытных животных с начала опыта и до момента эвтаназии являются статистически не значимыми (Р>0,1).
Результаты компрессорной трихинел-лоскопии показали, что беспородные крысы всех пяти опытных групп заразились трихинеллезом с разной степенью интенсивности. Наибольшая интенсивность инвазии наблюдалась после введения гидрокортизона ацетата в течение 5 дней в дозе 2мл/гол - 37,4 личинки на 1 грамм пробы и в течение 3 дней в дозе 3мл/ гол - 105,3 личинок на 1 грамм пробы.
Средняя масса тела животных контрольной группы к моменту эвтаназии увеличилась с 246,3 грамма до 265,8 грамма, что является статистически значимым (Р<0,05). После заражения в контрольной группе видимых внешних изменений у животных не выявили. Они были активны и охотно поедали корм.
Согласно данным табл. 2, животные контрольной группы №6, которым не вводили
Таблица 1
Изменение массы тела животных после введения гидрокортизона ацетата.
Группа крыс Доза гидрокортизона ацетата (мл/особь) Продолжительность введений(суток) Средняя масса крыс (г) Потеря массы в %
До введения гидрокортизона Перед заражением личинками Trichinella nativa
№1 1,0 5 261,6±24,5 258,8±15,7* 1,8
№2 2,0 5 195,6±8,4 179,8±11,8* 8,1
№3 2,5 3 287,3±9,5 256,6±3,3* 9,6
№4 3,0 3 230,5±13,0 217,5±10,3* 5,7
№5 5,0 2 193,5±31,5 170,1±5,0** 12,1
№6 контроль - 246,3±2,6 258,7±5,3* + 5,1
*Р>0,1; **Р<0,001
Таблица 2
Результаты заражения к
рыс личинками Trichinella nativa.
Группа крыс Доза гидрокортизона ацетата (мл/особь) Средняя масса перед эвтаназией (г) Масса пробы для ИЖС (г) Количество личинок в пробе (штук) Среднее количество личинок в 1 грамме мышечной ткани (штук)
№1 1 264,6±21,7* 200 1740 8,7
№2 2 157,7±1,2* 68 2540 37,4
№3 2,5 284,8±13,6* 120 140 1,2
№4 3 235,3±41,2* 40 4210 105,3
№5 5 180,2±0,1* 34 6 0,18
№6 контроль 265,8±5,8** 170 нет нет
*Р>0,1; **Р<0,05
суспензию гидрокортизона ацетата, трихинеллезом не заразились. Данные результаты свидетельствуют о том, что животные, имеющие изначально хорошее физиологическое состояние, остаются не восприимчивыми к данному генотипу трихинелл.
Выводы
Таким образом, полученные опытные данные позволяют сделать вывод о том, что подкожное введение 2,5% суспензии гидрокортизона ацетата снижает иммунную защиту организма, обеспечивая инициацию заражения лабораторных крыс не адаптированным для них видом трихинелл, в частности Trichinella nativa.
Библиографический список
1. Бриттов, В.А. Возбудители трихинеллеза / В.А. Бритов.- М.: Наука, 1982.- 270с.
2. Ройтман, В.А. Паразитизм как форма симбиотических отношений / В.А. Ройтман, С.А. Беэр. - М.: Товарищество научных изданий КМК, 2008. - 310с.
3. Букина Лидия Александрову. Трихинеллез в прибрежных районах Чукотского полуострова, распространение, меры про-
филактики: дис. ... д-ра биологических наук , специальность 03.02.11-паразитология / Л.А. Букина.- Киров, 2015.- 41с.
4. Скворцова, Ф. К. Резистентность к низким температурам изолятов трихинелл как признак характеристики видов / Ф.К. Скворцова // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. Материалы докладов научной конференции. - М., 2009. - Выпуск 10. - С. 374-376.
5. Глухова, М.В. Использование разгрузочных дней в разведении лабораторных животных / М.В. Глухова // Перспективы развития науки.-Уфа, 2014.- С.20.
6. Ковалевский, К.Л. Лабораторное животноводство / К.Л. Ковалевский.- М.: Издательство Академии медицинских наук, 1951.- 310 с.
7. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. Том 2 / М.Д. Машковский.- Харьков, 1998.- .- 685с.
8. Ветеринарно-санитарная экспертиза на трихинеллез на основе искусственного желудочного сока бетасол / А.В. Успенский, Ф.К. Скворцова // Теория и борьбы с паразитарными болезнями. Материалы докладов научной конференции. - М., 2012. - Выпуск 13. - С. 430-433.
и
SEIS es »1
Si
Р и ш SS si н ■ i
00 s!
