CC BY
109
УДК [577.112:611.018.43:616.71-003.93]-092.9
КОМПЛЕКС НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ БЕЛКОВ КОСТНОЙ ТКАНИ И ЕГО ВЛИЯНИЕ НА РЕГЕНЕРАЦИЮ КОСТИ
С.Н. ЛУНЕВА, А.Н. НАКОСКИН, И.А. ТАЛАШОВА, Е.В. ОСИПОВА, Е.Н. ОВЧИННИКОВ
ФГБУ «Российский научный центр «Восстановительная травматология и ортопедия» имени академика Г.А. Илизарова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации», 640014 г. Курган, ул. М. Ульяновой, 6,
e-mail:
Аннотация: выделена фракция низкомолекулярных кислото- и водорастворимых белков из костной ткани быков. В экспериментах на животных показано влияние выделенных белков на углеводный обмен, сращение переломов костей и замещение костных дефектов в составе кальцийфосфатного имплантационного материала. Установлено, что при внутрибрюшинном введении у мышей снижается концентрация глюкозы в сыворотке крови, содержание гликогена в мышцах и повышается содержание гликогена в печени. При введении в зону перелома у крыс наблюдали положительную динамику показателей скелетного гомеостаза. Замещение костных дефектов происходило быстрее в опытной группе, чем в группе без имплантации.
Ключевые слова: низкомолекулярные белки костной ткани, гипогликемический эффект, регенерация костной ткани.
THE COMPLEX LOW-PROTEIN BONE AND ITS INFLUENCE OF THE REGENERATION OF BONE
S.N. LUNEVA, A.N. NAKOSKIN, I.A. TALASHOVA, E.V. OSIPOVA, E.N. OVCHINNIKOV
Federal State Institution Russian Scientific Centre for Restorative Traumatology and Orthopaedics named after G.A. Ilizarov RF Ministry of healthcare and social development, 640014 Kurgan, Russia, M. Ulyanova St, 6, e-mail: office@ilizarov.ru
Abstract: the fraction of acid-and water-soluble proteins from bone tissue bulls was excrerted. The effects of isolated proteins on carbohydrate metabolism, bone fracture healing, the substitution of bone defects of calcium phosphate implant material were determined in experiments on animals. It was established that after intraperitoneal injection in the mouses the concentration of glucose in the blood serum and the content of glycogen in the muscles reduced and the content of glycogen in the liver increased. At the introduction in a zone of fracture in rats observed positive dynamics of indicators of skeletal homeostasis. With the substitution of bone defects substitution was faster in the experimental group in comparison with the group without implants.
Key words: low-protein bone, hypoglycemic effect, regeneration of bone.
С развитием техники, высокой урбанизацией и ухудшением экологической обстановки с каждым годом увеличивается количество и тяжесть травм, врожденных и приобретенных дефектов костей. Лечение этих заболеваний связано с регенерацией костной ткани и является длительным и дорогостоящим процессом. В связи с этим ускорение сращения переломов костей и возмещение костных дефектов является актуальной задачей современной медицины.
На сегодняшний день с внедрением в практику здравоохранения высокотехнологичной медицинской помощи активно ведется поиск средств, направленных на ускорение регенерации костной ткани. Особой популярностью для решения поставленной задачи у исследователей пользуются различные компоненты зрелой костной ткани [1]. Это объясняется тем, что в зрелой костной ткани содержится весь спектр веществ, необходимых для её роста и регенерации. Кроме кальцийфосфатной составляющей, которая активно внедряется в практическое здравоохранение, из костной ткани выделяют целый ряд белковых факторов, влияние которых на регенерацию костной ткани изучено недостаточно. Кроме того, отдельно выделенный белок на наш взгляд не способен оказать значимого влияния на процесс регенерации, так как этот процесс является многостадийным. В связи с этим имеет смысл получение оптимальной по составу белковой смеси, отдельные составляющие которой влияли бы на различные звенья регенеративного процесса.
Цель исследования — получение комплекса низкомолекулярных кислото- и водорастворимых белков из костной ткани, исследование его влияния на регенерацию кости и углеводный обмен.
Материалы и методы исследования. Из компактной костной ткани быков были выделены растворимые в 0,1 н растворе хлороводородной кислоты белковые вещества. При выделении белков в экстракционную смесь добавляли йодуксусную кислоту для блокирования активности протеолитических ферментов. Экстракт диализовали против дистиллированной воды и лиофильно высушивали. Полученный комплекс белков фракционировали с помощью ионообменной хроматографии на носителях СПС-биоДЕАЕ в Cl- форме и СПС-биоСМ в Na+ форме (С-Пб, Россия). Были получены фракции: имеющая сродство к катионообменнику, имеющая сродство к анионообменнику, не имеющая сродства к ионообменным смолам. Фракции диализовали против дистиллированной воды и лиофильно высушивали. В полученных фракциях определяли количество ИФР-1 иммунорадиометрическим методом наборами реагентов IRMA IGF-1 фирмы Immunotech SAS на при-
боре Tracor Analytic 1190 (Голландия). В данной работе использовали фракцию, не имеющую сродства к ионообменным смолам.
Для исследования влияния полученного комплекса на углеводный обмен мышам линии СВА (n=36) внутрибрюшинно вводили раствор получаемых нами белков объемом 0,1 мл из расчета 1 мг/кг веса животного. На протяжении 120 мин с интервалом
20 мин в сыворотке крови животных определяли концентрацию глюкозы наборами реагентов Глюкоза-ФКД, общего белка Vital Diagnostics Spb, в печени и мышцах - количество гликогена по Филипповичу Ю.Б [4]. Результаты сравнивали с контрольной группой, в которой внутрибрюшинно вводился 0,9% раствор NaCl. В каждой группе количество животных n=6.
Крысам линии Вистар (n=6) моделировали перелом голени с сохранением целостности малоберцовой кости. Перелом фиксировали четырьмя консольными спицами, проведенными дистальнее и проксимальнее места перелома. Концы спиц армировали медной проволокой и придавали жесткость конструкции термопластичной акриловой пастой. Оперативное вмешательство проводили под рометар-золетиловым наркозом (оперативное вмешательство выполнено к.в.н. О.В. Дюрягиной). На седьмые сутки после операции в зону перелома вводили раствор белков, не имеющих сродства к ионообменникам, в дозе 10 мг/кг веса. Эвтаназию крыс проводили декапитацией на 7, 14, 21, и 28 сутки эксперимента. В сыворотке крови определяли общую активность щелочной фосфатазы, тар-тратрезистентной кислой фосфатазы наборами фирмы Vital Diagnostics Spb, Россия. В экстрактах костной ткани, полученных растиранием на холоде навески сырой кости из зоны перелома в 1,5 мл
0,9% раствора хлористого натрия, определяли активность тех же ферментов. Результаты сравнивали с контрольной группой (n=6), в которой стимуляции не проводилось.
Для изучения влияния действия полученной нами фракции белков на 10 взрослых беспородных собаках обоего пола в возрасте от одного года до трех лет с массой тела 8,8±3,2 кг в стерильных условиях под общим наркозом осуществляли моделирование конусообразных несквозных дефектов диаметром 5 мм и высотой 7 мм в метафизах плечевых и большеберцовых костей. Дефекты заполняли композиционным имплантационным материалом (КИМ), в состав которого входили кальцийфосфатные соединения (КФС) [2] и костные белки, не имеющие сродства к ионообменникам.
Рентгенологические исследования проводили с целью оценки течения репаративного процесса в области дефекта в сроки до операции, в день операции, на 21 и 42 стуки после опера-
ции. Во всех сериях опытов рентгенографию осуществляли на аппарате АРД-2 (Россия) в стандартной боковой проекции (оперативное вмешательство на собаках и рентгенологические исследования выполнены к.в.н. А. А. Емановым).
Для гистологического исследования выпиливали фрагменты проксимального метафизов большеберцовых костей, включающие области сформированных дырчатых дефектов, в сроки 21 и 42 сутки после операции. Материал фиксировали в 10% нейтральном растворе формалина, после декальцинации и обезвоживания в спиртах восходящей концентрации заливали в целлоидин. Для исследования остеогенеза в дефекте и морфометрического анализа делали срезы с периостальной и эндостальной поверхностей, в середине корковой пластинки, а также с субэндо-стальной поверхности, в середине и в глубине дефекта губчатого вещества метафиза. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван Гизону, трихромным методом по Масону и изучали в светооптическом микроскопе «МИКМЕД-5».
Морфометрическое исследование проводили с помощью программного обеспечения «ВидеоТесТ 4,0 - Мастер». На гистологических препаратах определяли долю композиционного им-плантационного материала (КИМ) и новообразованной костной ткани в площади дефекта корковой пластинки и губчатого вещества метафиза.
Экспериментальные исследования проводили, руководствуясь требованиями, изложенными в «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» (1986 г.) и в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 755) с соблюдением этических норм и гуманного отношения к объектам изучения и с одобрения этического комитета Центра.
Численные результаты проводимых исследований обрабатывали методами непараметрической статистики с использованием критериев Мана-Уитни, Краскела-Уоллиса, принимая критический уровень значимости р<0,05.
Результаты и их обсуждение. Выделенная из костной ткани фракция белков содержит в своем составе незрелые формы коллагена, факторы роста и гликозаминогликаны. Иммунорадио-метрическое исследование комплекса, выделенного из костной ткани и не имеющего сродства к ионообменным смолам, показало, что он содержит ИФР-1 в количестве 0,06% от сухой навески комплекса. Общеизвестно, что этот соматомедин способствует росту костной ткани, стимулируя клеточную активность, пролиферацию остеобластов [5]. Для определения влияния этой фракции на углеводный обмен проводили исследование на мышах.
Таблица 1
Концентрация глюкозы в сыворотке и содержание гликогена в печени и икроножной мышце мышей интактной, контрольной и опытной групп
Время, мин Глюкоза, ммоль/л Гликоген в печени, мг/100г Гликоген мышц, мг/100г
Интактные, n=6 9,6±1,8 128±30 28,9±5,6
Контроль, физраствор, n=6 9,7±0,4 89±21 42,6±24,4
2G, n=6 опыт 11,12±2,9*# 135±19 38,1±8,3
4G, n=6 опыт 10,6±2,6*# 21±15*# 19,5±6,1
6G, n=6 опыт 8,98±1,2# 162±29# 8,6±4,6*#
12G, n=6 опыт 7,0±1,1 *# 98±19 6,8±3,9*#
Примчеание: * - различия с интактными животными, # - различия с контрольной группой с уровнем значимости р<0,05
При внутрибрюшинной инъекции 0,9% раствора хлористого натрия концентрация глюкозы в сыворотке крови мышей не отличалась от значения этого показателя у интактных животных в течение всего эксперимента. В экспериментальной группе при введении внутрибрюшинно аликвоты раствора полученного нами комплекса белков через 20 мин. резко возрастала концентрация глюкозы в сыворотке крови. В течение часа эксперимента концентрация глюкозы снижалась и к двум часам была достоверно ниже, чем у интактных животных и в контрольной группе (табл. 1).
Изменение содержания гликогена в печени и мышцах экспериментальных животных было разнонаправленным. В печени содержание гликогена изменялось волнообразно, при этом к сороковой минуте эксперимента резко снижалось, а к шестидесятой резко возрастало в 1,5 раза, превосходя значения контрольной группы. В мышцах наблюдали четкую тенденцию к снижению содержания гликогена.
Таким образом, через 2 часа после инъекции раствора кислото- и водорастворимых белков, выделенных из костной ткани и не имеющих сродства к ионообменникам, концентрация глюкозы в сыворотке крови и содержание гликогена в мышцах были значимо ниже, чем у интактных животных и в контрольной группе. Содержание же гликогена в печени экспериментальных мышей имеет тенденцию к росту. На наш взгляд, такое изменение показателей свидетельствует о том, что фракция белков, полученная нами, содержит инсулиноподобные факторы роста. Так как содержание гликогена в мышцах снижается, мы полагаем, что физиологическое влияние ИФР отличается от действия инсулина и/или подвергается действию других регуляторных механизмов. В тоже время Solomon A. Kaplan and Pinchas Cohen высказано предположение, что повышение концентрации ИФР-1 в крови ингибирует секрецию гормона роста, что приводит к утилизации глюкозы в синтезе жировой ткани [6].
Для исследования влияния препарата на заживление перелома крысам-самцам вводили в зону перелома раствор полученных нами белков. Течение репаративной регенерации кости оценивали по индексу фосфатаз (ИФ), который представляет собой отношение активности щелочной фосфатазы к активности тар-тратрезистентного изофермента кислой фосфатазы в сыворотке крови, экстрактах из зоны перелома и симметричного участка контрлатеральной конечности (табл. 2).
Таблица 2
Индекс фосфатаз сыворотки крови и экстрактов костной ткани крыс контрольной и опытной групп
Срок эксперимента, сут 7 14 21 28
Кровь контроль п=6 79,79 49,95 78,15 72,19
Кровь опыт п=6 131,98* 130,47* 149,56*
Прав. контроль 46,97 25,20 25,23 21,48
Прав. опыт 29,64 29,15 20,92
Лев. контроль 17,68 16,95 12,79 13,72
Лев. опыт 19,41 21,77 21,44
Примечание: * - отличия от контрольной группы с уровнем значимости
р<0,05
По нашим наблюдениям в опытной группе животных, которым на седьмые сутки в зону перелома вводили раствор полученных нами белков, ИФ в сыворотке крови был достоверно выше, чем в контрольной группе, что свидетельствует о преобладании процессов костеобразования над процессами резорбции, протекающих при сращении перелома. Такая же тенденция наблюдается и в экстрактах костной ткани, однако статистически значимых различий нами не обнаружено. Интересно отметить, что ИФ водного экстракта из зоны перелома к 14 суткам эксперимента снижается и в контрольной, и в экспериментальной группе животных, однако в контрольной группе это снижение более выражено, чем в экспериментальной.
Рентгенографические исследования показали, что в день операции в опытной группе в области дефектов, заполненных пастообразным имплантационным материалом, рентгенологически отмечали серые гомогенные тени, которые по плотности приближались или превышали плотность окружающей костной ткани (рис. 1). Границы дефектов диаметром 6 мм имели четкие очертания. У животных контрольной группы на этом же этапе эксперимента созданный дефект на рентгенограммах представлял собой окружность с четко выраженными ровными краями, перекрываемую тенями низкой оптической плотности.
Через три недели эксперимента в опытной группе рентгенологически происходило уплотнение теней контура дефекта и сглаживание его краев. Область дефекта была заполнена неоднородными облаковидными тенями различной интенсивности, а по внутреннему краю дефекта просматривалась зона просветления шириной 2,1±0,7 мм, что свидетельствовало о резорбции имплан-тационного материала от периферии к центру дефекта.
Рис. 1. Рентгенограммы экспериментальных животных
К 6 неделе эксперимента полости дефектов контрольной группы перекрывали тени, оптическая плотность которых приближалась к плотности мягких тканей. Края дефектов были сглажены. К этому сроку на рентгенограммах животных опытной группы контуры краев дефекта были размыты. Дефект был заполнен плотными гомогенными тенями новообразованной костной ткани, его полость перекрывали тени средней рентгеноконтрастности. К этому сроку появлялся характерный костный рисунок.
Гистологические исследования показали, что у животного, которому дефект не заполняли имплантационным материалом, через 42 суток после операции по краю дефекта определялся узкий прерывистый слой компактной костной ткани. Полость дефекта была заполнена слабо васкуляризированной соединительной тканью. В периферических отделах отмечалось формирование единичных костных трабекул, на поверхности которых располагались активные остеобласты. Внутренняя поверхность полости дефекта подвергалась активной резорбции. Аналогичные результаты были получены нами ранее [3].
При гистологическом исследовании, проведенном через
21 сутки после операции в опытной группе, в корковой пластинке метафиза определялся дефект округлой формы с четкой ровной границей. Со стороны кости от края дефекта к его центру формировались костные структуры в виде мелкопетлистой трабекулярной сети. Поверхность трабекул, расположенных ближе к центру, была покрыта активными остеобластами. Доля новообразованной костной ткани составляла 24,7±6,4% от площади дефекта. Центральная часть дефекта заполнена волокнистой соединительной тканью с многочисленными полнокровными капиллярами синусоидного типа. Фрагменты КИМ в виде гранул различного размера и формы, располагались, в основном, в центре дефекта. Гранулы подвергались деструкции, края их были неровными, на поверхности определялись многоядерные макрофаги. Доля КИМ в площади дефекта составляла 5,6±1,6%.
В губчатом веществе метафиза сохранялась четкая граница зоны дефекта. Центральная часть дефекта так же, как и в корковой пластинке, заполнена васкуляризированной рыхлой волокнистой соединительной тканью. По периферии полости дефекта располагалась сеть трабекул из грубоволокнистой костной ткани. Новообразованная костная ткань занимала 28,3±10,8%, доля им-плантационного материала составляла 9,7±5,5% от площади дефекта. Размеры гранул КИМ в дефекте корковой пластинки и в губчатом веществе метафиза не имели значимых различий, их площадь колебалась от 0,16 до 3,55 мм2, диаметр - от 0,45 до 2,13 мм. Гранулы имплантируемого материала, располагающиеся в центральной части дефекта, были окружены васкуляризирован-ной волокнистой соединительной тканью, а по периферии дефекта заключены во вновь сформированную костную ткань. В прилежащих к дефекту участках в межтрабекулярных пространствах увеличивалась доля красного костного мозга и количество полнокровных капилляров синусоидного типа.
При гистологическом исследовании, проведенном через 42 суток после операции, в губчатом веществе метафиза отсутствовала четкая граница дефекта (рис. 2). Новообразованный участок кости можно было отличить по микроархитектурной организации трабекулярной сети (толщине трабекул, расстоянию между ними, плотности их расположения) и содержимому межтрабеку-лярных пространств (соотношению красного и желтого костного мозга, количеству кровеносных сосудов).
Доля новообразованной костной ткани в полости дефекта губчатого вещества метафиза в опытной группе увеличивалась до 55,5±13,3% (р<0,05). В корковой пластинке четко определялась граница между новообразованной костной тканью в дефекте и окружающей костью, что было связано с неупорядоченной ориентацией формирующихся остеонов, не имеющих продольного направления, характерного для окружающей область дефекта кости, доля новообразованной костной ткани составляла 67,7±17,1% (р<0,001).
Рис. 2. Полость дефекта в губчатом веществе метафиза через 42 суток после операции: а - опыт; б - контроль. Окраска гематоксилином и эозином. Об. - 2,5, ок. - 10
Выводы:
1. Полученная из костной ткани фракция белков содержит в своем составе инсулиноподобный фактор роста и влияет на углеводный обмен. У мышей при внутрибрюшинном введении раствора этих белков наблюдался гипогликемический эффект, который выражался в снижении концентрации глюкозы в сыворотке крови животных и накоплении гликогена в печени;
2. При инъекции раствора белкового комплекса в зону перелома у крыс наблюдалась тенденция к преобладанию регенеративных процессов костной ткани, что установлено по активности фосфатаз сыворотки крови;
3. При заполнении у собак дырчатых дефектов кальций-фосфатным соединением в смеси с выделенными нами белками
наблюдалась выраженное замещение дефектов по сравнению с контрольной группой. В результате проведенного исследования установлено, что применение белковой фракции приводит к увеличению скорости репаративных процессов при восстановлении костных дефектов.
Литература
1. Сорокин, А.Н. Сравнительный анализ биологических и синтетических костно-пластических материалов по литературным данным / А.Н. Сорокин, О.А. Тетерин, И.А. Кирилова, В.Т. // Инновационные технологии в трансплантологии органов, тканей и клеток. Материалы Всероссийской конференции с международным участием.- Самара.- 2008.- С. 108-110.
2. Талашова, И.А. Лабораторное выделение кальцийфос-фатных соединений из костной ткани крупного рогатого скота и определение их состава методом электронно-зондового микро-
анализа / И.А.Талашова, Т.А. Силантьева // Гений ортопедии.-2007.- № 4.- С. 71-75.
3. Талашова, И. А. Возмещение дефектов губчатой кости животных / И.А. Талашова, Н.А. Кононович, Т.А. Силантьева // Ветеринария.- 2009.- №8.- С. 51-54.
4. Филиппович, Ю. Б. Практикум по общей биохимии / Ю.Б. Филиппович, Т.А. Егорова, Г.А. Севастьянова.- М. Просвещение, 1982.- 311 с.
5. Derek le Roith Insulin-like growth factors. // The New England Journal of Medicine.- 1997.- №336(9).- P. 633-640.
6. Solomon, A. Kaplan, Pinchas Cohen Review: the somatomedin hypothesis 2007: and 50 years later / A. Solomon // The journal of clinical endocrinology & metabolism.- 2007.- №92(12).- P. 4529-4535.
УДК 616.155.392
ОСОБЕННОСТИ КРИСТАЛЛОГЕННОГО ПОТЕНЦИАЛА КРОВИ МЫШЕЙ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ
А.К. МАРТУСЕВИЧ, Л.К. КОВАЛЕВА, А.А. КОСТЯЕВ
ФГБУ «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», ул. Красноармейская, 72, г. Киров, 610027 ФГБУ «Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии» Минздравсоцразвития России Ассоциация российских озонотерапевтов, Верхне-Волжская набережная, 18, г. Н.Новгород, 603155
Аннотация: цель исследования - уточнение «паттерна» дегидратационной структуризации плазмы крови мышей с учетом их предрасположенности к формированию спонтанного лимфолейкоза (линия AKR). Изучали кристаллогенные свойства плазмы крови 15 мышей линии Black и 20 мышей линии AKR (на стадии формирования лимфолейкоза). Для оценки собственного и инициированного кристаллообразования биосреды использовали систему полуколичественных параметров. Установлено, что формирование у мышей экспериментального лимфолейкоза способствует существенному сдвигу качественно-количественного состава их крови, что, в свою очередь, приводит к трансформации кристаллогенной активности последней.
Ключевые слова: лимфолейкоз, кристаллизация, кровь, биокристалломика.
THE PARTICULAR FEATURES OF CRYSTALLOGENOUS POTENTIAL OF THE BLOOD OF MOUSES AT EXPERIMENTAL LYMPHOID
LEUCOSIS
A.K. MARTUSEVICH, L.K. KOVALEVA, A.A. KOSTYAEV
Kirov Research Institute of Hematology and Blood Transfusion Nizhny Novgorod Research Institute of Traumatology and Orthopaedics
Association of Russian Ozone Therapeutists
Abstract: the aim of this work is the estimation of dehydrational structurization the blood serum in mouses takin into account the conditions of formation the lynphoid leucosis (AKR line). The authors studied crystallogenous properties of the blood plasma of mouses AKR (n=20) and Black (n=15) lines. For biological fluids own and initiated crystallogenesous the authors used special semiquantitive criterias. It was established, that experimental lymphoid leucosis allows to change the blood composition and transformation of its crystallogenous potential.
Key words: lymphoid leucosis, crystallization, blood, biocrystallomics.
Линия мышей АК^ выделена и уже на протяжении длительного времени используется для различных исследовательских задач (изучение механизмов развития патологии легких [10], заболеваний эндокринного и офтальмологического профиля [4,11], паразитарных инвазий и др. [1,5,9,13], а также апробации вариантов их экспериментальной терапии [3,12]). В то же время основной характерной чертой линии является формирование на 7-9 месяце жизни спонтанного лимфолейкоза [2,3,5,9]. Это свойство предопределяет наиболее значимую область применения животных линии AKR - детальное раскрытие патогенеза лимфо-лейкоза и отработка способов химиотерапевтической и лучевой коррекции указанного патологического состояния. Однако, несмотря на многолетние изыскания [1, 2-5, 8-11], подробному изучению подверглись далеко не все анатомо-физиологические и морфологические параметры рассматриваемой линии. Так, практически отсутствует информация об одном из интегральных показателей физико-химического гомеостаза жидких сред организма животного - их кристаллогенной активности. Оценка последнего, в свою очередь, может быть полезна как критерий функционально-метаболического статуса и индикатор эффективности экспериментальной терапии [6,7,12].
В связи с этим, целью данного исследования служила сравнительная характеристика «паттерна» дегидратационной структуризации плазмы крови мышей с учетом их предрасположенности к формированию спонтанного лимфолейкоза (линия AKR).
Материал и методы исследования. Объектом данного экспериментального исследования служила плазма крови 15 мы-
шей линии Black и 20 мышей линии AKR (на стадии формирования лимфолейкоза). Забор крови производили без умерщвления животных. Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. План исследования соответствовал положениям Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации последнего пересмотра [8].
Дегидратацию производили без термической стимуляции кристаллогенеза в условиях лаборатории.
Оценку результатов структуризации осуществляли с применением собственной системы полуколичественных параметров для кристаллоскопических и тезиграфических фаций [7]. Базисным веществом при тезиграфии служил 10% раствор хлорида натрия. Изучали общие морфологические особенности образцов высушенной плазмы крови животных обеих групп. В качестве основных визуаметрических показателей при описании кристаллоскопических фаций использовали кристаллизуемость (Кр), индекс структурности (ИС), степень деструкции фации (СДФ) и выраженность ее краевой зоны (Кз), для тезиграфических фаций -тезиграфический индекс (ТИ), коэффициент поясности (Р), кристалличность (К), а также, аналогично кристаллограммам, степень деструкции фации (СДФ) и выраженность ее краевой зоны (Кз). Статистическая обработка полученных данных осуществлялась с помощью электронных таблиц Microsoft Excel 2003, а также программных пакетов Primer of biostatistics 4.03 и SPSS 11.0.
