Научная статья на тему 'Изучение характеристик фосфатовкальция, синтезированных из модельных растворов плазмы крови'

Изучение характеристик фосфатовкальция, синтезированных из модельных растворов плазмы крови Текст научной статьи по специальности «Химические науки»

CC BY
304
241
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
КРИСТАЛЛИЗАЦИЯ / ПЕРЕСЫЩЕНИЕ / ФОСФАТ КАЛЬЦИЯ / ПЛАЗМА КРОВИ / КИНЕТИКА РАСТВОРЕНИЯ / ТЕРМОПРЕВРАЩЕНИЯ / CRYSTALLIZATION / SUPERSATURATION OF CALCIUM PHOSPHATE / BLOOD PLASMA / DISSOLUTION KINETICS / THERMAL TRANSFORMATIONS

Аннотация научной статьи по химическим наукам, автор научной работы — Голованова О.А., Кутузова Ю.А.

Представлены результаты исследований процессов кристаллизации в растворах, моделирующих состав плазмы крови человека. Осуществлен синтез из прототипов плазмы крови человека в зависимости от пересыщения и времени эксперимента, и установлено, что полученные твердые фазы состоят из октакальцийфосфата, карбонатгидроксиапатита А-типа, витлокита. Выяснено, что масса осадков растет с увеличением пересыщения и времени синтеза. Химическими методами получено, что с увеличением времени синтеза и пересыщения раствора Са/Р коэффициент изменяется, так как меняется фазовый состав осадка. Изучена биоактивность образцов в трех растворителях и установлены кинетические характеристики. Получено, что более эффективное растворение наблюдается в ацетатном буфере. В результате термической обработки твердых фаз в интервале температур 200-800 °C определены основные фазовые переходы.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по химическим наукам , автор научной работы — Голованова О.А., Кутузова Ю.А.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Studying the characteristics of calcium phosphate synthesized from model solutions of blood plasma

This paper presents the results of research of crystallization processes in solutions simulating the composition of human plasma. The synthesis of the prototype human plasma as a function of supersaturation and the duration of the experiment and found that the resultant solid phase composed octacalcium phosphate, carbonathydroxyapatite A-type tricalcium phosphate. It was found that the mass of precipitation increases with increasing supersaturation and synthesis time. Chemical methods found that with increasing time of synthesis and solution supersaturation Сa\ P ratio changes as changing the phase composition of the sediment. Bioactivity of samples studied in three solvents and installed kinetic characteristics. It is found that better dissolution is observed in acetate buffer. As a result of thermal treatment of the solid phases in the temperature range 200-800 °C the basic phase transitions.

Текст научной работы на тему «Изучение характеристик фосфатовкальция, синтезированных из модельных растворов плазмы крови»

ХИМИЯ

Вестн. Ом. ун-та. 2016. № 1. С. 56-62.

УДК 546.05.544.77

О.А. Голованова, Ю.А. Кутузова

ИЗУЧЕНИЕ ХАРАКТЕРИСТИК ФОСФАТОВ КАЛЬЦИЯ, СИНТЕЗИРОВАННЫХ ИЗ МОДЕЛЬНЫХ РАСТВОРОВ ПЛАЗМЫ КРОВИ*

Представлены результаты исследований процессов кристаллизации в растворах, моделирующих состав плазмы крови человека. Осуществлен синтез из прототипов плазмы крови человека в зависимости от пересыщения и времени эксперимента, и установлено, что полученные твердые фазы состоят из октакальцийфосфата, карбо-натгидроксиапатита А-типа, витлокита. Выяснено, что масса осадков растет с увеличением пересыщения и времени синтеза. Химическими методами получено, что с увеличением времени синтеза и пересыщения раствора Са/Р коэффициент изменяется, так как меняется фазовый состав осадка. Изучена биоактивность образцов в трех растворителях и установлены кинетические характеристики. Получено, что более эффективное растворение наблюдается в ацетатном буфере. В результате термической обработки твердых фаз в интервале температур 200-800 °C определены основные фазовые переходы.

Ключевые слова: кристаллизация; пересыщение; фосфат кальция; плазма крови; кинетика растворения; термопревращения.

Введение

Одним из важных направлений современной биоминералогии является изучение процессов кристаллизации малорастворимых соединений, входящих в состав физиогенных (кости, зубы) и патогенных минералов (мочевые, зубные, слюнные и др.) [1-5]. Интерес вызван тем, что данные соединения чаще всего являются причинами болезней организма человека, например артериосклероз - заболевание, связанное с отложением солей кальция в сосудах. Это заболевание - второе по распространенности среди всех склеротических поражений артериальных сосудов после атеросклероза [6-8]. За последние годы увеличился процент патогенного минерало-образования в кровеносных сосудах, сердечных клапанах.

В настоящее время существует несколько гипотез развития кальцифи-катов в сердечных клапанах: структурные изменения в тканях клапана при воспалении, результат жизнедеятельности микроорганизмов и др. [910]. Подобные образования отмечаются рядом авторов на силиконовых грудных имплантатах и биопротезах сердечных клапанов. Известно, что биологические жидкости, из которых происходит образование таких соединений, состоят из множества компонентов как неорганических, так и органических [9]. Появление в биологической жидкости любого нового вещества при патологическом состоянии приводит к изменению химического состава и межмолекулярного взаимодействия, что находит свое отражение в особенностях кристаллических структур. Такие молекулярные изменения наиболее точно характеризуют состояние внутренней среды организма и могут иметь значение для выявления патологического процесса на ранних стадиях [9].

Анализ проведенных ранее рядом авторов [11-17] исследований показал, что главной неорганической фазой патогенной кальцификации колла-геновых и мышечных тканей, так же как в костной и зубной тканях, является фосфат кальция, который с определенной степенью приближения от-

"Работа выполнена при частичной финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 15-29-04839 офи_м).

© О.А. Голованова, Ю.А. Кутузова, 2016

носят к карбонатсодержащему гидроксила-патиту [18], как правило, слабо окристалли-зованному и нестехиометрическому из-за присутствия значительных количеств посторонних ионов. Некоторые из этих ионов входят в кристаллическую решетку апатита, другие же только адсорбируются на поверхности апатита. Этот апатит является типичным биогенным минералом, тесно связанным пространственно, генетически структурно и морфологически с составляющими тканей организма. Степень дефектности его всегда высока и зависит в большей степени от локальных процессов, чем от состояния организма в целом. Соотношение Са/Р в кальцинатах, по литературным данным, варьируется в значительных пределах. В матричных везикулах это соотношение может быть около 0,66, а в зрелом апатите доходит до 2. Размер кристаллов в процессе созревания биоапатита увеличивается от наноразмерных до 100 и даже более микрон. Патогенный апатит не имеет такой тесной связи с обменными процессами в организме, как физиогенный.

Именно из-за кальцификации сроки функционирования трансплантатов сердечных клапанов ограничены. В связи с этим возникает настоятельная необходимость в исследовании механизма инициации кальци-ноза как коллагеновых и мышечных тканей, так и трансплантатов клапанов сердца с целью разработки на основе полученных представлений способов его предотвращения.

Отсюда можно сделать вывод, что кристаллография природного неорганического апатита невероятно сложна, а структура биоапатита имеет ряд дополнительных особенностей, при этом минерализация тканей изучена недостаточна.

Цель работы - изучение кристаллизации фосфатов кальция из прототипов плазмы крови человека и исследование их свойств (биоактивность, термическая деградация).

Экспериментальная часть

Для расчета состава модельных растворов использовали значения средней концентрации неорганических ионов, входящих в плазму крови человека (табл. 1). Выбор исходных реагентов и их соотношение в растворе определяли таким образом, чтобы концентрации ионов и ионная сила раствора были максимально приближены к параметрам плазмы крови человека.

В качестве исходных реагентов использовали соли марки ч.д.а. и х.ч. и дистиллированную воду. Для каждой серии экспериментов были приготовлены растворы, содержащие катионы и анионы, при совместном присутствии которых в данных условиях не образуются малорастворимые соединения (отдельно катионы и анионы, которые являются осадкообразующими). В каждом из исходных растворов производили корректи-

ровку значений рН до физиологического значения (7,4 ± 0,01) путем добавления 30 %-ого раствора NaOH или HCl (конц.) и ионной силы до значения 0,146. После смешения эквивалентных объемов растворов получали раствор с заданным пересыщением относительно произведения растворимости гидрофосфата кальция и рассчитанной концентрацией исходных компонентов (табл. 1). Все опыты проводили при температуре 25 °С в отсутствие перемешивания. Время синтеза составляло: 2, 4 (S = 50, 100); 8, 10, 12 (S = 25, 50, 100) недель. По окончанию опыта раствор отфильтровывали и высушивали осадок в сушильном шкафу при температуре ~ 80 °С до полного удаления воды.

Таблица 1

Данные для приготовления модельного раствора

Компонент-ион Среднеезначение концентрации (ммоль/л) Значение концентрации (ммоль/л) для пересыщения 3

Ca2+ 2,35 3,94

Na+ 143 26

K+ 4,35 4,52

Mg2+ 0,95 0,95

NH4+ 0,04 0,04

Cl- 103 4,89

SO42- 0,45 -

CO32- 26 26

PO43- 1,3 2,28

Фазовый состав полученных осадков исследован с помощью РФА (ДРОН-3) и ИК-спек-троскопии (спектрофотометр «ФТ-02»). Идентификация пиков на дифрактограммах проводилась с помощью картотеки JCPDS и программных пакетов DifWin4.0 и Crystallogra-phica Search-Match. Содержание присутствующих фаз в образцах определяли по методу корундовых чисел (метод Чанга, программа Crystallographica Search-Match). Размеры области когерентного рассеяния (ОКР, минимальные размеры кристаллитов) твердых фаз определены по формуле Дебая-Шеррера [22]. Параметры и объем элементарной ячейки кристаллов были вычислены по формулам для гексагональной сингонии ГА [23].

Для изучения энергетики процессов термического разложения полученных твердых фаз проводился термогравиметрический анализ (ТГА). Навеску образца массой 0,2000 ± 0,0005 г помещали в керамические тигли и нагревали в муфельной печи от 200 °С до 1000 °С с шагом 200 °С. Затем пробу с осадком охлаждали до комнатной температуры взвешивали на аналитических весах. Эксперимент проводили в трехкратной повторности.

Изучение резорбции (растворимости) полученных образцов проводилось путем их динамического растворения при постоянном перемешивании в растворе 0,9 %-ного хлорида натрия (рН~7), в ацетатном (pH = 4,75) и трис-буфере (pH = pH = 7,4) при комнатной

температуре (17-20 °С) и 37 °С. Через определенные промежутки времени (1 = 0-90 мин) с помощью прямой потенциометрии фиксировали значение кислотности среды и показателя концентрации ионов кальция в растворе. На заключительном этапе эксперимента проводилось взвешивание высушенной не растворившейся твердой фазы. На основе полученных экспериментальных данных были получены кинетические кривые и проведена их математическая обработка по алгоритму, описанному в работе [24].

Результаты экспериментов и их обсуждение

Результаты РФА показали, что все образцы, синтезируемые в среде модельного раствора плазмы крови человека при варьировании пересыщений и времени синтеза, представляют собой смесь из карбонатгид-роксилапатита, октокальцийфосфата и вит-локита, при этом пики максимальной интенсивности находятся близко и накладываются

друг на друга, что затрудняет расшифровку. Линиям ОКФ соответствуют пики по шкале 20: 28,3; 34,4; 36,7, линиям КГА соответствуют пики по шкале 20: 26,3; 33,9; 34,6, а линиям витлокита соответствуют пики по шкале 20: 17,4; 30,2; 33,7, причем с увеличением пересыщения и времени синтеза содержание КГА увеличивается (рис. 1).

Для установления качественного состава твердых фаз использовали ИК-спектроско-пию (рис. 2).

На спектрах всех исследованных образцов регистрируются полосы поглощения в спектральных областях 1400-1500 и 150300 см-1, относящихся соответственно к валентным и деформационным колебаниям связей С-О карбонат-ионов. Можно отметить, что интенсивность, характерная для гидроксилапатита, полос колебания ОН- в области 3500 см-1 очень мала.

Таким образом, из результатов следует, что в составе полученных твердых фаз обнаружена смесь карбонатгидроксилапатита А-типа, витлокита и октакальцийфосфата.

Рис. 1. Дифрактограмма образцов: а) 8 недель S = 10; б) 8 недель S = 100

Вохиоеое 1испо, см"

Рис. 2. ИК-спектры образцов: 1 - 1 месяц, Б = 50; 2 - 2 месяца, Б = 50

Методами химического анализа надоса-дочной жидкости установлено, что соотношение Са/ Р в синтезируемых осадках меняется в зависимости от времени синтеза и пересыщения (рис. 3).

Сложный характер зависимости свидетельствует об изменении состава осадков в зависимости от времени синтеза и пересыщения. Из литературных данных известно, что Са/Р соотношение для КГА-1,67, ОКФ-1,33, витлокита-1,28. С увеличением пересыщения Са/Р соотношение увеличивается. Повышение Са/ Р свидетельствует об увеличении доли КГА в осадке. Для полученных твердых фаз была проведена оценка массы рис. 4.

Видно, что с увеличением пересыщения синтеза масса твердой фазы растет, при

этом время не оказывает заметного влияния на массу осадков.

Далее было изучено растворение синтезированных порошков с разным пересыщением (8 = 10, 20, 30, 40, 50, 100) и временем синтеза 8 недель. Растворение проводилось в трех растворителях.

По кинетическим кривым С(Са2+) = Цт) растворения в 0,9 % растворе МаС1 видно, что насыщения ионами кальция происходит за 5 минут. Далее по полученным кривым рассчитали кинетические закономерности (табл. 2). Получили, что порядок реакций растворения нулевой, при этом в зависимости от пересыщения скорость монотонно не изменяется.

1,6 т

1,2 ::

CL _

"¡5 0 8 Т

о '

0,4 :: 0

2 месяца

X х

+

Пересыщения

ч-1-1-1-1-1-1-1-1-1

0

50

пересыщение а

100

2

1,5 ::

CL _

"¡5 1 }

О

0,5 0

♦ S=5

• S=10

W - ■ • S=20

■ • ■

■ ■ Л S=30

♦ ■ м S=50

♦ S=100

♦ щ

♦ S=40

Н-1-1-1-1-1-1-1-1-1

0

5

недели б

10

5 4,5 4

3,5 j;

3 j;

ч. 2,5 ii

Е 2 Ü

1,5 Ц

0,51: "

Рис. 3. Зависимость Са/Р от времени синтеза и пересыщения: а) 8 недель; б) пересыщения

масса осадков

*

ж

ж

Л

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

ж

♦ ■

ж

Л

ж

♦ 4 недели 8 недель

2 недели

3 недели ж 1 неделя

0 —I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I—I

0 20 40 „ 60 80 100 120

Пересыщение

Рис. 4. Зависимость массы от времени синтеза и пересыщения

Кинетические параметры растворения твердых фаз в 0,9 % растворе NaCl

Таблица 2

Время синтеза Пересыщение Порядок Уравнение R^pac v, мкмоль/л*мин

10 C=0,1448x+9,3282 0,4891 0,1448

20 C=0,0825x+7,8891 0,4487 0,0825

8 недель 30 0 C=0,2852x+3,608 0,6654 0,2852

40 C=0,028x+2,7053 0,6571 0,0280

50 C=0,0557x+4,0013 0,4970 0,0557

100 C=0,1518x+4,7436 0,6994 0,1518

Аналогичные закономерности были получены при изучении биоактивности в растворах в трис-буфере и в ацетатном буфере. Далее для исследуемых проб провели растворение при температуре до 40 °С, для расчёта энергии активации.

Выявили, что для раствора 0,9 % МаС1 (табл. 3) характерно снижение энергии активации с уменьшением пересыщения. Это связано с тем, что для пересыщения 100 требуется меньше энергии для осуществления процесса растворения, так как происходит увеличение ионной силы раствора, т. е. проявляется солевой эффект. Сравнивая растворение при одинаковых пересыщениях (50) в ацетатном и трис-буфере можно отметить, что для трис-буфера энергия активации горазда выше.

Таблица 3 Изменение энергии активации для разных растворителей

Растворитель Пересыщение Ea, Дж / моль

NaCl, 0,9 % 10 226,52

100 32,33

Ацетатный буфер 50 84,97

Трис-буфер 50 382,63

Анализ данных табл. 3 показал, что наибольшая скорость растворения синтезированных образцов характерна для ацетатного буфера (наименьшее значение энергии

активации), это, по нашему мнению, связано с кислой средой ацетатного буфера.

На следующем этапе проводилось исследование полученных осадков путем изотермического термогравиметрического анализа (ТГА) для проб с временем синтеза 4 и 8 недель и пересыщением 100. Анализ образца методом ТГА показал непрерывную потерю массы (рис. 5).

По полученным результатам (рис. 5) видно, что наибольшее уменьшение массы относится к интервалу температур 200400 °С, что связано с удалением адсорбционной и кристаллизационной воды. В интервале 600-800 происходит удаление карбонат-ионов из структуры карбонатгидрокси-лапатита, кроме того на каждом изменении температуры ОКФ претерпевает структурные изменения (табл. 4).

Данные, представленные в табл. 4, подтверждены методом РФА (рис. 6, 7). При температуре 200 °С образуются фазы ГА и ди-кальцийфосфата, основным интенсивным линиям ГА соответствуют пики на шкале 20: 31,3; 34,9; 38,5. Для температуры 400-600 °С образуются фазы ГА и пирофосфата кальция, линиям ГА соответствуют пики по шкале 20: 28,1; 31,4; 34,3, линиям пирофос-фата кальция соответствуют пики по шкале 20: 18,2; 23,2; 25,3. При температуре 800 °С образуется в-трикальций фосфат, его линиям соответствуют пики по шкале 20: 31,8; 33,6; 35,7.

0,1920 0,1900 0,1880 g- 0,1860 0,1840 0,1820 0,1800

0

1 месяц S=100

2 месяца S=100

200

400

600

800

1000

Т,оС

Рис. 5. Термогравиметрические кривые для пробы с временем синтеза 4, 8 недель и пересыщение 100

Таблица 4

Фазовые превращения продуктов кристализации при термообработке

аТ,°С Процессы вызывающие убыль образца

200 Удалением адсорбционной и кристаллизационной воды: Саб(НРО4)2(РО4)4-5Н2О ^ У2 Са1о(РО4)б(ОН)2 + 3СаНРО4

400 Плавка монетита с образованием пирофосфата кальция: Л Саю(РО4)б(ОН)2 + 3СаНРО4 Саю(РО4)е(ОН)2 + 3/2у-Са2Р2От

600 У2 Саю(РО4)б(ОН)2 + 3/2у-Са2Р2От ^ 2Саа(РОф + Р-Са2Р2От.

800 Удаление карбонат-ионов из структуры КГА: Сад(РО4)б-х-у(НРО4)у(СОа)х(ОН)2-у ^30- Саа(РОф+ хСО2 +2 Н2О

ч

Ч.

V

\

Л Л

V4 /

"АЧ,

„у 'И

Рис. 6. Дифрактограммы образца 4 недели, S = 100: 1 - Т = 200 °С; 2 - Т = 400 °С; 3 - Т = 600 °С; 4 - Т = 800 °С

iw

Ч \ V чл ч

X \ \ ч »

\\Мл

VyCVi Ы

ч у

VI

ч Г vAv

\ У \

Vv/

V

» Л, Л

..i J

Рис. 7. Дифрактограммы образца 8 недель S = 100: 1 - Т = 200 °С; 2 - Т = 400 °С; 3 - Т = 600 °С; 4 - Т = 800 °С

Выводы

Осуществлен синтез из прототипов плазмы крови человека в зависимости от пересыщения и времени синтеза. Получены твердые фазы состоящие из октакальций-фосфата, карбонатгидроксиапатита А-типа, витлокита.

Показано, что масса твердой фазы растет с увеличением пересыщения и времени синтеза. Выявлено, что с увеличением времени синтеза и пересыщения раствора Са/Р коэффициент изменяется.

Изучено растворение в трех растворителях. Выяснено, что порядок растворения для всех трех растворителей равен нулю. Скорость реакции растворения изменяется не монотонно. Установлено, что более эффективное растворение наблюдается в ацетатном буфере.

Определены процессы, протекающие при термической обработке образцов в интервале температур 200-800°C.

ЛИТЕРАТУРА

[1] Golovanova O. A., Frank-Kamenetskaya O. V., Pu-nin Y. O. Specific features of pathogenic mineral formation in the human body // Russian Journal of General Chemistry. 2011. № 81 (6). P. 1392-1406.

[2] Tetsuo Kodaka et al. Fine structure and mineral components of fibrous stonelike masses obtained from the human mesenteries // The Clinical Electron Microscopy Society of Japan. 2003. № 36. Р. 272.

[3] Becker А. et al. A comparative study of clinically well-characterized human atherosclerotic plaques with histological, chemical, and ultrastructural methods // Journal of Inorganic Biochemistry. 2004. № 98. Р. 2032-2038.

[4] Kazuyuki Yahagi, Frank D. Kolodgie, Fumiyuki Otsuka. Pathophysiology of native coronary, vein graft, and in-stent atherosclerosis // Nature Reviews Cardiology. 2015. № 10. Р.1038.

[5] Титов А. Т. и др. Механизм минерализации сердечных клапанов // Поверхность, рентгеновские, синхротронные и нейтронные исследования. 2001. № 3. С. 74.

[6] Kazuyuki Yahagi, Frank D. Kolodgie, Fumiyuki Otsuka. Op. cit. P. 1038.

[7] Lars-Fride Olsson et al. In Vitro Formation of Nano-crystalline Carbonate Apatite - A Structural and Morphological Analogue of Atherosclerotic Plaques // Eur. J. Inorg. Chem. 2007. P. 41234127.

[8] Титов А. Т. и др. Гидроксилапатит в крови человека. // Поверхность, рентгеновские, синхро-тронные и нейронные исследования. 2000. № 7. С. 66.

[9] Ламанова Л. М. Тканевая кальцификация в сердечно-сосудистой системе. Вестник тГу. 2010. № 337. С. 194-197.

[10] Росеева Е. В. и др. Биоапатит кальцификатов сердечных клапанов // Материалы докладов годичного собрания РМО и Федоровской сессии. 2012. С. 306-308.

[11] Grazielle V. Nogueira et al. Pacheco Raman spectroscopy study of atherosclerosis in human carotid artery Journal of Biomedical Optics. 2005. № 10(3).

[12] Pigozzi F. et al. Endothelial (dys)function: the target of physical exercise for prevention and treatment of cardiovascular disease // J. Sports Med. Phys. Fitness. 2011. № 51. Р. 260-267.

[13] Гилинская Л. Г. и др. Исследование минеральных патогенных образований на сердечных клапанах человека. I. Химический и фазовый состав // Журнал структурной химии. 2003. Т. 44, № 4. С. 678.

[14] Гилинская Л.Г., Окунева Г.Н., Власов Ю.А. Исследование минеральных патогенных образований на сердечных клапанах человека. II. ЭПР спектроскопия. // Журнал структурной химии. 2003. Т. 44, № 5. С. 882.

[15] Гилинская Л. Г. и др. Исследование минеральных патогенных образований на сердечных клапанах человека. III. Электронная микроскопия // Журнал структурной химии. 2003. Т. 44, № 6. С. 1122.

[16] Gibson I.R., Bonfield W. Novel synthesis and characterization of an AB-type carbonate-substituted hydroxyapatite // Sayer M. J. Biomed. 2002. P. 697-708.

[17] Frank-Kamenetskaya O., Kol'tsov A. Ion substitutions and non-stoichiometry of carbonated apatite-(CaOH)synthesised by precipitation and hydrothermal methods // J. of Molecular Structure. 2011. Vol. 9. P. 9.

[18] Golovanova O. A., Chikanova E. S., Punin Y. O. Мain features of nucleation in model solutions of

oral cavity // Crystallography Reports. 2015. Т. 60, № 3. С. 438-445.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

[19] Peters F., Epple M. Simulating arterial wall calcification in vitro: biomimetic crystallization of calcium phosphates under controlled conditions // Zeitschrift f.r. Kardiologie. 2001.

[20] Dorozhkina E. I., Dorozhkin S. V. In vitro crystallization of carbonateapatite on cholesterol from a modified simulated body fluid // Colloids and Surfaces A: Physicochem. Eng. Aspects. 2003. № 223. Р. 231-237.

[21] Березов Т. Т., Коровин М. А. Биологическая химия. М. : Медицина, 2002. 704 с.

[22] Петракова Н. В. Влияние условий синтеза и спекания нанопорошков гидроксилапатита на формирование микроструктуры и свойств керамики : дис. ... канд. техн. наук. М., 2014.

[23] Шаскольская М. П. Кристаллография. М. : Высшая школа, 1976. 391 с.

[24] Измайлов Р. Р., Голованова О. А. Растворимость гидроксилапатита и карбонатгидроксила-патита, полученных из модельного раствора синовиальной жидкости // Вестн. Ом. ун-та. 2012. № 4. С. 109-113.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.