Научная статья на тему 'Изучение эффектов гептапептида селанка на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс Вистар'

Изучение эффектов гептапептида селанка на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс Вистар Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
436
88
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
СЕЛАНК / ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ / НЕЙРОТРАНСМИТТЕРЫ / ДОФАМИН / SELANK / HPLC / NEUROTRANSMITTERS / DOPAMINE

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Клодт П. М., Кудрин В. С., Наркевич В. Б., Козловская М. М., Майский А. И.

С помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии изучено влияние синтетического аналога тафтсина гептапептида селанка на содержание моноаминов и их метаболитов в коре и подкорковых структурах (стриатум, прилежащее ядро, гипоталамус и гиппокамп) головного мозга крыс Вистар. Было обнаружено, что введение селанка вызывает увеличение содержания дофамина (ДА) в гиппокампе и снижает его в стриатуме. Уровень 3,4-диоксифенил-уксусной кислоты (ДОФУК) метаболита ДА статистически достоверно возрастал (на 300-400 % при дозе селанка 1 мг/кг) в коре и гиппокампе. Изменения концентрации гомованилиновой кислоты (ГВК) другого метаболита ДА также носили разнонаправленный характер. Если в гипоталамусе этот параметр дозозависимо снижался (более чем в 2 раза для дозы селанка 1 мг/кг), то в мегиппокампе он так же драматически увеличивался (на 250 % для той же дозы). На основании полученных данных выдвинуто предположение о том, что селанк, по-видимому, обладает некоторой селективностью в отношении мезокортикальной дофаминергической системы мозга.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Клодт П. М., Кудрин В. С., Наркевич В. Б., Козловская М. М., Майский А. И.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

The study of the effects of heptapeptide Selank on the neurotransmitter content in brain structures of Wistar rats

Selank, Trh-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, was shown to reveal a unique psychopharmacological profile, being resistant to enzymatic degradation. The aim of the present work was to study the effects of heptapeptide Selank on the neurotransmitter content in brain structures of Wistar rats. The levels of monoamines and its metabolites were measured by HPLC/ED techniques. Dopamine (DA) levels were found to increase in dose-dependent manner in hippocampus and to diminish in the striatum. Dramatic rise in DA metabolite dioxyphenylacetic acid (DOPAC) content (300-400 % for 1 mg/kg dose) was shown in FC and hippocampus. Concentrations of homovanillic acid (HVA), the other DA metabolite, changed in a more complex manner, while it decreased in hypothalamus, the drastic rise of this parameter in FC (80 % for 0,25 mg/kg dose) and hippocampus (250 % for the 1 mg/kg dose) was detected. The results obtained lead us to suggest that Selank exerts complex effects preferentially on brain mesocortical DA-ergic neurotransmitters and to less extent on serotonergic system.

Текст научной работы на тему «Изучение эффектов гептапептида селанка на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс Вистар»

ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ

© П.М. КЛОДТ, В.С. КУДРИН, В.Б. НАРКЕВИЧ,

М.М. КОЗЛОВСКАЯ, А.И. МАЙСКИЙ, К.С. РАЕВСКИЙ; 2005

НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН, Москва

ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТОВ ГЕПТАПЕПТИДА СЕЛАНКА НА СОДЕРЖАНИЕ МОНОАМИНОВ И ИХ МЕТАБОЛИТОВ В СТРУКТУРАХ МОЗГА КРЫС ВИСТАР

Резюме

Изучено влияние синтетического аналога тафтсина — гептапептида селанка — на содержание моноаминов и их метаболитов в коре и подкорковых структурах (стриатум, прилежащее ядро, гипоталамус и гиппокамп) головного мозга крыс Вистар. На основании полученных данных выдвинуто предположение о том, что селанк, по-видимому, обладает некоторой селективностью в отношении мезокортикальной дофаминергической системы мозга.

Ключевые слова

селанк; жидкостная хроматография; нейротрансмиттеры; дофамин

ВВЕДЕНИЕ

В последние десятилетия уделяется значительное внимание изысканию лекарственных средств анксиолитического действия, лишенных недостатков соединений, использующихся в клинической практике в настоящее время. Известно, что в терапии тревожных состояний широко применяются соединения бензодиазепинового ряда, серьезным недостатком которых является развивающаяся при их длительном применении лекарственная зависимость [1].

В связи с этим, одним из приоритетных направлений психофармакологии является поиск и создание веществ, обладающих высоким анксиолитическим потенциалом, но не вызывающих побочных эффектов. Среди таких соединений значительный интерес представляют синтетические аналоги или фрагменты эндогенных нейротроп-ных пептидов, способные оказывать выраженное нейропсихотроп-ное воздействие [9, 16].

Одним из таких веществ является эндогенный регуляторный тет-рапептид тафтсин (ТЬг-Ьу8-Рго-Лг§), обладающий иммуномодули-рующим эффектом [14], а также широким спектром фармакологической (в т.ч. психотропной) активности [17]. С другой стороны, ней-ротропное действие тафтсина кратковременно, а само соединение неустойчиво к действию внешних и внутренних факторов.

На основе модификации структуры молекулы тафтсина был синтезирован гептапептид пролонгированного действия селанк (Институт молекулярной генетики РАН) [5]. Молекула селанка содержит тетра-пептид тафтсин и три левовращающих аминокислоты — Рго-Оу-Рго. Селанк отличается устойчивостью и высокой биодоступностью при различных способах введения [8, 10].

Расширенное фармакологическое изучение селанка, выполненное в НИИ фармакологии РАМН, позволило охарактеризовать данное соединение как препарат с уникальным спектром психофармакологической активности, обладающий как анксиолитическими, так и психостимулирующими свойствами [4, 12, 15]. Было также показано, что данное соединение положительно влияет на когнитивные и мнести-ческие функции [12]. Центральное действие селанка связывают с изменением баланса моноаминов в эмоциогенных структурах мозга, а также с модуляцией активности фермента биосинтеза катехолами-нов тирозингидроксилазы [6, 11]. Высказывается предположение о том, что психотропный эффект селанка может быть связан с его спо

собностью ингибировать ферменты деградации эн-кефалинов, обеспечивая тем самым накопление последних [2].

В то же время, нейрохимические механизмы психотропного действия селанка до настоящего времени остаются малоизученными. Данные о влиянии соединения на биохимические процессы в структурах мозга фрагментарны и получены при изучении малых доз селанка, вызывающих анксиолитическое действие, тогда как стимулирующие эффекты больших доз препарата не исследовались.

Предпринимались попытки исследования содержания моноаминов и их метаболитов при введении селанка, однако для определения указанных нейрохимических параметров были использованы гомоге-наты целого мозга [11].

В связи с этим, целью данной работы являлось изучение влияния различных доз селанка на концентрацию моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимической детекцией (ВЭЖХ/ЭД).

МЕТОДИКА

В эксперименте были использованы 21 крыса-самец линии Вистар массой 180—220 г. Селанк растворяли в физиологическом растворе и вводили однократно внутрибрюшинно.

Были выбраны дозы 0,25 мг/кг и 1 мг/кг, поскольку имеются сведения о том, что селанк в первой из этих доз обладает анксиолитическими свойствами, а в дозе 1 мг/кг проявляет психостимулирующий эффект [1].

Забой животных осуществлялся через 1 час после инъекции селанка. Структуры мозга (фронтальная кора (ФК), гиппокамп, гипоталамус, стриатум и прилежащее ядро (ПЯ)) извлекались на льду и замораживались в жидком азоте.

Перед экспериментами по определению содержания нейротрансмиттеров пробы размельчали в ручном гомогенизаторе (тефлон-стекло) в 20 объемах 0,1 н HCIO. с добавлением диоксибензила-мина (0,5 нмоль/мл) в качестве внутреннего стандарта.

Пробы центрифугировали при 10 000 g в течение 10 минут. Содержание моноаминов и их метаболитов определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимической детекцией (ВЭЖХ/ЭД) на хроматографе LC-304T (BAS, West Lafayette, США) с аналитической колонкой Phenomenex (C18, 4 х 150 мм, 4 мкм) [7].

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием t-критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Было обнаружено, что введение селанка вызывает разнонаправленные изменения содержания ней-ротрансмиттеров в различных структурах мозга. Так, если в гиппокампе данный пептид вызывал дозоза-висимое увеличение содержание дофамина (ДА) (табл. 5), то в стриатуме наблюдалась обратная картина — содержание ДА при увеличении дозы снижалось (табл. 2). В то же время, следует отметить, что описанные эффекты не достигали статистической достоверности и отмечались лишь на уровне тенденции. Уровень 3,4-диоксифенилуксусной кислоты (ДОФУК) — одного из основных метаболитов ДА — статистически достоверно возрастал (на 300—400 % при дозе селанка 1 мг/кг) в ФК (табл.4) и гиппокампе (табл. 5). Следует отметить, что наблюдавшееся нами увеличение содержания ДОФУК в ФК не сопровождалось одновременным снижением концентрации норадреналина (НА) в той же структуре, что не согласуется с выдвинутым предположением о ре-ципрокном характере изменений уровня этих нейро-трансмиттеров [11]. В то же время, необходимо указать, что работа этой группы исследователей была выполнена на гомогенатах целого мозга и измерения нейрохимических показателей проводились флуори-метрическим методом, а не с помощью более чувствительной методики ВЭЖХ/ЭД. Полученные нами результаты согласуются с данными о том, что введение трициклического антидепрессанта иприндола вызывало сходный подъем концентрации ДОФУК в ФК [13], подтверждая, таким образом, предположение о наличии в спектре фармакологического действия селанка антидепрессивной компоненты [3].

Изменения концентрации гомованилиновой кислоты (ГВК) — другого метаболита ДА — также носили разнонаправленный характер. Если в гипоталамусе (табл. 1) величина этого параметра дозоза-висимо снижалась (более чем в 2 раза для дозы селанка 1 мг/кг), то в гиппокампе он так же драматически увеличивался (на 250 % для той же дозы) (табл. 5). Следует отметить, что подобная картина наблюдалась в ФК и ПЯ, в которых доза пептида 0,25 мг/кг вызывала прямо противоположные изменения: при этом уровень ГВК в ФК увеличивался на 70 % (табл.4), тогда как в ПЯ он снижался примерно на треть (табл. 3). Содержание серотонина (5-ОТ) значимо не изменялось ни в одной из изу-

Таблица 1

Влияние селанка на содержание моноаминов и их метаболитов в гипоталамусе крыс Вистар

Препарат НА ДА ДОФУК гвк 5- 5- / / 5- / 5-

Контроль 100,0 ± 4,2 100,0 ± 8,0 100,0 ± 9,1 100,0 ± 20,0 100,0 ± 4,0 100,0 ± 5,6 100,0 ± 12,0 100,0 ± 25,9 100,0 ± 7,1

Селанк 0,25 / 101,7 ± 3,2 111,5 ± ± 14,7 87,7 ± 5,3 102,2 ± 15,0 105,0 ± 4,4 107,5 ± 3,6 99,7 ± 7,6 104,0 ± 22,1 94,3 ± 5,9

Селанк 1,0 мг/ 102,9 ± 3,0 89,2 ± 5,8 104,8 ± 5,0 44,3 ± 5,8 * 104,8 ± 3,7 93,8 ± 4,3 121,1 ± 5,0 49,4 ± 6,1 88,2 ± 6,2

Таблица 2

Влияние селанка на содержание моноаминов и их метаболитов в стриатуме крыс Вистар

Препарат НА ДА ДОФУК ГВК 5- 5- / / 5- / 5-

Контроль 100,0 ± 6,0 100,0 ± 3,2 100,0 ± 4,0 100,0 ± 10,0 100,0 ± 1,8 100,0 ± 8,6 100,0 ± 1,8 100,0 ± 8,4 100,0 ± 4,7

Селанк 0,25 мг/ 95,0 ± 7,1 93,8 ± 2,5 90,7 ± 2,7 94,1 ± 5,7 97,8 ± 2,5 85,0 ± 3,1 96,8 ± 2,0 100,9 ± 5,7 87,2 ± 4,0

Селанк 1,0 мг/ 110,7 ± 8,2 89,4 ± 5,9 87,1 ± 4,1 92,9 ± 7,2 83,9 ± 4,2 84,0 ± 2,8 94,7 ± 4,5 106,1 ± 7,9 105,9 ± 6,0

Таблица 3

Влияние селанка на содержание моноаминов и их метаболитов в прилежащем ядре крыс Вистар

Препарат НА ДА ДОФУК ГВК 5- 5- / / 5- / 5-

Контроль 100,0 ± 9,7 100,0 ± 6,9 100,0 ± 5,4 100,0 ± 9,9 100,0 ± 4,6 100,0 ± 6,8 100,0 ± 4,6 100,0 ± 13,0 100,0 ± 8,0

Селанк 0,25 мг/ 118,4 ± ± 17,2 90,4 ± 5,4 89,7 ± 5,0 74,4 ± 3,9* 101,8 ± 4,2 92,1 ± 3,0 98,4 ± 2,6 80,4 ± 3,0 90,4 ± 4,8

Селанк 1,0 мг/ 111,2 ± ± 10,0 98,9 ± 3,1 98,8 ± 5,6 87,6 ± 9,1 98,6 ± 5,5 94,0 ± 4,6 98,7 ± 4,8 84,9 ± 7,8 96,3 ± 7,6

Примечание: * — достоверность различий по сравнению с контролем при р < 0,05; ** — достоверность различий по сравнению с контролем при р < 0,001 ^-критерий Стьюдента).

ченных структур, за исключением стриатума, в ко- лось снижение величины этого нейрохимического тором при введении дозы селанка 1 мг/кг наблюда- параметра примерно на 20 % (табл.2). Сходная,

Таблица 4

Влияние селанка на содержание моноаминов и их метаболитов во фронтальной коре мозга крыс Вистар

Препарат НА ДА ДОФУК гвк 5- 5- / / 5- / 5-

Контроль 100,0 ± 2,6 100,0 ± 5,6 100,0 ± ± 22,1 100,0 ± 13,0 100,0 ± 2,9 100,0 ± 4,6 100,0 ± 30,3 100,0 ± 14,7 100,0 ± 4,9

Селанк 0,25 мг/ 97,6 ± 3,3 84,5 ± 6,7 136,3 ± ± 18,2 188,1 ± ± 27,2 * 99,7 ± 4,5 98,5 ± 5,3 134,7 ± 23,8 188,0 ± ± 28,5 * 100,6 ± 9,0

Селанк 1,0 мг/ 95,1 ± 3,7 108,4 ± ± 14,3 200,4 ± ± 29,8 * 125,7 ± 34,9 97,1 ± 2,6 105,6 ± 5,7 167,2 ± 37,3 124,7 ± 50,1 108,7 ± 6,1

Таблица 5

Влияние селанка на содержание моноаминов и их метаболитов в гиппокампе крыс Вистар

Препарат НА ДА ДОФУК ГВК 5- 5- / / 5- / 5-

Контроль 100,0 ± ± 10,4 100,0 ± ± 43,8 100,0 ± ± 26,1 100,0 ± 25,7 100,0 ± 9,8 100,0 ± 5,2 100,0 ±43,0 100,0 ± 11,0 100,0 ± 7,1

Селанк 0,25 мг/ 112,5 ± 9,3 125,8 ± ± 12,3 171,9 ± ± 61,9 131,7 ± 14,6 105,0 ± 7,2 93,6 ± 2,3 93,3 ± 38,9 123,9 ± 21,0 81,5 ± 7,5

Селанк 1,0 мг/ 121,0 ± 8,3 162,8 ± ± 39,7 351,8 ± ± 43,8 ** 249,5 ± ± 40,4 * 113,2 ± 10,7 97,3 ± 6,2 168,4 ± 62,9 295,2 ± ± 110,1 87,0 ± 12,6

Примечание: приведены средние значения и стандартные ошибки (М ± m). Значимость отличий: * — достоверность различий по сравнению с контролем при р< 0,05; ** — при р < 0,001 ^-критерий Стьюдента).

однако статистически недостоверная тенденция наблюдалась также в ФК. Уровень метаболита 5-ОТ— 5-оксииндолуксусной кислоты (5-ОИУК) — ни в одной из структур сколько-либо значимых изменений не претерпевал. Аналогичным образом не изменялось ни в одном из функциональных образований мозга и соотношение ДОФУК/ДА, характеризующее скорость кругооборота ДА. Показатель ГВК/ДА понижался в ФК, что может свидетельствовать об угнетающем влиянии малых (анк-сиолитических) доз селанка на метаболизм ДА. С другой стороны, в остальных изученных структурах мозга влияния гептапептида на данный показатель обнаружено не было.

Что касается соотношения 5-ОИУК/5-ОТ, свидетельствующего о скорости биодеградации серото-нина, то следует отметить, что величина этого параметра не изменялась практически во всех структу-

рах, за исключением стриатума, в котором этот показатель незначительно, но статистически достоверно снижался при введении селанка в дозе 0,25 мг/кг.

В целом, полученные нами результаты опытов в мозге отражают сложный комплексный характер действия селанка на дофаминергические структуры, в том числе и мезолимбические (гипоталамус, гип-покамп). Последние, как известно, являются, эмо-циогенными и отвечают за развитие тревожных состояний. Нельзя исключать также задействованнос-ти в фармакологическом ответе некоторых других нейромедиаторных систем, в частности, аминоацид-и гистаминергической, изучение которых представляется весьма перспективным для более глубокого понимания механизмов психотропных механизмов действия.

Работа поддержана грантом РФФИ № 04-0448083.

ЛИТЕРАТУРА

988 1. Вальдман А.В. Модулирующее действие коротких пептидов на моноаминергические процессы мозга как основа их психотропного эффекта // Вопр. мед. химии. — 1984.— Т. 30. — С. 36-63.

2. Зозуля А.А. и др. Ингибирующее действие селанка на энкефалин- деградирующие ферменты как возможный механизм его анксиолитической активности // Бюлл. эксперим. биол. и мед. — 2001. — Т. 131, № 4. — С. 315-317.

3. Козловская М.М., Саркисова К.Ю., Козловский И.И. Влияние гептапептида селанка на депрессию поведения высоко- и низкотревожных мышей Balb/c и C57BI/6 и крыс с наследуемой депрессивностью поведения WAG/Rij // Психофармакол. биол. наркол. — 2005. — Т. 5, № 1. — С. 939-945.

4. Козловская М.М., и др. Сравнительное изучение фрагментов тафтсина на показатели условной реакции пассивного избегания // Хим.-фарм. журн. — 2001. — Т. 35, № 6. — С. 3-6.

5. Козловская М.М. и др. Сравнительный анализ структурно-функциональных особенностей пептидного препарата селанка // Психофармакол. биол. наркол. — 2002. — Т. 2, № 1-2. — С. 203-210.

6. Минеева М.Ф. Физиологические основы регуляции тирозингидроксилазы // Нейрохимическая основа психотропного эффекта. — М.: НИИ фармакологии АМН СССР, 1982. — С. 53-57.

7. Мирошниченко И.И., Кудрин В.С., Раевский К.С. Влияние карбидина, сульпирида и галоперидола на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах головного мозга крыс // Фармакол. и токсикол. — 1988. — Т. 51, № 2. — С. 26-29.

8. Незнамов Г.Г., Телешова Е.С., Бочка-рева В.К. Результаты клинико-фарма-кологических исследований пептидного препарата селанка в качестве анксиоли-

тического средства // Тер. псих. забол. — 2002. — С. 28-36.

9. Семенова Т.П. и др. Влияние тафтсина и его аналогов на обучение, память и исследовательское поведение крыс // Журн. высш. нервн. деят. — 1988. — Т. 38, № 6. — С. 1033-1037.

10. Середенин С.Б. и др. Изучение противо-тревожного действия аналога эндогенного пептида тафтсина на инбредных мышах с различным фенотипом эмоционально-стрессовой реакции // Журн. высш. нервн. деят. — 1998. — Т. 48, № 1. — С. 153-161.

11. Середенин С.Б. и др. Роль серотонинер-гического компонента в форми-ровании противотревожного действия синтетического аналога тафтсина // Эксперим. и клин. фармакол. — 1995. — Т. 58, № 6. — С. 3-6.

12. Середенин С.Б. и др. Сравнительное изучение гептапептида ГП-7 и его лекарственной формы на обучение, память и исследовательское поведение крыс с интактной и разрушенной катехоламинер-гической системой // Хим.-фарм. журн. — 1996. — Т. 30. — С. 12-14.

13. Berretera C. et al. Chronic treatment with iprindole reduces immobility of rats in the "despair" test by activating dopaminergic mechanisms in the brain // J. Pharm. Pharmacol. —1986. — Vol. 38. — P. 313-315.

14. Fridkin M., Najjar V. Tuftsin: its chemistry, biology, and clinical potential // Critical Rev. in Biochem and Molec. Biol. — 1989. — Vol. 24. — P. 1-40.

15. Kozlovskaya М.М. et al. Selank — the novel anxiolytic of peptide nature with the unique range of psychotropic activity // J. Eur. Neuropsychopharmacol. — 2000. — Vol. 10, Suppl. 2. — P. 70-71.

16. Roques B.P. Novel approaches to targeting neuropeptide systems // Trends Pharmacol. Sci. — 2000. — Vol. 21. — P. 475-483.

17. Wang J., Tsirka S. Tuftsin fragment 1-3 is beneficial when delivered after the induction of intracerebral hemorrhage // Stroke. — 2005. — Vol. 36. — P. 613-615.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.