CC BY
62
УДК 615.451.16
ИЗУЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ЖИДКИХ ЭКСТРАКТОВ ИЗ ROSA CANINA FRUCTUS И ARONIA MELANOCARPA FRUCTUS Затолгутская К.А., Кисилёва А.Н., Коган Е.Г. Научный руководитель — к.ф.н., доцент Кисилёва А.Н.
Смоленский государственный медицинский университет, Россия, 214019, Смоленск, ул. Крупской, 28.
goldenlira07@mail.ru - Затолгутская Ксения Александровна
Резюме. При изучении антиоксидантной активности жидких экстрактов из Rosa canina fructus, Aronia melanocarpa fructus и их композиции методом электронного парамагнитного резонанса наиболее выраженные антиоксидантные свойства выявлены у 50% экстракта из Rosa canina fructus. Экстракты были получены методом ускоренной дробной мацерации. Следует отметить, что 50% суммарный экстракт также обладал сильными антиоксидантными свойствами. Этиловый спирт 50% концентрации обеспечивает более высокую концентрацию природных антиоксидантов в экстракте, т.е. является более оптимальным экстрагентом, чем 70% этанол.
Ключевые слова: антиоксидантная активность, жидкие экстракты, Rosa canina fructus, Aronia melanocarpa fructus, электронный парамагнитный резонанс.
THE STUDY OF ANTIOXIDANT ACTIVITY OF ROSA CANINA FRUCTUS AND ARONIA MELANOCARPA FRUCTUS LIQUID EXTRACTS ZatolgutskaiaK.A., Kisilyova A.N., Kogan E.G.
Scientific advisor — Assistant Professor Kisilyova A.N., Candidate of Pharmacy
Smolensk State Medical University, 28, Krupskoy St., Smolensk, 214019, Russia Abstract. In the study of antioxidant activity of Rosa canina fructus, Aronia melanocarpa fructus and their composition liquid extracts with electron paramagnetic resonance method it was established that 50% of extract from Rosa canina fructus had the most expressed antioxidant properties. The extracts were obtained with dynamic fractional maceration. It should be noted that 50% summing extract had also strong antioxidant properties. Ethanol of 50% concentration provided higher concentration of natural antioxidants in the extract, i.e. 50% ethanol is a more optimal extracting agent than 70% ethanol.
Key words: antioxidant activity, liquid extracts, Rosa canina fructus, Aronia melanocarpa fructus, electron paramagnetic resonance.
Введение. Свободные радикалы имеют большое значение для организма человека. При многих заболеваниях наблюдается дисбаланс между
содержанием свободных радикалов и субстанций, для уничтожения которых они необходимы. Данная ситуация требует применения антиоксидантов, которые обладают способностью «гасить» свободно-радикальные частицы.
Действующие вещества растений Rosa canina и Aronia melanocarpa представлены, в частности, флавоноидами - классом соединений, которые в зависимости от концентрации могут проявлять как антиоксидантные, так и прооксидантные свойства.
Целью данного исследования является сравнительная оценка
антиоксидантной активности жидких экстрактов из Rosa canina fructus, Aronia melanocarpa fructus и их композиции с применением метода электронного парамагнитного резонанса (ЭПР).
Методика. Жидкие экстракты представляют собой водно-спиртовые извлечения в соотношении сырья и готового экстракта 1:1. В качестве лекарственного растительного сырья (ЛРС) - плоды Rosa canina, плоды Aronia melanocarpa и их комбинация (в соотношении 1:1); производитель ООО «Беловодье». В качестве экстрагента был использован спирт этиловый различной концентрации: 50% и 70%. Способ
экстракции - ускоренная дробная мацерация методом противотока с последующим отстаиванием готовых экстрактов в течение 2-х суток при температуре не выше 10°С и фильтрованием.
Изучение антиоксидантной
активности полученных жидких экстрактов проводилось с помощью метода ЭПР-спектроскопии с
использованием тестового реагента - 1,1-дифенил-1-пикрилгидразила (ДФПГ) и ЭПР-спектрометра, работающего в X-диапазоне (диапазон частот
сантиметровых длин волн), с частотой 9,4 ГГц.
Реакция ДФПГ с антирадикальными антиоксидантами происходит по последовательно-параллельному механизму. На первом этапе (лимитирующая стадия реакции) молекула антиоксиданта отдаёт радикалу самый подвижный атом водорода:
ДФПГ^ + АН ^ ДФПГ-Н + А^. (1)
На втором этапе образовавшийся в реакции (1) радикал антиоксиданта атакует новую молекулу ДФПГ в пара-положении фенильного заместителя:
Измерения осуществлялись по методике, предложенной кафедрой физической химии фармацевтического факультета Варшавского медицинского университета:
1. Разбавление (минимальное количество -50 мкл) образца дистиллированной водой. Разведение должно быть таким, чтобы после смешивания 20 мкл разбавленного образца с 100-200 мкл раствора радикала концентрация радикала уменьшилась, но сохранилась возможность её определения.
2. Добавление раствора ДФПГ (около 1,3 мМ, что эквивалентно 0,5 мг/мл, в ацетоне или метаноле). Перемешивание раствора в течение 30 с.
3. Выдержка полученной реакционной смеси в тёмном месте в течение 20 минут, перемешивание ещё несколько раз.
4. Запись ЭПР-спектров.
5. Расчёт количества прореагировавших радикалов за счёт уменьшения интенсивности ЭПР-сигнала, рассчитанной как двойной интеграл спектра, путём сравнения со стандартом (100 мкл дистиллированной воды с 375 мкл раствора радикала). Все измерения проводятся 3 раза.
А^ + ДФПГ^ ^ А - ДФПГ. (2) [1].
Расчёт количества прореагировавшего ДФПГ производился по следующей формуле:
_ СдФПП X ^ДФПГ . ^образца
ТПдФПГ
с
ДФПГ1
образца
)хс
стандарта
ДФПГ:
где ШдфПГ - количество прореагировавшего ДФПГ, мг/мл; УдфПГ - объём добавленного ДФПГ, мкл; УпЛппъш - объём исследуемого образца, мкл;
образца образца
- интенсивность исследуемого образца;
'стандарта - интенсивность стандарта; Сдфпг - концентрация ДФПГ, мг/мл.
Статистическая обработка
полученных результатов проводилась при помощи компьютерной программы STATGRAPHICS Plus 5.0. Доверительная
вероятность принималась равной 95%. Объём выборки для каждого образца - 3.
Результаты исследования и их обсуждение. Результаты исследования представлены в таблице 1.
Таблица 1. Результаты измерения антиоксидантной активности жидких экстрактов из Rosa canina fructus, Aronia melanocarpa fructus и их композиции методом ЭПР-спектроскопии
Исследуемый образец Количество прореагировавшего 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила, мг/мл
50% экстракт из Rosa canina fructus 328,51±25,81
70% экстракт из Rosa canina fructus 152,29±40,47
50% экстракт из Aronia melanocarpa fructus 140,62±69,59
70% экстракт из Aronia melanocarpa fructus 30,02±10,56
50% экстракт из Rosa canina fructus+ Aronia melanocarpa fructus 203,67±30,99
70% экстракт из Rosa canina fructus+ Aronia melanocarpa fructus 77,53±10,01
Заключение. Антиоксидантная активность жидких экстрактов из Rosa canina fructus в обеих концентрациях превосходит таковую для жидких экстрактов из Aronia melanocarpa fructus. Возможная причина подобных различий заключается в том, что одним из действующих веществ Rosa canina является аскорбиновая кислота - мощный природный антиоксидант. Следует отметить, что 50% суммарный экстракт также обладает выраженными
антиоксидантными свойствами. При сравнении 50% и 70% концентрации отдельно для Rosa canina fructus и отдельно для Aronia melanocarpa fructus можно сделать вывод, что этиловый спирт 50% концентрации обеспечивает более высокую концентрацию природных антиоксидантов в экстракте, т.е. является более оптимальным экстрагентом.
Литература
1. Волков В.А., Дорофеева Н.А., Пахомов П.М. Кинетический метод анализа антирадикальной активности экстрактов растений // Химико-фармацевтический журнал. -2009. - № 6 (49). - С. 27-31.
Интерпретировать полученные данные необходимо следующим образом: чем большее количество ДФПГ прореагировало с исследуемым образцом, тем больше образец содержит природных антиоксидантов, следовательно, тем сильнее выражены антиоксидантные свойства у данного экстракта.
Таким образом, исследуемые образцы по мере уменьшения антиоксидантной активности можно расположить в следующей
последовательности: 50% экстракт из Rosa canina fructus - 50% экстракт из Rosa canina fructus + Aronia melanocarpa fructus
- 70% экстракт из Rosa canina fructus -50% экстракт из Aronia melanocarpa fructus
- 70% экстракт из Rosa canina fructus + Aronia melanocarpa fructus - 70% экстракт из Aronia melanocarpa fructus.
