Исследование эритроцитов методом РЭМ у детей с микро- и макрогематурическим синдромом Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

Современная медицина: актуальные вопросы www.sibac.info________________________________

СибАК

№ 12 (44), 2015 г.

1.3. ПЕДИАТРИЯ

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭРИТРОЦИТОВ МЕТОДОМ РЭМ У ДЕТЕЙ С МИКРО- И МАКРОГЕМАТУРИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ

Мунхалова Яна Афанасьевна

канд. мед. наук, доцент, зав. кафедрой педиатрии и детской хирургии, Медицинский институт, Северо-Восточный федеральный

университет им. М.К. Аммосова РФ, г. Якутск E-mail: tokmacheva@mail. ru

Мамаева Саргылана Николаевна

канд. физ.-мат. наук, доцент, кафедра общей и экспериментальной физики, Физико-технический институт, Северо-Восточный федеральный университет им. М.К. Аммосова

РФ, г. Якутск E-mail: sargylana mamaeva@mail.ru

Шейкин Иннокентий Юрьевич

студент, Отделение педиатрии, Медицинский институт, Северо-Восточный федеральный

университет им. М.К. Аммосова РФ, г. Якутск E-mail: tipakeka@mail. ru

55

ifC СибАК

Современная медицина: актуальные вопросы www.sibac.info_______________________________________№12 (44), 2015г.

RESEARCH OF ERYTHROCYTE BY SEM OF CHILDREN WITH MICRO- AND MACROHAEMOTURIA SYNDROME

Yana Munhalova

candidate of Science, Head of pediatric and children surgery, Medical Institute, associate professor of North-Eastern Federal University,

Russia, Yakutsk

Sargylana Mamaeva

candidate of Science, Department of General and Experimental Physics, Institute of Physics and Technologies, associate professor of North-Eastern Federal University, Russia, Yakutsk

Innokentiy Sheykin

student, Pediatrics, Medical Institute, North-Eastern Federal University,

Russia, Yakutsk

АННОТАЦИЯ

Исследовались мазки крови и мочи детей проживающих в Республике Саха (Якутия) с макрогематурическим синдромом методом растровой электронной микроскопии. Где на снимках были обнаружены изменения их структур и частицы нанометровых размеров, соответствующие малым вирусам, что подтверждает вирусную этиологию гломерулонефритов.

ABSTRACT

Studied smears of blood and urine of children, which live in republic of Sakha (Yakutia) with the macrohematuria syndrome by scanning electron microscopy. Where were found changes in their structures and nanometersized particles, which correspond to small viruses, confirming the viral etiology of glomerulonephritis.

Ключевые слова: Педиатрия; нефрология; эритроциты.

Keywords: Pediatrics; nephrology; erythrocytes.

Гематурия является основным симптом в ряде заболеваний мочевыделительной системы таких как острый гломерулонефрит, капилляротоксический гломерулонефрит, гемаррогический васкулит и др. В свою очередь в группе заболеваний почек и мочевыводящих путей гломерулонефрит занимает 3-4 место [4]. И данное заболевание является основной причиной, приводящая к хроническому диализу.

56

((Г СибАК

Современная медицина: актуальные вопросы

www.sibac.info________________________________________№ 12 (44), 2015г.

Отдельно следует выделить IgA-нефропатию, т.к. ее этиология и патогенез еще недостаточно изучены. Болезнь Берже является широко распространенной формой первичного гломерулонефрита и характеризуется повторяющимися эпизодами макроскопической гематурии, которая обычно связана с инфекцией слизистых оболочек верхних дыхательных путей (или инфекцией другой локализации), или бессимптомной микроскопической гематурией с протеинурией или без нее [2].

По мнению Дж. Фиихали и Дж. Камерона IgA-нефропатия характеризуется тремя важнейшими ее проявлениями - клиническим синдромом повторной гематурии, гистологическим появлением фокального или мезангиального нефрита и иммуногистохимическим выявлением депозитов IgA [5]. Частота данного заболевания оценивается как 5 случаев на 100 000 населения, которая впоследствии может привести к хронической почечной недостаточности. Было выявлено, что в США ее распространенность варьирует от 2-10 %, тогда как в Азии до 50 % (в Японии 18-40 %) [6].

При анализе данных по этнической принадлежности было выявлено, что все наблюдаемые дети с гематурическим синдромом были азиатской расы, с преобладанием коренных национальностей -95 % (саха, эвенки, эвены). Из них 57 % - мальчики, 43 % - девочки. У детей с гематурическим синдромом выявлено наличие цитомегало-вируса у 47 %, вируса простого герпеса у 24 % и отсутствие данных вирусов у 29 % [1,3]. Также из анамнеза было выяснено, что дети переболели ОРВИ 100 % и ветряной оспой 80 %.

Впервые методом растровой электронной микроскопии изучить биологические материалы детей с наиболее часто диагностируемыми вариантами гематурического синдрома у детей Республики Саха (Якутия), такими как смешанный нефротический синдром, геморрагический васкулит, IgA-нефропатия (болезнь Берже).

В качестве объекта для исследования использовались мазки крови и мочи детей, поступивших в нефрологическое отделение Республиканской больницы № 1 - Национального центра медицины города Якутска с симптомами макрогематурии, на электронном сканирующем микроскопе. Исследования проводили на растровом электронном микроскопе (РЭМ) JSM-7800F фирмы JEOL.

Модель JSM-7800F имеет термополевой эмиссионный катод Шоттки и супергибридную объективную линзу. Супергибридная объективная линза позволяет значительно уменьшить хроматические и сферические аберрации, что позволяет существенно улучшить разрешение, особенно при малых ускоряющих напряжениях.

57

ifC СибАК

Современная медицина: актуальные вопросы www.sibac.info__________________________________________№12 (44), 2015г.

Микроскоп оборудован 4-мя типами детекторов: верхний детектор электронов, верхний детектор вторичных электронов, детектор обратно отраженных электронов и нижний детектор вторичных электронов.

Исследования проводили при напряжении от 0.1 кВ до 30 кВ. Микроскоп имеет пространственное разрешение 1.2 нм при 1 кВ, 0.08 нм при 15 кВ и диапазон увеличения от 25x до 1,000,000x. Максимальный размер образца для измерения может иметь диаметр до 200 мм. Исследования проводились при ускоряющем напряжении 1 кВ и 2 кВ с подачей напряжения на исследуемый объект от 8 до 10 В. Измерения были проведены нижним детектором вторичных электронов. Выбор такого режима измерения позволил проводить исследования без напыления проводящих покрытий и без повреждения исследуемого объекта. Исследования мазков мочи и крови на растровом электронном микроскопе проводилось без нанесения проводящего напыления.

Первичным исследованием мазков было проведение исследований с помощью оптической микроскопии. Такое исследование позволяет на предварительном этапе сделать выборку более информативных объектов и позволяет уменьшить временные и ресурсные затраты.

По результатам проведенных исследований, нами было выявлено, что самые IgA-нефропатия (болезнь Берже), высокие показатели частоты стойкого гематурического синдрома отмечались в возрастные периоды, от 6 до 8 лет и от 14 до 15 лет. И самая низкая частота встречаемости стойкого гематурического синдрома отмечалась у детей в возрасте от 10 месяцев до 3 лет. Гематурия встречалась с одинаковой частотой у мальчиков и девочек. Нами были проведены исследования мазков крови и мочи детей с симптомами макрогематурии, на растровом электронном микроскопе (РЭМ) JSM-7800F фирмы JEOL.

При IgA-нефропатии наблюдаются нарушения поверхности эритроцита, где присутствуют множество ямок с плоским дном и наряду с ними наблюдаются светящиеся объекты нанометровых размеров. На фоновой поверхности также наблюдается много светящихся объектов с нанометровыми размерами. Размеры этих объектов сравнимы с размерами вирусов малых размеров. Типичными объектами в рассмотренных мазках мочи при нефротическом синдроме являлись эритроциты и «кристаллиты». Было видно, что эритроцит находится на фоне множества мелких вытянутых зернообразных образований длинной примерно 1.5 мкм и шириной примерно 0.3 мкм, между которыми видны ниткообразные объекты.

58

((Г СибАК

Современная медицина: актуальные вопросы

www.sibac.info___________________________________________№ 12 (44), 2015г.

Предположительно эти объекты представляют собой бактериальные биопленки.

Проведенные на РЭМ исследования мазков мочи и крови детей с синдромом гематурии, показали, что кроме дисморфных

эритроцитов наблюдается наличие сопутствующих объектов

нанометровых размеров, сопоставимые с размерами малых вирусов,

что может подтвердить предположения о вирусном этиологическом факторе в возникновении гематурии у детей. Для подтверждения этого предположения необходимо проведение дополнительных исследований.

Список литературы:

1. Горохова А.В., Мунхалова Я.А. Результаты морфологического исследо-

вания биоптатов почек у детей с хроническими нефропатиями в РС (Я) // Сборник научных трудов Ш съезда педиатров Дальневосточного

федерального округа, II съезда детских врачей РС (Я) «Современные проблемы педиатрии» (Якутск, 3-4 апреля, 2014 г.) / Под ред. проф. Н.В. Савиной. Киров: МЦНИП. 2014. - С. 116-122.

2. Папаян А.В., Соловьев А.А., Стяжкина И.С. IgA нефропатия (болезнь Берже у детей). Лекция. СПб.: издание ГПМА, 2001. - 34 с.

3. Мунхалова Я.А., Захарова Н.М., Горохова А.В. Особенности гломерулонефрита ассоциированного с герпес-вирусной инфекцией // Сборник трудов IV Конгресса с межд. участием «Экология и здоровье человека на Севере» (Якутск, 2013 г.) / Под ред. проф. Н.В. Савиной. Киров: МЦНИП. 2013. - С. 405-409.

4. Рябова С.И., Ракитянский И.А. Нефрология: руководство для врачей: в 2 т. /- Т. 1. Заболевание почек. - СПб. : СпецЛит, 2013. - 767 с.

5. Feehally J., Cameron J. S. IgA Nephropathy: Progress Before and Since Berger // American Journal of Kidney Diseases. 2011. Vol. 58(2). P. 310-319.

6. Hall YN, Fuentes EF, Chertow GM, Olson JL (2004) Race/ethnicity and disease severity in IgA nephropathy. BMC Nephrol 5:10.

59