CC BY
87
УДК 547.963.3
ИММУНОТРОПНАЯ АКТИВНОСТЬ МЫЛКОЙ АМФИФИЛЬНОЙ ВЫСОКОПОЛИМЕРНОЙ РНК ИЗ ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙ
Татьяна Витальевна ЯМКОВАЯ1, Ольга Петровна КОЛЕСНИКОВА2, Виталий Иванович ЯМКОВОЙ3, Владимир Александрович КОЗЛОВ2, Лев Евгеньевич ПАНИН3
1 ООО «Виталанг»
630055, г. Новосибирск, ул. Рубиновая, 4-128
2 ФГБУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН 630099, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14
3 ФГБУ НИИ биохимии СО РАМН 630117, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2
Исследована иммунотропная активность мылкой амфифильной высокополимерной РНК, выделенной из пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты. Обнаружено, что данный препарат дозозависимо увеличивает массу лимфоидных органов (тимуса и селезенки) у мышей, возрастает также среднее количество клеток в данных органах. Препарат индуцирует лейкоцитарную реакцию, дозозависимо стимулирует первичный (IgM) и вторичный (IgG) гуморальный иммунный ответ. Вместе с тем он оказывает иммунодепрессивное воздействие на выраженность клеточного иммунного ответа (дозозависимое подавление эффекторной фазы реакции гиперчувствительности замедленного типа и выраженное подавление фазы сенсибилизации в высокой дозе).
Ключевые слова: дрожжи, олеиновая кислота, высокополимерная РНК, иммунотропная активность РНК.
Рибонуклеиновые кислоты представляют собой важнейшие компоненты живой клетки. Помимо мажорных - рибосомальной, матричной и транспортной РНК - в клетке присутствуют весьма многочисленные виды минорных РНК, которые, как выяснилось, играют регуляторную роль в самых разнообразных клеточных процессах. В связи с этим исследование компонентов суммарной РНК представляет собой значительный интерес, особенно если учесть, что разные компоненты пула клеточных РНК могут влиять на различные процессы в клетке, так что может наблюдаться некоторый сочетанный эффект.
Ранее из дрожжей было выделено несколько различных препаратов РНК и исследована их биологическая активность. Натриевая соль низкополимерной дрожжевой РНК - Нуклеинат натрия -давно применяется в медицине при лечении пациентов с широким спектром заболеваний. Он обладает высокой биологической активностью, ускоряет процессы регенерации тканей, стиму-
лирует деятельность костного мозга и лейкопоэз; обладает активностью поликлонального иммуностимулятора, регулируя миграцию Т-лимфоцитов и процессы кооперации Т- и В-лимфоцитов. Ну-клеинат натрия относится к стимуляторам фагоцитарной активности макрофагов и продукции факторов неспецифической защиты [4]. На основе высокополимерной составляющей дрожжевой РНК разработан препарат - Полирибонат. Он также биологически активен, в частности, специфически стимулирует биосинтез белка в кроветворных и иммунокомпетентных органах [9]. Полирибонат обладает противовирусными свойствами, усиливает гемопоэз, является имму-номодулятором и адъювантом; в последнее время используется в ветеринарии [12]. В качестве индуктора интерферона используется двуспираль-ная РНК - Ридостин, выделяемая из киллерных штаммов дрожжей [5]. Полирибонат, Нуклеинат натрия и Ридостин состоят из гидрофильных молекул, хорошо растворимых в воде.
Ямковая Т.В. - к.б.н., директор, e-mail: yam_tv@mail.ru
Колесникова О.П. - д.м.н., зав. лабораторией экспериментальной иммунотерапии, e-mail: iscreen2001@mail.ru
Ямковой В.И. - д.б.н., проф. кафедры химии, e-mail: vitalang2@mail.ru
Козлов В.А. - д.м.н., проф., академик РАМН, директор, e-mail: iscreen2001@mail.ru
Панин Л.Е. - д.м.н., проф., академик РАМН, директор, e-mail: ibch@soramn.ru
Недавно нами было описано получение принципиально иной мылкой амфифильной высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей [14]. Предложенная технология основана на де-тергентном лизисе клеток дрожжей при повышенной температуре с помощью олеиновой кислоты. Препарат был назван Виталангом-2.
Основные характеристики препарата:
- растворимость в воде - удовлетворительная (в отличие от гидрофильного Полирибоната, растворяющегося в воде в течение нескольких секунд, препарат Виталанг-2 растворяется в воде только через 30-60 мин при периодическом перемешивании), водный раствор мылкий, нераство-ренные крупинки скользкие;
- весовая экстинкция, D260, 10-18,5 ед./мг; содержание КРФ < 10 %; прирост КРФ за 1 сут при 25 оС < 0,5 %; спектральные отношения: D230/D260 -0,25-0,55; D25JD2№ - 0,86-0,94; D^/D^ - 0,400,65.
Примесь прочно связанной олеиновой кислоты в препарате Виталанг-2 приводит к ухудшению его растворимости в воде. Однако можно было ожидать, что по этой же причине препарат будет обладать повышенной способностью проникать через биологические мембраны и поэтому проявлять более высокую биологическую активность.
Цель исследования - изучить в эксперименте иммуноактивные свойства высокополимерной РНК, выделенной из пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Исследования проведены на здоровых половозрелых мышах-гибридах (CBA х C57BL/6) F1 (CBF1) обоего пола в возрасте 10-12 недель и массой тела 22-23 г. Животные были получены из экспериментально-биологической клиники лабораторных животных СО РАМН (Новосибирск). До эксперимента и во время его проведения животных содержали в виварии в стандартных пластиковых клетках с мелкой древесной стружкой (не более 10 особей) на стандартном рационе. Исследования проводили в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [3] в одно и то же время суток (утром).
В работе были использованы: среда RPMI-1640 и раствор Хенкса (НПО «Вектор», Россия); физиологический раствор, содержащий фосфатный буфер с pH 7,4; эмбриональная сыворотка телят («BioClot GmbH», Германия); Hepes, 2-меркаптоэтанол, L-глутамин и конканавалин
А (ConA) («Sigma-Aldrich», США); гентами-цин (АО «Самсон», Россия); 3Н-тимидин («Изотоп», Россия); комплемент морской свинки (НПО «Биомед», Россия); парафин и воск. Для культивирования клеток селезенки использовали 96-лу-ночные круглодонные планшеты для культивирования Linbro («Flow Laboratories», США).
Лиофилизованный препарат Виталанг-2 получали, как описано в работе [10], стерилизовали по методу [11], растворяли в воде для инъекций, встряхивая суспензию 30-60 мин до полного растворения РНК, и вводили животным опытных групп в разных дозах в объеме 0,5 мл внутрибрю-шинно ежедневно в течение 5 дней. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили растворитель препарата (воду). Каждый эксперимент повторяли 2-3 раза, число наблюдений для группы контроля и опыта составляло не менее 10 животных.
Оценку иммуноактивных свойств Виталан-га-2 проводили в соответствии с методическими материалами [7] и методическими рекомендациями [8]. Органы, ткани и клетки выделяли по стандартным методикам [1].
Выделение клеток. Мышей забивали дислокацией позвоночника и помещали на стерильный анатомический столик. Селезенку и тимус извлекали, помещали во флакончики со средой, расстригали ножницами, многократно пропускали через шприц с иглой, фильтровали через металлическую сеточку и 2-3 раза отмывали центрифугированием при 1000 g в течение 10 мин со сменой среды.
Определение миелоактивных свойств было основано на определении количества ядросодер-жащих клеток в периферической крови через 24 ч после последнего введения препарата. Результаты выражали в абсолютных значениях (количество лейкоцитов в 1 мл крови).
Гуморальный иммунный ответ на тимус-зависимый антиген - эритроциты барана (ЭБ) (число IgM- и IgG-антителообразующих клеток (АОК)) в селезенке мышей оценивали на пике иммунного ответа, свойственного данному генотипу после внутривенного введения 2 х 108 ЭБ [6]. Все процедуры с клетками проводили на льду. Для определения числа IgM-АОК при первичном гуморальном иммунном ответе инкубационную смесь, состоящую из клеток селезенки, ЭБ и комплемента, помещали в стеклянные камеры и инкубировали 1,5 ч при 37 оС. Количество IgM-АОК в селезенке мышей оценивали на 4-е сутки после иммунизации по количеству зон локального гемолиза в полужидкой среде модифицированным методом [6]. Результаты выражали в абсолютном количестве IgM-АОК в селезенке.
Для определения числа IgG-АОК (при первичном и вторичном гуморальном иммунном ответе) в инкубационную смесь добавляли антисыворотку против IgG мыши и инкубировали в термостате 2 ч при 38 оС. Зоны гемолиза подсчитывали под бинокулярной лупой (увеличение х 42). Количество IgG-АОК в селезенке (первичный иммунный ответ) определяли на 9-е сутки после иммунизации. Через 30 дней проводили вторичную иммунизацию 2 % ЭБ внутривенно, на пике иммунного ответа (на 5-е сутки после вторичной иммунизации) методом локального гемолиза в селезенке определяли количество IgG-АОК (вторичный иммунный ответ) [6]. Клетки селезенки инкубировали 2 ч при 39 оС в камерах с ЭБ, комплементом морской свинки и кроличьей антисывороткой против мышиного IgG (разведение в 2000 раз). Зоны гемолиза подсчитывали под бинокулярной лупой (увеличение х 42). Результаты выражали в абсолютном количестве IgG-АОК в селезенке.
Клеточный иммунный ответ на тимус-зависимый антиген оценивали по степени выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ): измеряли величину отека лапки после введения разрешающей дозы ЭБ сенсибилизированным животным; сенсибилизирующая доза - 2,5 х 107 ЭБ/мышь внутрибрюшинно, разрешающая доза - 5 х 108 ЭБ/мышь под подошвенный апоневроз задней лапки, контроль - контра-латеральная лапка, в которую вводили среду в том же объеме. Для оценки влияния препарата на фазу сенсибилизации ГЗТ в день последнего введения Виталанга-2 мышей иммунизировали внутрибрю-шинным введением 0,25 % ЭБ в объеме 0,5 мл, на 4-е сутки после сенсибилизации вводили разрешающую дозу антигена под подошвенный апоневроз правой задней лапы (50 % ЭБ в объеме 50 мкл). В контралатеральную лапу вводили растворитель в том же объеме. Для оценки влияния препарата на эффекторную фазу Виталанг-2 вводили в день проведения сенсибилизации и далее в течение четырех дней. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили растворитель препарата (воду). Реакцию ГЗТ оценивали по методике локальной ГЗТ [15]. Учет реакции производили через 24 ч после введения разрешающей дозы ЭБ, величину отека оценивали штангенциркулем. Результаты выражали в процентах.
Спонтанная и митоген-стимулированная пролиферация клеток селезенки в культуре in vitro под влиянием Виталанга-2. Клетки селезенки мышей культивировали в круглодонных планшетах для иммунологических реакций при 37 оС в атмосфере 5 % СО2 и 95 % воздуха. Абсолютное количество клеток, вносимых в лунку,
составляло 200 000. Клетки стимулировали ми-тогеном ConA. Концентрацию митогена подбирали предварительным титрованием и использовали в оптимальной дозе, что составило 2 мкг/мл СопА. Виталанг-2 в трех дозах вносили в лунки одновременно с митогеном. Пролиферативную активность клеток оценивали по включению Н3-тимидина в ДНК делящихся клеток. Метку вносили за 16 ч до конца культивирования по 1 мкКи в каждую лунку планшета. Для этого основной раствор Н3-тимидина доводили средой RPMI-1640 до концентрации 100 мкКи/мл и вводили по 10 мкл в каждую лунку планшета. По окончании инкубации клетки собирали на стеклян-но-волокнистые фильтры («Flow Laboratories») с помощью аппарата Harvester («Titertek», «Flow Laboratories»). Фильтры высушивали и помещали во флаконы для сцинтилляционного счета с толу-ольным сцинтиллятором (4 г дифенилоксазола, 0,1 г дифенил-оксазолилбензола на 1 л толуола). Их радиоактивность подсчитывали в жидкостном сцинтилляционном счетчике «Delta» (США). Результаты выражали в количестве импульсов в минуту включенного тимидина на 2 х 105 клеток, представлены средние данные по триплету.
Статистическую обработку данных по числу АОК, имеющему распределение, отличное от нормального, проводили по непараметрическому критерию Манна - Уитни [2]; в таблицах представлены средние арифметические значения (M), а также минимальные и максимальные (MinMax).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Изучение иммунотропной активности фармакологических веществ включает комплекс стандартных методик, с помощью которых можно оценить эффект изучаемого вещества на иммунитет и сделать вывод о возможности его отнесения к группе иммунотропных средств. При этом идентифицируется то звено иммунитета, на которое в наибольшей степени действует изучаемое вещество. Обязательно оценивается влияние препарата на гуморальный иммунный ответ (путем определения числа АОК), на клеточный иммунный ответ (реакция ГЗТ), на пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов [7]. Главная цель испытаний биологически активных соединений на первых этапах исследования, в том числе определение их иммуноактивных свойств, - это выявление наиболее активных соединений и отсев неперспективных для фармакологии веществ (соединений, обладающих малой активностью или нежелательными побочными эффектами), что представляет, однако, большие сложности. По
мнению Б.С. Утешева и соавт. [13], наиболее целесообразно наряду с оценкой иммуноактивных свойств определять одновременно и миелоактив-ные свойства соединений, действие на иммунную систему в целом, а не на отдельные виды иммунологической реактивности. Такими показателями служат масса, число клеток и популяционный состав центральных и периферических органов иммунной системы. Однако, по данным О.П. Колесниковой [6], некоторые соединения, практически не влияя на массу тимуса и селезенки, максимально стимулируют ^М-антителообразование, а другие, существенно увеличивая массу тимуса и селезенки, практически не изменяют величину ^М-ответа.
На первом этапе исследования Виталанга-2 оценивали влияние курсового введения препарата на гемопоэз и иммунопоэз в целом: на количество ядросодержащих клеток в периферической крови, массу и количество клеток в периферических органах иммунитета. Курсовое введение препарата приводило к выраженному дозозависимому увеличению как массы тимуса, так и количества
клеток в органе (табл. 1). Максимальное увеличение массы, клеточности тимуса и селезенки выявлялось при дозе 100 мг/кг. Введение препарата приводило также к достоверному увеличению количества лейкоцитов в периферической крови. Обнаруженное достоверное и существенное увеличение количества лейкоцитов в крови и количества клеток в тимусе соответствует данным литературы о способности препаратов дрожжевой РНК стимулировать лейкопоэз и изменять миграцию Т-лимфоцитов, что приводит к повышению количества ядросодержащих клеток в периферической крови и клеток в тимусе [12].
Далее оценивали влияние курсового введения препарата Виталанг-2 на первичный (IgM и IgG) и вторичный (IgG) гуморальный иммунный ответ на тимус-зависимый антиген в селезенке in vivo. В табл. 2 представлены данные о влиянии препарата, введенного в индуктивную фазу первичного гуморального иммунного ответа, на количество IgM-АОК в селезенке мышей. Период гуморального иммунного ответа, в течение которого В-лимфоцит получает специфический анти-
Таблица 1
Влияние Виталанга-2 на массу и количество клеток в лимфоидных органах у мышей CBF1
Группа Масса тела, г Тимус Селезенка Количество лейкоцитов крови, 106/мл
Масса органа, мг Количество клеток, 106/мл Масса органа, мг Количество клеток, 106/мл
M Min-Max M Min-Max
Контроль 22,8 23,4 11-37 26,2 100,4 76-116 100 7,5
Виталанг-2:
10 мг/кг 23,2 32,0* 24-45 34,7* 126,0 79-203 109 8,1
50 мг/кг 23,2 38.8* 36-43 49,8* 128,6 109-140 149* 9,0
100 мг/кг 22,7 43,6* 36-54 57,4* 134,0 111-170 155* 11,2
200 мг/кг 21,9 40,6* 35-50 62,9* 109,2 99-125 133 15,1*
Число IgM АОК Число IgG АОК (первичный Число IgG АОК (вторичный
Группа на селезенку ответ) на селезенку ответ) на селезенку
M Min-Max M Min-Max M Min-Max
Контроль 13703 2191-26494 1924 1359-2520 863535 732298-1103097
Виталанг-2:
0,5 мг/кг 1471 668-3572 813651 446167-1187614
10 мг/кг 14134 9788-19023
50 мг/кг 35723* 21033-56810 1237 814-1768 903383 678497-1133922
100 мг/кг 28989* 14050-51585 1731 622-4661 1038565* 795253-1337136
200 мг/кг 29762* 23480-35898 1934 671-4312 927254 785841-1173393
Примечание. Здесь и в табл. 2-4 звездочкой обозначены статистически значимые отличия от величины соответствующего показателя в контроле (р < 0,05).
Таблица 2
Влияние Виталанга-2 на первичный (IgMАОК) гуморальный иммунный ответ на Т-зависимый антиген, на количество IgG-АОК при первичном и вторичном гуморальном иммунном ответе у мышей CBFl
генный сигнал и ряд дополнительных сигналов от клеток-помощников, называют индуктивной фазой иммунного ответа. Ее продолжительность составляет 2-3 дня. Введение препарата мышам в индуктивную фазу первичного гуморального иммунного ответа (введение антигена после курсового внутрижелудочного введения препарата) достоверно увеличивало в селезенке количество АОК, синтезирующих ^М-антитела (см. табл. 2), и, в то же время, не влияло на количество IgG-АОК в селезенке мышей при первичном иммунном ответе (см. табл. 2). Препарат, введенный в индуктивную фазу иммунного ответа (перед первичной иммунизацией) стимулировал вторичный (анамнестический) гуморальный иммунный ответ только в дозе 100 мг/кг.
Известно, что препараты дрожжевой РНК обладают активностью поликлональных стимуляторов, регулируя процессы как миграции Т-лимфоцитов, так и их кооперации с В-лимфоцитами, а также увеличивают функциональную активность макрофагов [12]. Возможно, стимуляция гуморального иммунного ответа (первичного и вторичного) на Т-зависимый антиген под действием препарата Виталанг-2 связана с усилением и миграции, и кооперации Т- и В-лимфоцитов. Различные эффекты препарата на первичный ^М- и IgG- и вторичный IgG-гуморальный иммунный ответ могут быть связаны с тем, что он изменяет генерирование эффективного гуморального иммунного ответа, основное содержание которого составляют процессы продвижения В-клеток по циклу, вступления в митоз, переключения классов иммуноглобулинов, последующей дифференцировки в плазматические клетки и формирование В-клеток памяти, требующего множества сигналов, в частности, наличия молекул цитокинов для инициации и переключения классов иммуноглобулинов. Различные этапы активации и последующего развития В-лимфоцитов находятся под контролем целого комплекса цитокинов. Известно, что развитие
Таблица 3
Влияние Виталанга-2 на клеточный иммунный ответ (ГЗТ) у мышей CBF1
Группа Фаза сенсибилизации, % Эффектор-ная фаза, % Min-Max
Контроль 34,4 44,3 39,4-50,0
Виталанг-2:
10 мг/кг 31,8 37,8* 36,4-39,4
50 мг/кг 37,7 38,2* 36,6-40,6
100 мг/кг 25,2* 29,8* 26,9-32,3
200 мг/кг 23,1 26,7* 26,0-27,6
Примечание. Величину отека лапки оценивали штангенциркулем (мм), результаты представлены в % относительно контрольной - контралатеральной лапки, в которую вводили воду в том же объеме.
иммунного ответа не заканчивается синтезом антител, а вызывает и формирование иммунной памяти. Но вопросы роли клеток памяти и закономерностей их регуляции, а также взаимоотношений первичного и вторичного гуморального иммунного ответа на уровне целостного организма еще далеки от разрешения.
Оценку влияния курсового введения препарата Виталанг-2 на клеточные реакции иммунной системы in vivo оценивали по выраженности индуктивной/продуктивной фазы реакции ГЗТ, отражающей функциональную активность Т-хелперных клеток типа 1 и макрофагального звена при ответе на Т-зависимый антиген. Препарат оказывает иммунодепрессивное действие на выраженность клеточного иммунного ответа (дозозависимое подавление эффекторной фазы реакции ГЗТ и выраженное подавление фазы сенсибилизации в дозе 100 и 200 мг/кг) (табл. 3).
По традиционным представлениям иммуно-активные соединения разделяются на иммуностимуляторы и иммуносупрессоры. Однако современные знания о патогенезе многих заболеваний, связанных с нарушением межклональ-
Таблица 4
Влияние Виталанга-2 на спонтанную и митоген-стимулированную пролиферацию клеток селезенки мышей CBF1 в культуре in vitro 5
Пролиферация, имп./мин Доза препарата, мкг/мл
Опыт 1 Опыт 2
0 2 20 200 0 2 20 200
Спонтанная 935 850 889 1435* 751 766 687 1754*
ConA 49866 58475 46892 40016 58611 64931 57024 42063
Примечание. Пролиферативную активность клеток оценивали по включению Н3-тимидина в ДНК делящихся клеток; результаты выражали в импульсах в минуту включенного Н3-тимидина на 2 х 105 клеток, представлены средние данные по триплету.
ных взаимоотношений за счет расстройства ТЫ/г1Ъ2-регуляторных влияний и баланса соответствующих цитокинов, выдвигают требования к поиску новых иммуноактивных препаратов. В связи с этим представляют интерес препараты, проявляющие при первичном скрининге in vivo на интактных животных разнонаправленное действие на интегральные показатели - антитело-образование и реакцию ГЗТ, оказывающие влияние либо только на гуморальный, либо только на клеточный иммунный ответ. Оценивая полученные данные, можно отметить, что Виталанг-2 оказывает разнонаправленный эффект на гуморальный и клеточный иммунный ответ: стимулирует антителообразование (ТЪ2-ответ) и подавляет клеточные реакции иммунитета (Thl-ответ).
Оценку ростостимулирующей активности препарата Виталанг-2 проводили в культуре in vitro спонтанно пролиферирующих и стимулированных Т-клеточным митогеном спленоцитов ин-тактных мышей, данные двух опытов представлены в табл. 4. Как видно из таблицы, начиная с дозы 200 мг/кг Виталанг-2 стимулирует спонтанную пролиферацию клеток селезенки, что согласуется с литературными данными о свойствах препаратов дрожжевой РНК как поликлональных стимуляторов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Оценивая полученные результаты, следует отметить, что способность препарата Виталанг-2 стимулировать спонтанную активность клеток селезенки в культуре in vitro, стимулировать лейкопоэз и гуморальный иммунный ответ на Т-зависимый антиген в целом согласуется с литературными данными об иммунологических свойствах препаратов дрожжевой РНК. Выраженные иммуноактивные свойства Виталанга-2 могут быть использованы для повышения неспецифической резистентности человека и животных к инфекционным заболеваниям.
Уникальной представляется способность Ви-таланга-2 оказывать оппозитное влияние на интегральные параметры иммунного ответа: стимулировать антителообразование и ингибировать клеточный иммунитет. В связи с этим перспективно проведение испытаний данного препарата для лечения заболеваний с реакциями ГЗТ в патогенетическом процессе (туберкулез, проказа, шистосомоз, саркоидоз и болезнь Крона). Особенно актуально лечение туберкулеза, который в последние годы в России приобрел масштабы эпидемии. Положительный результат предсказать нетрудно, поскольку туберкулез успешно лечится препаратами с добавлением Полирибоната.
Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт от 11.02.2011 № 16.512.11.2018).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск: Изд-во Томского ун-та, 1992. 272 с.
2. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л., 1978. 68-91.
3. Европейская конвенция по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях. Страсбург, 1986.
4. Земское В.М., Лидак М.Ю., Земское A.M., Микстайс У.Я. Низкомолекулярная РНК: получение, гидролиз и применение в медицине. Рига: Зи-натне, 1985. 191 с.
5. Кнорроз М.Ю., Попова О.М., Давыдова А.А. и др. Сравнительное изучение противовирусной активности природных двуспиральных РНК при экспериментальном клещевом энцефалите // Вопр. вирусол. 1985. 30. (6). 697-700.
6. Колесникова О.П. РТПХ-индуцированные расстройства иммунитета как экспериментальные модели для поиска новых биологически активных соединений: автореф. дис. ... докт. мед. наук. Новосибирск, 2000.
7. Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств. М., 1984.
8. Методические рекомендации по оценке им-мунотоксических свойств фармакологических средств. М., 1992.
9. Пат. 2045270 РФ. Специфический стимулятор биосинтеза белка в кроветворных и иммунокомпе-тентных органах / Л.Е. Панин, А.В. Харьковский; опубл. 10.10.95.
10. Пат. 2392329 РФ. Способ получения высокополимерной РНК из дрожжей / Т.В. Ямковая, Е.В. Кузовкова, Ю.П. Железнова и др.; опубл. 20.06.2010.
11. Пат. 2397988 РФ. Способ терминальной стерилизации высокополимерной дрожжевой РНК / Т.В. Ямковая, Е.В. Кузовкова, Ю.П. Железнова и др.; опубл. 27.08.2010.
12. Соколов В.Д., Андреева Н.Л., Соколов А.В. Иммуностимуляторы в ветеринарии // Ветеринария. 1992. (7-8). 49-50.
13. Утешев Б.С., Арзамасцев Е.В. Об оценке иммунотоксичности при доклиническом изучении биологически активных соединений // Эксперим. клинич. фармакол. 1996. 59. (3). 3-8.
14. Ямковая Т.В., Ямковой В.И., Панин Л.Е. Выделение и анализ биологической активности высокополимерной РНК из пекарских дрожжей // Бюл. СО РАМН. 2012. (6). 60-68.
15. Yoshikai Y., Miake S., Matsumoto T. et al. Effect of stimulation and blockade of mononuclear phagocyte system on the delayed footpad reaction to SRBC in mice // Immunology. 1979. 8. 577-583.
IMMUNOTROPIC ACTIVITY OF SOAPY AMPHIPHILIC HIGH-POLYMER RNA FROM BAKER'S YEAST
Tatyana Vitalievna YAMKOVAYA1, Olga Petrovna KOLESNIKOVA2, Vitaliy Ivanovich YAMKOVOY3, Vladimir Aleksandrovich KOZLOV2, Lev Evgen'yevich PANIN3
1 LLC «Vitalang»
630055, Novosibirsk, Rubinovaya str., 4-128
2 Institute for Clinical Immunology of SB RAMS 630099, Novosibirsk, Yadrintsevskaya str.,14
3 Institute for Biochemistry of SB RAMS 630117, Novosibirsk, Timakov str., 2
The immunotropic activity of the amphiphilic high-polymer RNA isolated from baker's yeast with oleic acid has been studied. It was discovered that the drug dose-dependently increases the mass of lymphoid organs (thymus and spleen) in mice, as well increases the average number of cells in these organs. The drug induces leukocyte reaction, dose-dependently stimulates the primary (IgM) and secondary (IgG) antibody response. However, it has an immunosuppressive effect on the expression of cell-mediated immune response (dose-dependent suppression of the effector phase of delayed-type hypersensitivity reactions and pronounced suppression phase of sensitization in the high dose).
Key words: yeast, oleic acid, high-polymeric RNA, immunotropic activity of RNA.
Yamkovaya T.V. - candidate of biological sciences, director, e-mail: yam_tv@mail.ru
Kolesnikova O.P. - doctor of medical sciences, head of the laboratory of experimental immunotherapy,
e-mail: iscreen2001@mail.ru
Yamkovoy V.I. - doctor of biological sciences, professor of the chair for chemistry, e-mail: vitalang2@mail.ru Kozlov V.A. - academician of the RAMS, doctor of medical sciences, professor, director, e-mail: iscreen2001@mail.ru Panin L.E. - doctor of medical sciences, professor, academician of the RAMS, director, e-mail: ibch@soramn.ru
