CC BY
71
УДК 615.32. 547.9
ГЕПАТОПРОТЕКТОРНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ ФИТОПРЕПАРАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ
© 2009 О.Л. Кулагин, В.А. Куркин, А.А. Царева, Н.А. Додонова Самарский государственный медицинский университет Статья получена 21.10.2009 г.
С давних времен лимонник китайский применяется в медицинской практике как растительный адаптоген. В процессе исследования проведено изучение антиоксидантной активности препаратов и субстанций плодов лимонника китайского, а также показано их влияния на ферментативные звенья антиоксидантной защиты печени.
Ключевые слова: гепатопротекторная активность, антиоксиданты, фенилпропаноиды
Использование лекарственных растений, содержащих биологически активные соединения (БАС), обладающие антиоксидантной активностью, позволяет расширить арсенал лекарственных препаратов для лечения и профилактики поражений печени. Изучение механизмов действия гепатопротекторных соединений растительного происхождения дает возможность влиять на различные звенья антиок-сидантной защиты печени в комплексной терапии гепатитов. Лимонник китайский - Schi-zandra chinensis Baill. - долгое время применяется в медицине в качестве тонизирующего и адаптогенного лекарственного средства [3]. Также существуют данные о высокой антиок-сидантной активности препаратов, изготовленных из лимонника [8-9].
Цель настоящей работы - определение ан-тиоксидантной активности фитопрепаратов на основе плодов лимонника китайского, а также исследование их влияния на ферментативные звенья антиоксидантной защиты печени.
В качестве объектов исследования выбрали фармакопейные препараты из семян лимонника китайского «Лимонника настойка», фитопрепараты: С02-экстракт («Схизатон») из семян лимонника китайского Schizandra chinen-sis Baill., сок лимонника, настойка лимонника на 70%-ном спирте [6]. Исследование антиок-сидантной активности фитопрепаратов осуществляли на белых лабораторных крысах обоего пола массой 200-260 г., которые были разделены на группы по 10 штук в каждой. Крысы находились на обычном рационе вивария, были размещены в стандартных пластиковых
Кулагин Олег Львович, доктор медицинских наук, профессор кафедры фармакологии. E-mail: ku-lagin2000@yandex.ru
Куркин Владимир Александрович, доктор фармакологических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии. Email: vakur@samaramail.ru
Царева Анна Александровна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры фармакологии. E-mail anna@anarun.net
Додонова Наталья Аполлоновна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры фармакологии. E-mail moli2000@mail.ru
клетках в помещении с температурой воздуха 18-25оС. Животные были вовлечены в эксперимент одновременно, что исключает влияние внешних температурных, климатических и иных факторов на разницу активности ферментов у опытных и контрольных групп животных. Во время эксперимента доступ крыс к воде и корму был свободным. Все эксперименты выполнялись в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». Для воспроизведения токсического повреждения печени нами был выбран четыреххлористый углерод, который наиболее часто применяется в эксперименте с целью моделирования токсического гепатита [5]. В результате токсического повреждения печени в крови увеличивается уровень пере-кисного окисления липидов (ПОЛ). В этой связи нами было применено многократное введение четыреххлористого углерода крысам в дозе 2,0 г/кг веса животного. Крысы забивались в соответствии с этическими нормами под эфирным наркозом методом декапитации. Печень крыс извлекалась, промывалась физиологическим раствором и сразу замораживалась в сосуде с твердой углекислотой («сухим льдом») при температуре -70-80оС. Затем из ткани печени готовился гомогенат для проведения анализа на содержание малонового альдегида (МДА), а также определения активности супероксиддисмутазы (СОД), глутатион-пероксидазы (ГП) и каталазы. Гомогенат готовился механическим измельчением ткани печени массой 1 г. с 5 мл фосфатного буфера (рН=7,4) со скоростью 5000 об/мин в сосуде с двойными стенками постоянно охлаждаемого проточной водой. Определение конечного продукта ПОЛ - МДА осуществляли на основе принципа [7], в соответствии с которым при высокой температуре в кислой среде МДА реагирует с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), образуя окрашенный триметиновый комплекс с максимумом поглощения при длине волны 532 нм, который и регистрируется фотометрически.
Известия Самарского научного центра Российской академии наук, т. 11, №1(6), 2009
Определение активности каталазы основано на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс [2]. В гомогенате печени определяли также активность СОД - фермента, инактивирующего супероксидные радикалы и уменьшающего интенсивность ПОЛ. Суперок-сиддисмутаза относится к числу ферментов, входящих в состав антиоксидантной защитной системы организма. Активность СОД определялась по методу, описанному в [1]. Определение активности глутатионпероксидазы (ГП)
Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,01
Результаты и их обсуждение. Результаты исследования антиоксидантной активности фитопрепаратов на основе лимонника китайского указывают на то, что именно 70% настойка лимонника обладает наиболее выраженной фармакологической активностью. Несколько слабее действует препарат сока лимонника. Оба препарата достоверно снижают уровень малонового диальдегида и повышают активность супероксиддисмутазы. Но в отличие от сока, настойка лимонника повышает активность каталазы, что, безусловно, свидетельствует о лучшей способности этого препарата защищать ткани от окислительного стресса. Разность в фармакологической активности 70% настойки и сока лимонника можно объяснить различием в составе исходного сырья, взятого для их получения, а именно: 70% настойка готовится из семян, где уровень а-токоферола изначально высок, а в соке, приготовленном из плодов лимонника, очевидно, преобладают кверцетин и ретинол. Наличие фенилпропаноидов и в семенах, и в плодах
осуществляют в соответствии со следующей методикой [4], основанной на определении скорости окисления глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила. Данные активности ферментов рассчитывались на содержание белка. Полученные данные являлись выборками из генеральных совокупностей с нормальным распределением. Для статистической обработки данных нами был применен однофакторный дисперсионный анализ. Для статистического анализа средних выборок был использован ^критерий с поправкой Бонферони.
лимонника доказано. Видимо имеет значение различия в концентрации и эффективности реализации гепатопротекторных механизмов различных компонентов, обеспечивающих различные виды синергизма. Нами не отмечалось достоверного влияния на фермент глутатион-пероксидазу, тем не менее, можно говорить о тенденции к повышению активности этого фермента.
Выводы: полученные нами данные позволяют говорить об эффективности фитопрепаратов, изготовленных на основе лимонника китайского, в качестве гепатопротекторов и могут служить основанием для расширения показаний к их применению. При сравнении исследуемых нами фитопрепаратов с карсилом было установлено, что все они в меньшей степени снижают уровень малонового диальдеги-да. Повышение активности важнейшего фермента противоперекисной защиты - суперок-сиддисмутазы хотя и достаточно выражено, но несколько ниже, чем на фоне применения карсила.
Таблица 1. Влияние фитопрепаратов на активность ферментов и уровень ПОЛ
Вводимые вещества Малоновый диальдегид, нМоль на мг белка печени Активность супероксид-дисмутазы, АЕД на мг белка печени Активность каталазы, нМоль/с на мг белка печени Активность глутатионпероксидазы, нМоль/мин на мг белка печени
Контроль (СС14) 26,29±3,09 0,720±0,310 0,057±0,014 1,12±0,25
Карсил 19,28±2,39** 1,280±0,340** 0,067±0,022* 1,41±0,49*
Контроль (СС14 + спирт) 24,74±2,07 0,810±0,147 0,058±0,014 1,11±0,44
СС14 + лимонника настойка 40% 19,60±4,00* 0,966±0,134* 0,065±0,010* 1,25±0,58*
Контроль (СС14 ) 25,11±1,96 0,750±0,105 0,059±0,013 1,01±0,37
СС14 + лимонника настойка 70% 20,48±4,38* 1,086±0,115* 0,072±0,012* 1,02±0,52*
Контроль (СС14) 26,06±3,40 1,161±0,292 0,064±0,014 0,89±0,32
СС14 + СО2 экстракт лимонника 25,97±5,03* 1,212± 0,241* 0,098±0,030* 1,16±0,31*
Контроль (СС14) 25,45±3,18 1,16 ±0,502 0,059±0,013 1,45±0,11
СС14 + сок лимонника 20,93±2,69** 1,656±0,466* 0,062±0,016* 1,46±0,40*
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
1. Гуревич, В. С. Сравнительный анализ двух методов определения активности супероксиддисмутазы / В.С. Гуревич, К.Н. Конторщикова, Л.В. Шатилина // Лаб. Дело. - 1990. - № 4. - С. 44-47.
2. Королюк, М.А. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк, Л. И. Иванова, И. Т. Майорова // Лаб. дело. - 1988. - №1. - С. 16-19.
3. Куркин, В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармацевтических вузов. - Самара: ООО «Офорт», ГОУБПО «СамГМУ», 2004. - 1180 с.
4. Моин, В.М. Простой и специфический метод определения глутатионпероксидазы в эритроцитах // Лаб. Дело. - 1986. - № 12. - С. 724-726.
5. Саратиков, А. С. Эффективность гепатопрозащит-ных свойств, при экспериментальном токсическом гепатите / А.С. Саратиков, А.И. Венгеровский //
Эксперим. и клиничю фармакология. - 1999. - №.1
- С. 59-60.
6. Сатдарова, Ф.Ш. Фитохимическое и фармакологическое исследование препаратов на основе сырья лимонника китайского // 72-я итоговая конференция СНО: тез. док.- Самара, 2004. - С. 180-181.
7. Стальная, И.Д. Современные методы в биохимии. / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили. - М., 1977. - С. 66-68.
8. Pan, S. Y. Schisandrin B protects against tacrine- and bis(7)-tacrine-induced hepatoxicity and enhances cognitive function in mice / S.Y. Pan, Y.F. Han, P.R. Carlier et al. // KoKM. Planta Med. - 2002. - №68.
- P. 217-220.
9. Ip, S.P. Schisandrin B protects against menadione -induced hepatoxicity by enhancing DT - diaphorase activity / S.P. Ip, H.Y. Yiu, K.M. Ko // Mol. Cell Biochem. - 2000. - №1. - P. 151-155.
HEPATOPROTECTIVE ACTIVITY OF SOME PHYTOPREPARATIONS,
CONTAINING PHENYLPROPANOIDS
© 2009 O.L. Kulagin, V.A. Kurkin, A.A. Tsareva, N.A. Dodonova Samara State Medical University Article is received 2009/10/21
For a long time Schizandra chinensis Baill. is applied in a medical practice as vegetative adaptogen. During research studying antioxidant activity of preparations and substances of Schizandra chinensis Baill. fruits is lead, and also shown their influences on enzymatic parts of liver antioxidant protection.
Key words: gepatoprotective activity, antioxidants, phenylpropanoids
Oleg Kulagin, Doctor of Medicine, Professor at the Pharmacology Department E-mail: kulagin2000@yandex.ru Vladimir Kurkin, Doctor of Pharmacy, Professor, Head of the Pharmacognosy with Botany and Bases of Phytotherapy Department. E-mail: vakur@samaramail.ru
Anna Tsareva, Candidate of Medicine, Assistant at the Pharmacology Department E-mail: anna@anarun.net
Nataliya Dodonova, Candidate of Medicine, Associate Professor at the Pharmacology Department E-mail: moli2000@mail.ru
