CC BY
17
УДК 591.557:599.322.2
DOI 10.21685/2307-9150-2018-3-6
С. С. Закс, А. А. Кузьмин, М. Д. Симаков, С. В. Титов
ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ МЕТАПОПУЛЯЦИЙ КРАПЧАТОГО СУСЛИКА (SPERMOPHILUS SUSLICUS GULD.) В ВОСТОЧНОЙ ЧАСТИ АРЕАЛА: АНАЛИЗ МАРКЕРОВ яДНК1
Аннотация.
Актуальность и цели. Фрагментация исторического ареала широко распространенных видов млекопитающих под действием экологических факторов естественной и антропогенной природы в последнее время стала довольно обычным явлением. За последние 40 лет ареал крапчатого суслика в Поволжье сильно изменился. В результате быстрой фрагментации восточная часть ареала крапчатого суслика приобрела метапопуляционную структуру. Целью исследования было изучение генетического полиморфизма метапопуляций крапчатого суслика, обнаруженных в восточной части его ареала, с использованием молекулярно-генетического маркера ядерной ДНК - HOX Ь5 и сопоставление полученных результатов с полученными ранее данными.
Материалы и методы. Была исследована генетическая структура 12 популяций крапчатого суслика, обнаруженных на территории Ульяновской области и входящих в состав пяти выделенных ранее метапопуляций. Были использованы специфические для сусликов праймеры, применяемые для амплификации фрагментов гена HOX b5, и просеквенировано 29 образцов. Генетическая структура метапопуляций описывали по соотношению гаплотипов и генотипов HOX b5 при использовании результатов ранее проведенных исследований структуры популяций крапчатого суслика по фрагменту гена p53.
Результаты. Анализ нуклеотидных последовательностей (713 пн) фрагмента гена HOX b5 из 12 географических популяций крапчатого суслика в Ульяновской области показал высокую консервативность последовательностей этого молекулярного маркера (С = 0,999). Была выявлена только одна нуклеотидная замена по 173-й позиции - транзиция A-G. Проведенный ML-анализ нуклеотидных последовательностей позволил объединить отдельные географически изолированные точки в две группировки - группу “А” и группу “G” (по имеющемуся нуклеотиду в позиции 173). Полиморфизм изученного ядерного маркера HOX Ь5 в границах фрагментированной восточной части ареала крапчатого суслика снижается с юга на север и с востока на запад. Наиболее мономорфны оказались Центральная и Северо-Западная метапопуляции. При этом по этой же линии отмечается и уменьшение доли менее распространенного гаплотипа (G) этого ядерного маркера.
Выводы. Изучение полиморфизма двух ядерных маркеров (HOX Ь5 и 6 инт-рона гена р53) показало, что они достаточно надежно дифференцируют географически изолированные популяции крапчатого суслика. При этом второй из маркеров является более информативным для подобных исследований.
1 Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках проекта № 16-34-60059 мол_а_дк (С. С. Закс) и проекта № 18-04-00687 а (А. А. Кузьмин, М. Д. Симаков, С. В. Титов).
© 2018 Закс С. С., Кузьмин А. А., Симаков М. Д., Титов С. В. Данная статья доступна по условиям всемирной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License (http://creativecommons.org/licenses/by/ 4.0/), которая дает разрешение на неограниченное использование, копирование на любые носители при условии указания авторства, источника и ссылки на лицензию Creative Commons, а также изменений, если таковые имеют место.
По обоим маркерам как по гаплотипам, так и по генотипам не отличаются метапопуляции II (Восточная или Приволжская) и IV (Северная). По всей видимости, эти результаты могут косвенно указывать на однородность населения этих метапопуляций, а также, возможно, только на внешнюю их географическую дифференциацию при внутренней генетической однородности.
Ключевые слова: крапчатый суслик, ядерная ДНК, ген p53, ген HOX Ь5, Ульяновская область.
S. S. Zaks, A. A. Kuz'min, M. D. Simakov, S. V. Titov
GENETIC POLYMORPHISM OF METAPOPULATIONS OF THE SPOTTED GROUND SQUIRREL (SPERMOPHILUS SUSLICUS GULD.) OF THE EASTERN PART OF THE AREA: ANALYSIS OF NDNA MARKERS
Abstract.
Background. In recent years, fragmentation of the historical area of mammal species has become quite common under the influence of environmental factors of natural and anthropogenic nature. Over the last 40 years the habitat of the spotted ground squirrels in the Volga region has change much. The Eastern part of the spotted ground squirrel area acquired metapopulation structure as a result of rapid fragmentation. The aim of the study was to research the genetic polymorphism of populations of the spotted ground squirrel in the Eastern part of the area, according to the study of the variability of a marker of nuclear DNA HOX b5. The results will be compared with the data obtained earlier.
Materials and methods. Genetic structure of 12 local spotted souslik’s populations on the territory of Ul’yanovsk Region was studied. These susliks populations are part of the previously identified 5 metapopulations. Specific for ground squirrels primers applicable for gene HOX b5 amplification were used. 29 samples from these populations were sequenced. Populations’ genetic structure was described on the ratio of haplotypes and genotypes of HOX b5 using the results of previous studies of the structure of populations of spotted ground squirrel on the fragment gene p53.
Results. Analysis of the nucleotide sequences (713 pn) fragment of the gene HOX b5 of 12 geographical populations of the spotted ground squirrel has shown highly conserved sequence of this molecular marker (C = 0,999). Was identified only one nucleotide replacement at position 173 - a transition A-G. Carried out the ML analysis of the nucleotide sequences allowed us to combine the separate geographically isolated point in two groups - group “A” and group “G” (according to the available nucleotide at position 173). The polymorphism of the studied nuclear marker HOX b5 decreases from South to North and from East to West within the boundaries of the fragmented Eastern part of the spotted ground squirrel area. The most monomorphic were Central and North-Western metapopulations. Along the same line, there is a decrease in the proportion of the less common haplotype (G) of this nuclear marker.
Conclusions. The study of polymorphism of two nuclear markers (HOX b5 and 6 intron of p53 gene) showed that these markers reliably differentiate populations of spotted gopher. The second marker is more informative for such studies. Metapopulations II (Eastern or Volga) and IV (Northern) do not differ in both markers by hap-lotype frequencies and genotype frequencies. These results indicate the homogeneity of the population in these metapopulations. Perhaps their geographical differentiation is only external, internally they are genetically homogeneous.
Key words: Spotted Ground Squirrel, nuclear DNA, gene p53, gene HOX b5, Ul’yanovsk Region.
Фрагментация исторического ареала широко распространенных видов млекопитающих под действием экологических факторов естественной и антропогенной природы в последнее время стала довольно обычным явлением [1]. Особенно часто этот процесс наблюдается у тех из них, которые не обладают высоким репродуктивным потенциалом и не проявляют высокой миграционной активности [2, 3]. К таким видам в полной мере можно отнести крапчатого суслика (Spermophilus suslicus Guld.). Этот вид сусликов характеризуется низким репродуктивным успехом (в Поволжье число эмбрионов в среднем составляет 7,9 - 5-11, n = 16, а в размножении участвует менее 50 % самок) и редкой регистрацией широких перемещений с целью освоения новых мест обитания [4, 5]. За последние 40 лет ареал крапчатого суслика в Поволжье сильно изменился. Быстрая его фрагментация произошла как по причине сокращения общей численности зверьков, так и из-за исчезновения большого числа поселений этого грызуна. В результате такой популяционной динамики восточная часть ареала крапчатого суслика приобрела метапопуляционную структуру [6], а этот вид был включен в Красные книги большинства субъектов Поволжского региона [7-11], а также в Красную книгу Международного союза охраны природы (МСОП) (http://www.iucnredlist.org/details/ 20492/0).
Целью исследования было изучение генетического полиморфизма метапопуляций крапчатого суслика, обнаруженных в восточной части его ареала, с использованием молекулярно-генетического маркера ядерной ДНК -HOX Ь5 и сопоставление результатов и полученных ранее данных.
Материалы и методы
Генетический материал для работы был собран в Ульяновской области в ходе проведения полевых работ в период 2014-2018 гг. Исследована генетическая структура 24 популяций крапчатого суслика, обнаруженных на обследованной территории. Аналитическая выборка составила 202 особи (табл. 1).
Таблица 1
Исследованные на аллельное разнообразие фрагмента гена HOX Ь5 интрона 6 гена р53 популяции крапчатого суслика в Ульяновской области
Популяция Адрес поселения N
HOX Ь5 р53
1 2 3 4
1. Беловодье с. Беловодье, Карсунский район, 54°15' с.ш., 46°39' в.д. - 3
2. Белозерье с. Белозерье, Карсунский район, 54°16' с.ш., 47°16' в.д. - 2
3. Бестужевка с. Бестужевка, Кузоватовский район, 53°44' с.ш., 47°38' в.д. - 2
4. Волчанка с. Волчанка, Радищевский район, 53°00' с.ш., 47°10' в.д. 2 3
Окончание табл. 1
1 2 3 4
5. Вязовка с. Вязовка, Радищевский район, 52°54' с.ш., 48°22' в.д. 2 4
6. Загоскино с. Загоскино, Майнский район, 53°53' с.ш., 47°38' в.д. - 2
7. Зыково с. Зыково, Новоспасский район, 53°04' с.ш., 47°46' в.д. - 4
8. Красноборск пос. Красноборск, 53°45' с.ш., 48°02' в.д. - 5
9. Николаевка пос. Николаевка, Николаевский район, 53°07' с.ш., 47°19' в.д. 4 38
10. Погорелово с. Нов. Погорелово, Вешкаймский район, 54°09' с.ш., 46°50' в.д. - 5
11. Горенки с. Русские Горенки, Карсунский район, 54°15' с.ш., 46°44' в.д. - 8
12. Сарым Ур. Сарым, Теренгульский район, 53°36' с.ш., 48°19' в.д. 1 2
13. Смышляевка с. Смышляевка, Кузоватовский район, 53°45' с.ш., 47°44' в.д. 5 79
14. Соловчиха с. Соловчиха, Радищевский район, 52°58' с.ш., 47°48' в.д. 1 2
15. Ярыкла с. Ст. Ярыкла, Теренгульский район, 53°41' с.ш., 47°58' в.д. - 2
16. Студенец ст. Студенец, Кузоватовский район, 53°25' с.ш., 47°58' в.д. 2 2
17. Сухаревка с. Сухаревка, Майнский район, 53°58' с.ш., 47°47' в.д. 2 3
18. Терешка с. Сухая Терешка, Николаевский район, 52°59' с.ш., 47°29' в.д. - 1
19. Тимерсяны с.Нижние Тимерсяны, Цильнинский район, 54°33' с.ш., 47°48' в.д. 3 10
20. Трубетчина с. Трубетчина, Кузоватовский район, 53°38' с.ш., 47°52' в.д. - 7
21. Урено-Карлинское с. Урено-Карлинское, Карсунский район, 54°15' с.ш., 47°15' в.д. 3 6
22. Кулатка с. Чув. Кулатка, Старокулатский район, 52°43' с.ш., 47°43' в.д. - 1
23. Шевченко пос. Шевченко, Радищевский район, 52°53' с.ш., 48°11' в.д. 2 5
24. Элита пос. Элита, Сурский район, 54°28' с.ш., 46°51' в.д. 1 6
Всего: 28 202
Молекулярно-генетические исследования проводили на базе лаборатории молекулярной экологии и систематики животных кафедры зоологии и экологии Пензенского государственного университета.
ДНК выделяли из образцов ткани, зафиксированных после биопсии в этаноле (96 %). Предварительно гомогенизировав, небольшие кусочки ткани (около 50 мг) инкубировали в течение 6-12 ч в смеси, включающей 0,5 мл буфера STE, 50 мкл 10 %-го додецилсульфата натрия (SDS) и 17 мкл протеи-назы К, при 50 °С с последующей фенольной экстракцией [12].
Полимеразную цепную реакцию (PCR) проводили в 25 мкл реакционной смеси, содержащей 50 мМ Трис-HCl (pH 8,9), 20 мМ сульфата аммония, 20 мкМ ЭДТА, 170 мкг/мл бычьего сывороточного альбумина (BSA), смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов (200 мкМ каждого из них), 2 мМ хлористого магния, 0,6 мкМ каждого из праймеров, 0,1-0,2 мкг ДНК и 2 ед. акт. Taq-полимеразы.
В качестве молекулярно-генетического маркера для описания генетической структуры популяций крапчатого суслика был использован фрагмент гена HOX Ь5, кодирующего гомеодоменные белки, которые являются факторами транскрипции и имеют характерную складчатую структуру, связывающую ДНК [14-16].
В работе были использованы специфические для сусликов праймеры, применяемые для амплификации фрагментов HOX Ь5: HOX 5D - 5'-agactcctcagatattcccc-3' и HOX 5R - 5'-gaactccttctccagctcca-3'. Реакцию проводили при условиях - 94 °С - 1 мин, 62 °С - 1 мин (отжиг), 72 °С - 3 мин (30 циклов). Впоследствии полученные таким образом PCR-продукты были подвергнуты электрофоретическому исследованию в 6 %-м полиакриламидном геле (ПААГ) с целью качественного подтверждения прохождения реакции для каждого образца. Далее полученные таким образом 28 фрагментов гена HOX Ь5 из 12 географических популяций крапчатого суслика были сек-венированы на генетическом анализаторе ABI 3500 при использовании реактива BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kits.
Генетический анализ полученных последовательностей фрагмента гена HOX b5 был проведен при использовании пакета программ MEGA 7.0.21 [17] и DnaSP 5.10 [18]. Достоверность различий непараметрических показателей оценивалась с помощью теста Стьюдента и %2-теста при использовании пакета программ Statistica for Windows.
Результаты и обсуждение
Анализ нуклеотидных последовательностей (713 пн) фрагмента гена HOX Ь5 из 12 географических популяций крапчатого суслика в Ульяновской области показал высокую консервативность последовательностей этого молекулярного маркера (С = 0,999). Была выявлена только одна нуклеотидная замена по 173-й позиции - транзиция A-G. Таким образом, при изучении генетической структуры ареала крапчатого суслика в Ульяновской области можно ожидать 2-аллельную модель генетической дифференциации его популяций.
С целью выявления по этому маркеру генетических группировок, образованных географическими популяциями крапчатого суслика, был проведен ML-анализ последовательностей фрагментов гена HOX Ь5 в пакете программ MEGA 7.0.21 с использованием эволюционной модели JC (модель Джукса-Кантора, максимальный логарифм правдоподобия: -1021,5). Выбор эволюционной модели в ML-анализе определяется результатами модель-теста, по ко-
торым по использованному ядерному маркеру для модели JC получены минимальные значения байесового информационного критерия (BIC) - 2632,8.
Уровень изменчивости ядерных фрагментов HOX Ь5 крапчатого суслика (число нуклеотидных замен) оказался чрезвычайно низким, даже для внутривидового уровня. Он составил в среднем 0,1 %. Проведенный ML-анализ нуклеотидных последовательностей позволил построить кладограмму и объединить отдельные географически изолированные точки в две группировки -группу “А” (в позиции 173 последовательностей присутствует аденин) и группу “G” (в позиции 173 - гуанин) (рис. 1).
Рис. 1. Результаты генетического ML-анализа (модель JC) нуклеотидных последовательностей (п = 30) участка яДНК (HOX Ь5, 713 пн), показывающие генетическую дифференциацию современных популяций крапчатого суслика в восточной части ареала. В узлах - результаты будстреп-анализа (1000 реплик), шкала - генетические дистанции между гаплотипами (А и G). Названия популяций приведены рядом с номерами образцов, звездочкой отмечены популяции, в которых выявлен только один гаплотип
Проведенный анализ гаплотипического и нуклеотидного разнообразия проанализированных последовательностей фрагментов гена HOX Ь5 в программе DnaSP 5.10 выявил наличие только двух гаплотипов (h = 2). При этом гаплотипическое разнообразие (Hd) выборки последовательностей составило 0,491, а нуклеотидное разнообразие (Pi) - 0,00069. В целом, полученные данные подтверждают высказанное выше предположение о низком полиморфизме популяций по этому генетическому маркеру и наличии 2-аллельной модели генетической дифференциации популяций крапчатого суслика в Ульяновской области.
При рассмотрении характера распределения образцов из отдельных географических популяций крапчатого суслика по двум выделенным генетическим группам на кладограмме (см. рис. 1) заметна некоторая генетическая их дифференциация. Так, в популяциях Элита, Урено-Карлинское, Соловчи-ха, Сухаревка, Журавлевка и Сарым выявлен только гаплотип “А”, а в популяции Шевченко только гаплотип “G”. В остальных проанализированных популяциях (Смышляевка, Чихан-Гора, Студенец, Вязовка, Тимерсяны) отмечается наличие двух этих гаплотипических форм.
При сопоставлении полученных результатов по генетическому полиморфизму популяций крапчатого суслика по ядерному маркеру HOX Ь5 с результатами по полиморфизму этих же популяций, но по другому ядерному маркеру 6 интрону гена р53 [19], при учете метапопуляционного характера структуры восточной части ареала этого вида были получены следующие результаты (табл. 2, рис. 2).
Таблица 2
Гаплотипическая и генотипическая структура метапопуляций крапчатого суслика в Ульяновской области по двум ядерным маркерам - HOX Ь5 и 6 интрону гена р53
Мета- HOX Ь5 6 интрон гена p53
популя- гаплотип генотип гаплотип генотип
ция* A G AA AG GG S1 S2 S1S1 S1S2 S2S2
I 14/63 8/37 5/45 4/36 2/19 95/83 20/17 38/65 19/33 1/2
II 5/83 1/17 2/66 1/36 - 31/78 9/22 13/65 5/25 2/10
III 13/93 1/7 6/86 1/14 - 92/55 76/45 23/27 46/55 15/18
IV 10/83 2/17 4/66 2/36 - 29/81 7/19 12/67 5/28 1/5
V 2/100 - 1/100 - - 33/75 11/25 15/68 3/14 4/18
Всего 44/78 12/22 18/64 8/29 2/7 280/69 123/31 101/50 78/39 23/11
Примечание. *Популяции, входящие в состав метапопуляционных группировок: I - Журавлевка, Вязовка, Зыково, Николаевка, Соловчиха, Сухая Терешка, Чувашская Кулатка, Шевченко; II - Трубетчина, Студенец, Бестужевка, Красноборск, Сарым, Старая Ярыкла; III - Загоскино, Смышляевка, Сухаревка; IV - Белозерье, Урено-Карлинское, Тимерсяны; V - Беловодье, Новое Погорелово, Русские Горенки, Элита.
Рис. 2. Распределение генотипов двух ядерных маркеров в метапопуляциях крапчатого суслика в Ульяновской области: HOX Ь5 (1) - 1а - генотип АА,
1б - генотип AG, 1в - генотип GG, 1г - размер популяционных выборок; интрона 6 гена р53 - 2а - генотип SiSb 2б - генотип SiS2, 2в - генотип S2S2,
2г - размер метапопуляционных выборок; пунктирной линией показаны границы метапопуляций: I - Южной (Сызранской), II - Восточной (Приволжской), III - Центральной, IV - Северной, V - Северо-Западной (Присурской)
По генотипическому составу суммарные выборки всех метапопуляций по двум ядерным маркерам (HOX b5, n = 28 и 6 интрону гена р53, n = 202), имеющих 2-аллельную модель полиморфизма, достоверно не отличаются друг от друга (two-side p = 0,306). По маркеру HOX Ь5 соотношение (%) гомо- и гетрозигот составляет 71/29, по маркеру 6 интрон гена р53 - 61/39.
При этом сравнение моделей полиморфизма двух исследуемых ядерных маркеров по частотам гаплотипов и генотипов внутри выделенных пяти метапопуляций (см. рис. 2) показало их достоверные различия по всем парам сравнения (х2 = 6105,1-20,5, df= 1-2,p < 0,0001).
Сравнение показателей полиморфизма маркера HOX Ь5 в пяти выделенных метапопуляциях крапчатого суслика показал, что в большинстве пар сравнения (I-II, I-III, I-IV; II-III) отмечаются достоверные различия по соотношению гаплотипов (х2 = 65,2-4,9, df = 1, 0,027 > p > 0,0001). Заметно меньше достоверно различающихся пар сравнения (I-II, I-III) отмечается при анализе частот генотипов (х2 = 13,5-9,2, df = 2, 0,01 >p > 0,001). По гаплоти-пам не различаются метапопуляции II и III с метапопуляцией IV (х2 = 3,0-1,4, df = 1, 0,237 > p > 0,083), по генотипам - метапопуляция IV c метапопуляциями I, II, III, а также метапопуляции II и III (х2 = 2,6-1,5, df = 2, 0,472 >p > 0,264) (табл. 2, рис. 2).
Точно такое же сравнение, но уже показателей полиморфизма маркера 6 интрона гена р53, выявило более высокий уровень дифференциации метапопуляций. Для большинства пар сравнения (I-II, I-III, I-IV, I-V; III-II, III-IV, III-V) по данному ядерному маркеру отмечаются достоверные различия как по соотношению гаплотипов (х2 = 817,0-14,6, df = 1, p < 0,0001), так и по соотношению генотипов (х2 = 650,9-38,7, df = 1, p < 0,0001). При этом, как по гаплотипам, так и по генотипам не различаются метапопуляция V с метапопуляциями II и IV, а также метапопуляции II и IV (х2 = 4,2-1,1, df = 1-2, 0,582 >p > 0,123).
Заключение
Таким образом, изучение полиморфизма двух ядерных маркеров (HOX Ь5 и 6 интрона гена р53) показало, что они достаточно надежно дифференцируют географически изолированные популяции крапчатого суслика. При этом второй из маркеров является более информативным для подобных исследований. По обоим маркерам как по гаплотипам, так и по генотипам метапопуляции II (Восточная или Приволжская) и IV (Северная) (х2 = 3,0-1,1, df = 1-2, 0,582 > p > 0,083) не отличаются друг от друга. Данные результаты указывают на однородность населения этих метапопуляций. Возможно, их географическая дифференциация является только внешней, внутренне они генетически однородны.
В целом, уровень полиморфизма изученного ядерного маркера HOX Ь5 в границах фрагментированной восточной части ареала крапчатого суслика снижается с юга на север и с востока на запад. Наиболее мономорфными оказались Центральная и Северо-Западная метапопуляции. По этим же линиям отмечается и уменьшение доли менее распространенного гаплотипа (G) этого ядерного маркера.
Библиографический список
1. Hanski, I. A practical model of metapopulation dynamics / I. Hanski // Journal of Animal Ecology. - 1994. - Vol. 63. - P. 151-162.
2. Титов, С. В. Современное распространение и изменение численности крапчатого суслика в восточной части ареала / С. В. Титов // Зоологический журнал. -2001. - Т. 80, № 2. - С. 230-235.
3. Закс, С. С. Современное распространение и биотопические предпочтения крапчатого суслика (Spermophilus suslicus Guld.) в Среднем Поволжье / С. С. Закс, А. А. Кузьмин, С. В. Титов // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Естественные науки. - 2016. - № 3 (15). - С. 47-56. - DOI 10.21685/2307-9150-2016-3-5.
4. Попов, В. А. Млекопитающие Волжско-Камского края (насекомоядные, рукокрылые, грызуны) / В. А. Попов. - Казань : Изд-во Казан. фил. АН СССР, 1960. -468 с.
5. Титов, С. В. Популяционные и генетические механизмы межвидовой гибридизации млекопитающих (на примере рода Spermophilus) : автореф. дис. ... д-ра биол. наук / Титов С. В. - М., 2009. - 48 с.
6. Динамика ареалов и современное состояние поселений наземных беличьих в правобережных районах Поволжья / С. В. Титов, А. А. Кузьмин, Р. В. Наумов,
О. А. Ермаков, С. С. Закс, О. В. Чернышова. - Пенза : Изд-во ПГУ, 2015. - 124 с.
7. Красная книга Пензенской области. Т. 2. Животные - Пенза : Пензенская правда, 2005. - 300 с.
8. Красная книга Саратовской области. Грибы. Лишайники. Растения. Животные / Комитет охраны окружающей среды и природопользования Саратовской области. -Саратов : Изд-во Торгово-промышленной палаты Саратовской области, 2006. -528 с.
9. Красная книга Республики Татарстан (животные, растения, грибы). - 2-е изд. -Казань, 2006. - 832 с.
10. Красная книга Ульяновской области / под науч. ред. Е. А. Артемьевой, А. В. Масленникова, М. В. Корепова. - М. : Буки Веди, 2015. - 550 с.
11. Красная книга Чувашской Республики. Т. 1. Ч. 2. Животные. - Чебоксары : ИПК Чувашия, 2011. - 372 с.
12. Sambrook, J. Molecular cloning: А laboratory Manual / J. Sambrook, E. F. Fritsch, T. Maniatis. - New York : Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 1989. - Р. 58-64.
13. Изучение гибридизации четырех видов сусликов (Spermophilus: Rodentia, Sciuri-dae) молекулярно-генетическими методами / О. А. Ермаков, В. Л. Сурин, С. В. Титов, А. Ф. Тагиев, А. В. Лукьяненко, Н. А. Формозов // Генетика. - 2002. - Т. 38, № 7. - С. 950-964.
14. Gehring, W. J. The homeobox in perspective / W. J. Gehring // Trends in Biochemical Sciences. - 1992. - Vol. 17, № 8. - P. 277-280. - DOI 10.1016/0968-0004(92) 90434-B.
15. Gehring, W. J. Exploring the homeobox / W. J. Gehring // Gene. - 1993. -Vol. 135 (1-2). - P. 215-221. - DOI 10.1016/0378-1119(93)90068-E.
16. Burglin, T. R. Homeodomain proteins: an update / T. R. Burglin, M. Affolter // Chromosoma. - 2015. - № 125 (3). - P. 1-25. - DOI 10.1007/s00412-015-0543-8.
17. Estimating Divergence Times in Large Molecular Phytogenies / K. Tamura, F. U. Bat-tistuzzi, P. Billing-Ross, O. Murillo, A. Filipski, S. Kumar // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2012. - № 109. - P. 19 333-19 338.
18. Librado, P. DnaSP v5: A software for comprehensive analysis of DNA polymorphism data / P. Librado, J. Rozas // Bioinformatics. - 2009. - № 25. - P. 1451-1452.
19. Закс, С. С. Генетическая структура популяций крапчатого суслика (Spermophilus suslicus Guld.) в Среднем Поволжье по данным анализа яДНК / С. С. Закс, А. А. Кузьмин, С. В. Титов // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Естественные науки. - 2016. - № 4 (16). - С. 3-13. - DOI 10.21685/2307-9150-2016-4-1.
References
1. Hanski I. Journal of Animal Ecology. 1994, vol. 63, pp. 151-162.
2. Titov S. V. Zoologicheskiy zhurnal [Zoological journal]. 2001, vol. 80, no. 2, pp. 230-235.
3. Zaks S. S., Kuz'min A. A., Titov S. V. Izvestiya vysshikh uchebnykh zavedeniy. Povolzh-skiy region. Estestvennye nauki [University proceedings. Volga region. Natural sciences]. 2016, no. 3 (15), pp. 47-56. DOI 10.21685/2307-9150-2016-3-5.
4. Popov V. A. Mlekopitayushchie Volzhsko-Kamskogo kraya (nasekomoyadnye, rukokry-lye, gryzuny) [Mammals of Volga-Kama region (insects, cheiroptera, rodents)]. Kazan: Izd-vo Kazan. fil. AN SSSR, 1960, 468 p.
5. Titov S. V. Populyatsionnye i geneticheskie mekhanizmy mezhvidovoy gibridizatsii mle-kopitayushchikh (na primere roda Spermophilus): avtoref. dis. d-ra biol. nauk [Population and genetic mechanisms of interspecies hybridization of mammals (by the example of Spermophilus genus): author’s abstract of dissertation to apply for the degree of the doctor of biological sciences]. Moscow, 2009, 48 p.
6. Titov S. V., Kuz'min A. A., Naumov R. V., Ermakov O. A., Zaks S. S., Chernyshova O. V. Dinamika arealov i sovremennoe sostoyanie poseleniy nazemnykh belich'ikh v pravo-berezhnykh rayonakh Povolzh’ya [Habitat dynamics and the modern condition of settlements of ground squirrels in the right-bank areas of Volga region]. Penza: Izd-vo PGU, 2015, 124 p.
7. Krasnaya kniga Penzenskoy oblasti. T. 2. Zhivotnye [The Red Book of Penza region. Vol. 2. Animals]. Penza: Penzenskaya pravda, 2005, 300 p.
8. Krasnaya kniga Saratovskoy oblasti. Griby. Lishayniki. Rasteniya. Zhivotnye [The Red Book of Saratov region. Fungi. Lichens. Plants. Animals]. Committee of environmental protection and nature management of Saratov region. Saratov: Izd-vo Torgovo-pro-myshlennoy palaty Saratovskoy oblasti, 2006, 528 p.
9. Krasnaya kniga Respubliki Tatarstan (zhivotnye, rasteniya, griby) [The Red Book of the Republic of Tatarstan (animals, plants, fungi)]. 2nd ed. Kazan, 2006, 832 p.
10. Krasnaya kniga Ul’yanovskoy oblasti [The Red Book of Ulyanovsk region]. Eds. E. A. Artem'eva, A. V. Maslennikov, M. V. Korepov. Moscow: Buki Vedi, 2015, 550 p.
11. Krasnaya kniga Chuvashskoy Respubliki. T. 1. Ch. 2. Zhivotnye [The Red Book of the Republic of Chuvashia. Vol. 1. Part 2. Animals]. Cheboksary: IPK Chuvashiya, 2011, 372 p.
12. Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T. Molecular cloning: A laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 1989, pp. 58-64.
13. Ermakov O. A., Surin V. L., Titov S. V., Tagiev A. F., Luk'yanenko A. V., Formozov N. A. Genetika [Genetics]. 2002, vol. 38, no. 7, pp. 950-964.
14. Gehring W. J. Trends in Biochemical Sciences. 1992, vol. 17, no. 8, pp. 277-280. DOI 10.1016/0968-0004(92)90434-B.
15. Gehring W. J. Gene. 1993, vol. 135 (1-2), pp. 215-221. DOI 10.1016/0378-1119(93) 90068-E.
16. Burglin T. R., Affolter M. Chromosoma. 2015, no. 125 (3), pp. 1-25. DOI 10.1007/ s00412-015-0543-8.
17. Tamura K., Battistuzzi F. U., Billing-Ross P., Murillo O., Filipski A., Kumar S.
Proceedings of the National Academy of Sciences. 2012, no. 109, pp. 19 333-19 338.
18. Librado P., Rozas J. Bioinformatics. 2009, no. 25, pp. 1451-1452.
19. Zaks S. S., Kuz'min A. A., Titov S. V. Izvestiya vysshikh uchebnykh zavedeniy. Povolzhskiy region. Estestvennye nauki [University proceedings. Volga region. Natural sciences]. 2016, no. 4 (16), pp. 3-13. DOI 10.21685/2307-9150-2016-4-1.
Закс Светлана Сергеевна кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, Научно-учебная лаборатория молекулярной экологии и систематики животных, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40)
E-mail: s.s.zaks@yandex.ru
Zaks Svetlana Sergeevna Candidate of biological sciences, senior researcher, scientific and educational laboratory of molecular ecology and systematics of animals, Penza State University (40 Krasnaya street, Penza, Russia)
Кузьмин Антон Алексеевич кандидат биологических наук, доцент, кафедра биотехнологий и техносферной безопасности, Пензенский государственный технологический университет (Россия, г. Пенза, проезд Байдукова/ул. Гагарина, 1а/11)
E-mail: kuzmin-puh@yandex.com
Симаков Максим Дмитриевич аспирант, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40)
E-mail: maksimakov@bk.ru
Титов Сергей Витальевич доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой зоологии и экологии, декан факультета физикоматематических и естественных наук, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40)
E-mail: svtitov@yandex.ru
Kuz'min Anton Alekseevich Candidate of biological sciences, associate professor, sub-department of biotechnology and technosphere safety, Penza State Technological University (1a/11 Baidukova lane/Gagarina street, Penza, Russia)
Simakov Maksim Dmitrievich
Postgraduate student, Penza State University (40 Krasnaya street, Penza, Russia)
Titov Sergey Vital'evich Doctor of biological sciences, professor, head of sub-department of zoology and ecology, dean of the faculty of physics, mathematics and natural sciences, Penza State University (40 Krasnaya street, Penza, Russia)
УДК 591.557:599.322.2 Закс, С. С.
Генетический полиморфизм метапопуляций крапчатого суслика (Spermophilus suslicus Gtild.) в восточной части ареала: анализ маркеров яДНК / С. С. Закс, А. А. Кузьмин, М. Д. Симаков, С. В. Титов // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Естественные науки. -2018. - № 3 (23). - С. 80-91. - DOI 10.21685/2307-9150-2018-3-6.
