CC BY
41
КЛОЧКОВА-АБЕЛЬЯНЦ С.А., СУРЖИКОВА Г.С., МАМУШКИНА А.В.,
ДОРОФЕЕВСКАЯ Л.С.
Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей, Городская клиническая больница № 1,
Городская клиническая больница № 2 Святого Великомученика Георгия Победоносца,
г. Новокузнецк
ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА В-КЛЕТОК ПРИ АНЕМИЯХ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Согласно современным представлениям, анемии, возникающие у пациентов с острой или хронической активацией иммунной системы вследствие различных инфекционных и неинфекционных заболеваний, принято условно обозначать как анемии при хронических заболеваниях (АХЗ). Частота анемий при указанных состояниях достигает 100 % (Суржикова Г.С., 2014).
Оценка как относительного, так и абсолютного количества В-клеток является одним из важных диагностических признаков при воспалительных заболеваниях. Все В-лимфоциты обладают рядом общих свойств: они синтезируют иммуноглобулины (Ig), экспрессируют антиген-распознающий Ig-рецептор (B-Cell Receptor — BCR) и поверхностные маркеры CD19 и CD45. Вместе с тем, можно выделить несколько субпопуляций В-кле-ток, различающихся по происхождению, диффе-ренцировке, фенотипу и функциональным свойствам.
Одна из них — В2-клетки (иногда их называют обычными В-клетками), локализующиеся преимущественно в селезенке, костном мозге, лимфоузлах, пейеровых бляшках и отдельных фолликулах лимфоидной ткани кишечника. Гистологическая единица, являющаяся местом сосредоточения В2-клеток — лимфоидный фолликул. Эти клетки составляют подавляющее большинство циркулирующих В-лимфоцитов и играют основную роль в гуморальном иммунном ответе.
В1-клетки локализуются преимущественно в серозных полостях — брюшной и плевральной. Небольшое количество В1-лимфоцитов, преимущественно клетки, секретирующие антитела, выявляют в селезенке, где на их долю приходится 1—5% от числа В-клеток. В1-клетки способны к самоподдержанию путем очень медленной пролиферации, восполняющей убыль клеток, погибающих в результате апоптоза. Предназначение В1-лимфоцитов — быстрый ответ на проникающие в организм широко распространенные па-
тогены (преимущественно бактерии). В1-клетки могут дифференцироваться в антителообразующие клетки без стимуляции антигеном. Основной дифференциальный признак В1-клеток — экспрессия мембранной молекулы CD5 (известной как один из маркеров Т-клеток).
Принципиальное отличие CD5+-клеток от обычных В-лимфоцитов состоит в том, что при иммунном ответе в их V-генах не повышается частота мутаций и вариабельность продуцируемых ими антител ограничивается репертуаром зародышевых V-генов. Эти клетки не подвергаются селекции, при этом они секретируют преимущественно IgM-антитела (в кишечнике — также IgA). Большинство этих антител специфично к собственным белкам организма (ДНК, гистонам, коллагену, компонентам цитоскелета, антигенам групп крови и т.д.); многие из них полиспецифичны, т.е. способны взаимодействовать с несколькими антигенами, в том числе аутологичными.
Сведения о субпопуляциях В-клеток человека немногочисленны, кроме того, большинство данных получено в эксперименте на животных (Царев В.Н., 2013). В последние годы В1-клетки вызывают значительный интерес за счет того, что их наличие связывают с аутоиммунными процессами (Хайдуков С.В., Зурочка А.В., Черешнев В.А., 2011).
Целью работы явилось исследование субпопуляционного состава В-лимфоцитов при анемиях хронических заболеваний различного генеза.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Исследования проведены у 276 женщин в возрасте от 16 до 60 лет. 79 из них были практически здоровыми и составили контрольную группу, у 197 выявлена анемия хронических заболеваний. У 125 женщин диагностирована анемия, развившаяся на фоне аутоиммунных заболеваний соединительной ткани (ревматоидный артрит), у 72 — анемия хронических заболеваний при бактериальных инфекциях (хронический тонзиллит,
42
КЛИНИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ВЕДЕНИЯ ПАЦИЕНТОВ, ОТНОСЯЩИХСЯ К КОНТИНГЕНТУ ОСОБОГО ВНИМАНИЯ
бактериальный эндокардит, хронический пиелонефрит).
Научно-исследовательская работа проведена в соответствии с Положениями Конституции РФ, п. 32 Основ законодательства РФ об охране здоровья граждан, Хельсинкской декларацией, Всемирной медицинской ассоциации «Рекомендации для врачей, занимающихся биомедицинскими исследованиями с участием людей». Протокол исследования одобрен Комитетом по этике ГБОУ ДПО НГИУВа МЗ России. До начала исследования все лица, участвующие в наблюдении, подписали письменное информированное согласие, утвержденное Комитетом по этике ГБОУ ДПО НГИУВа МЗ России. Критериями исключения пациенток из исследования были следующие: возраст младше 16 лет и старше 60 лет; другие формы анемий; наличие злокачественных заболеваний; отказ от участия в исследовании.
Методы исследования включали оценку показателей периферического звена эритрона, метаболизма железа и субпопуляционного состава В-лимфоцитов. Исследование показателей периферического звена эритрона проводили на гематологическом анализаторе «ADVIA 60» с оценкой морфофункциональных показателей эритроцитов. Количественное определение железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки (ОЖСС) проводили феррозино-вым методом с использованием диагностических наборов фирмы «Teco» (США) с последующим вычислением латентной железосвязывающей способности сыворотки (ЛЖСС) и коэффициента насыщения трансферрина железом (КНТ).
Оценку запасов железа проводили по уровню сывороточного ферритина (СФ), который исследовали иммуноферментным методом с использованием тест-систем фирмы «Orgentec diagnostika» (Германия).
Определение субпопуляций В-клеток проводили методом проточной цитофлуориметрии, для локализации В1-клеток использовали следующие моноклональные антитела: CD19(FITC)/ CD5(PE). Исследование проводили на проточном цитометре Сytomics FC 500 (Beckman Coulter, США).
Пробоподготовку периферической крови проводили по безотмывочной технологии с использованием лизирующих и фиксирующих реагентов «ImmunoPrep Reagent Sistem» и автоматической рабочей станции TQ-PREP («Beckman Coulter», США).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
При исследовании показателей периферического звена эритрона у больных ревматоидным артритом и у лиц с хроническими инфекционно-воспалительными процессами выявлена микроцитарная, гипохромная анемия.
У лиц с анемией хронических заболеваний при инфекционно-воспалительных заболеваниях и при аутоиммунных заболеваниях соединительной ткани (ревматоидный артрит) уровни сывороточного железа, общей железосвязывающей способности и коэффициент насыщения трасферрина были значимо ниже по сравнению с контрольной группой. Уровень ферритина сыворотки в группе лиц с анемией хронических заболеваний при бактериальных инфекциях и аутоиммунных заболеваниях составил 178,59 ± 75,52 нг/мл и 238,38 ± 64,16 нг/мл, соответственно, против 33,55 ± 2,59 нг/мл у здоровых лиц (р = 0,000), то есть количество депонированного железа в организме, определяемое по уровню сывороточного ферритина, не было сниженным, несмотря на выраженный гипохромный характер выявленных анемий.
Таким образом, показатели феррокинетики и состояние эритрона при инфекционно-воспалительных заболеваниях и аутоиммунных заболеваниях соединительной ткани, демонстрируют функциональный дефицит железа.
Результаты исследования иммунного статуса свидетельствуют о том, что у больных с анемией при ревматоидном артрите отмечается дисбаланс в системе В-лимфоцитов. Общее количество В-лим-фоцитов (CD3^D19+) в периферической крови у больных с АХЗ на фоне РА составило в среднем 9,27 ± 0,79 % и не отличалось от такового у практически здоровых лиц. (р > 0,05), при этом имело место существенное увеличение В-лимфо-цитов с фенотипом В1-клеток (СD19+СD5+). Содержание В1-лимфоцитов у больных с АХЗ на фоне РА составило в среднем 5,15 ± 0,22 % против 2,05 ± 0,2 % у здоровых лиц, соответственно (р < 0,001). При этом количество В2-лимфоцитов — В-лимфоцитов, не экспрессирующих CD5^^ тиген, у больных с АХЗ на фоне РА значимо не изменялось и не отличалось от такового у здоровых лиц.
У больных с анемией хронических заболеваний при инфекционно-воспалительных процессах имело место существенное снижение В1-лимфоцитов до 0,8 ± 0,03 % по сравнению со здоровыми лицами (р < 0,001), в то время как общее количество В- и В2-клеток значимо не отличалось от такового в контрольной группе (р > 0,05).
Таким образом, у лиц, страдающих анемией хронических заболеваний, наблюдаются изменения со стороны В1-лимфоцитов в системе В-кле-ток. При анемии хронических заболеваний на фоне ревматоидного артрита отмечается увеличение В1-клеток (доля СD5+ В-клеток составила 55,5 % от всех В-клеток), наличие и уровень которых ассоциируется с продукцией антител и, как следствие, с аутоиммунными заболеваниями. Определение относительного уровня
43
В1-клеток может быть использовано в качестве ваний, на фоне которых развился анемический диагностического параметра за течением заболе- синдром.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Микробиология, вирусология и иммунология полости рта /под ред. Царева В.Н. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. -576 с.
2. Суржикова Г.С. Анемии: этиология, патогенез, клиника и лабораторная диагностика: учеб. пособие. - Томск: Издательский Дом ТГУ, 2014. - 156 с.
3. Хайдуков С.В., Зурочка А.В., Черешнев В.А. Цитометрический анализ в клинической иммунологии. - Екатеринбург: УрО РАН, 2011. - 220 с.
44
КЛИНИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ВЕДЕНИЯ ПАЦИЕНТОВ, ОТНОСЯЩИХСЯ К КОНТИНГЕНТУ ОСОБОГО ВНИМАНИЯ
