CC BY
88
ФАРМАКОЛОГИЯ
УДК 615.038
Д. А. Василькин, Л. А. Поцелуева, Л. Т. Мусина, Е. В. Файзуллина,
Г. М. Зинатулина, Н. И. Наумкина, А. М. Губайдуллина
ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ ВО ВЗАИМОСВЯЗИ С ИХ ПОЛИМОРФИЗМОМ КАК ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИМ ФАКТОРОМ. Сообщение III
ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет»; Аналитико-технологический сертификационный испытательный центр (АТСИЦ) ФГУП ЦНИИгеолнеруд Министерства природных ресурсов России, Казань
Полиморфизм относится к фармацевтическим факторам, влияющим на терапевтическую эффективность лекарственных средств. Получение разных модификаций веществ зависит от условий их кристаллизации. В данном сообщении на примере лин-комицина и рокситромицина продолжено описание результатов исследования полиморфизма названных антибиотиков и его влияние на их физико-химические и фарма-котерапевтические свойства.
Трофические язвы, которые имеются у лиц пожилого возраста, чаще всего возникают на фоне варикозного симптомокомплекса нижних конечностей, сопровождаются они массивным бактериальным стрепто-стафилококковым обсеменением, развитием микробной экземы.
Клиническая картина характеризуется наличием островоспалительной эритемы, экссудативными папулами, на поверхности очагов имеются скопления серозно-гнойных корок, эрозий, нередко с мацерированной поверхностью. На участках, свободных от корок, поверхность застойно-красного цвета, с островками грануляций, с выраженной эритемой и инфильтрацией.
В этиологии заболевания ведущую роль играют стрептококки и стафилококки. Вне зависимости от интенсивности кожного процесса эти возбудители высеваются со всех участков очага [1].
Терапия инфекционных осложнений затруднена из-за нарастающей резистентности основных возбудителей пиодермии Staphylococcus aureus и Staphylococcus epi-dermidis к широко применяемым антибиотикам: пенициллину (до 80% штаммов), тетрациклину (до 65%), эритромицину (до 40%). Бесконтрольное применение наружных противовоспалительных препаратов затягивает процесс санации инфекции и способствует дальнейшей селекции резистентной флоры [2, 3].
© Д. А. Василькин, Л. А. Поцелуева, Л. Т. Мусина, Е. В. Файзуллина, Г. М. Зинатулина, Н. И. Наумкина, А. М. Губайдуллина, 2011
Получение новых полиморфных форм антибиотиков для создания противоми-кробных лекарственных средств, в частности мазей [4], является актуальной задачей современной фармацевтической технологии.
Материал и методы. У исследуемых образцов были сняты ИК-спектры (инфракрасная спектроскопия) для идентификации в соответствии с нормативной документацией изучаемых антибиотиков с учётом возможных различий ИК-спектров полиморфных форм линкомицина и рокситромицина [6].
Выделенные полиморфные формы субстанции названных антибиотиков использовали для экстемпорального изготовления мазей. 2% мазь линкомицина изготавливали в соответствии с составом одноимённой мази промышленного производства, а именно: линкомицина гидрохлорида — 2,4 г, окиси цинка — 15 г, крахмала картофельного — 5 г, парафина нефтяного — 0,5 г, вазелина — до 100 г. В качестве препарата сравнения была использована 2% мазь линкомицина промышленного изготовления.
В промышленных условиях выпускается 1% эритромициновая мазь. Рокситроми-цин является производным и близким аналогом эритромицина, в связи с чем для изготовления рокситромициновой мази в качестве мазевой основы была взята использованная в промышленном производстве эритромициновой мази смесь вазелина и ланолина безводного в пропорциях 6+4. Концентрация антибиотика в рокситромициновой мази аналогична концентрации антибиотика в препарате сравнения.
Для исследования высвобождения линкомицина и рокситромицина из мазей был использован «метод колодцев». С этой целью взвесь суточной культуры стандартного штамма S. aureus засевали в чашки Петри на мясо-пептонный агар (МПА). После впитывания взвеси в агаре с помощью гильзы делали лунки диаметром 6 мм, в которые вносили до краев мази антибиотиков. Отрицательным контролем служили мазевые основы per se. Чашки с образцами термостатировали при 37°С. Высвобождение рокситромицина оценивали через 24 часа по диаметру зон задержки роста бактериальной культуры. Полученные данные обрабатывались статистически согласно Государственной фармакопее XI издания (р = 0,95) [7].
Терапевтическую эффективность мазей линкомицина и рокситромицина оценивали при лечении бактериальных поражений кожи у амбулаторных больных. Образцы полученных мазей накладывали на поверхность раневых дефектов у 3-х амбулаторных больных с диагнозом «Микробная экзема на фоне варикозного симптомакомплекса, осложнённая трофическими язвами» в течение двух недель дважды в день с аппликацией окклюзивной повязки.
Возможность накожного нанесения мазей, изготовленных из разных полиморфных форм антибиотиков, для сопоставления их терапевтической эффективности обусловлена сходством клинической картины, одинаковой выраженностью интенсивности воспалительного процесса в разных участках раневого дефекта.
Результаты. ИК-спектры образцов линкомицина приведены на рис. 1. На них прослеживаются основные полосы поглощения, характерные для функциональных групп антибиотика: 3500-3300 см-1 — ОН группа, 3100-2900 см-1 — связи С-Н и ^Н-, 1650 см-1 — амидная группа, 1100-1500 см-1 — области «отпечатков пальцев». Характер кривых практически идентичен для всех образцов и имеет лишь незначительные различия в характере пиков в области 3500-3300 см-1 и 1550 см-1, что не обеспечивает надежной идентификации полиморфных форм линкомицина при использовании данного метода исследования.
Absorbance Units
1,2
1,0
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500
Wavenumber cm-1
Рис. 1. ИК-спектры образцов линкомицина, полученных в различных условиях:
1 — промышленного производства;
2 — полученный сушкой его раствора в этаноле при 20°С;
3 — полученный сушкой его раствора в ДМФА при 65°С.
\УауепитЪег ст-1
Рис. 2. ИК-спектры образцов рокситромицина, полученных в различных условиях:
1 — промышленного производства;
2 — полученный сушкой его раствора в диэтиловом эфире при 20°С;
3 — полученный сушкой его раствора в ДМФА при 65°С.
На рис. 2 приведены ИК-спектры образцов рокситромицина. На них также имеются основные полосы поглощения, характерные для функциональных групп названного антибиотика: 3500-3300 см-1 — ОН группа, 3100-2900 см-1 — связи С-Н и -NH-, 1650 см-1 — амидная группа, 1100-1500 см-1 — области «отпечатков пальцев». Характер кривых практически идентичен для всех трёх образцов, поэтому идентифицировать полиморфные формы рокситромицина данным методом не представляется возможным.
Для исключения влияния остальных фармацевтических факторов мази антибиотиков в соответствии с приведёнными выше составами готовились одним и тем же исследователем с использованием одной и той же ступки. Составы мазей и их обозначения приведены в табл. 1.
Изучение антимикробной активности мазей проводилось по «методу колодцев». В качестве отрицательного контроля использовали мазевые основы per se. Внешний вид чашек Петри после опыта приведен на рис. 3 и 4.
Опыт 1 Опыт 2 Опыт 3
Рис. 3. Зоны задержки роста вокруг лунок с образцами мазей рокситромицина.
Опыт 1 Опыт 2 Опыт 3
Рис. 4. Зоны задержки роста вокруг лунок с образцами мазей линкомицина.
В табл. 1 приведены диаметры зон задержки роста микроорганизма вокруг лунок с образцами мазей. Вокруг лунок с мазевыми основами задержки роста не наблюдалось.
Данные табл. 1 свидетельствуют о том, что образцы рокситромицина, полученные в лабораторных условиях, по сравнению с образцами промышленного производства обеспечивают более высокую антибактериальную активность мазей. При этом раз-
личия в антимикробной активности мазей, изготовленных из кристаллической формы, полученной в лабораторных условиях, и аморфной формы рокситромицина, незначительны. Аналогичные результаты отмечаются и в случае образцов линкомицина, изготовленных в лабораторных условиях, которые также проявляют большую антимикробную активность по сравнению с активностью мазей, изготовленных с использованием субстанции линкомицина промышленного производства.
Таблица 1. Обозначения лунок с мазями
№ образца Антибиотик Технология изготовления из субстанции
Р1 Рокситромицин, 1% мазь промышленного производства
Р2 полученной из эфира
Р3 полученной из аморфной формы антибиотика
К- Контроль Мазевая основа
Л1 Линкомицин, 2% мазь промышленного производства
Л2 полученной из этанола
Л3 полученной из аморфной формы антибиотика
Л- Контроль Мазевая основа
Таблица 2. Характеристика зон роста микроорганизмов по лункам с мазями
Образец Диаметры зон задержки роста, мм Доверительный интервал (р=0,95)
Р1 27 27 26 26 26 25,72 27,08
Р2 30 30 29 29 28 28,16 30,24
Р3 29 30 31 30 28 28,18 31,02
Л1 31 28 29 30 29 27,98 30,82
Л2 31 32 32 31 32 30,92 32,28
Л3 34 35 35 36 35 34,12 35,88
Таблица 3. Обозначения образцов мазей
№ образца Рокситромицин № образца Линкомицин
1 1% мазь из субстанции промышленного производства 5 2% мазь из субстанции промышленного производства
2 1% мазь из субстанции, полученной из эфира производства 6 2% мазь из субстанции, полученной из этанола
3 1% мазь из субстанции, полученной из аморфной формы 7 2% мазь, полученная из аморфной формы антибиотика
4 1% мазь эритромициновая промышленного производства (препарат сравнения) 8 2% мазь линкомициновая промышленного производства
Изготовленные мази далее использовались для лечения амбулаторных больных с инфекционно-воспалительными заболеваниями. Процесс заживления, проиллю-
стрированный на рис. 5, свидетельствует о снижении воспаления и эритемы. Цифрами обозначены области нанесения различных образцов мазей, которые пронумерованы в табл. 3.
Начало лечения Через 1 неделю лечения Через 2 недели лечения
Рис. 5. Динамика снижения интенсивности воспалительного процесса у больного.
На рис. 5 видна положительная динамика снижения воспалительного процесса, наиболее выраженная для образцов мазей 2, 3, 4, 6 и 7.
Резюмируя вышеизложенное можно заключить, что метод ИК-спектроскопии не позволяет идентифицировать полиморфные формы антибиотиков линкомицина и рокситромицина.
Наибольшую фармакотерапевтическую эффективность проявляют мази, изготовленные с использованием аморфных форм линкомицина и рокситромицина. Наименьшую фармакотерапевтическую эффективность проявляют мази, изготовленные с использованием исходных кристаллических форм линкомицина и рокситромицина, выпускаемых в промышленных условиях.
Литература
1. Белобородов В. Б., Митрохин С. Д. Стафилококковые инфекции // Consilium medicinum. 2003. № 5.
2. Elston D. M. Epidemiology and prevention of skin tissue infection // Cutis. 2004. Vol. 75 (5 sup-pl.). P. 3-7.
3. GlosbellI. B. Methicillin-resistant staphylococcus aureus: impact on dermatology practice // Am. Clin. Dermatol. 2004. Vol. 5(4). P. 239-259.
4. Rayner C. Munckof W. J. Antibiotics currently used in the treatment of infections caused by Staphylococcus aureus // Intern. Med. J. 2006. Vol.36(2). P. 142-143.
5. Василькин Д. А., Поцелуева Л. А., Литвинов И. А., Губайдуллин А. Т. Фармакотерапевтиче-ская эффективность лекарственных веществ во взаимосвязи с их полиморфизмом как фармацевтическим фактором // Вестн. Санкт-Петерб. ун-та. Сер. 11. 2010. Вып. 1. С. 166-174.
6. Казахст. фармацевт. вестн. 2002, май, № 9 (157). Интернет-версия: http://www.pharmnews. kz/kfv_db/N omera157/ct3.html
7. Полиморфизм молекулярных кристаллов / Дж. Берштейн; [пер. с англ. К. Ю. Суповниц-кого, И. В. Глухова, И. В. Фединина и др.]; под. ред. М. Ю. Антипина, Т. В. Тимофеевой. М.: Наука, 2007. 500 с.
8. Государственная фармакопея СССР. 11-е издание. М.: Медицина, 1987. Вып. I. С. 199-251.
9. Кембриджская кристаллографическая база данных — Cambridge Cristallographic Data Base. http://www.ccdc.cam.ac.uk/
Статья поступила в редакцию 15 апреля 2011 г.
