CC BY
57
ВЕСТНИК САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
Сер. 11. 2007. Вып. 3.
УДК 616.1-097-005
B. Я. Плоткин1, Т.Э. Иващенко2, В.Л. Воронель3, З.А. Зарипова3,
C. В. Азанчевская3, Н.Н. Хромов-Борисов1
ОСТРЫЙ ПЕРИОД ИНФАРКТА МИОКАРДА И ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ. СООБЩЕНИЕ I. ПОЛИМОРФИЗМЫ ГЕНА ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ АЛЬФА (TNFA)
1 Санкт-Петербургский государственный университет, медицинский факультет
2 Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН, Санкт-Петербург
3 Городская больница св. Георгия, Санкт-Петербург
Различия в генетической регуляции воспалительного процесса могут объяснить, почему одни лица заболевают ишемической болезнью чаще других и почему некоторые из них имеют более значительный воспалительный ответ, чем другие [1]. Фактор некроза опухоли (TNF), один из основных цитокинов воспаления, продуцируется макрофагами миокарда, миоцитами сердца и лимфоцитами и обладает значительной биологической активностью [2].
Исследования на животных показали, что повышенная экспрессия или хроническое введение TNFa приводило к миокардиту, систолической дисфункции, расширению и гипертрофии желудочка, фиброзу миокарда, апоптозу миоцитов и повышенной смертности [3]. Локальное повышение TNFa в зоне инфаркта миокарда (ИМ) у мышей увеличивало число разрывов миокарда и дисфункцию левого желудочка посредством местного экстенсивного воспалительного ответа, деградации матрикса и коллагена, повышения активации матриксных металлопротеиназ (MMP) и апоптоза [4]. Все эти нарушения можно было предотвратить введением белков, связывающих TNFa. В клинических наблюдениях подавление TNFa также облегчало симптомы, повышало толерантность к нагрузке и фракцию выброса. В культуре фибробластов сердца крыс in vitro TNFa селективно снижал синтез фибриллярного коллагена и повышал общую активность MMP, разрушающих коллаген. Тем самым было показано, что TNFa может принимать участие в дилятации сердца и развитии сердечной недостаточности, способствуя ремоделированию интерстициального коллагена [5].
В промоторной области гена TNFA идентифицируется несколько полиморфизмов, включая один в нуклеотидной позиции -308, где наличие гуанина определяет обычную (часто встречающуюся) аллель (TNF1; —308G). В то же время замена гуанина на аденин представляет собой необычный аллель (TNF2; G—308A), который является более сильным активатором транскрипции с 6-7-кратным повышением индуцируемого уровня транскрипции гена TNFA [6]. Наряду с этим для другого полиморфного варианта гена TNFA (G-238Ä) аллель A ассоциирована с понижением продукции TNFa [7]. При изучении полиморфизма гена TNFA у 33 больных с кардиогенным шоком оказалось, что среди лиц с аллелью
© В.Я. Плоткин, Т.Э. Иващенко, В.Л. Воронель, З.А. Зарипова, С.В. Азанчевская, Н.Н. Хромов-Борисов, 2007
ТЫП умерло 81 % больных, а среди пациентов с аллелью ТЫЕ2 - 29 %. При этом частота аллели ТЫЕ2 у больных не отличалась от частоты у здоровых лиц, но сочеталась с более благоприятным прогнозом [8].
Из вышеизложенного следует, что при ИМ повреждение миокарда может сопровождаться ответной воспалительной реакцией и локальным увеличением синтеза ТОТа. Однако практически недостаточно изучена роль генетических изменений основного участника воспалительной ответной реакции ТОТа в остром периоде ИМ и развитии его осложнений, что и послужило основанием для проведения настоящего исследования.
Цель работы — изучить частоты аллельных вариантов и генотипов гена ТЫГА у больных в остром периоде ИМ, а также проанализировать их возможную ассоциацию с течением заболевания.
Методы исследования. Частоты полиморфных вариантов 0-238А и 0-308А гена ТЫЕА проводился методом ПЦР/ПДРФ анализа у 89 больных ИМ в первые дни пребывания в реанимационном отделении. Средний возраст пациентов составлял 68,6+11,4 года. Среди больных было 49 (54,8 %) женщин и 41(45,2 %) мужчина. Все больные были разделены на 5 групп (табл. 1). Группа 1 состояла из 31 (34,8 %) пациента с неосложненным течением ИМ, среди которых было 14 женщин (45,5 %) и 17 мужчин (54,5 %). Во 2-ю группу вошли 15 (16,8 %) больных ИМ, осложненным отеком легких. Распределение по полу было одинаковым (48 и 52 %). В 3-й группе было 16 (18,1 %) пациентов с ИМ, умерших от кардиогенного шока; среди них женщин - 8 (50 %), мужчин - 8 (50 %). К 4-й группе были отнесены 19 (21,3 %) пациентов с ИМ с разрывом миокарда; среди них женщин - 15 (76,2 %), мужчин - 4 (23,8 %). Группа 5 представлена 8 (9,0 %) пациентами с ИМ с нарушениями ритма и проводимости: 4 женщины и 4 мужчин.
Таблица 1
Течение ИМ Группа Число больных
n %
ИМ неосложненный 1 31 34,8
ИМ осложненный отеком легкого кардиогенным шоком разрывом миокарда аритмиями 58 65,2
2 15 16,8
3 16 18,1
4 19 21,3
5 8 9,0
Всего 89 100
Отмечались следующие нарушения ритма: фибрилляция желудочков, наджелудочковая тахикардия, фибрилляция предсердий и атриовентрикулярная блокада (см. табл.1). Контрольная группа состояла из 117 человек, не имеющих воспалительных заболеваний и ИМ на момент сбора материала и проживающих на территории Северо-Западного региона России.
ДНК выделяли из лейкоцитов периферической крови с использованием стандартных методик. Смесь для амплификации объемом 25 мкл включала 15 нМ каждого праймера; 67 мМ трис-HCl, рН 8,8; 16,6 мМ сульфата аммония; 6,7 мМ MgCl2; 6,7 мкМ ЭДТА;
10 мМ меркаптоэтанола; 170 мкг BSA; 1,0 мМ каждого dNTP и 1U Tth-ДНК-полимеразы (производство «Бион», Москва).
Для амплификации фрагментов гена TNFA использованы праймеры, содержащие одну замену основания для создания сайта рестрикции, необходимого для выявления полиморфного варианта гена: TNFA1: 5'<ATC TGG AGG AAG CGG TAG TG>3'; TNFM1: 5'<AAT AGG TTT TGA GGG CCA TG>3' (содержит G в положении -313); TNFM2: 5'<AGA AGA CCC CCC TCG GAA CC>3' (содержит T в положении -240). Праймеры A1 и M1 использовали для амплификации фрагмента с полиморфизмом в положении -308, а праймеры A1 и M2 - для амплификации фрагмента с полиморфизмом в положении -238.
Амплификацию фрагментов гена TNFA проводили на программируемом термоцик- лере фирмы «ДНК-технология» (Москва) при следующих условиях: денатурация (94 °С, 7 мин) 12 циклов амплификации в режиме 96 °С - 15 с; 65 °С - 20 с; затем 23 цикла в режиме 96 °С - 10 с; 58 °С - 30 с, 72 °С - 30 с и заключительный синтез 72 °С (3 мин).
Специфичность амплификации и количество ПЦР продукта проверяли методом электрофореза в 7 %-ном полиакриламидном геле (ПААГ).
Для идентификации аллельных вариантов TNFA ПЦР продукты гидролизовали при 37 °C в течение 16 ч эндонуклеазой Bsp19I для детекции полиморфизма G—308A, эндонуклеазой MspI для детекции полиморфизма A—238G. Рестрикцию амплифи- цированных ДНК-фрагментов проводили согласно рекомендации фирмы-изготовителя («Сибэнзим»). Полноту гидролиза оценивали по результатам электрофореза в 7,5 %-ном ПААГ.
Для проверки согласия распределений генотипов с равновесием Харди-Вайнбер- га (РХВ) использовали точный критерий, реализованный в программе GENEPOP (подпрограмма HW.bat) [9]. В случае больших выборок (объемом более тысячи) использовали простую программу [10]. Для проверки независимости (однородности) в получаемых таблицах сопряженности использовали три точных критерия: хи-квадрат (%2), отношения правдоподобий (G2) и вероятностный критерий - (Fi), реализованные в программе StatXact-4 (Cytel Software Corporation, Inc., США). Для детального («поклеточного») анализа таблиц сопряженности и для выявления внутренне гомогенных блоков в анализируемых распределениях генотипов использовали программу SANCT [11]. Ее эффективность и продуктивность были продемонстрированы ранее в генетико-популяционных и мутационных исследованиях [11-15].
Результаты исследования. Частоты аллелей и генотипов изученных диморфизмов G-238A и G-308A в гене TNFA приведены в табл. 2. Распределения генотипов в обеих группах по обоим полиморфизмам статистически не отличались от случайного (равновесного по Харди -Вайнбергу). Проверка независимости (однородности) их распределений в группе больных ИМ и в группе сравнения была основана на точном P-зна- чении, полученном c помощью программы StatXact. В таблице представлены точные P-значения для трех разных критериев: хи-квадрат [%2], отношения правдоподобий [G2] и вероятностный критерий [Fi] (точный критерий Фишера для таблиц сопряженности 2Л2 или точный критерий Фишера-Фримена-Холтона для таблиц сопряженности большей размерности).
Из двух изученных полиморфизмов в гене TNFA лишь по полиморфизму G—308A частоты генотипов (G/G, G/A и A/A) аллелей (G и A) у пациентов с ИМ статистически отличались от таковых в контрольной группе (P=0,037 [G2] и P=0,012 [G2] соответственно).
Варьирование Р-значений для трех точных критериев и, соответственно, некоторая неопределенность выводов, очевидно, обусловлены небольшими объемами сравниваемых выборок.
Таблица 2
Частоты аллелей и генотипов по двум диморфизмам G-308A и G-238A в гене TNFA в группе больных ИМ и в группе здоровых
Полиморфизм Геноти пы и аллели Пациенты с ИМ N = 89 Группа сравнения N = 117 Точные значения на основе
n Частота n Частота
G-308A G/G 71 0,80 108 0,92 0,019 [x2] 0,037 [G2] 0,017 [Fi]
G/A 16 0,18 8 0,07
A/A 2 0,02 1 0,01
РХВ, точное Р-значение 0,083 1,00
G 158 0,89 224 0,96 0,0077 [x2] 0,012 [G2]
A 20 0,11 10 0,04
G-238A G/G 84 0,94 101 0,88 0,062 [x2]; [Fi] 0,048 [G2]
G/A 4 0,05 14 0,12
A/A 1 0,01 0 0,00
РХВ, точное Р-значение 0,29 0,18
G 172 0,97 216 0,94 0,25 [X2; g2; Fi]
A 6 0,03 14 0,06
П р и м е ч а н и е. Критерии, на основе которых вычислены точные Р-значения: [x2] - хи-квадрат, [G2] - отношение правдоподобий и [Fi] - вероятностный критерий (точный критерий Фишера для таблиц сопряженности 2x2 или Фишера-Фримена-Холтона для таблиц сопряженности большей размерности). Жирным шрифтом выделены различия, статистически значимые на уровне a = 0,05.
Детальный анализ с помощью программы SANCT показал, что основной вклад в наблюдаемую неоднородность вносят гомозиготы G/G. Их частота в группе больных ИМ статистически слегка превышает таковую в группе сравнения (92 % против 80 %) при Р = 0,03 для поклеточного анализа с поправкой на множественность сравнений. Генотипы G/A и A/A в обеих группах образуют статистически однородный блок, т. е. их можно рассматривать в данном случае как единое целое. Принято считать, что аллель A в положении -308 гена TNFA ассоциирован с повышенной продукцией TNFa [7]. Таким образом, поскольку в единый статистически однородный блок объединяются носители генотипов (-308A/-308A; -308G/-308A), то получается, что среди больных ИМ до некоторой степени преобладали носители генов, стимулирующих, а в группе сравнения — тормозящих экспрессию и синтез TNFa.
Что касается диморфизма G-238A в этом же гене, то между группой пациентов с ИМ и группой сравнения частоты генотипов и аллелей статистически не отличались друг от друга (Р = 0,062 [%2; Fi] и Р = 0,25 [%2; G2; Fi] соответственно).
Распределение сочетанных генотипов по двум полиморфизмам гена TNFA представлено в табл. 3.
Генотипы Пациенты с ИМ N = 89 Группа сравнения N = 115
G-238A G-308A n Частота n Частота
G/G G/G 66 0,74 92 0,80
G/G G/A 16 0,18 8 0,07
G/A G/G 4 0,03 14 0,12
G/G A/A 2 0,02 1 0,01
A/A G/G 1 0,01 0 0,00
Точные Р-значения для всех сочетаний
На основе [х2] 0,015 На основе [О2] 0,023 На основе вероятности 0,014
Анализ полученных распределений сочетанных генотипов у больных ИМ и в группе сравнения показал, что их можно считать статистически различающимися (наибольшее из трех найденных точных Р-значений составило 0,023 [G2]). Двойная гомозигота —238G/—238G; —308G/—308G (74 % у пациентов и 92 % в популяции), а также гетерозиготный генотип —238G/—238A и гомозиготный генотип —308G/—308G (4 % у больных и 12 % в популяции) встречались значимо чаще в контрольной группе по сравнению с группой пациентов с ИМ. В то же время гомозиготный генотип —238G/—238G, гетерозиготный генотип —308G/—308A и гомозиготные генотипы —238G/—238G и —308A/—308A отмечались значимо чаще у больных ИМ, чем в популяции. Наряду с этим в группе пациентов отмечалось сочетание двух гомозиготных генотипов —238A/—238A и —308G/—308G, чего не наблюдалось в популяции.
Для выявления возможной ассоциации между генотипами по локусам TNF-238 и TNF-308 в 5 обследованных группах пациентов с ИМ использовали оригинальную программу SANCT, разработанную одним из соавторов статьи с бразильскими коллегами (SANCT - Structural ANalysis of Contingency Table [11]).
Ни в одной группе пациентов (ИМ, осложненный кардиогенным шоком, разрывом миокарда, отеком легких, аритмиями и ИМ без осложнений) значимых отклонений от случайного комбинирования генотипов не обнаружено. В анализируемых данных в комбинациях генотипов выявлен внутренне однородный блок, в который объединились все группы больных. Внутри этой сводной группы (блока) различия между составляющими его группами (кардиогенный шок, разрыв миокарда, отек легких, аритмия и неосложнен- ный ИМ) статистически незначимы, т. е. этот блок статистически однороден (Р = 0,64). Одновременно выявляются два внутренне однородных блока наблюдаемых генотипов (G/G, G/A и A/A, G/G) и (G/G, G/G, G/G, A/A, G/A, G/G). Внутри этих блоков различия между распределениями по генотипам статистически незначимы (Р = 0,74 и Р = 0,23 соответственно).
В результате исходные данные были объединены в компактную таблицу сопряженности 2 x 2 (табл. 4). Полученное для этой таблицы малое Р-значение (Р = 0,002), казалось бы, свидетельствовало об относительно высокой значимости различий между объединенной группой больных и группой сравнения и между внутренне однородными блоками генотипов (G/G, G/A + A/A, G/G) и (G/G, G/A + A/A, G/G) и (G/G, G/G + G/G, A/A + G/A, G/G). Однако это Р-значение, скорректированное на множество возможных объединений шести групп в два блока, оказалось равным 0,060. Таким образом, при введении поправки оказалось, что между блоками генотипов (G/G, G/A + A/A, G/G) и (G/G, G/G + G/G, A/A + G/A, G/G) в сравниваемых группах отсутствует статистически значимая ассоциация (P=0,060). Количественной мерой ассоциаций является значение отношения шансов, которое в данном случае оказалось довольно высоким и равнялось: OR = 3,8 (программа StatXact). 95 %-ный доверительный интервал (ДИ) для OR составил [1,2-14,6]. В то же время с поправкой на множественность возможных объединений 95 %-ный ДИ: [0,9Л20,1] накрывал «нулевое» значение 1, тем самым подтверждается вывод об отсутствии значимой ассоциации.
Таблица 4
Распределение сочетанных генотипов по двум полиморфизмам гена TNFA в контрольной группе и у больных ИМ
Генотипы Контроль ИМ + шок или разрыв, или отек, или аритмия, или ИМ без осложнений Всего Однородность блока, Р-значение Скорректированное Р-значение Отношение шансов, OR Скорректированный 95 %-ный доверительный интервал
G/G, G/A + A/A, G/G 8 (7 %) 20 (22 %) 28 0,74 0,060 (0,002)* 3,8 [0,9-20,1] (1,214,6)*
G/G, G/G + G/G, A/A + G/A, G/G 107 (93 %) 70 (78 %) 177 0,23
Всего 115 90 205
Однородность блока, Р-значение 0,64
* Нескорректированные Р-значение и доверительный интервал для OR (odds ratio).
Обсуждение. В результате проведенной работы были изучены полиморфные варианты генов TNFA (G-238A, G-308A) в группе пациентов с ИМ и в группе сравнения. При этом при анализе генетического полиморфизма гена TNFA необходимо было учитывать, что нуклеотидная замена гуанина на аденин в позиции —308 промоторной области гена TNFA значительно повышает его транскрипционную активность и увеличивает скорость образования мРНК [16, 17]. У носителей генотипа -308A/-308A синтез белка происходит в 3 раза активнее, чем у лиц с генотипом —308G/—308G [7]. Поэтому наличие аллеля —308А способствует увеличению продукции белка TNFa, что согласуется с данными иммунологического анализа [18]. Наряду с этим замена гуанина на аденин в позиции —238 ведет к снижению уровня экспрессии гена и к снижению продукции белка. Так, было показано, что при стимуляции клеток цельной крови липополисахаридом клетки доноров с генотипом —238G/—238A синтезируют в 1,5 раза меньше TNFa, чем клетки с генотипом -238G/-238G [7].
Частоты аллелей -308A гена TNFA (G-308A) у пациентов с ИМ (11 %) почти в три раза превышали (Р = 0,012) частоты аллелей в контрольной группе (4 %), что свиде-тельствовало об увеличении продукции белка TNFa у больных ИМ [7]. В то же время частоты аллелей —238A второго полиморфного варианта гена TNFA (G—238A) хотя в два раза чаще встречались в популяции (6 %), чем у пациентов с ИМ (3 %), однако значимо не отличались (Р = 0,253).
Наряду с этим у больных ИМ частоты гетерозиготных генотипов —308G/—308A у пациентов примерно в 2,6 раза превышали (18 и 7 % соответственно) контрольные показатели (Р составляло 0,02-0,038), что также подтверждало стимулирование синтеза TNFa. Вместе с тем гомозиготные генотипы —308G/—308G значимо чаще наблюдались в группе сравнения (Р равно 0,02-0,038).
Гетерозиготные генотипы —238G/—238A у больных ИМ хотя и встречались в 2,4 раза реже, чем в группе сравнения, но разница между ними была малодостоверной (Р состав -ляло 0,048-0,062).
Анализ частот всех носителей генотипов, стимулирующих (-308A/308A; -308G/-308A) и тормозящих (-238G/-238A; -238A/-238A) экспрессию и синтез TNFa, в популяции и у пациентов с ИМ также подтвердил преобладание у больных ИМ носителей генов, стимулирующих, а в популяции — тормозящих экспрессию и синтез TNFa (Р = 0,0231).
Следует подчеркнуть, что оба промоторных полиморфных сайта гена TNFA являются сцепленными: «стимулирующий» аллель —308А в большинстве случаев наследуется вместе с нормальным аллелем —238G, а нормальный аллель —308G с «тормозящим» алле- лем -238А [10, 11].
При исследовании распределения сочетанных генотипов по двум полиморфизмам гена TNFA у больных чаще встречались сочетания гетерозиготных (-308G/—308A) или гомозиготных (-308A/—308A) генотипов, стимулирующих синтез белка TNFa, в сочетании с гомозиготным генотипом —238G/—238G. В то же время в популяции чаще наблюдались гомозиготные сочетания двух полиморфизмов (-238G/—238G; —308G/—308G) или гомозиготный генотип —308G/—308G в сочетании с гетерозиготным генотипом —238G/—238A, тормозящим синтез белка TNFa [7].
Согласно нашим данным, не было выявлено различий в частоте аллелей и генотипов -238G/A и -308G/A полиморфизмов гена TNFA в зависимости от тяжести ИМ и развития его осложнений, что требует дальнейших исследований со значительным увеличением числа испытуемых в каждой группе больных ИМ.
Таким образом, полиморфизм G-308A промоторной области гена TNFA, приводящий к увеличению экспрессии и синтеза TNFa, можно было бы рассматривать как возможный фактор генетического риска развития ИМ. Однако этот результат следует признать сугубо предварительным, так как введение поправки на множество возможных объединений шести групп в два блока показало, что между блоком генотипов (G/G, G/A, A/A, G/G) и ИМ отсутствовала статистически значимая ассоциация (Р = 0,060). Поэтому для подтверждения или опровержения полученных результатов необходимо существенно увеличить объемы выборок. С этой целью мы проанализировали численности генотипов по диморфизму G—308A в гене TNFA в девятнадцати независимых выборках здоровых и больных инфарктом миокарда россиян-европеоидов (табл. 5).
Таблица 5
Численность генотипов по диморфизму G-308A в гене TNFA в девятнадцати независимых выборках здоровых и больных инфарктом миокарда россиян-европеоидов
Блок
Выборка
Место
Уфа-11
Источник
Численность генотипов
G/G G/A
A/A
РХВ, точное Р-
значени е
Однородность внутри блока, точное Р-значение
[19]
53
65
120
2,810
Изб. гет.
Сибирь СПб.
[20, 21] Наст. иссл.
47 108
52 117
0,14 0,18
S
155
12
169
0,042 Деф. гет.
0,88
III-К
Белгород Москва-1 Москва-2 Москва-32 Новосибирск Омск-1 Омск-2 Томск
Уфа-2 Уфа-3 Уфа-4 Уфа-5 Уфа-6 Уфа-7
[22]
[23]
[24]
[36]
[25]
[26] [26]
[27]
[28] [29, 30] [31, 32]
[33] [25]
[37]
125
70
217
169
204
167
290
135
122
177
273
78
133
13
31 19 70 50 49 43 100 47
54
64 103 21
65 6
3 2 2
3 5
4 10 7
4
5
5 2
6 1
159
91
289
222
258
214
400
189
180 246 381 101 204 20
0,44 0,62 0,19 1,00 0,35 0,51 0,69 0,28
0,61 1,00 0,22 0,64 0,65 1,00
S
2173 722
59
2954
0,99
0,20
III-ИМ
Уфа-ИМ СПб.-ИМ
[29, 30] Наст. иссл.
242 71
61 16
306 89
1,00 0,29
S
313 77
395
0,80
0,68
III = III-К + III-ИМ
2486 799
64
3349
1,00
0,13
S
2
II
2
5
В настоящем исследовании из рассмотрения исключены опубликованные в цитируемых работах данные о татарах [27, 30] и якутах [35], хотя статистически (при анализированных объемах выборок) они мало отличаются от европеоидов.
Проверка статистической однородности в целом для всех девятнадцати групп выявляет высоко статистически значимую неоднородность (Р ~ 1012). Однако эти группы образуют всего лишь три внутренне однородных блока - I, II и III. В блок III объединяются 14 групп здоровых людей и две группы больных ИМ, т. е. они статистически неразличимы. Два других блока, резко отличающиеся от блока III, представлены всего лишь одной группой «Уфа-1» (блок I) и двумя статистически неразличимыми группами «Сибирь» и «СПб.» (блок II). В обоих случаях основной причиной неоднородности между выявленными блоками скорее всего являются значимые отклонения от равновесия Харди-Вайн- берга. В группе «Уфа-1» наблюдается избыток гетерозигот (Р = 2,8-10-4), а во внутренне однородном блоке II, образуемом группами «Сибирь» и «СПб.» и отличающемся от блоков I и III, возможно, имеет место дефицит гетерозигот (Р = 0,042).
Наблюдаемые отклонения от равновесия Харди-Вайнберга в группах «Уфа-1», «Сибирь» и «СПб.» могут быть следствием неудовлетворительного контроля за качеством использованных наборов реагентов для генотипирования и (или) неоптимизированных условий ПЦР либо рестрикции со стороны фирмы-производителя.
Таким образом, сопоставление наших данных с результатами работ других авторов (см. [29] и ссылки на предшествующие работы в этой статье) в основном подтверждает выводы большинства исследователей об отсутствии ассоциации между диморфизмом G—308A в гене TNFA и склонностью к развитию инфаркта миокарда в популяции русских европеоидов «от Москвы до самых до окраин». Остается открытым, правда, вопрос о данных в изученной нами группе сравнения, которые совпали с данными по группе «Сибирь», но значимо отличаются от четырнадцати других групп сравнения. Этому факту возможны три объяснения: либо (чего нельзя исключить) абсолютно случайно у нас подобралась выборка, статистически отличимая от большинства других, либо имеют место некоторые неконтролируемые различия в лабораторных процедурах генотипирования, либо популяция Северо-Запада России действительно отличается от других регионов России. Последнее предположение очевидно не согласуется с данными по группе больных СПб.-ИМ, которые оказались статистически неотличимыми от аналогичных данных уфимских коллег (группа Уфа-ИМ) [29, 30] и от основного «ядра» четырнадцати однородных групп сравнения (блок III). Для проверки этих предположений следует продолжить исследование с новыми независимыми выборками групп сравнения и больных.
Итак, основным результатом настоящей работы можно считать выявление статистически однородного блока из четырнадцати независимых групп россиян-европеоидов (блок III), который можно рассматривать как достаточно представительную группу сравнения для дальнейших исследований. Дополнительные исследования с существенным увеличением объемов выборок помогут оценить клиническую значимость выявленных нами ассоциаций полиморфизмов в гене TNFA с развитием инфаркта миокарда.
Summary
Plotkin V. Y., Ivaschenko T. E., Voronel V. L, Zaripova Z. A., Asachevskaja S. V., Khromov-BorisovN. N. Acute phase of myocardial infarction and genetic predisposition. Report 1. The genetic polymorphisms of TNFA gene.
The purpose of the present work were to study polymorphic variants of TNFA gene (-238G/A and —308G/A) by means of the PCR-RFLP method in 89 patients with acute period of myocardial infarction and to analyze their possible association with a clinical course of disease. Patient's —308 A-allele frequency (11 % against 4 %, p=0,012) and frequencies of -308G/-308A genotypes (18 % against 7 %, p=0,037) of a polymorphic variant -308G/A TNFA gene, and two polymorphic variant combinations of the heterozygote (-308G/-308A) and homozygote (-308A/—308A) TNFA gene variants have been authentically increased in comparison with the population group. However comparison of our data to results of 19 independent casual choices of healthy persons and patients suffering from myocardial infarction showed the absence of association between dimorphism of G-308A in TNFA gene and propensity to development of a myocardial infarction in a population of Russian Europeans. The basic result of the present work is definition of statistically homogeneous block of 14 independent choices among Russians population (2954 healthy persons) living in European part of Russia (the Block III). It is a big representing group of comparison for the subsequent researches. It is necessary to essentially increase the number of patients for an estimation of the clinical importance of the associations revealed by us in -308G/A gene TNFA polymorphisms with development of myocardial infarction.
Key words: genetic predisposition, polymorphism, association, TNFA gene, myocardial infarction.
Литература
1. Woods A., Brull D. J., Humphries S. E. et al. Genetics of inflammation and risk of coronary artery disease: the central role of interkeucin-6 // Eur. Heart J. 2000. Vol. 21. P. 1574-1583.
2. Meldrum D. R. Tumor necrosis factor in the heart // Amer. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physoil. 1998. Vol. 274. P. R557-R595.
3. Densem C. G, Hutchinson I. V., Yonan N., Brooks N. H. Tumor necrosis factor gene polymorphism: a predisposing factor to non-ischemic myocardial dysfunction? // Heart. 2002. Vol. 97. P. 153-155.
4. Sun M. S. M., Dawood W. H., Wen M. et al. Extensive tumor necrosis factor activation after infarction contributes to susceptibilityof myocardial rupture and left ventricular disfunction // Circulation. 2004. Vol. 110. P. 3221-3228.
5. SiwikD. A., Chang D. L.-F., Colluci W. S. Interleukin-1B and tumor necrosis factor- decrease collagen synthesis and increase matrix metalloproteinase activity in cardiac fibroblasts in vitro // Circulat. Res. 2000. Vol. 86. P. 1259.
6. Wilson A. G., Symons J. A., Grall F. et al. Effect of a polymorphisms in the human tumor necrosis factor a on transcriptional activation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. Vol. 94. P. 3195-3199.
7. РыдловскаяА. В., Симбирцев А. С. Функциональный полиморфизм гена TNFA и патология // Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4. № 3. С. 4-10.
8. Appoloni O., Dupon E., Vandercruys M. et al. Better survival in cardiogenic shock // Chest. 2004. Vol. 125. N 6. P. 2232-2237.
9. RaymondM., RoussetF. 1995 GENEPOP (version 1.2): population genetics software for exact tests and ecumeni- cism // J. Heredity. 1995. Vol. 86. P. 248-249 (см.: http://ftp.cefe.cnrs.fr/pc/msdos/genepop/).
10. CourtM. H. A simple calculator to determine whether observed genotype frequencies are consistent with Hard-Weinberg equilibrium. 2005 (см.: http://www.tufts.edu/~mcourt01/documents/court%20lab%20-%20hw%20calculator.xls).
11. Хромов-Борисов Н. Н., Lazzarotto G. B., Kist T. B. L. SANCT-Structural ANalysis of Contingency Tables. 2004. Предварительная версия программы под названием Collapse свободно доступна на сайте: ftp://ftp.bionet.nsc. ru/pub/biology/dbms.
12. Ivashchenko.E., Glazkov Р. B., Khromov-Borisov N. N., Baranov V. S. Population Study of CTG Trinucleotide Repeats in the Gene for Myotonin Protein Kinase I // Russian J. Genet. 1997. Vol. 33. № 9. P. 1098-1101.
13. Khromov-Borisov N. N., Rogozin I. B., Henriques J. A. Р., de Serres F. J. Similarity pattern analysis in mutational distributions // Mutation Res. 1999. Vol. 430. P. 55-74.
14. Smolyanitsky A. G., Khromov-Borisov N. N., Рopov V. L. et al. Statistical pattern analysis of D1S80 alleles in Northwestern Russians and worldwide database using COLLAPSE software // Int. Congr. Ser. Vol. 1239. Progress in Forensic Genetics. 2003. Vol. 9. P. 665-671.
15. Хромов-Борисов Н. Н, Лаззаротто Г. Б., Кист Т. Б. Л. Биометрические задачи в популяционных исследованиях: Методы популяционной биологии // Матер. докл. VII Всерос. популяционного семинара (часть 2). 16-21 февраля 2004 г. Сыктывкар, 2004. С. 62-86.
16. Bouma G.,Xia B., Crusius J. B. et al. Distribution of four polymorphisms in the tumour necrosis factor (TNF) genes in patients with inflammatory bowel disease (IBD) // Clin. Exp. Immunol. 1996. Vol. 103. P. 391-396.
17. Louis E., Satsangi J., RoussomoustakakiM. et al. Cytokine gene polymorphisms in inflammatory bowel disease // Gut. 1996. Vol. 39. № 5. P. 705-710.
18. Heel D.A. van, Udalova I.A, Silva А Р. de et al. Inflammatory bowel disease is associated with a TNFA polymorphism that effects an interaction between the OCT1 and NF (-kappa) B transcription factors // Hum. Mol. Genet. 2002. Vol. 11. P. 12811289.
1 Данные получены вычитанием более ранних численностей, представленных в статье [28], из более поздних численностей, представленных в автореферате Т.А. Хабеловой [19]. 2 Уточненные данные предоставила О. О. Фаворова (Институт экспериментальной кардиологии ФГУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Росздрава, г. Москва). Изб. гет. - избыток гетерозигот; Деф. гет. - дефицит гетерозигот; К - контрольные группы; ИМ - группы больных инфарктом миокарда.
19. Хабелова Т. А. Клинико-патогенетическое значение полиморфизма генов цитокинов и индуцибельной синтазы оксида азота у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом в республике Башкортостан: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2007.
20. СмольниковаМ. В., Прокофьев В. Ф., Сизякина Л. П. и др. Аллельные варианты генов IL-4, IL-10 и TNFA при ВИЧ-инфекции // Цитокины и воспаление. 2002. № 1. С. 29-32.
21. Авдошина В. В., Дортман В. В., Коненков В. И. и др. Прогноз предрасположенности человека к развитию вирусного гепатита С по полиморфизмам генов цитокинов G-308A TNFA, T-330G IL-2, C-590T IL-4, C-703T IL-5 и С-592Ф IL-10 // Мед. иммунол. 2006. Т. 8. № 5-6. С. 715-720.
22. НекипеловаЕ. В. Полиморфизм генов цитокинов и его клиническое значение у больных хроническим глору- лонефритом: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2007 (см.: http://www.rad.pfu.edu.ru/tmp/avtoref3289.pdf).
23. Ройтберг Г. Е., Кондратова Н. В. Оценка показателей углеводного и липидного обмена у мужчин и женщин с различными аллелями гена фактора некроза опухолей альфа // Профилакт. забол. укреп. здор. 2004. № 4. С. 7-11.
24. Тимковская Е. Е., Петрова Н. В., Каширская Н. Ю. и др. Полиморфизм генов TNFA и LTA у больных муко- висцидозом, гомозиготных по мутации F508del // Молек. генетика. 2007. Т. 6. № 3. С. 27-32.
25. Максимов В. Н. Связь наследственной отягощенности и полиморфизма некоторых генов-кандидатов с сердечнососудистыми заболеваниями и их факторами риска в городской популяции Западной Сибири: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. Новосибирск, 2007.
26. Горбунова И. Л. Клиническая интерпретация метаболических и молекулярно-генетических характеристик тканевой резистентности полости рта: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. Омск, 2007 (см.: http://vak.ed.gov.ru/announcements/ medicin/GorbunovaIL.doc).
27. Сеитова Г. Н., Букреева Е. Б., Буйкин С. В. и др. Роль полиморфизма в промоторной области гена TNF в развитии хронической обструктивной болезни легких // Бюл. сиб. мед. 2004. № 2. С. 29-34 (см.: http://bulletin.tomsk. ru/perl/section/item.pl/image_2133?screen=image&id=2133).
28. Хабелова. А., Вахитов В. А., Хунафина Д.Х., Кутуев О. И. Полиморфизм гена фактора некроза опухолей a у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом // Эпидемиол. и инфекц. болезни. 2006. № 2. С. 24-27.
29. Tulyakova G., Nasibullin T., SalmanovA. et al. Association of the - (GAA) polymorphim of tumor necrosis factor a with myocardial infarction and sudden cardiac death // Balkan J. Med. Genet. 2005. Vol. 8. № 3-4. P. 31-35 (см.: http://www. bjmg.edu.mk/record.asp? recordid=17).
30. Тулякова Г. Х. Полиморфизм генов цитокинов и предрасположенность к инфаркту миокарда и внезапной смерти: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Уфа, 2007.
31. Данилко К. В., Корытина Г. Ф.,Лхмадишина Л. З. и др. Ассоциация полиморфных маркеров генов цитокинов (IL1B, IL1RN, TNFA, LTA, IL6, IL8, IL10) с развитием хронической обструктивной болезни легких // Молек. биол. Т. 41. № 1. C. 26-36.
32. Данилко К. В. Роль генов белков сурфактантов, цитокиновой сети и ренин-ангиотензиновой системы в формировании дыхательных расстройств у новорожденных: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Уфа, 2007 (см.: http://www. anrb.ru./molgen/dissov.html).
33. Бакиров Б. А., Гринчук О. В., Якупова Э. В. и др. Молекулярно-генетический анализ полиморфизма генов интерлейкина-6, факторов некроза опухолей и глутатионА-трансферазы M1 у больных хроническим лимфолейко- зом // Гематол. трансфузиол. 2005. Т. 50. № 1. С. 18-22.
34. Янбаева Д. Г., Байнак О. В., Корытина Г. Ф. и др. Полиморфные варианты генов провоспалительных цитокинов как маркеры предрасположенности к хронической обструктивной болезни легких // Пульмонология. 2004. Т. 14. № 5. С. 17-22 (см.: http://www.pulmonology.ru/Sod/Pdf-04/N5 2004.exe).
35. ЕгороваН. Е. Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Новосибирск, 2007 (см.: http://www.iimed.ru/dissert/avtoref/ egorova).
36. Андреевский Т. В. Комплексный анализ полиморфизма генов иммунного ответа при рассеянном склерозе у русских: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 2007 (см.: http://cardioweb.ru/uploads/autoref/20.doc).
37. Лутфарахманов И. И., Викторова Т. В., Викторов В. В., Миронов П. И. Использование полиморфизма фактора некроза опухолей альфа в качество маркера развития абдоминального сепсиса у пациентов с тяжелым острым панкреатитом // Мед. вестн. Башкортостана. 2007. Т. 2. № 1. С. 68-73.
Статья принята к печати 21 марта 2007 г.
