CC BY
68
№ 6 - 2013 г.
14.00.00 медицинские и фармацевтические науки УДК 618.117-089.888.11:577.112.6
ЭНДОТЕЛИН-1 У ПАЦИЕНТОК С РАЗЛИЧНЫМИ ФОРМАМИ БЕСПЛОДИЯ В ПРОГРАММАХ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ
Л. А. Герилович, М. И. Базина, А. Т. Егорова, А. В. Моргун, А. Б. Салмина
ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В. Ф. Войно-Ясенецкого» Минздрава России (г. Красноярск)
В статье представлены данные об изменении уровней эндотелина-1 в фолликулярной жидкости и сыворотке крови у женщин в стимулированных циклах при различных формах бесплодия. Продемонстрирована возможность использования этого маркера для прогнозирования имплантации эмбрионов в программах вспомогательных репродуктивных технологий.
Ключевые слова: эндотелин-1, бесплодие, фолликулярная жидкость, периферическая кровь, эндотелиальная дисфункция.
Герилович Людмила Александровна — аспирант кафедры акушерства и гинекологии ИПО ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В. Ф. Войно-Ясенецкого», рабочий телефон: 8 (391) 264-29-83, e-mail: ludagerilovich@mail.ru
Базина Марина Ивановна — кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии ИПО ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В. Ф. Войно-Ясенецкого», рабочий телефон: 8 (391) 264-29-83, e-mail: sonya189@mail.ru
Егорова Антонина Тимофеевна — доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой акушерства и гинекологии ИПО ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В. Ф. Войно-Ясенецкого», рабочий телефон: 8 (391) 264-29-83, e-mail: fetus@krasgma.ru
Моргун Андрей Васильевич — кандидат медицинских наук, ассистент кафедры педиатрии ИПО ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В. Ф. Войно-Ясенецкого», рабочий телефон: 8 (391) 243-39-52, e-mail:441682@mail.ru
Салмина Алла Борисовна — доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой биологической химии с курсом медицинской, фармацевтической
и токсикологической химии ИПО ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В. Ф. Войно-Ясенецкого», руководитель НИИ молекулярной медицины и патобиохимии ИПО ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В. Ф. Войно-Ясенецкого», рабочий телефон: 8 (391) 228-07-69, e-mail: allasalmina@mail.ru
Введение. Яичниковый ангиогенез обеспечивает основные функции половой железы женщины — фолликуло- и стероидогенез, определяющие формирование, селекцию и развитие полноценного доминантного фолликула. Однако характер ангиогенеза является не единственным параметром, определяющим состояние кровоснабжения фолликула на каждой отдельной стадии развития, поскольку во многом этот процесс зависит также от свойств эндотелия и баланса эндотелиальных факторов, контролирующих тонус сосудов [2].
Эндотелины плазмы крови оказывают влияние на различные физиологические и патологические процессы, а увеличение их концентрации можно использовать в качестве маркеров патологических процессов в организме человека. Эндотелин-1 является мощным вазоконстриктором, его появление в крови в увеличенном количестве является маркером дисфункции эндотелия. В литературе имеются данные относительно содержания эндотелина-1 в фолликулярной жидкости — его количество выше в гонадотропинстимулированных циклах по сравнению со спонтанными циклами. Однако данные об изменении уровней эндотелина-1 в фолликулярной жидкости и сыворотке крови у женщин с различными формами бесплодия отсутствуют [2-4].
Цель исследования: изучить уровни эндотелина-1 в фолликулярной жидкости и сыворотке крови у пациенток с различными формами бесплодия в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).
Материалы и методы. Проведено когортное исследование 89-ти супружеских пар с различными формами бесплодия, получающих лечение методами ВРТ. Исследование проводилось на базе ООО «Медицинский центр гинекологической эндокринологии и репродукции „Три сердца"» города Красноярска (генеральный директор Сыромятникова С.А.). По форме бесплодия пациентки были разделены на 3 группы: с трубно-перитонеальной формой бесплодия (ТПФ) — 60 пациенток, с эндокринной формой (ЭФ) — 12 женщин, имеющих умеренно выраженный синдром поликистозных яичников (СПЯ), и с мужским фактором бесплодия (МФ) — 17 супружеских пар. Пациентки ТПФ и ЭФ отнесены нами в основную группу исследования, а пациентки с бесплодием, обусловленным мужским фактором, составили контрольную группу.
При анализе результатов исследования показателей эндотелина-1 исследуемые группы были дополнительно разделены на подгруппы с учетом наступления беременности (наступившая беременность — Б+, отсутствие беременности — Б).
Для выявления причин бесплодия пациентки подвергались комплексу стандартных клинико-лабораторных методов обследования, включающих общеклиническое и гинекологическое исследования, УЗИ органов малого таза, эндоскопические методы исследования (лапаро- и гистероскопия) при наличии показаний. Уровни стероидных и гонадотропных гормонов в сыворотке крови (ФСГ, ЛГ, пролактин, эстрадиол) изучались для определения овариальных резервов и выбора схемы индукции суперовуляции. Стимуляцию суперовуляции осуществляли с применением длинного и короткого
протоколов индукции суперовуляции с использованием агонистов и антагонистов гонадотропин-рилизинг гормона. В качестве триггера овуляции использовали хориогонадотропин-альфа — «Овитрель» в дозе 6500 МЕ. Перед началом стимуляции с каждой пациенткой была проведена беседа о планируемом протоколе стимуляции, и получено информированное согласие. Все исследования выполнены с разрешения локального этического комитета КрасГМУ (протокол № 21/2009 от 22.01.2010).
Образцы фолликулярной жидкости получали во время пункции доминантных фолликулов, достигших диаметра 18-20 мм, стимулированных в лечебных циклах ВРТ. Параллельно проводился забор крови из вены. Образцы помещали в стерильные пластиковые пробирки и замораживали для последующего исследования.
Для определения содержания эндотелина-1 использовали наборы для иммуноферментного анализа (ИФА) фирмы «Biomedica Gruppe» (Австрия). Нормальное значение медианы составило 0,26 фмоль/мл.
Статистическая обработка данных проводилась с доверительной вероятностью 0,95. Использовалась описательная статистика: частота в процентах, средняя арифметическая (М), ошибка среднего (m). Методы непараметрической статистики: Манна-Уитни, х2, степень достоверности различий (р). Различие считали достоверным при p < 0,05.
Результаты и обсуждение. Средний возраст пациенток в группе с ТПФ бесплодия составил 34,8 ± 0,95 года, с ЭФ — 35,4 ± 0,6 года и в группе с МФ — 33,6 ± 0,6 года и не имел достоверных различий. В исследуемых группах средняя продолжительность бесплодия была сопоставима и составила: в группе ТПФ — 6,9 ± 0,4 года, в группе ЭФ — 6,3 ± 0,4 года, в группе МФ — 6,2 ± 1,2 года. Вторичное бесплодие достоверно чаще (р < 0,001) встречалось в группе с ТПФ бесплодия и составило 72 % и одинаково часто в группах с ЭФ и МФ — в 50 и 47 % соответственно. Различий между частотой первичного и вторичного бесплодия в группах не обнаружено.
При оценке уровня гонадотропных и стероидных гормонов на 2-3-й день менструального цикла получены следующие результаты (табл. 1).
Таблица 1
Уровни стероидных и гонадотропных гормонов в крови женщин исследуемых
групп
Группа Гормон
ФСГ, МЕ/л M ± m ЛГ, МЕ/л M ± m Пролактин, мМЕ/л M ± m Эстрадиол, пг/мл M ± m
ТПФ (n = 60) 7,4 ± 0,4 6,1 ± 0,4 324,0 ± 18,3 98,7 ± 15,7
ЭФ (n = 12) 6,4 ± 0,7 4,1 ± 0,4 314,0 ± 52,4 72,1 ± 19,5
МФ (n = 17) 7,2 ± 0,8 5,4 ± 0,7 320,6 ± 36,8 53,6 ± 12,6
Достоверность, р — р12 < 0,001 — р1,3 < 0,05
Выявлены достоверные различия в содержании ЛГ в сыворотке крови в группах с ТПФ и ЭФ бесплодия (р < 0,001), а также в содержании эстрадиола в сыворотке крови в группах с ТПФ и группой контроля (р < 0,05). Несмотря на полученные различия в группах, данные показатели находятся в пределах нормального диапазона значений (ЛГ — 1,1-8,7 пг/мл, эстрадиол — 28-156 пг/мл), что подтверждает сохранение овариальных резервов у пациенток исследуемых групп. Более низкие показатели
уровня ЛГ у женщин с ЭФ бесплодия рассматривались нами как основание к изменению схем индукции суперовуляции и применением в них препаратов рекомбинантного ЛГ (рЛГ).
При проведении контролируемой индукции суперовуляции средняя доза рекомбинантного гонадотропин-альфа (рФСГ) в группе с ТПФ составила 1181,4 ± 50,3 МЕ и в 10 % (6) случаев использовался рЛГ в средней дозе 175 ± 2,9 МЕ. В группе с ЭФ доза рФСГ составила 1184,1 ± 97,7 МЕ, и у всех пациенток дополнительно применялся рЛГ в средней дозе 162,5 ± 13,5 МЕ. В контрольной группе данный показатель составил 1224,1 ± 107,6 МЕ и в 35 % (6) случаев рЛГ назначался в средней дозе 175 ± 10,3 МЕ, что также не имело достоверных различий. Средняя продолжительность индукции овуляции была сопоставима между группами и составила 8,4 ± 0,2 дня в группе с ТПФ бесплодия, с ЭФ — 7,8 ± 0,6 дня и 8,6 ± 0,6 дня в контрольной группе. Среднее количество фолликулов к моменту аспирации в группах исследования составило: ТПФ — 8,9 ± 0,4, ЭФ — 8,6 ± 0,9, МФ —10,8 ± 1,1.
Уровни эндотелина-1 в сыворотке крови и фолликулярной жидкости во всех исследуемых группах превышали медианное значение (0,26 фмоль/мл).
На рисунке представлено содержание эндотелина-1 в сыворотке крови и фолликулярной жидкости женщин в исследуемых группах с учетом наступившей беременности.
Уровни эндотелина-1 в фолликулярной жидкости и сыворотке крови в исследуемых группах (фмоль/мл), *— р < 0,05 (метод Манна-Уитни)
У пациенток с ТПФ бесплодия процент наступления беременности на эмбриоперенос составил 42 %. При этом уровни эндотелина-1 были увеличены в сыворотке крови и фолликулярной жидкости, что рассматривалось нами как проявление активного ангиогенеза в стимулированных фолликулах, ассоциированного с умеренно выраженной эндотелиальной дисфункцией.
У пациенток с ЭФ бесплодия процент наступления беременности на эмбриоперенос составил 25 %. У этих женщин нами отмечены аналогичная тенденция в уровнях эндотелина-1 в фолликулярной жидкости. В то же время в сыворотке крови уровни эндотелина-1 достоверно выше (р < 0,05) при наступившей имплантации эмбрионов. Данные изменения позволили нам сделать предположение о наличии патологического ангиогенеза в стимулированных фолликулах и выраженной эндотелиальной дисфункции,
обусловленной дисбалансом половых стероидов [8].
У пациенток контрольной группы наблюдался самый высокий процент наступления беременности на эмбриоперенос, который составил 45 %. Уровни эндотелина-1 в фолликулярной жидкости в сравнении с аналогичными показателями основных групп не имели достоверных различий. Однако в сыворотке крови нами выявлено достоверное повышение уровня эндотелина-1 при отсутствии имплантации. Данные изменения можно объяснить более активным фолликуло- и стероидогенезом у этих пациенток и минимально выраженными проявлениями эндотелиальной дисфункции, что, вероятно, можно связать с отсутствием у них серьезных репродуктивных нарушений, коль скоро развитие выраженной эндотелиальной дисфункции ограничивает возможности имплантации эмбрионов.
Выводы
1. В результате проведенных исследований нами выявлено повышенное содержание эндотелина-1 в фолликулярной жидкости у пациенток исследуемых групп, что может быть обусловлено прямым действием гонадотропных гормонов и особенностями фолликуло- и стероидогенеза стимулированных яичников.
2. Наиболее высокие уровни эндотелина-1 в сыворотке крови наблюдались у пациенток с наступившей беременностью при ЭФ бесплодия (СПЯ), что, на наш взгляд, обусловливает развитие выраженной эндотелиальной дисфункции, связанной
с дисбалансом половых стероидов.
3. Эндотелин-1 в сыворотке крови является маркером неблагоприятного исхода программ ВРТ при его высокой экспрессии у здоровых женщин с бесплодием, обусловленным МФ, и низкой — у женщин с ЭФ бесплодия (СПЯ).
Список литературы
1. Биохимия и физиология семейства эндотелинов / С. А. Патарая, Д. В. Преображенский, Б. А. Сидоренко [и др.] // Кардиология. — 2000. — № 6. — С. 78-85.
2. Роль эндотелина и сосудисто-эндотелиального фактора роста в процессе фолликулогенеза / Е. А. Тепляшина, Е. А. Пожиленкова, М. В. Екимова [и др.] // Рос. вестн. акушера-гинеколога. — 2011. — № 3. — С. 4-8.
3. Чернуха, Г. Е. Синдром поликистозных яичников как фактор риска формирования эндотелиальной дисфункции / Г. Е. Чернуха, И. В. Блинова, Т. В. Балахонова // Проблемы репродукции. — 2008. — № 2. — С. 40-44.
4. Эндотелий. Функция и дисфункция / З. А. Лупинская, А. Г. Зарифьян, Т. Ц. Гурович [и др.]. — Бишкек : КРСУ, 2008. — 373 с.
5. Angiogenesis and vascular function in the ovary / R. S. Robinson, K. J. Woad, A. J. Hammond [et al.] // Reproduction. — 2009. — Vol. 138, N 6. — Р. 869-881.
6. Endothelin-2 in ovarian follicle rupture / C. M. Ko, M. C. Gieske, L. Al-Alem [et al.] // Endocrinology. — 2006. — Vol. 147, N 4. — P. 1770-1779.
7. The level of vascular endothelial cell growth factor, nitric oxide, and endothelin-1 was correlated with ovarian volume or antral follicle counts: a potential predictor of pregnancy outcome in IVF / M. Zhao, C. Chang, Z. Liu [et al.] // Growth Factors. — 2010. — Vol. 28, N 5. — Р. 299-305.
8. Miller V. M. Sex steroids and endothelial function: translating basic science to clinical practice / V. M. Miller, S. L. Mulvagh // Trends. Pharmacol. Sci. — 2007. — Vol. 28, N 6. — Р. 263-270.
ENDOTELIN-1 AT PATIENTS WITH VARIOUS STERILITY FORMS IN PROGRAMS OF AUXILIARY GENESIAL
TECHNOLOGIES
L. A. Gerilovich, M. I. Bazina, A. T. Egorova, A. V. Morgun, A. B. Salmina
SBEIHPE «Krasnoyarsk State Medical University n. a. professor V.F.Voyno-Yasenetsky
of Ministry of Health» (c. Krasnoyarsk)
Data on change of endothelin-1 levels in follicular liquid and blood serum at women in stimulated cycles at various forms of sterility are presented in the article. Possibility of usage of this marker for forecasting of embryos implantation in programs of auxiliary genesial technologies is demonstrated.
Keywords: endothelin-1, sterility, follicular liquid, peripheric blood, endothelial dysfunction.
About authors:
Gerilovich Lyudmila Aleksandrovna — post-graduate student of obstetrics and gynecology chair at PGE at SBEI HPE «Krasnoyarsk State Medical University n. a. professor V.F.Voyno-Yasenetsky of Ministry of Health», office phone: 8 (391) 264-29-83, e-mail: ludagerilovich@mail.ru
Bazina Marina Ivanovna — candidate of medical sciences, assistant professor of obstetrics and gynecology chair at PGE at SBEI HPE «Krasnoyarsk State Medical University n. a. professor V.F.Voyno-Yasenetsky of Ministry of Health», office phone: 8 (391) 264-29-83, e-mail: sonya189@mail.ru
Egorova Antonina Timofeevna — doctor of medical sciences, professor, head of obstetrics and gynecology chair at PGE at SBEI HPE «Krasnoyarsk State Medical University n. a. professor V.F.Voyno-Yasenetsky of Ministry of Health», office phone: 8 (391) 264-29-83, e-mail: fetus@krasgma.ru
Morgun Andrey Vasilyevich — candidate of medical sciences, assistant of pediatrics chair of PGE at SBEI HPE «Krasnoyarsk State Medical University n. a. professor V.F.Voyno-Yasenetsky of Ministry of Health», office phoner: 8 (391) 243-39-52, e-mail:441682@mail.ru
Salmina Alla Borisovna — doctor of medical sciences, professor, head of biological chemistry chair with course of medical, pharmaceutical and toxicological chemistry of PGE at SBEI HPE «Krasnoyarsk State Medical University n. a. professor V.F.Voyno-Yasenetsky of Ministry of Health», principal of scientific research institute of molecular medicine of PGE at SBEI HPE «Krasnoyarsk State Medical University n. a. professor V.F.Voyno-Yasenetsky of Ministry of Health», office phone: 8 (391) 228-07-69, e-mail: allasalmina@mail.ru
List of the Literature:
1. Biochemistry and physiology of endothelins genus / S. A. Pataraya, D. V. Preobrazhensky, B. A. Sidorenko [etc.] // Cardiology. - 2000. - № 6. - P. 78-85.
2. Role of endothelin and vascular and endothelial factor of body height in the course
of folliculogenesis / E. A. Teplyashina, E. A. Pozhilenkov, M. V. Ekimov [etc.] // Rus. bul. of obstetrician-gynecologist. — 2011. — № 3. — P. 4-8.
3. Chernukha G. E. Syndrome of polycystic ovaries as risk factor of formation of endothelial dysfunction / G. E. Chernukha, I. V. Blinova, T. V. Balakhonova // Reproductive Problems.
— 2008. — № 2. — P. 40-44.
4. Endothelium. Function and dysfunction / Z. A. Lupinskaya, A. G. Zarifyan, T. T. Gurovich [etc.]. — Bishkek: KRSU, 2008. — 373 P.
5. Angiogenesis and vascular function in the ovary / R. S. Robinson, K. J. Woad, A. J. Hammond [et al.] // Reproduction. — 2009. — Vol. 138, N 6. — P. 869-881.
6. Endothelin-2 in ovarian follicle rupture / C. M. Ko, M. C. Gieske, L. Al-Alem [et al.] // Endocrinology. — 2006. — Vol. 147, N 4. — P. 1770-1779.
7. The level of vascular endothelial cell growth factor, nitric oxide, and endothelin-1 was correlated with ovarian volume or antral follicle counts: a potential predictor of pregnancy outcome in IVF / M. Zhao, C. Chang, Z. Liu [et al.] // Growth Factors. — 2010. — Vol. 28, N 5.
— P. 299-305.
8. Miller V. M. Sex steroids and endothelial function: translating basic science to clinical practice / V. M. Miller, S. L. Mulvagh // Trends. Pharmacol. Sci. — 2007. — Vol. 28, N 6. — P. 263-270.
