CC BY
45
https://doi.org/10.33647/2074-5982-15-1-102-112
(«О
BY 4.0
ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ДЕЙСТВИИ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА
И ОКСИДА АЗОТА
А.К. Мартусевич134*, А.А. Мартусевич24, А.В. Дерюгина2, С.П. Перетягин4
1 Университетская клиника ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Минздрава России 603155, Российская Федерация, Нижний Новгород, Верхне-Волжская наб., д. 18/1
2 ФГАОУ ВО «Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет
им. Н.И. Лобачевского» 603022, Российская Федерация, Нижний Новгород, просп. Гагарина, д. 23
3 ФГБОУ ВО «Кировский государственный медицинский университет» Минздрава России 610027, Российская Федерация, Киров, ул. Карла Маркса, д. 112
4 Ассоциация российских озонотерапевтов 603089, Российская Федерация, Нижний Новгород, ул. Бориса Панина, д. 9
Целью работы служило изучение электрофоретической подвижности эритроцитов при действии экзогенных активных форм кислорода и оксида азота на образцы крови и организм здоровых крыс. Первый этап эксперимента (in vitro) выполнен на образцах крови 15 здоровых доноров. Каждый образец был разделен на 5 равных порций по 5 мл, первая из которых являлась контрольной (в ней не проводили никаких манипуляций), остальные барботировали различными газовыми смесями (озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 60 мг/л; синглетно-кислородной воздушной смесью; NO-содержащей газовой смесью с концентрацией оксида азота 20 и 100 ppm). Второй этап эксперимента (in vivo) выполнен на 40 половозрелых крысах-самцах популяции линий Wistar, разделенных на 7 групп. Первая группа животных (n=10) являлась контрольной. Животные второй группы (n=5) на протяжении 10 дней получали ежедневные ингаляции озоно-кислородной смеси. Крысам третьей и четвертой групп (n=5 в каждой) в течение 10 дней осуществляли ежедневные ингаляции синглетно-кислородной газовой смеси (50 и 100% мощности генератора), а пятой-седьмой групп (n=5 в каждой) — NO (концентрация соединения — 20, 50 и 100 ppm соответственно). На основании проведенных исследований обнаружен единый характер реагирования биосистем на непосредственное (при обработке крови) и опосредованное (в форме ингаляций) воздействие данных соединений в изучаемых условиях. Так, озоно-кислородная смесь и высокие концентрации оксида азота (100 ppm) обеспечивают снижение электрофоретической подвижности эритроцитов. Напротив, более низкие дозы NO (20 ppm) и синглетный кислород оказывают стабилизирующее влияние на состояние мембран красных клеток крови, повышая антиоксидантный потенциал биосреды. Подобный эффект указанных факторов способствует стимуляции электрокинетических свойств эритроцитов в эксперименте in vivo (при курсовых ингаляциях).
Ключевые слова: эритроциты, электрофоретическая подвижность, озон, синглетный кислород, оксид азота
Конфликт интересов: авторы заявили об отсутствии конфликта интересов.
Для цитирования: Мартусевич А.К., Мартусевич А.А., Дерюгина А.В., Перетягин С.П. Электро-форетическая оценка состояния мембран эритроцитов при действии активных форм кислорода и оксида азота. Биомедицина. 2019;15(1):102-112. https://doi.org/10.33647/2074-5982-15-1-102-112
Поступила 19.11.2018
Принята после доработки 15.01.2019
Опубликована 10.03.2019
I
ELECTROPHORETIC STUDY OF ERYTHROCYTE MEMBRANES UNDER THE ACTION OF REACTIVE OXYGEN SPECIES AND
NITRIC OXIDE
Andrey K. Martusevich1,3,4*, Anastasiia A. Martusevich2,4, Anna V. Deriugina2,
Sergey P. Peretyagin4
1 University Clinic of the Privolzhsky Research Medical University 603155, Russian Federation, Nizhny Novgorod, Verhne-Volzhskaya enbankment, 18/1
2 Lobachevsky State University of Nizhni Novgorod 60360023, Russian Federation, Nizhny Novgorod, Gagarina avenue, 23
3 Kirov State Medical University 610027, Russian Federation, Kirov, Karla Marksa str., 112
4 Russian Association of Ozone Therapy 603089, Russian Federation, Nizhny Novgorod, Borisa Panina str., 9
This study was aimed at estimating the erythrocyte electrophoretic mobility by investigating the effect of exogenous reactive oxygen species and nitric oxide on the blood specimens and organism of healthy rats. In the first (in vitro) experimental stage, blood specimens taken from 15 healthy people were analyzed. Each specimen was divided into 5 portions (5 ml.). One portion was used a as control (without any manipulations), with the rest being treated with different gas mixtures, including an ozone-oxygen mixture with the ozone dose of 60 mg/l; singlet oxygen and an NO-containing gas mixture with 20 and 100 ppm of NO. The second (in vivo) experimental stage was performed on 40 male Wistar rats divided into 7 groups. The first group (n=10) was considered to be a control group. Animals in the second group (n=5) were given daily inhalations with the ozone-oxygen mixture. Rats in the third and fourth groups (n=5 in each) received inhalations with singlet oxygen (under the power of the generator of 50 and 100%, respectively). Animals in the fifth, sixth and eleventh groups (n=5 in each) were given daily inhalations with nitric oxide (under the NO concentration of 20, 50 and 100 ppm, respectively). Our study has demonstrated the biosystems under study to exhibit identical response patterns both to direct (blood treatment) and indirect (inhalations) action of the investigated substances. Thus, the ozone-oxygen mixture and high doses of nitric oxide (100 ppm) are shown to result in a decrease in the electrophoretic mobility of erythrocytes. Alternatively, both low NO doses (20 ppm) and singlet oxygen stabilize erythrocyte membranes by elevating the antioxidant potential of the biofluid. These effects contribute to the activation of erythrocyte electrokinetic properties in vivo experiments (after a course of inhalations).
Keywords: erythrocyte, electrophoretic motility, ozone, singlet oxygen, nitric oxide Conflict of interest: the authors declare no conflict of interest.
For citation: Martusevich A.K., Martusevich A.A., Deriugina A.V., Peretyagin S.P. Electrophoretic Study of Erythrocyte Membranes under the Action of Reactive Oxygen Species and Nitric Oxide. Biomedicine. 2019;15(1):102-112. https://doi.org/10.33647/2074-5982-15-1-102-112
Submitted 19.11.2018 Revised 15.01.2019 Published 10.03.2019
Введение
Биорадикалы, преимущественно представленные в живых системах активными формами кислорода (АФК) и оксидом азота [3, 8, 13], в настоящее время рассматриваются в качестве универсальных низкомолекулярных биорегуляторов, оказывающих влияние на широкий спектр физиологических и патологических процессов [4, 8, 24]. Их регуляторное значение прослеживается в отношении большинства метаболических путей, реализующихся на клеточно-ткане-вом уровне [1, 3, 8, 13, 15]. Учитывая нелинейность биологического ответа живых систем на действие экзогенных и эндогенных биорадикалов, доза последних может рассматриваться в качестве фактора, лимитирующего их эффект [10, 17, 23].
С другой стороны, исследования в области свободнорадикальной медицины преимущественно ориентированы на изучение особенностей модулирующего действия эндогенных биорадикалов на различные параметры биосистем [4, 8], тогда как характер влияния экзогенных соединений с радикальными свойствами до сих пор не раскрыт достаточно полноценно [12, 24]. В частности, на фоне наличия данных об особенностях протекания окислительных процессов в мембранах эритроцитов под влиянием АФК и монооксида азота не уточнен характер воздействия биорадикалов на электрокинетические свойства эритроцитов, зависящие от состояния мембран последних [17, 23]. Ранее публикациями нашего коллектива и работами др. авторов было показано, что электрофорети-ческая подвижность эритроцитов (ЭФПЭ), являющаяся их количественным критерием, может рассматриваться как неспецифический индикатор состояния эритрона и его реакции на изменения гомеостаза и внешние воздействия на организм [5, 20]. В то же время подобные сведения имеются лишь в отношении озона, причем они приводятся только в единичных источниках [17]. На основании этого целью работы служило
изучение электрофоретической подвижности эритроцитов при действии экзогенных активных форм кислорода и оксида азота на образцы крови и организм здоровых крыс.
Материалы и методы
Проведенное исследование имело двух-этапный дизайн, причем на первом этапе изучали непосредственное влияние активных форм кислорода и оксида азота на кровь, а на втором — характер опосредованного эффекта указанных факторов на организм животного при ингаляционном применении.
Первый этап эксперимента (in vitro) выполнен на образцах крови 15 здоровых доноров. Каждый образец был разделен на 5 равных порций по 5 мл, первая из которых являлась контрольной (в ней не проводили никаких манипуляций), остальные барботировали различными газовыми смесями (единые параметры обработки для всех воздействий: объем газовой смеси — 100 мл, продолжительность барботирова-ния — 3 мин [13]). Вторую порцию крови обрабатывали озоно-кислородной смесью (концентрация озона — 60 мг/л), третью — синглетно-кислородной воздушной смесью (примененная мощность генератора — 100%), а четвертую и пятую — NO-содержащей газовой смесью (концентрация оксида азота — 20 и 100 ppm соответственно). Барботаж производили путем медленного пропускания указанных газов через весь объем биологической жидкости, находящейся в стандартной стеклянной пробирке (выходное отверстие — выпускник газа — находилось на дне пробирки). Продолжительность экспозиции после обработки — 5 мин.
Второй этап эксперимента (in vivo) выполнен на 40 половозрелых крысах-самцах популяции линий Wistar, разделенных на 7 групп. Первая группа животных (n=10) являлась контрольной, с ними не проводили никаких манипуляций, кроме однократного получения крови. Животные второй группы
(n=5) на протяжении 10 дней получали ежедневные ингаляции озоно-кислородной смеси. Крысам третьей и четвертой групп (n=5 в каждой) в течение 10 дней осуществляли ежедневные ингаляции синглетно-кисло-родной газовой смеси (50 и 100% мощности генератора), а пятой-седьмой групп (n=5 в каждой) — оксида азота (концентрация соединения в газовом потоке — 20, 50 и 100 ppm для указанных групп соответственно). Продолжительность воздействия составляла 10 мин, скорость потока газовой смеси — 2 л/мин. Синтез NO-содержащей воздушной смеси осуществляли с помощью экспериментального генератора, разработанного в РФЯЦ-ВНИИЭФ (г. Саров, Россия) [7]. Воздушный поток, содержащий синглетный кислород, получали с применением аппарата Aimergy (Германия). Для проведения ингаляций крыс (по одной) помещали в эксикатор, через который осуществляли продувание газового потока.
По завершении полного курса воздействий у животных всех основных групп получали образцы крови. Из них выделяли эритроциты трехкратным отмыванием 0,85% р-ром хлористого натрия с последующим центрифугированием в течение 10 мин при 1500 об./мин. Измерение ЭФПЭ проводили методом микроэлектрофореза в собственной модификации [5, 9, 17]. Суспензию эритроцитов (0,1%) помещали в 10 мМ трис-НС1 буфер (рН 7,4) и фиксировали перемещение клеток при силе тока 8 мА. Величину ЭФПЭ определяли по формуле: U= S/TH, где S — расстояние, на которое перемещались клетки, Т — время перемещения клеток на расстояние S, Н — градиент потенциала.
Это исследование проводилось в соответствии с принципами Базельской декларации и рекомендациями локального этического комитета Университетской клиники ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России.
Полученные данные были обработаны статистически в программном пакете
Statistica 6.0. Нормальность распределения значений параметров оценивали с использованием критерия Шапиро — Уилка. С учетом характера распределения признака для оценки статистической значимости различий применяли Н-критерий Краскела — Уоллеса.
Результаты исследования
В рамках первого этапа эксперимента, выполненного на образцах крови человека, установлено, что изучаемые экзогенные биорадикалы оказывают неодинаковое влияние на ЭФПЭ крови человека. Так, обе изучаемые АФК (озон и синглетный кислород) изменяют данный показатель, однако эти сдвиги разнонаправленны (рис. 1).
В частности, барботирование крови озо-но-кислородной смесью с концентрацией озона 500 мкг/л, что соответствует низким терапевтическим дозам [14], инициирует существенное снижение значения параметра (на 22%; p<0,05 по сравнению с контрольным образцом), тогда как обработка биологической жидкости синглет-но-кислородной газовой смесью вызывает умеренное повышение уровня ЭФПЭ (на 13% относительно контроля; p<0,05). Это обусловлено тем обстоятельством, что даже небольшие количества озона, введенные в биосреду, обеспечивают стимуляцию процессов липопероксидации [12, 14], приводя к структурным перестройкам мембраны эритроцитов и, следовательно, изменению их электрокинетических характеристик.
Напротив, показанное нами ранее в экспериментах in vitro [13] и in vivo [10] ан-тиоксидантное действие синглетного кислорода способствует стабилизации эритроцитарных мембран и повышению их устойчивости, что, в свою очередь, способствует увеличению подвижности клеток крови в электрическом поле.
Оценка влияния различных концентраций оксида азота на электрокинетические свойства эритроцитов позволила установить, что данное воздействие вызывает
1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0
* т
1-Н-н
*
—t—
контроль
озон 500 мкг/л
СК
Рис. 1. Электрофоретическая подвижность эритроцитов (мкм^см^В-1^с-1) при действии активных форм кислорода (* — статистическая значимость различий по сравнению с контролем p<0,05).
Fig. 1. Electrophoretic mobility of erythrocytes (^m^cm^B-1^s-1) under the action of reactive oxygen species (* is the statistical significance of differences compared to the control p<0.05).
1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2
Н-л
г-Н *
контроль
NO 20 ppm
NO 100 ppm
Рис. 2. Электрофоретическая подвижность эритроцитов (мкм^см^В'1^с1) при действии оксида азота в различной концентрации (* — статистическая значимость различий по сравнению с контролем p<0,05). Fig. 2. Electrophoretic mobility of erythrocytes (^m^cm^B-1^s-1) under the action of nitric oxide in various concentrations (* is the statistical significance of differences compared to the control p<0.05).
0
дозозависимое снижение уровня ЭФПЭ (рис. 2). При этом, если при обработке крови относительно небольшим количеством N0 (концентрация в газовой смеси — 20 ррт) эти сдвиги обнаруживаются лишь на уровне тенденции (р<0,1 по сравнению с контрольным образцом), то при барбота-же биологической жидкости более высокой концентрацией оксида азота (100 ррт) вы-
106
явлено снижение изучаемого параметра на 23% по отношению к контролю (р<0,05). По нашему мнению, подобный характер ответа биосистемы на введение N0 связан с тем, что небольшие количества последнего, утилизируясь в процессе реализации его биорегуляторной активности [2, 19, 24] и частично трансформируясь в депонирующие соединения (8-нитрозотиоды,
динитрозильные комплексы железа с высоко- и низкомолекулярными лигандами [21, 22, 24]), не включаются в свободноради-кальные процессы, протекающие в плазме и клетках крови.
С другой стороны, обработка биожидкости более высокой концентрацией N0 обеспечивает условия для формирования его неутилизированного избытка, который способен трансформироваться в высокореактивные химические соединения, в частности пероксинитрит [23]. Обладая крайне высоким окислительным потенциалом, он может атаковать мембраны клеток крови, в том числе эритроцитов, потенцируя интенсивность свободнорадикальных процессов в них. Это, в свою очередь, приводит к изменению структуры эритроци-тарных мембран и, как следствие, к сдвигам ЭФПЭ.
На втором этапе исследования изучали особенности модификации электрокинетических свойств мембран эритроцитов крыс при системном воздействии активных форм кислорода и оксида азота. Было установлено, что, как и в отношении непосредственной обработки крови источниками
радикалов, характер формируемых сдвигов ЭФПЭ определяется количеством и химическим составом воздействующих соединений. Так, при проведении ингаляций АФК выявлено, что озоно-кислородная смесь и синглетный кислород разнонаправленно трансформируют изучаемый параметр (рис. 3). При этом проведение курса ингаляций озона способствует значительному снижению ЭФПЭ (на 30% относительно контрольной группы; p<0,01), что согласуется с результатами эксперимента in vitro. Напротив, проведение ингаляций синглет-ного кислорода обеспечивает стимуляцию подвижности эритроцитов, причем использование полной мощности (100%) генератора данной активной формы кислорода приводило к достаточно существенному смещению уровня параметра (+13%; p<0,05 по сравнению с интактными животными), тогда как при использовании 50% режима наблюдали сохранение физиологического уровня электрокинетической подвижности эритроцитов.
Также интересная динамика ответа была зафиксирована в отношении курсовых ингаляций различных концентраций
контроль
Рис. 3. Электрокинетические свойства эритроцитов крыс (мкм^см^В-1^с-1) при проведении ингаляций активных форм кислорода (СК — ингаляции синглетно-кислородной смеси; «*» — статистическая значимость различий по сравнению с контролемp<0,05).
Fig. 3. Electrokinetic properties of rat erythrocytes (^m^cm^B-1^s-1) during a course of inhalations with reactive oxygen species (СК — singlet oxygen inhalations; * is the statistical significance of differences compared to the controlp<0.05).
Рис. 4. Электрокинетические свойства эритроцитов крыс (мкм^см^В'1^с-1) при проведении ингаляций оксида азота (* — статистическая значимость различий по сравнению с контролемp<0,05).
Fig. 4. Electrokinetic properties of rat erythrocytes (/umxcmxB-1xs-1) during a course of inhalations with nitric oxide (* is the statistical significance of differences compared to the controlp<0.05).
N0 (рис. 4). В частности, минимальная из примененных концентраций (20 ррт) обеспечивает нарастание значения показателя устойчивости мембран эритроцитов и их электрокинетической мобильности. В то же время применение газовой смеси с более высокими концентрациями (50 и 100 ррт) дозозависимо снижало ЭФПЭ (на 15 и 31% относительно интактных животных соответственно; р<0,05 для обоих случаев). Это свидетельствует о двухфазности реакции мембран изучаемых клеток крови на курсовое ингаляционное применение данного оксида азота.
Обсуждение результатов
В настоящее время убедительно показана биорегуляторная роль малых молекул-радикалов [4, 8, 18], к числу которых относятся активные формы кислорода и монооксид азота [3, 6, 10, 15, 16]. С другой стороны, этот постулат касается преимущественно эндогенно генерируемых соединений [4, 15, 19], тогда как в отношении экзогенного их введения подобные сведения немногочисленны [1, 2, 21, 24]. В наших предшествующих работах было экспериментально показано, что эк-
зогенные источники кислород- и нитросо-держащих радикалов способны изменять ряд метаболических параметров крови, включая индикаторы состояния окислительного и энергетического обмена, эрит-роцитарных ферментных систем детокси-кации, как в условиях in vitro (на образцах крови) [5, 13], так и in vivo (у здоровых крыс популяции линий Wistar при ингаляционном и внутрибрюшинном введении) [11]. При этом продемонстрирован дифференцированный и дозозависимый характер ответа на воздействие данных физико-химических факторов. В частности, в этих исследованиях установлено модулирующее действие АФК и оксида азота на состояние мембран эритроцитов. Данный эффект был проиллюстрирован на примере динамики перекисной резистентности, характеризующей интенсивность процессов липопероксидации в эритроцитарных мембранах [11, 13].
Учитывая то обстоятельство, что ЭФПЭ в последние десятилетия рассматривается как интегральный параметр, позволяющий оценивать целостность и функциональные свойства мембран изучаемых клеток крови [10, 17, 23], представляло интерес уточнить
особенности сдвигов данного показателя в условиях влияния эндогенных источников радикалов и сопоставить его реализацию при непосредственной обработке крови и при системном применении фактора (в форме курса ингаляций).
Установлено, что среди изученных агентов наиболее неблагоприятным воздействием обладают ингаляции сухой озоно-кис-лородной смеси и высокие концентрации оксида азота (100 ррт), которые существенно понижают электрокинетические свойства эритроцитов, что может быть обусловлено стимуляцией процессов липопероксидации в мембранах эритроцитов под влиянием данных источников радикалов. Напротив, синглетный кислород, для которого ранее нами показано выраженное антиоксидант-ное действие на биосистемы [10, 13, 22], способствует упрочнению липидного каркаса мембран, ингибируя процессы пере-кисного окисления липидов в последних. Аналогичный эффект прослеживается и в отношении низкой концентрации оксида азота (20 ррт), повышая мобильность рассматриваемых клеток крови в электрическом поле. Эти сдвиги ЭФПЭ, характерные для курсовых ингаляций синглетного кислорода и N0 в концентрации 20 ррт, трактуются нами как благоприятные, проадаптив-ные. Приведенные результаты полностью подтверждают ранее продемонстрированное положительное действие указанных факторов на метаболические параметры крови, в частности, на состояние окислительного
и энергетического обмена, ферментных систем детоксикации и др. [10-13]. Это позволяет предположить, что одной из основных «точек приложения» экзогенных источников радикалов выступают свободнорадикальные процессы в мембранах эритроцитов, опосредующие биологические эффекты изучаемых соединений.
Заключение
На основании проведенных исследований обнаружен единый характер реагирования биосистем на непосредственное (при обработке крови) и опосредованное (в форме ингаляций) воздействие данных соединений в изучаемых условиях. Так, озоно-кислородная смесь и высокие концентрации оксида азота (100 ppm) обеспечивают снижение электрофоретической подвижности эритроцитов. Напротив, более низкие дозы NO (20 ppm) и синглетный кислород оказывают стабилизирующее влияние на состояние мембран красных клеток крови, повышая антиоксидантный потенциал биосреды. Подобный эффект указанных факторов способствует стимуляции электрокинетических свойств эритроцитов в эксперименте in vivo (при курсовых ингаляциях). Таким образом показано, что экзогенные биорадикалы (активные формы кислорода и оксид азота) специфично и дозозависимо влияют на электрокинетические свойства эритроцитов в условиях in vitro и in vivo.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ_
1. Ванин А.Ф., Чазов Е.И., Капелько В.И., Писа-ренко О.И., Шумаев К.Б., Максименко А.В., Ру-уге Э.К., Тимошин А.А., Лакомкин В.Л., Цкити-швили О.В., Серебрякова Л.И., Мох В.П. Участие активных форм кислорода в модуляции гипотензивного эффекта динитрозильных комплексов железа // Кардиологический вестник. — 2007. — № 2. — С. 31-37.
2. Власова М.А., Смирин Б.В., Покидышев Д.А., Машина С.Ю., Ванин А.Ф., Малышев И.Ю., Манухи-
на Е.Б. Механизм адаптации сосудистой системы к хроническому изменению уровня оксида азота в организме // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2006. — № 12. — С. 626-630.
3. Граник В.Г., Григорьев Н.Б. Оксид азота (N0). Новый путь к поиску лекарств. — М.: Вузовская книга, 2004.
4. Гусакова С.В., Ковалев И.В., Смаглий Л.В., Бирулина Ю.Г., Носарев А.В., Петрова И.В., Медведев М.А., Орлов С.Н., Реутов В.П. Газовая сигнализация
в клетках млекопитающих // Успехи физиологических наук. — 2015. — Т. 46, № 4. — С. 53-73.
5. Дерюгина А.В., Ошевенский Л.В., Таламано-ва М.Н., Цветков А.И., Шабалин М.А., Гля-вин М.Ю., Крылов В.Н. Изменение электрокинетических и биохимических характеристик эритроцитов при действии электромагнитных волн терагерцового диапазона // Биофизика. — 2017. — Т. 62, № 6. — С. 1108-1113.
6. Заворотная Р.М. Синглетный кислород при лечении ряда патологических процессов: физико-химические аспекты // Украинский ревматологический журнал. — 2002. — № 1. — С. 35-37.
7. Карелин В.И., Буранов С.Н., Пименов О.А. и др. Плазмохимическая установка для NO-терапии // Медиаль. — 2013. — № 4. — С. 46.
8. Костюк В.А., Потапович А.И. Биорадикалы и био-антиоксиданты. — Минск: БГУ, 2004.
9. Крылов В.Н., Дерюгина А.В., Плескова С.Н. Элек-трофоретическая подвижность и морфометрия эритроцитов крыс при стрессовых воздействиях // Современные технологии в медицине. — 2010. — № 4. — С. 23-26.
10. Мартусевич А.А., Перетягин С.П., Мартусе-вич А.К. Молекулярные и клеточные механизмы действия синглетного кислорода на биосистемы // Современные технологии в медицине. — 2012. — №2. — С. 128-134.
11. Мартусевич А.К., Соловьева А.Г., Ашихмин С.П., Перетягин С.П. Влияние ингаляций оксида азота на состояние окислительного и энергетического метаболизма крови крыс // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. — 2015. — Т. 101, № 2. — С. 180-188.
12. Мартусевич А.К., Соловьева А.Г., Перетягин С.П. Влияние свободного и депонированного оксида азота на энергетический метаболизм крови // Современные технологии в медицине. — 2013. — Т. 5, № 4. — С. 33-38.
13. Мартусевич А.К., Соловьева А.Г., Перетягин С.П., Митрофанов В.Н. Оценка влияния некоторых физических факторов на энергетический метаболизм крови in vitro // Биомедицина. — 2013. — № 1. — С. 103-108.
14. Перетягин С.П., Стручков А.А., Мартусевич А.К., Костина О.В., Лузан А.С. Применение озона как средства детоксикации в раннем периоде ожоговой болезни // Скорая медицинская помощь. — 2011. — Т. 12, № 3. — С. 39-43.
15. Реутов В.П., Охотин В.Е., Шуклин А.В. Оксид азота (NO) и цикл NO в миокарде: молекулярные, биохимические и физиологические аспекты // Успехи физиологических наук. — 2007. — Т. 38, № 4. — С. 39-58.
16. Самосюк И.З., Фисенко Л.И. (ред.) Синглетно-кис-лородная терапия. — Киев, 2007.
17. Симутис И.С. Дерюгина А.В., Бояринов Г. А. и др. Изменение электрофоретической подвижности и формы эритроцитов при действии озона на эритроцитарную массу // Медиаль. — 2013. — № 4. — С. 20-21.
18. Halliwell B., Gutteridge J.M.C. Free radicals in biology and medicine. — Oxford, UK: Oxford University Press, 1999.
19. Ignarro L.J., Buga G.M., Wood K.S., Byrns R.E., Chaudhuri G. Endothelium-derived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1987. — Vol. 84. — P. 9265-9269.
20. Nihei Y., Asai H., Ukai T., Marimoto H., Nakajima Y., Hanajiri T., Maekawa T. Detection of surface immun-oreactions on individual cells by electrophoretic mobility measurement in a micro-channel // Sensors and actuators. — 2008. — Vol. 131. — P. 285-289.
21. Shumaev K.B., Gubkin A.A., Serezhenkov V.A., et al. Interaction of reactive oxygen and nitrogen species with albumin- and hemoglobin bound dinitrosyl iron complexes // Nitric Oxide Biol. Chem. — 2008. — Vol. 18. — P. 37-46.
22. Titov V.Yu., Ivanova A.V., Petrov V.A., Serezhenkov V.A., Mikoyan V.D., Vanin A.F., Osipov A.N. Can Summary Nitrite+Nitrate Content Serve as an Indicator of NO Synthesis Intensity in Body Tissues? // Bull. Exp. Biol. Med. — 2012. — Vol. 153, No. 6. — P. 840-843.
23. van der Vliet A., Eiserich J.P., Halliwell B., Cross C.E. Formation of reactive nitrogen species during perox-idase-catalyzed oxidation of nitrite. A potential additional mechanism of nitric oxide-dependent toxicity // J. Biol. Chem. — 1997. — Vol. 272. — P. 7617-7625.
24. Vanin A.F. Dinitrosyl-iron complexes with thi-olate ligands: physico-chemistry, biochemistry and physiology // Nitric Oxide Biol. Chem. — 2009. — Vol. 21. — P. 136-149.
25. Xie L., Sun D., Yao W., Wen Z. Microrheological characteristics of reticulocyte in vivo // Science in China. — 2002. — Vol. 45, No. 1. — P. 50-55.
REFERENCES_
1. Vanin A.F., Chazov E.I., Kapel'ko V.I., Pisarenko O.I., Shumaev K.B., Maksimenko A.V., Ruuge Eh.K., Timoshin A.A., Lakomkin V.L., Ckitishvili O.V., Serebryakova L.I., Moh V.P. Uchastie aktivnyh form kisloroda v modulyacii gipotenzivnogo ehffekta dinitrozil'nyh kompleksov zheleza [Role of reactive
oxygen species in modulation of hypotensive effect of dinitrosyl iron complexes]. Kardiologicheskij vestnik [Cardiol. Gerald]. 2007. No. 2. Pp. 31-37. (In Russian).
2. Vlasova M.A., Smirin B.V., Pokidyshev D.A., Mashina S.Yu., Vanin A.F., Malyshev I.Yu., Manuh-ina E.B. Mekhanizm adaptacii sosudistoj sistemy k
hronicheskomu izmeneniyu urovnya oksida azota v organizme [Mechanism of adaptation of cardiovascular system tochronic shift of nitric oxide level in organism]. Byulleten' ehksperimental'noj biologii i mediciny [Bull. Exp. Biol. and Med.]. 2006. V. 12. Pp. 626-630. (In Russian).
3. Granik V.G., Grigor'ev N.B. Oksid azota (NO). Novyj put' k poisku lekarstv [Nitric oxide (NO). New way to drug discovery]. Moscow: Vuzovskaya kniga, 2004. (In Russian).
4. Gusakova S.V., Kovalev I.V., Smaglij L.V., Birulina Yu.G., Nosarev A.V., Petrova I.V., Medve-dev M.A., Orlov S.N., Reutov V.P. Gazovaya signal-izaciya v kletkah mlekopitayushchih [Gas signaling in mammalian cells]. Uspekhi fiziologicheskih nauk [Advances in physiological sciences]. 2015. V. 46, No. 4. Pp. 53-73. (In Russian).
5. Deryugina A.V., Oshevenskij L.V., Talamanova M.N., Cvetkov A.I., Shabalin M.A., Glyavin M.Yu., Krylov V.N. Izmenenie ehlektrokineticheskih i biohimicheskih harak-teristik ehritrocitov pri dejstvii ehlektromagnitnyh voln teragercovogo diapazona [Changes of electrokinetic and biochemical characteristics of erythrocytes under action of electromagnetic waves of terahertz mode]. Biophysics. 2017. V. 62, No. 6. Pp. 1108-1113. (In Russian).
6. Zavorotnaya R.M. Singletnyj kislorod pri lechenii ryada patologicheskih processov: fiziko-himicheskie aspekty [Singlet oxygen in treatment of some pathological processes: physical and chemical aspects]. Ukra-inskiy revmatologicheskiy zhurnal [Ukrainian Rheumatology J.]. 2002. No. 1. Pp. 35-37. (In Russian).
7. Karelin V.I., Buranov S.N., Pimenov O.A., et al. Plazmo-himicheskaya ustanovka dlya NO-terapii [Plasmo chemical device for NO-therapy]. Medial. 2013. No. 4. P. 46. (In Russian).
8. Kostyuk V.A., Potapovich A.I. Bioradikaly i bioantiok-sidanty [Bioadicals and antioxidants]. Minsk: BGU, 2004. (In Russian).
9. Krylov V.N., Deryugina A.V., Pleskova S.N. Ehlektro-foreticheskaya podvizhnost i morfometriya ehritrocitov krys pri stressovyh vozdejstviyah [Electrophorhetic motility and morphometry of rats erythrocytes under stress conditions]. Sovremennye tekhnologii v medicine [Modern technology in medicine]. 2010. No. 4. Pp. 23-26. (In Russian).
10. Martusevich A.A., Peretyagin S.P., Martusevich A.K. Molekulyarnye i kletochnye mekhanizmy dejstviya singletnogo kisloroda na biosistemy [Molecular and cellular mechanism of the action of singlet oxygen on biological systems]. Sovremennye tekhnologii v medicine [Modern technology in medicine]. 2012. No. 2. Pp. 128-134. (In Russian).
11. Martusevich A.K., Solov'eva A.G., Ashikhmin S.P., Peretyagin S.P. Vliyanie ingalyacij oksida azota na sostoyanie okislitelnogo i ehnergeticheskogo metabol-izma krovi krys [The influence of nitric oxide inhalations on the state of oxidative and energy metabolism in rats
blood]. Ros. fiziol. zhurn. im. I.M. Sechenova [Russ. J. of Physiol. Russian named after I.M. Sechenov]. 2015. V. 101, No. 2. Pp. 180-188. (In Russian).
12. Martusevich A.K., Solov'eva A.G., Peretyagin S.P. Vliyanie svobodnogo i deponirovannogo oksida azota na ehnergeticheskij metabolizm krovi [The influence of bound nitric oxide on blood energy metabolism. Sovremennye tekhnologii v medicine [Modern technology in medicine]. 2013. V. 5. No. 4. Pp. 33-38. (In Russian).
13. Martusevich A.K., Solov'eva A.G., Peretyagin S.P., Mitrofanov V.N. Ocenka vliyaniya nekotoryh fiziches-kih faktorov na ehnergeticheskij metabolizm krovi in vitro [Estimation of the influence of some physical factors on blood energy metabolism in vitro]. Bio-medicine. 2013. No. 1. Pp. 103-108. (In Russian).
14. Peretyagin S.P., Struchkov A.A., Martusevich A.K., Kostina O.V., Luzan A.S. Primenenie ozona kak sred-stva detoksikacii v rannem periode ozhogovoj bolezni [Use of the ozone as a detoxication remedy in early period of burn disease]. Skoraya meditsinskaya pomosch [Emergency]. 2011. V. 12, No. 3. Pp. 39-43. (In Russian).
15. Reutov V.P., Ohotin V.E., Shuklin A.V. Oksid azota NO i cikl NO v miokarde: molekulyarnye, biohimicheskie i fiziologicheskie aspekty [Nitric oxide (NO) and NO cycle in the myocardium: molecular, biochemical and physiological aspects]. Uspekhi fiziologicheskih nauk [Advances in physiological sciences]. 2007. V. 38, No. 4. Pp. 39-58. (In Russian).
16. Samosyuk I.Z., Fisenko L.I. (edited). Singlet-no-kislorodnaya terapiya [Singlet-oxygen therapy]. Kiev, 2007. (In Russian).
17. Simutis I.S., Deriugina A.V., Boyarinov G.A., et al. Izmenenie ehlektroforeticheskoj podvizhnosti i formy ehritrocitov pri dejstvii ozona na ehritrocitarnuyu massu [Changes of electrophorhetic motility and share of erythrocytes under ozone action on erythrocyte mass]. Medial. 2013. No. 4. Pp. 20-21. (In Russian).
18. Halliwell B., Gutteridge J.M.C. Free radicals in biology and medicine. Oxford, UK: Oxford University Press, 1999.
19. Ignarro L.J., Buga G.M., Wood K.S., Byrns R.E., Chaudhuri G. Endothelium-derived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. V. 84. Pp. 9265-9269.
20. Nihei Y., Asai H., Ukai T., Marimoto H., Nakajima Y., Hanajiri T., Maekawa T. Detection of surface immun-oreactions on individual cells by electrophoretic mobility measurement in a micro-channel. Sensors and actuators. 2008. V. 131. Pp. 285-289.
21. Shumaev K.B., Gubkin A.A., Serezhenkov V.A., et al. Interaction of reactive oxygen and nitrogen species with albumin- and hemoglobin bound dinitrosyl iron complexes. Nitric Oxide Biol. Chem. 2008. V. 18. Pp. 37-46.
22. Titov V.Yu., Ivanova A.V., Petrov V.A., Serezhen-kov V.A., Mikoyan V.D., Vanin A.F., Osipov A.N. Can Summary Nitrite+Nitrate Content Serve as an Indicator of NO Synthesis Intensity in Body Tissues? Bull. Exp. Biol. Med. 2012. V. 153. No. 6. Pp. 840-843.
23. van der Vliet A.., Eiserich J.P., Halliwell B., Cross C.E. Formation of reactive nitrogen species during perox-idase-catalyzed oxidation of nitrite. A potential addi-
tional mechanism of nitric oxide-dependent toxicity. J. Biol. Chem. 1997. V. 272. Pp. 7617-7625.
24. Vanin A.F. Dinitrosyl-iron complexes with thiolate lig-ands: physico-chemistry, biochemistry and physiology. Nitric Oxide Biol. Chem. 2009. V. 21. Pp. 136-149.
25. Xie L., Sun D., Yao W., Wen Z. Microrheological characteristics of reticulocyte in vivo. Science in China. 2002. V. 45. No. 1. Pp. 50-55.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ | INFORMATION ABOUT THE AUTHORS
Мартусевич Андрей Кимович*, д.б.н., Университетская клиника ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Минздрава России; зав. лаб. биокристалломи-ки и свободнорадикальной медицины, ФГБОУ ВО «Кировский государственный медицинский университет» Минздрава России; ученый секретарь, Ассоциация российских озонотерапевтов; e-mail: cryst-mart@yandex.ru
Andrey K Martusevich*, Dr. Sci. (Biology), University Clinic of the Privolzhsky Research Medical University; Head of Laboratory of Biocrystallom-ica and Free Radical Medicine, Kirov State Medical University; Scientific Secretary, Russian Association of Ozone Therapy; e-mail: cryst-mart@yandex.ru
Мартусевич Анастасия Анатольевна, Институт биологии и биомедицины ФГАОУ ВО «Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского»; Ассоциация российских озонотерапевтов
Дерюгина Анна Вячеславовна, д.б.н., доц., Институт биологии и биомедицины ФГАОУ ВО «Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского»
Перетягин Сергей Петрович, д.м.н., проф., Ассоциация российских озонотерапевтов
Anastasiia A. Martusevich, Institute of Biology and Biomedicine of the Lobachevsky State University of Nizhni Novgorod; Russian Association of Ozone Therapy
Anna V. Deriugina, Dr. Sci. (Biology), Associate Professor, Institute of Biology and Biomedicine of the Lobachevsky State University of Nizhni Novgorod
Sergey P. Peretyagin, Dr. Sci. (Med.), Professor, Russian Association of Ozone Therapy
* Автор, ответственный за переписку / Corresponding author
