Экспрессия микроркн-21 в почечной ткани и моче у крыс с односторонней обструкцией мочеточника Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ISSN 1561-6274. Нефрология. 2017. Том 21. №1.

Экспериментальные исследования

© И.Г.Каюков, Г.Т.Иванова, М.И.Зарайский, О.Н.Береснева, М.М.Парастаева, А.Г.Кучер, А.В.Смирнов, 2017 УДК [616.617-007.272 : 547.963.3]-092

И.Г. Каюков1, Г.Т. Иванова2, М.И. Зарайский3, О.Н. Береснева1, М.М. Парастаева1, А.Г. Кучер1, А.В. Смирнов1

ЭКСПРЕССИЯ микроРНК-21 В ПОЧЕЧНОЙ ТКАНИ И МОЧЕ У КРЫС С ОДНОСТОРОННЕЙ ОБСТРУКЦИЕЙ МОЧЕТОЧНИКА

1Научно-исследовательский институт нефрологии Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, 2лаборатория экспериментальной и клинической кардиологии Института физиологии им. И.П. Павлова РАН, 3Научно-методический центр по молекулярной медицине МЗ РФ, лаборатория молекулярной диагностики диагностики Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия

I.G. Kayukov1, G.T. Ivanova2, M.I. Zaraiskii3, O.N. Beresneva1, M.M. Parastaeva1, A.G. Kucher1, A.V. Smirnov1

EXPRESSION miRNA-21 IN RENAL TISSUE AND URINE IN RATS WITH UNILATERAL URETERAL OBSTUCTION

1Research institute of Nephrology, First Pavlov Saint-Petersburg State Medical University; 2Laboratory of Experimental and Clinical Cardiology. Institute of Physiology named after I.P. Pavlov of the Russian Academy of Sciences; 3Department of Clinical Laboratory Diagnostics, First Pavlov Saint Petersburg State Medical University, Saint-Petersburg, Russia

РЕФЕРАТ

ЦЕЛЬ: оценить уровень экспрессии микроРНК-21 в ткани почек и моче крыс с односторонней обструкцией мочеточника (ООМ). МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. ООМ вызывали путем перевязки левого мочеточника у крыс-самцов линии Wistar (n=10). Срок наблюдения составил 14 сут после моделирования ООМ. Собирали мочу накануне оперативного вмешательства (UmiRNA21C) и за сутки до окончания эксперимента (UmiRNA21|), в течение 24 ч. При выведении животного из эксперимента производили забор пробы мочи из лоханки левой почки (UmiRNA21O) и образцов ткани левой (KmiR-NA21O) и правой (KmiRNA21|) почек. Экспрессию миРНК-21 в ткани почек и моче определяли при помощи реакции амплификации (RealTime PCR-протокол). Расчет проводился по методу 2-deltaCt. Статистическую обработку проводили с применением критерия Вилкоксона и коэффициента корреляции Спирмена. Результаты представлены как медиана [нижний - верхний квартиль]. РЕЗУЛЬТАТЫ. UmiRNA21| (3,78[2,0-5,28]) и UmiRNA21O (3,78[3,25-3,82]) оказались значимо выше, чем UmiRNA21C (1,15[0,71-1,74]; р=0,0125 и р=0,0069, respectively). Величины UmiRNA21| и UmiRNA21O оказались практически одинаковыми. В почках с ООМ тканевой уровень экспрессии миРНК-21 был несколько выше, чем в контралатеральном органе (р=0,0926). Выявлена значимая прямая корреляция между KmiRNA| и KmiRNAO (Rs=0,770, р=0,0092). ЗАКЛЮЧЕНИЕ. ООМ вызывает специфические изменения в экспрессии, распределении и выведении миРНК-21. Однако механизмы активации при почечной патологии данной миРНК и ее роль в развитии почечного тубу-лоинтерстициального фиброза требует дальнейших исследований.

Ключевые слова: микроРНК-21, тубулоинтерстициальный фиброз, односторонняя обструкция мочеточника. ABSTRACT

THE AIM: to estimate the level of expression miRNA-21 in the urine and renal tissue in rats with unilateral ureteral obstruction (UUO). MATHERIAL AND METHODS. UUO was induced by ligation of the left ureter in male Wistar rats (n=10). Follow-up period was 14 days after UUO modeling. Urine was collected one day before the operation (UmiRNA21C), and one day before the end of experiment (UmiRNA211) during 24 hours. Before releasing animal out of experiment collected urine from left kidney pelvis (UmiRNA21O) and tissue of left kidney (KmiRNA21O) and right kidney (KmiRNA21|). MiRNA-21 expression in kidney tissues and urine was carried out with reaction amplification (RealTime PCR-protocol). Calculation was realized by 2-deltaCt method. Statistical analysis was performed with Wilcoxon test and Spearman correlation coefficient. Results are demonstrated as median [low - upper quartile]. RESULTS. UmiRNA21| (3.78[2.0-5.28]) and UmiRNA21 O (3.78[3.25-3.82]) were significantly higher than UmiRNA21C (1.15[0.71-1.74]; P=0.0125 and P=0.0069, respectively). UmiRNA21| and UmiRNA21O values were practically equal. |n kidneys with UUO the tissue levels of miRNA21 expression was a higher than in contralateral organ (P=0,0926). Revealed direct correlation between KmiRNA| and KmiRNAO (RS=0,770, P=0,0092). CONCLUSION. UOO can cause specific changes in the expression, distribution and excretion of micro RNA-21 and its role in the development of renal tubulointestitsial fibrosis requires further studies.

Key words: miRNA-21, tubulointerstitial fibrosis, unilateral ureteral obstruction.

Каюков И.Г. 197022, Россия, Санкт-Петербург, ул. Л.Толстого, д.17, корп.54. Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Научно-исследовательский институт нефрологии, лаборатория клинической физиологии почек. Тел.: (812) 346-39-26, E-mail: kvaka55@mail.ru

ВВЕДЕНИЕ

МикроРНК - это некодирующие РНК, включающие, в среднем, около 22 пар нуклеотидов. Считается, что эти РНК вовлечены в прогресси-рование целого ряда заболеваний [1-6]. Они являются регуляторами экспрессии генов на посттранскрипционном уровне. Более 90% генов у млекопитающих находятся под их контролем.

К настоящему времени в геноме человека описано более 2000 миРНК [7]. миРНК обладают специфичностью экспрессии в отношении тканей и типов клеток. Установлено, что для почек специфическими являются миРНК-146а, миРНК-886, миРНК-192, миРНК-194, миРНК-204, миРНК-215 и миРНК-216, а миРНК-196а/Ь, миРНК-10а/Ь, миРНК-130, миРНК-146, миРНК-200а, миРНК-30а-е, миРНК-872 и миРНК-21- высокоспецифичными [8-10]. При этом миРНК-21 довольно обильно экспрессируется и во многих других тканях и клетках человека. Она является наиболее изученной многофункциональной миРНК. Ее ген локализуется в межгенной области хромосомы 17q23,1, размер - 72 пары нуклеотидов, фланкирован белок-кодирующим геном ТМЕМ49. Ген миРНК-21 имеет свой собственный промотор и транскрибируется вне зависимости от ТМЕМ49. МиРНК-21-нокаутные мыши являются жизнеспособными, дают потомство и не имеют отличий в гистологии. Эти данные позволили сделать вывод о том, что миРНК-21 не является обязательным компонентом для нормального развития организма [11].

В настоящее время активно изучается возможное участие миРНК в механизмах развития повреждения почечной ткани при различных заболеваниях. При большинстве поражений почек развитие фиброза определяется комплексом механизмов (иммуновоспалительных, метаболических, гемодинамических), точную грань между ролью которых провести невозможно [12]. Однако на конечном этапе формирования фиброза основную роль играет экспрессия провоспалительных и профибротических цитокинов, которые, зачастую, начинают действовать вне зависимости от причин, вызвавших их активацию. Результаты некоторых исследований позволяют предположить, что миРНК-21 играет ведущую роль в развитии эпителиально-мезенхимальной трансформации и ренального фиброза [11, 13-15]. Однако сведений о деталях экспрессии миРНК-21 и ее последствиях в таких ситуациях недостаточно.

В связи с этим целью нашей работы было оценить уровень экспрессии миРНК-21 в ткани почек и моче у крыс Wistar с односторонней обструкцией

мочеточника (ООМ) - классической моделью экспериментального тубулоинтерстициального фиброза.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Для создания экспериментальной модели ту-булоинтерстициального фиброза на фоне ООМ были использованы самцы крыс Wistar (n=10) массой 230-250 г (питомник Колтуши РАН).

Методика выполнения оперативного вмешательства. Под общей анестезией - ксила-зин (0,05 мл) в сочетании с тилетамин/золазепам (0,3 мл) внутрибрюшинно выполняли перевязку левого мочеточника. На мочеточник накладывали 2 лигатуры (использовали шелк 2/0 Silkam). Участок мочеточника между лигатурами перерезали. Правую почку (с неповрежденным мочеточником) использовали в качестве контроля [16]. Срок наблюдения составил 14 сут после моделирования ООМ.

Накануне оперативного вмешательства и за сутки до окончания эксперимента у крыс, находящихся в метаболической камере, в течение 24 ч собирали мочу для последующего определения экспрессии миРНК-21 (контрольная порция мочи - UmiRNA21C и моча из интактной почки -UmiRNA21j соответственно). При выведении животного из эксперимента у каждой крысы производили забор (с помощью шприца) пробы мочи из лоханки левой почки (моча из почки с обструкцией мочеточника - UmiRNA21O) и образцов ткани левой (KmiRNA21O) и правой (KmiRNA21:) почек для определения экспрессии миРНК-21.

Эксперименты выполняли в соответствии с международными стандартами по работе с лабораторными животными с разрешения этического комитета Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова.

Экспрессия миРНК-21 в ткани почек и моче экспериментальных животных определялась при помощи реакции амплификации (RealTime PCR-протокол). Расчет проводился по методу 2-deltaCt.

Статистическую обработку данных проводили с применением стандартных пакетов программ прикладного статистического анализа (Statistica 10.0 for Windows). Использовали критерий Вил-коксона и коэффициент корреляции Спирмена. Уровень статистической значимости соответствовал р<0,05. Результаты исследования представлены как медиана [нижний - верхний квартиль].

РЕЗУЛЬТАТЫ

Через 14 дней после оперативного вмешательства экспрессия микроРНК значительно повыша-

Таблица

Матрица корреляций между уровнями относительной экспрессии миРНК-21в моче и почечной ткани у исследованных животных. Коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Статистически значимые коэффициенты выделены жирным шрифтом

Коррелируемые показатели UmiRNA21C UmiRNA21| UmiRNA21O KmiRNA21| KmiRNA21O

UmiRNA21C - -0,067 0,043 -0,213 -0,249

UmiRNA21, -0,067 - -0,448 -0,236 -0,212

UmiRNA21O 0,043 -0,448 - 0,067 0,117

KmiRNA21, -0,213 -0,236 0,067 - 0,770

KmiRNA21O -0,249 -0,212 0,117 0,770 -

лась как в моче из интактной почке (UmiRNA21I: 3,78 [2,0-5,28]), так и в моче из почки с перевязанным мочеточником (UmiRNA21O: 3,78 [3,253,82]) по сравнению с контрольными показателями (UmiRNA21O: 1,15 [0,71-1,74], р = 0,0125 и р= 0,0069 соответственно; рис. 1, 2). Уровни относительной экспрессии миРНК-21 в моче из неповрежденных почек и органов с обструкцией мочеточника на 14-е сутки эксперимента были практически одинаковыми (р = 0,953).

В тканях почек с обструкцией мочеточника уровень экспрессии миРНК-21 (19,22 [4,9245,25]) был больше, чем в неповрежденном орга-

то

р=0,0125

□Median

..?2£ь7.5%...

UmlRNA21C UmlRNA21l

Рис. 1. Экспрессия миРНК-21 в контрольной порции мочи и моче из интактной почки.

ТО

р=0,0069

□Median х25-75%

ит11ЧМА21С ит11ЧМА211

Рис. 2. Экспрессия миРНК-21 в контрольной порции мочи и моче из почки с обструкцией мочеточника.

не (9,38 [0,66-27,86]). Однако эти различия не достигали статистической значимости (р = 0,0926).

Была выявлена прямая корреляция между уровнями экспрессии миРНК-21 в тканях почек с обструкцией мочеточника и интактных почках (Яв = 0,770, р = 0,0092).

Все остальные изученные ассоциации оказались статистически не значимыми (таблица).

ОБСУЖДЕНИЕ

В настоящей работе в моче и почечной ткани крыс с ООМ, как и во многих экспериментальных исследованиях механизмов развития почечного фиброза, выявлялось повышение экспрессии миРНК [13,17]. Более того, в нашей предыдущей работе у пациентов с различными нефропатиями также была обнаружена более высокая мочевая экспрессия миРНК-21, чем у здоровых лиц. При этом у больных с большей выраженностью тубу-лярной атрофии величина экспрессии миРНК-21 в моче оказалась выше [18].

Установлено, что при повреждении тканей, особенно при инфаркте миокарда [19, 20] и остром повреждении почек [21], миРНК-21 является одной из наиболее активируемых. Длительная избыточная активация миРНК-21 ведет к разрастанию соединительной ткани. Этот факт подтвержден в целом ряде моделей сердечного [22], легочного [23] и почечного [15, 24] фиброза. В то же время, введение олинуклеотидов - ингибиторов миРНК-21 замедляет процессы фиброзирова-ния тканей [15, 24].

Молекулярные механизмы, через которые миРНК-21 приводит к развитию фиброза, в последние годы активно изучаются. Одним из таких механизмов является TGFp/Smad-система, которая стимулирует нуклеарный фактор транскрипции №кВ, который, в свою очередь, опосредует выработку провоспалительных цитокинов, прежде всего, фактора некроза опухолей а (Т№-а) и интерлейкина-1р (Ш-1р) [4, 14, 15, 24].

Не вызывает сомнения, что TGFpl является

ключевым медиатором прогрессирования почечного фиброза [25, 26].

В наших предыдущих работах на крысах с ООМ также было выявлено повышение активности как нуклеарного фактора транскрипции NFkB, так и TGFP1 в почечной ткани [4, 27]. TGFP1 и его изоформы (TGFP2 и TGFP3) синтезируются многими клетками, включая все типы клеток почек, и секретируются в виде латентных предшественников. Связывание активированного TGFP со своим рецептором приводит к фосфорилированию ряда Smad (Sma and Mad related рго1;ет8)-белков, а именно активируемых рецептором Smads (R-Smads). R-Smads затем связываются с так называемым общим Smad-белком (Smad 4), образуя гетеродимерный комплекс. Этот комплекс проникает в ядро, где связываясь с SBE-элементами (Smad binding element) промотерных участков генов-мишеней, регулирует транскрипцию. Так, одно исследование показало, что R-Smads в фи-бробластах, гладкомышечных клетках сосудов, эпителиальных клетках канальцев связываются с SBE-элементом, расположенном в промоторе гена миРНК-21, запуская таким образом транскрипцию ее предшественников [24, 28]. миРНК-21 в свою очередь подавляет Smad 7, который является ингибитором TGFp/Smad-пути. Возможны также и другие механизмы, при помощи которых миРНК-21 способствует прогрессированию фиброза, например, активация ERK/MAP-киназы [22].

Необходимо отметить, что уровень экспрессии миРНК-21 в моче значимо повышается при нарастании выраженности атрофии канальцев от незначительной до умеренной. При этом в экспериментальных работах показано, что наибольшая экспрессия миРНК-21 характерна для эпителиальных клеток канальцев [15]. Почечный фиброз характеризуется апоптозом и некрозом тубулярных клеток, лейкоцитарной инфильтрацией, пролиферацией тубулоинтерстициальных фибробластов и накоплением интерстициального матрикса [24] и является конечной стадией повреждения почек.

Полученные данные, по крайней мере, не противоречат предположению о том, что ООМ может активировать экспрессию миРНК-21 в почечной ткани, что далее модулирует деятельность миРНК-21 -ассоциированных сигнальных путей формирования почечного фиброза. Однако особенностью результатов настоящего исследования является обнаружение того, что односторонняя перевязка мочеточника приводит к нарастанию экспрессии миРНК-21 в моче не только из повреж-

денной, но и из интактной контралатеральной почки. При этом уровни такой экспрессии оказываются практически идентичными. Отмечены также тенденция к более высоким значениям активации миРНК-21 в почке с ООМ по сравнению с интактной и статистически значимая прямая связь между этими показателями. Все это позволяет несколько расширить взгляды о механизмах индукции экспрессии миРНК в условиях патологии, но не дает ответа на существенный вопрос: какой механизм лежит в основе усиления экспрессии миРНК-21 в моче, полученной из контралатеральной почки? Возможно, в таких условиях эта миРНК из почки с обструкцией высвобождается в системный кровоток и далее попадает в контра-латеральный орган и в мочу. Однако такая интерпретация встречает существенное препятствие. Как тогда объяснить отсутствие значимых связей между экспрессией миРНК-21 в почечной ткани и моче? Не исключено, например, что использованное экспериментальное воздействие вообще приводит к усилению экспрессии миРНК-21 на системном уровне за счет неустановленных механизмов. Очевидно, что данные проблемы требуют дополнительного изучения. Тем не менее, стоит иметь в виду, что полученные данные призывают проявить осторожность к использованию мочевой экспрессии миРНК-21, как маркера повреждения почек (почечного фиброза) в клинике. Такая настороженность должна сохраняться, по крайней мере, до тех пор, пока маркерная роль мочевой миРНК-21 не будет четко доказана не только в экспериментальных, но и клинических исследованиях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, односторонняя обструкция мочеточника вызывает специфические изменения в экспрессии, распределении и выведении миРНК-21. Однако механизмы активации при почечной патологии данной миРНК и ее роль в развитии почечного тубулоинтерстициального фиброза требуют дальнейших исследований.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

1. Kataoka M, Wang DZ. Non-Coding RNAs Including miRNAs and IncRNAs in Cardiovascular Biology and Disease. Cells 2014; 3(3): 883-898

2. Condorelli G, Latronico MV, Cavarretta E. microRNAs in cardiovascular diseases: current knowledge and the road ahead. J Am Coll Cardiol 2014; 63(21): 2177-2187

3. Gharipour M, Sadeghi M. Pivotal role of microRNA-33 in metabolic syndrome: A systematic review. ARYA Atheroscler 2013; 9(6): 372-376

4. Смирнов АВ, Кучер АГ, Добронравов ВА и др. Диетарный

соевый протеин замедляет развитие интерстициального почечного фиброза у крыс с односторонней обструкцией мочеточника: введение в нутритивную эпигеномику. Нефрология 2012; 16(4):75-83 [Smirnov AV, Kucher AG, Do-bronravov VA i dr. Dietarnyi soevyi protein zamedljаet razvitie intersticial'nogo pochechnogo fibroza u krys s odnostoronnei obstrukciei mochetochnika: vvedenie v nutritivnuyu yеpigenomiku. Nefrologijа 2012; 16(4):75-83]

5. Adams BD, Kasinski AL, Slack FJ. Aberrant Regulation and Function of MicroRNAs in Cancer. Curr Biol 2014; 24(16): R762-R776

6. Qingqing W, Qing-Sheng M, Zheng D. The regulation and function of microRNAs in kidney diseases. IUBMB Life 2013; 65(7): 602-614

7. Kozomara A, Griffiths-Jones S. miRBase: integrating mi-croRNA annotation and deep-sequencing data. Nucleic Acids Res 2011; 39: D152-157

8. Landgraf P, Rusu M, Sheridan R et al. A mammalian mi-croRNA expression atlas based on small RNA library sequencing. Cell 2007; 129(7): 1401-1414

9. Sun X Koo S, White N et al. Development of a micro-array to detect human and mouse microRNAs and characterization of expression in human organs. Nucleic Acids Res 2004; 32(22): e188

10. Chandrasekaran K, Karolina DS, Sepramaniam S et al. Role of microRNAs in kidney homeostasis and disease. Kidney Int 2012; 81(7): 617-627

11. Kumarswamy R, Volkmann I, Thum T. Regulation and function of miRNA-21 in health and disease. RNA Biol 2011; 8(5): 706-713

12. Lan HY Diverse Roles of TGF-ß/Smads in Renal Fibrosis and Inflammation. Int J Biol Sci 2011; 7(7): 1056-1067

13. Duffield JS, Grafals M, Portilla D. MicroRNAs are potential therapeutic targets in fibrosing kidney disease: lessons from animal models. Drug Discov Today Dis Models 2013; 10(3):e127-e135

14. Patel V, Noureddine L. MicroRNAs and fibrosis. Curr Opin Nephrol Hypertens 2012; 21(4): 410-416

15. Zarjou A, Yang S, Abraham E,Agarwal A et al. Identification of a microRNA signature in renal fibrosis: role of miR-21. Am J Physiol Renal Physiol 2011; 301(4): F793-F801

16. Береснева ОН, Парастаева ММ, Иванова ГТ и др. Влияние метформина на формирование тубулоинтерстициального фиброза у крыс. Нефрология 2014; 19(6): 45-48 [Beresneva ON, Parastaeva MM, Ivanova GT i dr. Vl^nie metformina na formirovanie tubulointersticial'nogo fibroza u krys. Nefrologijа 2014; 19(6): 45-48]

17. Chung AC, Lan HY. MicroRNAs in renal fibrosis. Front Physiol 2015; 6:50. doi: 10.3389/fphys.2015.00050

18. Cмирнов АВ, Карунная АВ, Зарайский МИ и др. Экспрессия микроРНК-21 в моче у пациентов с нефропатиями. Нефрология 2014; 18(6): 59-63 [Smirnov AV, Karunnaya AV, Za-rayskiy MI i dr. Ekspressiya mikroRNK-21 v moche u patsientov s nefropatiyami. Nefrologiya 2014; 18(6): 59-63]

19. D'Alessandra Y, Devanna P, Limana F et al. Circulating microRNAs are new and sensitive biomarkers of myocardial infarction. Eur Heart J 2010; 31(22): 2765-2773

20. Shi B, Guo X Wang J, Gao W. Altered expression of microR-NAs in the myocardium of rats with acute myocardial infarction. BMC Cardiovasc Disord 2010; 10:11

21. Godwin JG, Ge X, Stephan K et al. Identification of a microRNA signature of renal ischemia-reperfusion injury. Proc Natl Acad Sci USA 2010; 107: 14339-14344

22. Thum T, Gross C, Fiedler J et al. MicroRNA-21 contributes to myocardial disease by stimulating MAP kinase signalling in fibroblasts. Nature 2008; 456: 980-984

23. Liu G, Friggeri A, Yang Y et al. miR-21 mediates fibrogenic activation of pulmonary fibroblasts and lung fibrosis. J Exp Med 2010; 207: 1589-1597

24. Zhong X, Chung AC, Chen HY et al. Smad3-mediated upregulation of miR-21 promotes renal fibrosis. J Am Soc Nephrol 2011; 22: 1668-1681

25. Bottinger EP. TGF-beta in renal injury and disease. Semin Nephrol 2007; 27: 309-320

26. Wang W, Koka V, Lan HY Transforming growth factor-beta and Smad signalling in kidney diseases. Nephrology (Carlton) 2005;10(1):48-56

27. Смирнов АВ, Иванова ГТ, Береснева ОН и др. Экспериментальная модель интерстициального почечного фиброза. Нефрология 2009; 13(4): 70-74 [Smirnov AV, |vanova GT, Beresneva ON i dr.Yeksperimental'najа model' intersticial'nogo pochechnogo fibroza. Nefrologijа 2009; 13(4): 70-74]

28. Davis BN, Hilyard AC, Lagna G, Hata A. SMAD proteins control DROSHA-mediated microRNA maturation. Nature 2008;454:56-61

Сведения об авторах:

Проф. Каюков Иван Глебович

197022, Россия, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, д. 17, корп. 54. Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Научно-исследовательский институт нефрологии, лаборатория клинической физиологии почек, заведующий. Тел.: (812) 346-3926, E-mail: kvaka55@mail.ru Prof. Ivan G. Kayukov MD, PhD, DMedSci. Affiliations: 197022 Russia, St-Petersburg, L. Tolstoy st. 17, build. 54, First Pavlov St.-Petersburg State Medical University, Institute of Nephrology, Laboratory of Clinical Physiology of the Kidney, head. Phone (812)346-39-26, E-mail: kvaka55@mail.ru

Иванова Галина Тажимовна, канд. биол. наук 199034, Россия, Санкт-Петербург, наб. Макарова, д. 6. Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, лаборатория экспериментальной и клинической кардиологии, ст. науч. сотр. Тел.: (812) 328-07-01, E-mail: tazhim@list.ru Galina T. Ivanova, PhD.

Affiliations: 199034, Russia, St-Petersburg, Makarov emb. 6, Institute of Physiology named after I. P. Pavlov Russian Academy of Sciences, Laboratory of Experimental and Clinical Cardiology, senior researcher. Phone: (812) 3280701, E-mail: tazhim@list.ru

Проф. Зарайский Михаил Игоревич

197022, Россия, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, д. 6-8, корп. 28. Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Научно-методический центр по молекулярной медицине МЗ РФ, лаборатория молекулярной диагностики, зав. лабораторией. Тел.: +7904-334-37-54, E-mail: mzaraiski@yandex.ru Prof. Mikhail I. Zaraiskii, MD, PhD, DMedSci. Affiliations: 197022, Russia, St-Petersburg, L.Tolstoy st. 6-8, build. 28, First Pavlov St.-Petersburg State Medical University, Scientific and methodological center for molecular medicine, laboratory of molecular diagnostics, head. Phone: +7904-334-3754, E-mail: mzaraiski@yandex.ru

Береснева Ольга Николаевна, канд. биол. наук 197022, Россия, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, д. 17, корп. 54. Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им.акад. И.П.Павлова, Научно-исследовательский институт нефрологии, лаборатория клинической физиологии почек, ст. науч. сотр. Тел.: (812) 34639-26, E-mail: beresnevaolga@list.ru Olga N. Beresneva, PhD

Affiliations: 197022, Russia, St-Petersburg, L.Tolstoy st. 17, build. 54, First Pavlov St.-Petersburg State Medical University, Institute of Nephrology, Laboratory of Clinical Physiology of the Kidney, senior researcher. Phone: (812)346-39-26, E-mail: beresnevaolga@list.ru

Парастаева Марина Магрезовна, канд. биол. наук 197022, Россия, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, д. 17, корп. 54. Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Научно-исследовательский институт нефрологии, лаборатория клинической физиологии почек, ст. науч. сотр. Тел.: (812) 34639-26, E-mail: beresnevaolga@list.ru Marina M. Parastaeva, PhD.

Affiliations: 197022 Russia, St-Petersburg, L.Tolstoy st. 17, build. 54, First Pavlov St.-Petersburg State Medical University, Institute of Nephrology, Laboratory of Clinical Physiology of the Kidney, senior researcher. Phone: (812)346-39-26, E-mail: beresnevaolga@list.ru

Проф. Кучер Анатолий Григорьевич

197022, Россия, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, д. 17, корп. 54. Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Научно-исследовательский институт нефрологии, заместитель директора. Тел.: +7921-421-18-17, E-mail: prof.kucher@yandex.ru

Prof. Anatoly G. Kucher MD, PhD, DMedSci Affiliations: 197022, Russia, St-Petersburg, L.Tolstoy st., 17, build. 54, First Pavlov St.-Petersburg State Medical University, Institute of Nephrology, vice-director. Phone: +7921-421-18-17; E-mail: prof.kucher@yandex.ru

Проф. Смирнов Алексей Владимирович

197022, Россия, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, д. 17,

корп. 54. Первый Санкт-Петербургский государственный

медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Научно-

исследовательский институт нефрологии, директор. Тел.:

(812) 338-69-01; E-mail: smirnov@nephrolog.ru

Prof. Alexey V. Smirnov MD, PhD, DMedSci.

Affiliations: 197022, Russia, St-Petersburg, L.Tolstoy st., 17,

build. 54, First Pavlov St.-Petersburg State Medical, Institute of

Nephrology, director. Phone: (812) 338-69-01; E-mail: smirnov@

nephrolog.ru

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Поступила в редакцию: 18.06.2016 г.

Принята в печать: 05.12.2016 г.