CC BY
39
ЛАБОРАТОРНЫЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
УДК: 617.51/.617.57-006.61:577.218
ЭКСПРЕССИОННЫй ПРОФИЛЬ МИКРОРНК ПРИ ПЛОСКОКЛЕТОЧНОМ РАКЕ ГОЛОВЫ И ШЕИ
Ю.А. Веряскина1, Г.В. Какурина2, Е.С. Журавлев1, С.Е. Титов13, И.В. Кондакова2, О.В. Черемисина2, Д.А. Шишкин2, И.Ф. Жимулев1, Е.Л. Чойнзонов24, Н.Н. Колесников1
Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, г Новосибирск1 Томский НИИ онкологии, г Томск2 ЗАО «Вектор-Бест», г Новосибирск3
ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» МЗ РФ, г. Томск4 630090, г Новосибирск, пр. Академика Лаврентьева, 8/2, e-mail: fl-31@mail.ru1
Аннотация
Плоскоклеточные карциномы головы и шеи (ПКГШ) отличаются высокой агрессивностью и длительным бессимптомным течением. Диагностика заболевания на ранних стадиях и оценка риска метастазиро-вания, а также прогноза течения опухолевого процесса являются приоритетной задачей современной клинической онкологии, что требует поиска и разработки новых прогностических маркеров заболевания. Такими маркерами могут служить микроРНК (миРНК) - относительно недавно открытый класс малых некодирующих РНК. На основании литературных данных и собственных исследований мы выбрали 12 миРНК (миРНК-21, -221, -222, -155, -205, -20а, -125Ь, -146Ь, -181Ь, -200а, -126, -451), участвующих в процессе канцерогенеза ПКГШ. Методом ПЦР в реальном времени определены изменения уровня экспрессии выбранной группы миРНК в опухоли по сравнению с неизмененной тканью. Установлено увеличение уровня экспрессии 5 миРНК: миРНК-21, -155, -181Ь, -126, -451 (р<0,05) - непосредственно в опухоли по сравнению с окружающей неизмененной тканью. Также в результате исследования получены данные, указывающие на различия в содержании миРНК-126 между опухолями с наличием и без метастазов в регионарные лимфоузлы (р<0,05), что может быть важным аспектом в понимании процессов метастазирования и разработки нового прогностического маркера.
Ключевые слова: опухоли головы и шеи, микроРНК, метастазирование.
Клиническое течение плоскоклеточных карцином головы и шеи (ПКГШ) отличается высокой агрессивностью и длительным бессимптомным развитием, местные рецидивы ПКГШ и метастазы в лимфоузлы шеи сокращают 5-летнюю выживаемость пациентов практически вдвое [6]. Для улучшения результатов лечения важно определить риск развития рецидива опухоли и метастазов до их клинической реализации, что требует поиска и разработки новых прогностических маркеров заболевания. Предложено много новых белковых маркеров для прогнозирования течения ПКГШ: матриксные металлопротеиназы и их ингибиторы, протеасомная и кальпаиновая системы [5, 14]. Активно ведется поиск новых биомаркеров ПКГШ с использованием протеомных [1, 2] и транскриптомных технологий [3]. Открытие нового класса малых некодирующих РНК - микроРНК (миРНК) (~22 нуклеотида) определило новое направление в онкологии. МиРНК, комплементарно связываясь с 3' концевым районом гена, модулируют экспрессию белок-кодирующих
Веряскина Юлия Андреевна, fl-31@mail.ru
генов, причем как одна миРНК имеет более десятка генов-мишеней, так и один ген может находиться под контролем нескольких миРНК. К настоящему времени показано, что миРНК не только ассоциированы с различными типами опухолей, но могут сами выступать в роли онкогенов и супрессоров новообразований, т.е. быть первопричиной злокачественных превращений наряду с соматическими мутациями в генах [10]. Анализ литературных данных о роли миРНК в канцерогенезе при ПКГШ показал, что для оценки возможности их использования в качестве маркеров или терапевтических мишеней необходимы дальнейшие исследования.
Цель исследования — поиск новых диагностических маркеров путем изучения профилирования экспрессии миРНК в образцах ткани пациентов с плоскоклеточными карциномами гортани на основе выявления ассоциативной связи между выбранными миРНК (миРНК-21, -221, -222, -155, -205, -20а, -125Ь, -146Ь, -181Ь, -200а, -126, -451) и клинико-морфологическими параметрами заболевания.
ЛАБОРАТОРНЫЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материал и методы
В работе представлены результаты исследования операционного и биопсийного материала, полученного от 60 пациентов с верифицированным диагнозом плоскоклеточной карциномы разной степени дифференцировки: Т^Мо (п=14), Т2^Мо (п=14), ТзКоМо (п=15), Т4КоМо (п=8), Т-Д^Ц» (п=9), поступивших на лечение в отделение опухолей головы и шеи Томского НИИ онкологии. Средний возраст больных - 53 ± 5,3 года. Работа проведена с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности в соответствии с «Основами законодательства РФ об охране здоровья граждан» (Указ Президента РФ № 2288, от 24.12.93), получено разрешение этического комитета Томского НИИ онкологии.
Для хранения и транспортировки операционного материала использовался раствор для стабилизации РНК RNAlater, позволяющий выделять РНК из тканей и клеток без замораживания в жидком азоте. Выделение суммарного пула РНК проводили с помощью набора «РеалБест экстракция 1оо» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск) в соответствии с инструкцией производителя. Концентрация и качество выделенной РНК оценивались на спектрофотометре NanoDrop 2оооС (ThermoScientific, США). Чистоту препарата оценивали как отношение поглощения при длинах волн 2бо нм/28о нм и 2бо нм/23о нм. Для чистой РНК соотношение
А2бо/28о - 2,8 А2бо/23о - 1,8-2,2. Обратная Транскрипция была проведена при помощи специфичных
праймеров к миРНК: hsa-miR-21, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-155, hsa-miR-205, hsa-miR-20a, hsa-miR-125b, hsa-miR-146b, hsa-miR-181b, hsa-miR-200a, hsa-miR-126, hsa-miR451. Реакцию обратной транскрипции проводили с использованием готовой реакционной смеси «РеалБест Мастер микс ОТ» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск). Полученную кДНК, в объеме 3 мкл, сразу использовали в качестве матрицы для проведения ПЦР.
Измерение уровней экспрессии миРНК проводили методом ПЦР в реальном времени на амплифика-торе CFX96 (Bio-Rad Laboratories, США) [8]. В качестве референсного гена использовали малую РНК U6. Реакцию ПЦР проводили в объеме 30 мкл с использованием готовой реакционной смеси «РеалБест Мастер микс» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск) и раствора прямого и обратного праймеров (5 мкМ) и зонда (2.5 мкМ). Статистическая обработка проводилась с применением непараметрического U-критерия Манна - Уитни в программе Statistica 10.0.
Результаты и обсуждение
Профилирование экспрессии миРНК
у больных ПКГШ T1_4N0M0 стадии
Геном человека насчитывает около 1 900 генов миРНК. Для одной миРНК характерно более 100 генов-мишеней (Release 21, http://www.mirbase. org/). В зависимости от их роли в процессе канцерогенеза все миРНК разделены на онкогены и онкосупрессоры. В то же время одна миРНК может выступать как в роли онкогена, так и в роли опухолевого супрессора в зависимости от её гена-мишени и ткани, в которой она экспрессируется. На основе базы mirBase, анализа литературных и собственных экспериментальных данных выбраны миРНК, относящиеся к «онкомиру» и характерные для большинства видов карцином. Анализ уровня экспрессии выбранных 12 миРНК в опухолевых образцах, взятых у больных с плоскоклеточной карциномой гортани T^NqMq стадии, показал увеличение уровня экспрессии 9 миРНК: миРНК -21, -221, -22, -155, - 205, -146b, -181b, -200a, -126, -451 - и снижение уровня экспрессии трех миРНК: миРНК -20a, -125b, -200a (рис. 1).
Мы полагаем, что выявленные незначительные различия уровней экспрессии миРНК -221, -222, -205, -20a, -125b, -146b, -200a в опухоли и прилежа-
Рис. 1. Изменение экспрессии миРНК в образцах ПКГШ по сравнению с неизмененной тканью: столбцы черного цвета обозначают медианное значение миРНК для группы неизмененной ткани, столбцы серого цвета - медианное значение миРНК для группы опухолевой ткани. * - различия статистически значимы в опухолевой ткани по сравнению с неизмененной тканью (р<0,05); ** - различия статистически значимы в опухолевой ткани по сравнению с неизмененной тканью (р<0,001)
Ю.А. Веряскина, Г.В. Какурина, Е.С. Журавлев и др.
ЭКСПРЕССИОННЫй ПРОФИЛЬ МИКРОРНК
щей неизменённой ткани являются характерными для ПКГШ, в отличие от опухолей других локализаций [4]. Нами наблюдалось увеличение уровня экспрессии миРНК-21 в опухоли по сравнению с неизмененной тканью более чем в 3 раза (p<0,001). МиРНК-21 является онкогеном с множеством доказанных мишеней-онкосупрессоров [16], и ее экспрессия повышена в различных злокачественных опухолях [4], в том числе и при ПКГШ [13]. Мы наблюдали увеличение уровня экспрессии миРНК-155 более чем в 2 раза в опухолевой ткани в сравнении с неизмененной тканью (p<0,05). МиРНК-155 также является онкогеном, играет важную роль в различных биологических процессах, таких как гемопоэз, дифференцировка, воспаление, рак [15, 20]. Экспрессия миРНК-155 повышена практически во всех типах рака, включая ПКГШ [21]. Уровень миРНК-181Ь был увеличен почти в 3 раза в опухолевой ткани по сравнению с неизмененной тканью (p<0,001). Согласно литературным данным, миРНК-181Ь обладает различными свойствами в зависимости от типа ткани, в которой она экс-прессируется. Так, в клетках глиомы человека миРНК-181Ь является онкосупрессором и участвует в регуляции апоптоза опухолевых клеток [17]. В ПКГШ миРНК-181Ь является онкогеном и играет важную роль в злокачественной трансформации клеток [7, 18]. В представленной работе показано увеличение уровня миРНК-126 в опухолевой ткани более чем в 5 раз по сравнению с неизмененной тканью (p<0.001). МиРНК-126 является онкосупрессором, а также участвует в процессах ангио-генеза [11]. X. Yang et al. показали, что экспрессия миРНК-126 in vitro значительно снижает пролиферацию клеток, прогрессию клеточного цикла и инвазию [19]. Кроме того, миРНК-126 регулирует многие аспекты эндотелиальной клеточной биологии, включая миграцию клеток, реорганизацию
цитоскелета, стабильность капиллярных сетей, и требуется для поддержания сосудистой системы [12]. Уровень миРНК-451 был увеличен более чем в 7 раз (р<0.05) по сравнению с неизмененной тканью. Возможно, это связано с участием миРНК-451 в процессах инвазии [9].
Профилирование экспрессии миРНК
у больных ПКГШ Tз^N0_зM0_1 стадии
На втором этапе работы проводилось сравнение экспрессии выбранной группы миРНК у больных с ПКГШ Тз_4К0М0 (п=23) и Тз_4К0_зМ0_1 (п=9). Анализ профиля миРНК в сравнительных группах выявил тенденцию к увеличению уровня экспрессии всех исследуемых миРНК. Однако статистически значимое различие наблюдается только для миРНК-126 (р<0,05) (рис. 2). Вероятно, повышение уровня миРНК-126 в образцах тканей больных с ПКГШ Тз_^М стадии по сравнению с Тз_4^0 связано со способностью регулировать процессы ангиогенеза и миграцию клеток. Полученные результаты говорят о перспективности использования миРНК-126 в качестве маркёра метастазирования при ПКГШ.
Заключение
Выявленные изменения уровней экспрессии выбранной группы миРНК позволили сформировать профиль миРНК, характерный для ПКГШ, который может отражать процессы, происходящие в опухолевой ткани во время прогрессирования данного заболевания. Учитывая различия в содержании миРНК-126 в опухолях у больных с наличием и без метастазов в регионарные лимфоузлы (р<0,05), мы полагаем, что этот показатель может быть важным для понимания процессов метастазирования и разработки нового прогностического маркёра.
Рис. 2. Изменение экспрессии миРНК в образцах у больных с ПКГШ Тз_4^М0 стадии по сравнению с больных с ПКГШ Тз_^0_зМ0_1 стадии: столбцы черного цвета обозначают медианное значение миРНК для опухолевой ткани при ПКГШ Тз_^М0 стадии, столбцы серого цвета _ медианное значение миРНК для опухолевой ткани при ПКГШ Тз_^0_зМ0_1 стадии; * _ различия статистически значимы
по сравнению с группой больных без метастазов (р<0,05)
ЛИТЕРАТУРА
1. Какурина Г.В., Кондакова И.В., Чойнзонов Е.Л. Постгеномные технологии в прогнозе метастазирования плоскоклеточных карцином головы и шеи // Российский биотерапевтический журнал. 2011. Т. 10, № 3. С. 31-36.
2. Какурина Г.В., Кондакова И.В., Чойнзонов Е.Л., Шишкин Д.А., Черемисина О.В. Особенности протеома сыворотки крови больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи // Сибирский онкологический журнал. 2013. № 2. С. 62-66.
3. Какурина Г.В., Кондакова И.В., Чойнзонов Е.Л. Прогнозирование метастазирования плоскоклеточных карцином головы и шеи // Вопросы онкологии. 2012. Т. 58, № 1. С. 26-32.
4. КолесниковН.Н., Титов С.Е., ВеряскинаЮ.А., КарпинскаяЕ.В., Шевченко С.П., Ахмерова Л.Г., Иванов М.К., Козлов В.В., Елисафен-ко Е.А., Гуляева Л.Ф., Жимулёв И.Ф. МикроРНК, эволюция и рак // Цитология. 2013. Т. 55, № 3. С. 159-164.
5. СпиринаЛ.В., КондаковаИ.В. Роль внутриклеточного специфического протеолиза в онкогенезе // Вопросы онкологии. 2008. Т. 54, № 6. С. 690-694.
6. Чойнзонов Е.Л., Балацкая Л.Н., Кицманюк З.Д., Мухамедов М.Р., Дубский С.В. Реабилитация больных опухолями головы и шеи. Томск, 2003. 296 с.
7. CervigneN.K., ReisP.P., Machado J., SadikovicB., Bradley G., Gal-loniN.N., PintilieM., JurisicaI., Perez-OrdonezB., GilbertR., GullaneP., Irish J., Kamel-Reid S. Identification of a microRNA signature associated with progression of leukoplakia to oral carcinoma // Hum. Mol. Genet. 2009. Vol. 18 (24). P. 4818-4829. doi: 10.1093/hmg/ddp446.
8. Chen C., RidzonD.A., Broomer A.J., Zhou Z., LeeD.H., Nguyen J.T., Barbisin M., Xu N.L., Mahuvakar V.R., Andersen M.R., Lao K.Q., LivakK.J., GueglerK.J. Real-time quantification of microRNAs by stem-loop RT-PCR // Nucleic Acids. Res. 2005. Vol. 33 (20):e179.
9. Chen D., Huang J., Zhang K., Pan B., Chen J., De W., Wang R., Chen L. MicroRNA-451 induces epithelial-mesenchymal transition in docetaxel-resistant lung adenocarcinoma cells by targeting proto-oncogene c-Myc // Eur. J. Cancer. 2014. Vol. 50 (17). P. 3050-3067. doi:10.1016/ j.ejca.2014.09.008.
10. Croce C.M. Causes and consequences of microRNA dysregula-tion in cancer // Nat. Rev. Genet. 2009. Vol. 10 (10). P. 704-714. doi: 10.1038/nrg2634.
11. EbrahimiF., Gopalan V., Smith R.A., Lam A.K. MiR-126 in human cancers: clinical roles and current perspectives // Exp. Mol. Pathol. 2014. Vol. 96 (1). P. 98-107. doi: 10.1016/j.yexmp.2013.12.004.
12. Fish J.E., SantoroM.M., MortonS.U., Yu S., YehR.F., Wythe J.D., Ivey K.N., Bruneau B.G., Stainier D.Y., Srivastava D. MiR-126 regulates angiogenic signaling and vascular integrity // Dev. Cell. 2008. Vol. 15 (2). P. 272-284. doi: 10.1016/j.devcel.2008.07.008.
13. Jamali Z., AslAminabadiN., AttaranR., PournagiazarF., Ghertasi Oskouei S., Ahmadpour F. MicroRNAs as prognostic molecular signatures in human head and neck squamous cell carcinoma: A systematic review and meta-analysis // Oral. Oncol. 2015. Vol. 51 (4). P. 321-331. doi: 10.1016/j. oraloncology. 2015.01.008.
14. Kondakova I.V., Klisho E.V., Savenkova O.V., Kakurina G.V., Cho-inzonovE.L., ShishkinD.A., Mukhamedov M.R. Matrix metalloproteinases 2 and 9 as the factors of head and neck tumor metastases // Biochemistry (Moscow) Supplement Series B: Biomedical Chemistry. 2008. Vol. 2, № 3. P. 298-301.
15. Lind E.F., Ohashi P.S. Mir-155, a central modulator of T-cell responses.// Eur. J. Immunol. 2014. Vol. 44 (1). P. 11-15.
16. Pennelli G., Galuppini F., Barollo S., Cavedon E., Bertazza L., Fassan M., Guzzardo V., Pelizzo M.R., Rugge M., Mian C. The PDCD4/ miR-21 pathway in medullary thyroid carcinoma // Hum. Pathol. 2015. Vol. 46 (1). P. 50-57. doi: 10.1016/j.humpath.2014.09.006.
17. Shi L., Cheng Z., Zhang J., Li R., Zhao P., Fu Z., You Y. Hsa-mir-181a and hsa-mir-181b function as tumor suppressors in human glioma cells // Brain Res. 2008. Vol. 1236. P. 185-193. doi: 10.1016/j. brainres.2008.07.085.
18. Yang C.C., Hung P.S., Wang P. W., Liu C.J., Chu T.H., Cheng H. W., Lin S.C. MiR-181 as a putative biomarker for lymph-node metastasis of oral squamous cell carcinoma // J. Oral Pathol. Med. 2011. Vol. 40 (5). P. 397-404. doi: 10.1111/j.1600-0714.2010.01003.x.
19. Yang X., Wu H., Ling T. Suppressive effect of microRNA-126 on oral squamous cell carcinoma in vitro // Mol. Med. Rep. 2014. Vol. 10 (1). P. 125-130. doi: 10.3892/mmr.2014.2171.
20. ZengH., Fang C., Nam S., Cai Q., LongX. The clinicopathological significance of microRNA-155 in breast cancer: a meta-analysis // Biomed. Res. Int. 2014. 2014: 724209. doi: 10.1155/2014/724209.
21. Zhang J., Cheng C., Yuan X., He J.T., Pan Q.H., Sun F.Y. MicroR-NA-155 acts as an oncogene by targeting the tumor protein 53-induced nuclear protein 1 in esophageal squamous cell carcinoma // Int. J. Clin. Exp. Pathol. 2014. Vol. 7 (2). P. 602-610. eCollection 2014.
Поступила 25.04.15
сведения об авторах
Веряскина Юлия Андреевна, старший лаборант-исследователь лаборатории молекулярной генетики, Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН (г Новосибирск), Российская Федерация. E-mail: fl-31@mail.ru. SPIN-код: 7989-6099. Какурина Гелена Валерьевна, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории биохимии опухолей, Томский НИИ онкологии (г Томск), Российская Федерация. E-mail: kakurinagv@oncology.tomsk.ru. SPIN-код: 1896-3144. Журавлев Евгений Сергеевич, старший лаборант-исследователь лаборатории молекулярной генетики, Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН (г Новосибирск), Российская Федерация. E-mail: evgenijur@gmail.com. SPIN-код: 6760-3609. Титов Сергей Евгеньевич, кандидат биологических наук, научный сотрудник ЗАО «Вектор Бест», старший лаборант-исследователь лаборатории молекулярной генетики, Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН (г. Новосибирск), Российская Федерация. E-mail: titovse78@gmail.com. SPIN-код: 4924-8365
Кондакова Ирина Викторовна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая лабораторией биохимии опухолей, Томский НИИ онкологии (г. Томск), Российская Федерация. E-mail: kondakova@oncology.tomsk.ru. SPIN-код: 9338-4149. Черемисина Ольга Владимировна, доктор медицинских наук, заведующая эндоскопическим отделением, Томский НИИ онкологии (г Томск), Российская Федерация E-mail: СheremisinaOV@oncology.tomsk.ru. SPIN-код: 9579-2691. Шишкин Дмитрий Александрович, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник отделения опухолей головы и шеи, Томский НИИ онкологии (г. Томск), Российская Федерация. E-mail: nii@oncology.tomsk.ru. SPIN-код: 5793-2432. Жимулев Игорь Федорович, академик РАН, доктор биологических наук, профессор, директор Института молекулярной и клеточной биологии СО РАН (г. Новосибирск), Российская Федерация. E-mail: zhimulev@mcb.nsc.ru. SPIN-код: 5924-5307. Чойнзонов Евгений Лхамацыренович, академик РАН, доктор медицинских наук, директор Томского НИИ онкологии (г Томск), Российская Федерация E-mail: nii@oncology.tomsk.ru. SPIN-код: 2240-8730.
Колесников Николай Николаевич, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной генетики, Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН (г. Новосибирск), Российская Федерация. E-mail: kolesnikovnn@ mcb.nsc.ru. SPIN-код: 6236-1344.
Авторы данной статьи подтвердили отсутствие финансовой поддержки / конфликта интересов, о котором необходимо сообщить
ro.A. BepncKMHa, r.B. KaKypuHa, E.C. WypaBneB u flp.
ЭKCПPЕCCMOHHblM nPOOMHb MMKPOPHK
EXPRESSION PROFILE OF MICRORNAS IN SQUAMOUS CELL HEAD AND NECK CARCINOMA
Yu.A. Veryaskina1, G.V. Kakurina2, E.S. Zhuravlev1, S.E. Titov13, I.V. Konda-kova2, O.V. Cheremisina2, D.A. Shishkin2, I.F. Zhimulev1, E.L. Choynzonov24, N.N. Kolesnikov1
IMCB SB RAS, Novosibirsk1 Tomsk Cancer Research Institute, Tomsk2 Ltd «Vector-Best», Novosibirsk3 Siberian State Medical University, Tomsk4
8/2, Acad. Lavrentiev Ave., 630090-Novosibirsk, Russia, e-mail: fl-31@mail.ru1 Abstract
Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a highly aggressive disease with long asymptomatic course. New molecular prognostic markers are urgently needed to identify patients at high risk for developing lymph node metastasis. MicroRNAs (miRNAs) are a recently discovered class of small non-coding RNAs. Based on literature and our data, we have chosen 12 miRNAs (miRNA-21, -221, -222, -155, -205, -20a, -125b, -146b, -181b, -200a, -126, -451), involved in HNSCC carcinogenesis. Using real-time quantitative polymerase chain reaction analysis, we have shown a change in the expression miRNA in tumor tissue compared to unmodified tissue. Significant upregulation of five miRNAs: miRNA-21, -155, -181b, -126, -451 (p<0.05) has been shown in tumors. MiRNA-126 has been found to be highly expressed in metastasis tissue (p<0.05), and can be an important factor in understanding the processes of metastasis and development of a new prognostic marker.
Key words: head and neck tumors, miRNA, metastasis.
REFERENCES
1. Kakurina G.V, Kondakova I.V., Choynzonov E.L. Postgenime technologies in prediction of squamous cell head and neck cancer metastasis // Russian Journal of Biotherapy. 2011. Vol. 10 (3). P. 31-36. [in Russian]
2. Kakurina G.V., Kondakova I.V., Choinzonov E.L., Shishkin D.A Assessment of blood serum proteome in patients with squamous cell head and neck carcinoma // Siberian Journal of Oncology. 2013. № 2. P. 62-66. [in Russian]
3. Kakurina G.V., Kondakova I.V., Choinzonov E.L. Prognosis of metastasis in squamous carcinoma of the head and neck // Voprosy onkologii. 2012. Vol. 58 (1). P. 26-32. [in Russian]
4. Kolesnikov N.N., Titov S.E., Veryaskina Yu.A., Karpinskaya E.V., Shevchenko S.P., Akhmerova L.G., Ivanov M.K., Kozlov V.V., Elisafen-ko E.A., Gulyaeva L.F., Zhimulev I.F. MicroRNA, evolution and cancer // Tsitologiya. 2013. Vol. 55 (3). C. 159-164. [in Russian]
5. Spirina L.V., Kondakova I.V. The role of specific intracellular proteolysis in oncogenesis // Voprosy onkologii. 2008. Vol. 54 (6). C. 690-694. [in Russian]
6. Choynzonov E.L., Balatskaya L.N., Kitsmanyuk Z.D., Mukhame-dov M.R., Dubsky S.V. Rehabilitation of patients with head and neck tumors // Tomsk, 2003. 296 p. [in Russian]
7. CervigneN.K., ReisP.P., Machado J., SadikovicB., Bradley G., Gal-loniN.N., PintilieM., JurisicaI., Perez-OrdonezB., GilbertR., GullaneP., Irish J., Kamel-Reid S. Identification of a microRNA signature associated with progression of leukoplakia to oral carcinoma // Hum. Mol. Genet. 2009. Vol. 18 (24). P. 4818-4829. doi: 10.1093/hmg/ddp446.
8. Chen C., RidzonD.A., Broomer A.J., Zhou Z., LeeD.H., Nguyen J.T., Barbisin M., Xu N.L., Mahuvakar V.R., Andersen M.R., Lao K.Q., LivakK.J., GueglerK.J. Real-time quantification of microRNAs by stem-loop RT-PCR // Nucleic. Acids. Res. 2005. Vol. 33 (20):e179.
9. Chen D., Huang J., Zhang K., Pan B., Chen J., De W., Wang R., Chen L. MicroRNA-451 induces epithelial-mesenchymal transition in docetaxel-resistant lung adenocarcinoma cells by targeting proto-oncogene c-Myc // Eur. J. Cancer. 2014. Vol. 50 (17). P. 3050-3067. doi:10.1016/ j.ejca.2014.09.008.
10. Croce C.M. Causes and consequences of microRNA dysregula-tion in cancer // Nat. Rev. Genet. 2009. Vol. 10 (10). P. 704-714. doi: 10.1038/nrg2634.
11. EbrahimiF., Gopalan V., Smith R.A., Lam A.K. MiR-126 in human cancers: clinical roles and current perspectives // Exp. Mol. Pathol. 2014. Vol. 96 (1). P. 98-107. doi: 10.1016/j.yexmp.2013.12.004.
12. Fish J.E., Santoro M.M., Morton S.U., Yu S., Yeh R.F., Wythe J.D., Ivey K.N., Bruneau B.G., Stainier D.Y., Srivastava D. MiR-126 regulates angiogenic signaling and vascular integrity // Dev. Cell. 2008. Vol. 15 (2). P. 272-284. doi: 10.1016/j.devcel.2008.07.008.
13. Jamali Z., Asl AminabadiN., AttaranR., PournagiazarF., Ghertasi Oskouei S., Ahmadpour F. MicroRNAs as prognostic molecular signatures in human head and neck squamous cell carcinoma: A systematic review and meta-analysis // Oral. Oncol. 2015. Vol. 51 (4). P. 321-331. doi: 10.1016/j. oraloncology. 2015.01.008.
14. Kondakova I.V., Klisho E.V., Savenkova O.V., Kakurina G.V., Choinzonov E.L., Shishkin D.A., Mukhamedov M.R. Matrix metallo-proteinases 2 and 9 as the factors of head and neck tumor metastases // Biochemistry (Moscow) Suppl. Series B: Biomedical Chemistry. 2008. Vol. 2 (3). P. 298-301.
15. Lind E.F., Ohashi P.S. Mir-155, a central modulator of T-cell responses.// Eur. J. Immunol. 2014. Vol. 44 (1). P. 11-15.
16. Pennelli G., Galuppini F., Barollo S., Cavedon E., Bertazza L., Fassan M., Guzzardo V., Pelizzo M.R., Rugge M., Mian C. The PDCD4/ miR-21 pathway in medullary thyroid carcinoma // Hum. Pathol. 2015. Vol. 46 (1). P. 50-57. doi: 10.1016/j.humpath.2014.09.006.
17. Shi L., Cheng Z., Zhang J., Li R., Zhao P., Fu Z., You Y. Hsa-mir-181a and hsa-mir-181b function as tumor suppressors in human glioma cells // Brain Res. 2008. Vol. 1236. P. 185-193. doi: 10.1016/j. brainres.2008.07.085.
18. Yang C.C., Hung P.S., Wang P. W., Liu C.J., Chu T.H., Cheng H. W., Lin S.C. MiR-181 as a putative biomarker for lymph-node metastasis of oral squamous cell carcinoma // J. Oral Pathol. Med. 2011. Vol. 40 (5). P. 397-404. doi: 10.1111/j.1600-0714.2010.01003.x.
19. Yang X., Wu H., Ling T. Suppressive effect of microRNA-126 on oral squamous cell carcinoma in vitro // Mol. Med. Rep. 2014. Vol. 10 (1). P. 125-130. doi: 10.3892/mmr.2014.2171.
20. Zeng H., Fang C., Nam S., Cai Q., LongX. The clinicopathological significance of microRNA-155 in breast cancer: a meta-analysis // Biomed. Res. Int. 2014. 2014: 724209. doi: 10.1155/2014/724209.
21. Zhang J., Cheng C., Yuan X., He J.T., Pan Q.H., Sun F.Y. Micro-RNA-155 acts as an oncogene by targeting the tumor protein 53-induced nuclear protein 1 in esophageal squamous cell carcinoma // Int. J. Clin. Exp. Pathol. 2014. Vol. 7 (2). P. 602-610. eCollection 2014.
about the authors
Veryaskina Yuliya Andreevna, senior assistant of the Laboratory of Molecular Genetics, Institute of Molecular and Cell Biology SB RAS (Novosibirsk), Russian Federation. E-mail: fl-31@mail.ru. SPIN-code: 7989-6099.
Kakurina Gelena Valerevna, MD, Ph.D., Senior Researcher of the Laboratory of Tumor Biochemistry, Tomsk Cancer Research Institute (Tomsk), Russian Federation. Phone: +7 (3822) 51-25-29. E-mail: kakurinagv@oncology.tomsk.ru. SPIN-code: 1896-3144. Zhuravlev Evgeniy Sergeevich, senior assistant of the Laboratory of Molecular Genetics, Institute of Molecular and Cell Biology SB RAS (Novosibirsk), Russian Federation. E-mail: evgenijur@gmail.com. SPIN-code: 6760-3609.
Titov Sergey Evgenevich, Ph.D., Researcher of Ltd «Vector-Best», Novosibirsk, senior assistant of the Laboratory of Molecular Genetics, Institute of Molecular and Cell Biology SB RAS (Novosibirsk), Russian Federation. E-mail: titovse78@gmail.com. SPIN-code: 4924-8365.
Kondakova Irina Viktorovna, Tumor Biochemistry, Tomsk Cancer Research Center (Tomsk), Russian Federation. E-mail: kondakova@ oncology.tomsk.ru. SPIN-code: 9338-4149.
Cheremisina Olga Vladimirovna, MD, DSc, Head of Endoscopy Department, Tomsk Cancer Research Institute (Tomsk), Russian Federation. E-mail: CheremisinaOV@oncology.tomsk.ru. SPIN-code: 9579-2691.
Shishkin Dmitriy Aleksandrovich, Ph.D., Senior Researcher of the laboratory of the department of head and neck tumors, Tomsk Cancer Research Institute (Tomsk), Russian Federation. E-mail: nii@oncology.tomsk.ru. SPIN-code: 5793-2432. Zhimulev Igor Fedorovich, DSc, Professor, Academician RAN, Director of Institute of molecular and cell biology SB RAS (Novosibirsk), Russian Federation. Phone: 8 (383) 363-90-41. E-mail: zhimulev@mcb.nsc.ru. SPIN-code: 5924-5307. Choinzonov Evgeny Lhamatsirenovich, MD, DSc, Professor, Academician of RAS, Director of the Tomsk Cancer Research Institute (Tomsk), Russian Federation. E-mail: nii@oncology.tomsk.ru. SPIN-code: 2240-8730.
Kolesnikov Nikolay Nikolaevich, DSc, Principal Investigator of the laboratory of molecular genetics, Institute of molecular and cell biology SB RAS (Novosibirsk), Russian Federation. E-mail: kolesnikovnn@mcb.nsc.ru. SPIN-code: 6236-1344.
