CC BY
130
УДК 615.322:615.282
Бухарин О.В., Челпаченко О.Е., Перунова Н.Б., Иванова Е.В., Андрющенко C-В.
Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской Академии Наук, Оренбург E-mail: perunovanb@gmail.com
ЭКCПEРИМEHTAЛЬHO-КЛИHИЧECКOE ОБОЗДОВАНИЕ ВЫБОРА АНТИМИКОТИЧЕЗДИХ ФИТОПРЕПАРАТОВ
Экспериментально-клинически обоснован выбор антимикотической терапии фитопрепаратами под контролем антилизоцимной и липолитической активности Candida albicans.
42 штамма грибов C. albicans, выделенные из кишечного микробиоценоза от пациентов с дисплазией соединительной ткани (ДСТ) и дисбиозом кишечника 2-3 степени с гиперколонизацией грибами рода Candida. Антилизоцимную активность (АЛА) дрожжевых грибов определяли в мкг/мл*ОП по методике О.В. Бухарина с соавт., 1999, липолитическую активность (ЛА) - в мм, методом Slifkin, 2000. В качестве фитосредств использовали 7 эфирных масел и настои 6 видов лекарственных растений. Клиническая эффективность фитотерапии оценивалась по динамике кишечного микросимбиоценоза и частоте развития соматических заболеваний у 59 детей с дисплазией соединительной ткани (ДСТ), получавших лечение фитопрепаратами, группу сравнения составили 36 детей.
Использование АЛА и ЛА C. albicans в качестве биомишени позволило отобрать фитосредства с максимальным ингибирующим эффектом (на 60% и более от исходного уровня) в отношении биологических свойств грибов: настои Artemisia absinthium L. и Rosa cinnamomea L., среди растительных ароматических веществ: Juniperus communis L., Citrus limon burm., Dianthus, Melissa officinalis Chaix. и Aloe arborescens mill. Проведенные клинико-бактериологические исследования подтвердили эффективность отобранных лекарственных фитосредств, которая проявлялась в снижении частоты встречаемости кандидозного дисбиоза у пациентов с ДСТ с 94,0±3,1% (до лечения) до 71,2±5,9% (p<0,05) после лечения и урежении случаев соматических заболеваний до 11,9±4,2% в исследуемой группе против 30,5±7,7% в группе сравнения (p<0,05).
Заключение: полученные экспериментально-клинические данные свидетельствуют о целесообразности способа отбора эффективных антимикотических средств, основанного на ингиби-ровании антилизоцимной и липолитической активности C. albicans.
Ключевые слова: Candida albicans, настои лекарственных растений, эфирные масла, анти-лизоцимная активность, липолитическая активность, биомишень.
Введение
Антимикотическая терапия в настоящее время представлена широким арсеналом лекарственных препаратов для подавления жизнедеятельности гриба-возбудителя, включая антимикотики как синтетического, так и природного происхождения [1], [2]. Большую актуальность приобретают исследования, направленные на поиск эффективных, немедикаментозных, альтернативных методов лечения микозов препаратами лекарственных растений. Широкое использование антибиотиков привело к снижению интереса к применению фитопрепаратов в качестве антимикробной терапии. Однако, ряд серьёзных осложнений антибиотикотерапии, таких как развитие аллергических реакций, токсических состояний, сопровождающихся нарушением колонизационной резистентности кишечника, формирование антибиотикорезистентных штаммов бактерий и грибов, а также отсутствие эффекта при лечении заболеваний грибковой этиологии, послужило толчком к возрастающему
интересу врачей к лекарственным растениям с антимикотическим действием [3], [4]. Известен фунгистатический эффект эфирных масел чайного дерева, гвоздики, туи и других растений [1], [2]. Однако, далёк от разрешения вопрос о критериях патогенности и персистенции грибов, что в значительной степени тормозит поиск эффективных средств борьбы с микозами. В качестве критериев оценки патогенного потенциала клинических штаммов Candida spp. рассматриваются адгезия и резистентность к антимикотическим препаратам [5]. Известно, что адгезивная способность, во многом, определяется наличием у грибов липолитической активности, а Candida albicans является продуцентом экстрацеллюлярных гидролитических энзимов, среди которых липазы, фосфо-липазы и секретируемые аспартат протеиназы представляются значимыми факторами вирулентности грибов [6], [7]. Подтверждением тому - результаты работы Bramono K. с соавт. [8], выявивших у клинических штаммов Candida spp. наличие коррелятивной связи
между протеиназной активностью, липазной и а-глюкозидазной активностью, с одной стороны, и ростом грибов, с другой. Если к тому же учесть, что ингибирующее действие на рост Candida albicans и продукцию секрети-руемых протеиназ оказывает лизоцим (фактор врождённого иммунитета), высокие концентрации которого индуцируют кандидацидный эффект, а низкие - снижают количество секре-тируемых грибами протеиназ в 5 раз, угнетая рост грибов [9], то можно предположить, что в условиях инфицированного организма анти-лизоцимный фактор грибов, как компонент их персистентного потенциала, может рассматриваться в качестве «биомишени», пригодной для отбора эффективных лекарственных анти-микотиков [10], обрывающих персистенцию грибов в организме хозяина.
В связи с этим целью нашей работы явилось экспериментально-клиническое изучение эффективности антимикотической терапии фитопрепаратами, подавляющими антилизоцим-ную и липолитическую активности Candida albicans.
Материалы и методы
В работе использованы 42 штамма грибов Candida albicans, выделенных у пациентов 6-16 лет с дисплазией соединительной ткани и дисбиозом кишечника 2-3 степени. Высев грибов из клинического материала (испражнения) производили на плотные питательные среды: Кандид-агар, Сабуро-агар, после чего выросшие типичные колонии дрожжевых грибов отсевали и идентифицировали на основании морфологических свойств. Изолированные штаммы грибов имели характерные культу-ральные признаки: рост на плотных питательных средах в виде белых сметанообразных колоний и в жидких питательных средах - помутнение питательного бульона с образованием кольца. На основании положительного теста по образованию ростовых трубок и хла-мидоспор, исследуемые штаммы грибов были предварительно отнесены к виду C. albicans. У данных культур был оценен биохимический профиль (определение ассимиляции грибами питательных субстратов) с использованием коммерческой тест-системы «API 20C AUX» («BioMereux», Франция).
Оценку эффективности влияния лекарственных растений на штаммы C. albicans проводили под контролем изменений экспрессии антилизоцимной и липолитической активности грибов.
Антилизоцимную активность (АЛА) дрожжевых грибов определяли фотометрическим методом по методике О.В. Бухарина с соавт. [11], где использовали супернатанты (экзометаболи-ты) грибов, полученные при культивировании C. albicans в питательном бульоне в течение 48 часов при температуре 370 С, после чего супер-натант микромицетов соинкубировали с лизо-цимом. Антилизоцимную активность экзомета-болитов грибов определяли с использованием тест-штамма M. luteus. Измерение оптической плотности производили на фотометре Elix 808 при длине волны 540 нм. Полученные результаты по экпрессивности антилизоцимной активности выражали в мкг/мл на единицу оптической плотности (мкг/мл*ОП).
Липолитическую активность (ЛА) грибов определяли на плотной питательной среде по методу Slifkin, 2000. В агаровую среду, приготовленную из Бактопептона (BD Biosciences, Sparks, Md), 5,0 г NaCl, 0,1 CaCl2, 15,0 агара и 1,000 мл дистиллированной воды, добавляли 5 мл Tween-80 (Sigma, St.Louis, Mo.). Исследуемые культуры грибов засевали «пятачками» на среды и инкубировали при 30°С до 10 дней. Наличие зоны помутнения вокруг роста культур на среде с Tween-80, свидетельствовало о положительном результате, а исследуемые штаммы грибов обладали липолитической активностью, продуцируя липазу [12]. Экспрессию ЛА измеряли по диаметру зоны помутнения вокруг колонии на плотной питательной среде с Твином-80 и выражали в миллиметрах (мм).
При изучении антимикотического эффекта фитопрепараты использовали в виде настоев и эфирных масел. Для приготовления настоев лекарственных растений были использованы: Matricaria chamomilla L. (цветкиромашки), Rosa cinnamomea L. (плоды шиповника), Artemisia absinthium L. (трава полыни), Tanacetum vulgare L. (цветы пижмы), Betula verrucosa ehrh. (листья берёзы), Taraxacum officinale wig. (листья одуванчика) (фасовочный отдел центрального аптечного склада Оренбургского аптечного управления). Для изучения влияния
растительных ароматических веществ (РАВ) на антилизоцимную (АЛА) и липолитическую активность (ЛА) дрожжевых грибов использовали эфирные масла Lavandula officinalis Chaix. (лаванды), Juniperus communis L. (можжевельника), Citrus limon burm. (лимона), Dianthus (гвоздики), Melissa officinalis Chaix. (мелиссы), Aloe arborescens mill. (алоэ), Thea sinensis L. (чайного дерева) (ООО ТПК «Ароматы жизни», Москва). Опытные пробы содержали 1/2 минимальной подавляющей (субмикостатиче-ской) концентрации РАВ.
При приготовлении растительных настоев травы измельчали и помещали в стерильные флаконы, заливая водой, закрывали пробкой и ставили на кипящую водяную баню. Настой нагревали в течение 15 минут. После нагревания сосуд охлаждали при комнатной температуре и процеживали. Соотношение сырья и воды составляло 1/30-1/40. Брали 1/100 часть от разовой терапевтической дозы настоя [13] и смешивали с 1,5% мясопептонным агаром. Приготовленную фитосреду засевали микропипеткой взвесями (1,0^107 микробных клеток) исследуемых дрожжевых грибов, инкубировали в течение 1 часа в термостате, после чего определяли их антилизоцимную активность. Контролем служили культуры, выращенные без фитосредств. Оценку результатов действия фитопрепаратов проводили по изменению экспрессии липолитической и антили-зоцимной активности грибов. При снижении АЛА и ЛА C. albicans на 20% и более от исходного уровня препарат считался эффективным. Количественная оценка влияния лекарственных растений на антилизоцимную активность Candida albicans проводилась по следующим критериям: 1балл - изменение признака на 2040%; 2 балла - изменение признака на 40-60%; 3 балла - изменение признака на 60% и более от исходного уровня. В обязательном порядке учитывалось наличие однонаправленного - ин-гибирующего АЛА дрожжевых грибов эффекта более чем у 75% исследуемых культур [11]. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) эфирных масел растений определяли методом серийных микроразведений.
Оценку эффективности фитотерапии проводили на пациентах (дети в возрасте 6-16 лет), имеющих симптомы дисплазии соединитель-
ной ткани. Клинический выбор группы пациентов для оценки эффективности фитотерапии был обусловлен тем, что дисплазия соединительной ткани, с одной стороны, является фактором риска развития соматической патологии, а с другой - сопровождается нарушением кишечного микросимбиоценоза с гиперколонизацией грибами рода Candida [14], [15]. Первая исследуемая группа состояла из 59 детей, которые получали препараты лекарственных растений, ингибирующих антилизоцимную и ли-политическую активность дрожжевых грибов, курсами от 4 до 6 недель, повторяющимися не реже одного раза в 3 месяца в течение двух лет. Вторую группу (группа сравнения) составили 36 детей, которым лечение фитопрепаратами не проводилось.
Эффективность используемых лекарственных растений оценивалась по динамике нарушений кишечного микробиоценоза и клинического состояния - по частоте развития соматических заболеваний при наблюдении в катамнезе через 6, 12, 18 и 24 месяца.
Данные, полученные в результате исследования, статистически обработаны с помощью параметрических методов с вычислением критерия Стьюдента - Фишера и непараметрического метода определения одностороннего и двухстороннего t-критерия Вилкоксона [16] в компьютерной оболочке Windows с помощью процессора электронных таблиц Excel и программы «Biostat».
Результаты
Используя определение изменений уровня антилизоцимной активности и липолитической активности Candida spp. до и после воздействия фитопрепаратов мы отбирали препараты лекарственных растений, оказывающих выраженное ингибирующее действие в отношении данных биологичских свойств грибов. Это был один из ведущих критериев эффективности, тогда как стимулирующее действие в отношении АЛА или ЛА дрожжевых грибов или индифферентность (отсутствие эффекта) более чем у 20% исследуемых штаммов грибов, свидетельствовало о низкой антифунгальной активности фитосредств, либо её отсутствии. Важным критерием эффективности явилось так же определение экспрессивности АЛА и
липолитической активности дрожжевых грибов до и после воздействия препаратами лекарственных растений.
Полученные нами данные о влиянии препаратов лекарственных растений на антили-зоцимную активность и липолитическую активность грибов рода Candida представлены в таблицах 1 и 2.
Изучение влияния настоев лекарственных растений и растительных ароматических веществ (РАВ) на антилизоцимную активность Candida albicans in vitro показало, что к потенциально эффективным антимикотическим фитопрепаратам следует отнести настой Artemisia absinthium L. (полыни), который демонстрировал высокий ингибирующий эффект в отношении АЛА - на 60% и более от исходного уровня (Збалла) у 91,6% штаммов грибов и настой плодов Rosa cinnamomea L. (шиповника), сни-
жающий уровень антилизоцимной активности также на 60% и более от исходного уровня у 75,0% штаммов C. albicans.
В группу активных антимикотических средств мы включили все семь исследуемых растительных ароматических веществ, обладающих высокой ингибирующей способностью в отношении антилизоцимного признака дрожжевых грибов: Juniperus communis L., Citrus limon burm., Lavandula officinalis Chaix., Dianthus, Melissa officinalis Chaix., Thea sinensis и Aloe arborescens mill. которые снижали анти-лизоцимную активность на 60% и более от исходного уровня у подавляющего большинства (83,1-98,4%) штаммов Candida albicans.
Средний уровень ингибирующего действия на антилизоцимную активность C.albicans оказывали настои Matricaria chamomilla L. и Tanacetum vulgare L., снижающие АЛА на 40-60% (2балла).
Таблица 1. Ингибирующее влияние настоев лекарственных растений и эфирных масел на антилизоцимную активность Candida albicans (n=12)
Фитопрепараты АЛА штаммов
Экспрессивность (в баллах) пенетрантность M±m,%
Настои Полынь (Artemisia absinthium L.) -3 91,6±8,0
Шиповник (Rosa cinnamomea L.) -3 75±12,5
Ромашка (Matricaria chamomilla L.) -2 75±12,5
Пижма (Tanacetum vulgare L.) -2 66,6±13,6
Береза (Betula verrucosa ehrh.) -2 33,3±13,6
Одуванчик (Taraxacum officinale wig.) -1 66,6±13,6
эфирные масла Лимон (Citrus limon burm.) -3 96,7±3,1
Гвоздика (Dianthus) -3 90,0±5,5
Можжевельник (Juniperus communis L.) -3 86,7±6,1
Алоэ (Aloe arborescens mill.) -3 86,7±6,1
Лаванда (Lavandula officinalis Chaix.) -3 83,3±6,8
Мелисса (Melissa officinalis Chaix.) -3 83,3±6,8
Чайное дерево (Thea sinensis L.) -2 60,0±8,9
Примечание: «-» - снижение признака; «1 балл» - изменение признака на 20-40%; «2 балла» - изменение признака на 40-60%; «3 балла» - изменение признака на 60% и более от исходного уровня.
Отсутствие стимулирующего эффекта в отношении антилизоцимной активности дрожжевых грибов у настоя ромашки (Matricaria chamomilla L.) позволило отнести его в группу эффективных антимикотических средств. В то же время, фитопрепарат Tanacetum vulgare L. (пижмы) характеризовался разнонаправленным действием на антилизоцимную активность и, наряду с ингибированием, повышал АЛА на 40-60% от исходного уровня у 16,6% штаммов дрожжевых грибов, что послужило причиной для исключения настоя пижмы из группы эффективных антимикотических препаратов.
Учитывая, что настой Betula verrucosa ehrh. (берёзы) также снижал экспрессию антилизоцимной активности C. albicans на 40-60% от исходного уровня, но лишь у 1/3 штаммов дрожжевых грибов, при наличии стимулирующего влияния на АЛА у 1/4 штаммов и отсутствии эффекта в отношении антилизоцимного признака более чем у 1/3 штаммов дрожжевых грибов, настой берёзы так же отнесли в группу неэффективных средств.
Аналогичным образом из перечня эффективных антимикотиков был исключен настой одуванчика (Taraxacum officinale wig.), который снижал изучаемый персистентный признак всего лишь на 20,0% от исходного уровня (1балл) более чем у половины исследуемых штаммов, одновременно повышая антилизо-
цимную активность на 20,0% от исходного уровня у 1/5 штаммов Candida albicans или вовсе не оказывал эффекта на АЛА у 1/5 штаммов дрожжевых грибов, что позволило исключить этот препарат из числа эффективных.
Что же касается использования в качестве биомишени другого признака грибов - липо-литической активности, было установлено, что у 30,0-90,0% штаммов C. albicans происходило снижение экспрессии ЛА (уменьшение диаметра зон помутнения вокруг колоний от 3 до 5 мм; p<0,05) под действием растительных ароматических веществ, таких как Lavandula officinalis Chaix. (лаванды), Juniperus communis L. (можжевельника), Citrus limon burm. (лимона), Dianthus (гвоздики), Melissa officinalis Chaix. (мелиссы), Aloe arborescens mill. (алоэ), Thea sinensis L. (чайного дерева).
В итоге были отобраны наиболее перспективные фитопрепараты, оказывающие выраженное ингибирующее действие в отношении антилизоцимной и липолитической активности грибов, при подборе антимикотических средств. Ими оказались - настои Artemisia absinthium L. (полыни) и Rosa cinnamomea L. (шиповника), а также растительные ароматические вещества: Lavandula officinalis Chaix. (лаванды), Thea sinensis L. (чайного дерева), Juniperus communis L. (можжевельника), Citrus limon burm. (лимона), максимально ингибиру-
Таблица 2. Ингибирующее влияние эфирных масел на липолитическую активность
Candida albicans (n=30)
Эфирные масла Липолитическая активность
Экспрессивность (в баллах) пенетрантность M±m,%
Можжевельник (Juniperus communis L.) -3 90,0±5,5
Лаванда (Lavandula officinalis Chaix.) -3 86,7±6,1
Лимон (Citrus limon burm.) -3 83,3±6,8
Чайное дерево (Thea sinensis L.) -2 76,7±7,8
Гвоздика (Dianthus) -1 40,0±8,9
Алоэ (Aloe arborescens mill.) -1 36,7±8,8
Мелисса (Melissa officinalis Chaix.) -1 30,0±8,3
Примечание: «-» - снижение признака; «1 балл» - изменение признака на 20-40%; «2 балла» - изменение признака на 40-60%; «3 балла» - изменение признака на 60% и более от исходного уровня.
ющие как антилизоцимную, так и липолитиче-скую активность C. albicans.
На следующем этапе работы после проведения инвитральных экспериментов нами была проведена клиническая апробация разработанного способа выбора антимикотиче-ских фитосредств. В качестве клинической модели с этой целью мы сформировали группу детей с дисплазией соединительной ткани. Прежде всего, это обусловлено тем, что соединительная ткань, как известно, является важной интегративной системой, выполняющей ряд жизненно важных функций и работающей в единстве с иммунной системой при участии кишечного микробиоценоза. В тоже время, многочисленные литературные источники свидетельствуют о высокой частоте встречаемости диспластического статуса у детей с различными персистирующими, хроническими соматическими заболеваниями [17], [18]. Особенно высока частота развития патологии опорно - двигательного аппарата (артриты, артрозы), сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, мо-чевыделительной системы, являющихся основными органами-мишенями, которые вовлекаются в патологический процесс при транслокации кишечных бактерий и грибов [14], [15]. Установлено, что у детей с ДСТ дисбиоз толстого кишечника встречается в 8
раз чаще в сравнении со здоровыми детьми (р<0,001). Выявлена прямая корреляция между тяжестью нарушений кишечного микробиоценоза, гиперколонизацией дрожжевыми грибами, достигающей 70,1% и экспрессивностью симптомов диспластического статуса [15]. Эти факты определили целесообразность использования коррекции кишечного микробиоценоза, включающей антимикотическую фитотерапию, в качестве превентивного фактора, предупреждающего развитие острых и хронических соматических заболеваний у детей.
Проведённые клинико-бактериологические исследования подтвердили эффективность использования лекарственных растений у детей с дисплазией соединительной ткани, сопровождающейся гиперколонизацией кишечника грибами рода Candidа (рис. 1). Положительный эффект проявлялся в снижении частоты встречаемости кандидозного дисбиоза у пациентов исследуемой группы с 94,0±3,1% (до лечения) до 71,2±5,9% после лечения (р<0,05), в то время как в группе сравнения этот показатель был в пределах физиологических колебаний (88,8±5,26% и 94,4±3,8%). Снижение гиперколонизации дрожжевыми грибами отмечалось у 22,8%детей, из них у 10,2% пациентов имела место полная эрадикация, у 12,6% - снижение показателя микробной обсеменённости грибами с 105-107КОЕ/мл до 102-103КОЕ/мл. Кроме того,
* - р<0,05 (критерий достоверности различия показателей исследуемой группы и группы сравнения). Рисунок 1. Клиническая эффективность фитопрепаратов, ингибирующих АЛА и ЛА Candida albicans
за время наблюдения у лиц исследуемой группы снизилась частота развития соматических заболеваний, которые были зарегистрированы у 11,9±4,2% детей, получавших профилактическое лечение фитопрепаратами, тогда как в группе сравнения - у 30,5±7,7% пациентов (p<0,05), что в совокупности с бактериологическими данными свидетельствовало о клинической эффективности использования лекарственных растений для коррекции кандидозного дисбиоза и предупреждения развития соматических заболеваний у детей с дисплазией соединительной ткани.
Обсуждение
Процессы изменчивости бактерий и грибов, обеспечивая их устойчивость к антимикробным препаратам, значительно снижают эффективность лекарственных средств, в частности, за счёт формирования антибиоти-корезистентных клонов в микробной популяции. Традиционный способ решения данной проблемы предусматривает разработку новых антибиотиков, способных противостоять механизмам антибиотикорезистентности. Однако, большая часть новых антибиотиков - это структурные аналоги существующих семейств, имеющих те же точки приложения, что и их предшественники. Одним из альтернативных подходов к отбору эффективных антимикробных препаратов является поиск новых мишеней воздействия на структурные компоненты патогенов.
Мы сочли целесообразным использование в качестве новых «биомишений» грибов - ан-тилизоцимную и липолитическую активности, так как эти свойства соответствуют основным критериям «биомишени», пригодность которой подтверждена при отборе эффективных химических средств и биологически активных препаратов на модели персистирующей бактериальной инфекции [10]. Учитывая тот факт, что лизоцим обладает не только бактерицидным, но и определённым фунгицицидным эффектом [2], очевидно, что защита от него (АЛА) необходима не только бактериям, но и грибам для реализации своего патогенного потенциала. Значение липолитической активности Candida albicans в качестве одного из ведущих факторов патоген-ности убедительно показано исследованиями ряда авторов [6], [7], [8], [9].
Проведенные инвитральные эксперименты по изучению влияния фитопрепаратов на АЛА и ЛА Candida albicans позволили выявить выраженное ингибирующее действие в отношении антилизоцимной и липолитической активности дрожжевых грибов у препаратов лекарственных растений, предположительно оцененных нами в качестве эффективных противогрибковых средств. Эта группа фитосредств включала настои Artemisia absinthium L. (полыни), Rosa cinnamomea L. (шиповника) и Matricaria chamomilla L. (ромашки) и растительные аро-магические вещества Lavandula officinalis Chaix (лаванды), Juniperus communis L. (можжевельника), Citrus limon burm. (лимона), Dianthus (гвоздики), Melissa officinalis Chaix. (мелиссы) и Aloe arborescens mill. (алоэ).
Полученные результаты экспериментальных исследований in vitro были подтверждены клинико-бактериологическими данными, которые продемонстрировали клиническую эффективность применения отобранных фитопрепаратов: снижение частоты встречаемости нарушений кишечного микробиоценоза, сопровождающихся гиперколонизацией грибами рода Candida, снижение показателя микробной обсеменённости грибами с Ю5-Ю7КОЕ/мл до 102-103 КОЕ/мл у 10,2% детей и полная эради-кация дрожжевых грибов из кишечника у 12,6% пациентов, а также урежение случаев развития соматических заболеваний у детей с дисплазией соединительной ткани. Таким образом, совпадение экспериментальных и клинических результатов исследования свидетельствуют о пригодности использования разработанного способа для отбора эффективных антимикотических фитопрепаратов в клинических условиях.
Полученные результаты не противоречат данным других исследователей о наличии антимикотического эффекта у отобранных нами экспериментальным путём препаратов лекарственных растений, В настоящее время большинство авторов связывают антифунгаль-ный эффект фитопрепаратов с особенностями их состава и физико-химическими свойствами [3], [19]. Прежде всего, это содержание терпеноидных фенолов в составе полыни, пижмы, лимона; эвгенола гвоздики, а также фенольных кислот и полифенолов ромашки и мелиссы, катехинов чайного дерева, латек-
са алоэ в сочетании со сложным комплексом других биологически активных веществ [3]. Терпеноиды бисаболол и хамазулен, а также флавоноид-апигенин, извлечённые из цветков ромашки, характеризуются противогрибковой активностью, противовоспалительным, противоаллергическим, спазмолитическим и антибактериальным эффектами [20], [21]. Кроме того, появились результаты исследований, указывающих на содержание в полыни таких биологически активных веществ как производные даванона и сильфиперфолана, обладающие самой высокой противогрибковой активностью [22]. Значительный интерес представляют данные о наличии антимикотической активности у метаболитов эндофитных микроорганизмов полыни [23].
Изучены и механимы антифунгального действия вышеуказанных активных структурных компонентов фитопрепаратов,способствующих разрыву клеточных мембран грибов, ингибиро-ванию ферментативных систем, препятствующих адгезии дрожжевых грибов к эукариотиче-ским клеткам [3], [4], [24]. Кроме того, известно, что терпеноидные фенолы, входящие в состав растительных масел с антифунгальным эффектом, содержат карвакрол, эвгенол, тимол, каждый из которых не только тормозит рост грибов,
но также влияет на их биологические свойства, такие как биоплёнкообразование и множественную лекарственную резистентность дрожжевых грибов-мутантов [25].
Результаты проведенных нами исследований демонстрируют более высокий ингибиру-ющий эффект в отношении антилизоцимной и липолитической активности Candida albicans у эфирных масел в сравнении с настоями ле-картвенных растений, что согласуется с имеющимися литературными данными [26] и имеет важное прикладное значение.
Таким образом, проведённые экспериментально-клинические исследования показали, что фитопрепараты в виде настоев лекарственных растений и растительных эфирных масел, наряду с другими антифунгальными механизмами, обладают способностью изменять биологические свойства грибов рода Candida, в том числе,их антилизоцимную и липолитическую активности, что может быть использовано для отбора эффективных антимикотических фитопрепаратов. Полученные результаты свидетельствуют, что отобранные нами растительные препараты подавляют патогенный и персистентный потенциал грибов, что позволяет рекомендовать их в качестве перспективного сырья для создания противогрибковых препаратов.
10.12.2014
Список литературы:
1. Андреев В.А., Москалёв А.В., Сбойчаков В.Б., ред. Медицинская микология: руководство. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2008. -С.10-15.
2. Ахметова С.Б., Ахметова Н.Т., Котенева Е.Н., Адекенов С.М., Рязанцев О.Г. Антигрибковые свойства перспективных эфирых масел, выделенных из некоторых представителей флоры Казахстана // Проблемы медицинской микологии. - 2013. - Т.2. - С.55.
3. Cowan M.M. Plant products as antimicrobial agents // Clinical microbiology reviews. - 1999. - V.12. - №4. - Р. 564-82.
4. Prabuseenivasan S., Jayakumar M., Ignacimuthu S. In vitro antibacterial activity of some plant essential oils // BMC Complementary and alternative medicine. - 2006. - V.6. - №39. - Р. 156-61.
5. Лисовская С.А. и соавт. Адгезия и резистентность как критерии оценки патогенного потенциала клинических штаммов Candida albicans // Проблемы медицинской микологии. - 2009. - №2. - С.91-92.
6. Naglik J. et al. Candida albicans proteinases and host pathogen interactions // Cell Microbiol. - 2004. - V.6. - №10. - P.915-26.
7. Staniszewka M. et al. Virulence factors of Candida albicans // Pizegl. Epidemiol. - 2012. - V.66. - №4. - P.629-33.
8. Bramono K. et al. Comparison of proteinase, lipase and alpha-glucosidase activities from the clinical isolates of Candida species // Jpn. J. Infect Dis. - 2006. - V.59. - №2. - P.73-76.
9. Wu T. et al. Inhibition of growth and secreted aspartyl proteinase production in Candida albicans by lysozyme // J. Med Microbiol. -1999. - V.48. - №8. - P.721-30.
10. Бухарин О.В. и соавт. Симбиоз и его роль в инфекции // Екатеринбург, УрО РАН. - 2011. - 301 с.
11. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий // М.: Медицина. - 1999. - 365 с.
12. Slifkin M. Tween 80 capacity test responses of various Candida species // J. Clin. Microbiol. - 2000. - V.38. - №12. - Р.4626-28.
13. Соколов С.Я. Справочник по лекарственным растениям. М.: Медицина. - 1984. - С.259-64.
14. Суменко В.В. Недифференцированный синдром соединительнотканной дисплазии в популяции детей и подростков // Дис. канд. мед. наук. Оренбург. - 2000.
15. Челпаченко О.Е. Патогенетическое значение микробиоценоза кишечника у детей с синдромом дисплазии соединительной ткани и возможные пути коррекции // Дис. докт. мед. наук. Оренбург. - 2003.
16. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высш. шк. - 1990. - С.352.
17. Земцовский Э.В. Диспластические фенотипы. Диспластическое сердце. Аналитический обзор. СПб.: Изд-во «Ольга». -2007. - С.80.
18. Кадурина Т.И., Горбунова В.Н. Дисплазия соединительной ткани. СПб. - 2009. - С.722.
19. Карташова О.Л., Уткина Т.М. Регуляция персистентных свойств микроорганизмов факторами различной природы // Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. - 2013. - №1. - http: //www.elmag.uran.ru.
20. Gardiner P. Complementary, holistic, and integrative medicine: chamomile // Pediatr Rev. - 2007. - V. 28. - P.16-8.
21. Srivastava J.K., Sanjay G.E. Characterization, Stability and Biological Activity of Flavonoids Isolated form Chamomile Flowers // Mol Cell Pharmacol. - 2009. - V.1. -№3. - Р.138.
22. Obistioiul D., Cristina R.T., Schmerold I., Chizzola R., Stolze K., Nichital I., Chiurciu V. Chemical characterization by GC-MS and in vitro activity against Candida albicans of volatile fractions prepared from Artemisia dracunculus, Artemisia abrotanum, Artemisia absinthium and Artemisia vulgaris // Chemistry Central Journal. - 2014. - V.8. - №6. - P. 1-11.
23. Lu H., Zou W.X., Meng J.C., Hu J., Tan R.X. New bioactive metabolites produced by Colletotrichum sp., an endophytic fungus in Artemisia annua // Plant Sci. - 2000. - V. 151. - P.67-73.
24. Samy R.P., Manikandan J., Qahtani M.A. Evaluation of aromatic plants and compounds used to fight multidrug resistant infections // Evidence - Based complementary and alternative medicine. - 2013. - V.2013. - 17p.
25. Zhang Y., Muend S., Rao R. Dysregulation of ion homeostasis by antifungal agents // Frontiers in microbiology. - 2012. - V.3. - №10. - P.3389-95.
26. Thormar H. Antibacterial and antifungal activities of essential oils // Lipids and essential oils as antimicrobial agents. - 2011. -V.12. - P.256-93.
Сведения об авторах:
Бухарин Олег Валерьевич, главный научный сотрудник лаборатории биомониторинга и молекулярно-генетических исследований Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, доктор медицинских наук, академик РАН, e-mail: perunovanb@gmail.com
Перунова Наталья Борисовна, заведующий лабораторией биомониторинга и молекулярно-генетических исследований Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, доктор медицинских наук, доцент, e-mail: perunovanb@gmail.com
Андрющенко Сергей Валерьевич, старший научный сотрудник лаборатории биомониторинга и молекулярно-генетических исследований Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, кандидат медицинских наук, e-mail: rattus000@gmail.com
Иванова Елена Валерьевна, ведущий научный сотрудник Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, кандидат медицинских наук, доцент, e-mail: walerewna13@gmail.com
Челпаченко Ольга Ефимовна, ведущий научный сотрудник Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, доктор медицинских наук, профессор, e-mail: walerewna13@gmail.com
460000, г. Оренбург, ул. Пионерская, 11, тел. (3532) 775908
