Эффективность нового препарата в отношении вируса вирусной диареи крупного рогатого скота Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

УДК 619:616.98:578.835.2 ЭФФЕКТИВНОСТЬ НОВОГО

ПРЕПАРАТА В ОТНОШЕНИИ ВИРУСА ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Т.И. Глотова, доктор профессор; А.Г. Глотов, наук, профессор; О.В. кандидат биол. наук; А.А. Никонова ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии

UDC 619:616.98:578.835.2 EFFECTIVENNES OF THE NEW AGAINST VIRUS OF BOVINE DIARRHEA

DRUG VIRAL

биол. наук, доктор вет.

Семенова,

Представлены результаты эффективности препарата Виталанг-2 в отношении возбудителя вирусной диареи - болезни слизистых оболочек (ВД - БС) крупного рогатого скота. Препарат проявил противовирусное действие в культуре клеток КСТ, снизив титр вируса на 1,97 ^ ТЦД50/см3. Аналогичные данные получили в опытах на естественно инфицированных телятах. Препарат в дозе 0,5 мг/кг массы тела при введении животным с субклинической формой инфекции привел к сокращению сроков выделения вируса с носовыми секретами, нормализации температуры тела и гематологических показателей. Ключевые слова: дрожжи, олеиновая кислота, высокополимерная РНК, вирус диареи-болезни слизистых

Glotova T.I., Dr. Biol. Sci. Glotov A.G., Dr. Vet. Sci. Semenova O.V., Cand. Biol. Sci. Nikonova A.A. IEVSiDV RAAS t-plotova@mail.ru изучения The results of studies the effectiveness of the preparation Vitalang-2 against virus of BVD-MD are submitted. The preparation had antiviral activity in cell culture leading to a significant reduction in viral titer at 1,97 lg10 TCD 50/cm 3. Similar results were obtained in experiments on infected calves. Administration the drug at a dose of 0,5 mg/kg lead to reducing the excretion of agent with nasal secretion, the normalization of body temperature and hematological parameters in calves with subclinical form of the disease.

Key words: yeast, oleic acid, high-polymeric RNA, virus diarrhea-mucosal disease.

Вирусная диарея-болезнь слизистых оболочек (ВД-БС) -контагиозное заболевание, вызываемое РНК-содержащим вирусом, относящимся к роду Рвв^тв семейства Flaviviridae. ВД-БС может проявляться в виде расстройства органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, репродуктивной, сердечно-сосудистой, лимфатической, иммунологической, покровной или центральной нервной систем зараженного скота [1]. Но наиболее характерными и экономически значимыми последствиями этой инфекции для индустрии скотоводства являются репродуктивные проблемы и болезни респираторного тракта.

Во многих странах в качестве мероприятий против ВД - БС КРС используют вакцинацию восприимчивого поголовья [3], выявление и уничтожение персистентно инфицированных животных [2]. Химиопрепаратов для эффективного лечения и профилактики данного заболевания в настоящее время нет.

В связи с этим разработка новых препаратов и оценка их противовирусной активности в отношении вируса ВД-БС КРС является актуальной задачей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Новый препарат (серии: 151012; 160611; 181012) был предоставлен для изучения разработчиками и изготовителями ООО «Виталанг-2», г. Новосибирск.

Для проверки его противовирусной активности использовали цитопатогенный штамм ВК-1 вируса ВД-БС КРС с титром 6,5 log10 ТЦД50/см3. Культивирование, накопление и титрование вируса ВД-БС проводили в перевиваемой культуре клеток коронарных сосудов теленка (КСТ). Культуры клеток выращивали во флаконах для клеточных культур (Nunc, Дания) в среде Игла МЕМ (производство ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова РАМН») с добавлением 5-10 % эмбриональной сыворотки крови теленка (HyClone, лот № ASA28574). При выращивании культур клеток использовали 0,25 %-й раствор трипсина, 0,01 %-й раствор химопсина в 0,02 %-м растворе Версена. Контаминацию культуры клеток нецитопатогенными штаммами вируса исключали методом ПЦР.

Токсичность препарата оценивали в опытах in vitro в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [6]. Максимально переносимую концентрацию (МПК) его вычисляли по формуле: МПК = ТЦД50/4.

Для определения профилактической противовирусной активности препарат вносили в монослой культуры клеток КСТ, а через 1 ч после контакта с ним культуру клеток заражали вирусом в дозе 100

о

ТЦД50/0,1см . При определении лечебной активности препарат вносили в монослой используемой культуры клеток через 1 ч после ее контакта с тест - вирусом. При изучении вирулицидного действия препарат вносили в монослой клеток одновременно с вирусом. В качестве контроля во всех случаях использовали культуру клеток без препарата.

Для определения противовирусного действия препарата пробы отбирали через 24 ч после заражения культуры клеток и титровали. Степень редукции возбудителя определяли по формуле: R = (logwAo) -(logwAn), где A0 - титр вируса в исходном образце; An - его титр в пробе, взятой после обработки препаратом. Антивирусный эффект считали значимым при снижении титра на 1,7 - 2,0 log [6].

На втором этапе испытаний изучали противовирусную активность препарата в неблагополучном по ВД - БС КРС хозяйстве на естественно инфицированных 3 - 4-мес. телятах с субклинической формой инфекции.

Телятам первой опытной группы интраназально вводили препарат в дозе 0,15 мг/кг массы тела ежедневно в течение 10 дней; второй - 0,5

мг/кг массы тела. Животные третьей и четвертой групп служил контролем, им интраназально вводили физиологический раствор.

На протяжении 15 дней ежедневно проводили клиническое обследование телят опытных и контрольных групп, измеряли температуру тела, отбирали тампонные пробы носовых выделений для установления длительности выделения вируса ВД - БС КРС. Наличие возбудителя в носовых выделениях молодняка определяли до и в течение 15 дней после начала применения препарата.

Лечебное действие нового препарата оценивали по изменению гематологических показателей, снижению инфекционной активности и длительности выделения вируса с носовым секретом в период и после завершения использования препарата.

Данные статистически обрабатывали в соответствии с общепринятыми методами [4]. Титр вируса рассчитывали по методу Рида и Менча [5].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

о

МПК препарата для культуры клеток КСТ составила 5 мг/см3. Все серии препарата не различались по токсичности.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что новый препарат в максимально переносимой дозе оказывал ингибирующее действие на вирус ВД - БС КРС при внесении его через 1 ч после

о

тестируемого штамма. Титр вируса снизился на 1,97 log ТЦД 50/см°.

Препарат в дозе 0,15 мг/кг при ежедневном применении в течение 10 дней не обладал противовирусным эффектом.

Улучшение клинического состояния телят второй опытной группы отмечали на 5 - 6-й день, а выздоровление - на 8 - 9-й день после начала обработки препаратом. У животных восстанавливался аппетит, повышалась активность, прекращались выделения из носа, нормализовались температура тела и гематологические показатели

Длительность выделения вируса с носовым секретом у телят второй опытной группы составила 5 - 6 дней, а у четвертой группы - 7 -9 дней. Максимальные титры вируса в носовых секретах животных обеих групп регистрировали с 1-го по 3-й день. Они составляли 2,5 - 3,0 log ТЦД 50/смз с последующим снижением до 0,5±0,12 log ТЦД 50/смз во второй группе на 5 - 6-й день, а у контрольных животных - на 8 - 9-й день.

Таким образом, у животных второй группы сроки выздоровления и выделения вируса с носовым секретом сократились в среднем на 2 дня по сравнению с таковыми контрольной группы. Это свидетельствует о том, что новый препарат в дозе 0,5 мг/кг при ежедневном использовании в течение 10 дней проявляет противовирусную активность in vivo.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Новый препарат подавляет репродукцию вируса ВД - БС КРС в культуре клеток КСТ, что проявляется достоверным снижением титра

о

возбудителя на 1,97 logi0 ТЦД 50/см3. Препарат в дозе 0,5 мг/кг при ежедневном в течение 10 дней интраназальном введении телятам с субклинической формой ВД - БС КРС сокращает сроки выделения вируса с носовым секретом, нормализует температуру тела и гематологические показатели и может быть использован для лечения субклинических форм ВД-БС КРС у телят.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Ашмарин. И. П. Быстрые методы статистической обработки и планирования экспериментов/И.П. Ашмарин., Н. Н. Васильев, В. А. Амбросов //. - Л.: Ленинградского университета. 1974. 76 с.

2. Медицинская вирусология: руководство / под ред. Д. К. Львова. - М.: ООО «Мед. информ. агентство». 2008. 656 с.

3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред. Р. У. Хабриева. М.: Медицина, 2005. 832 с.

4. Control of bovine viral diarrhea virus in ruminants// Walz P.H. [et al] // Journal of Veterinary Internal Medicine. 2010. № 24. P. 476-486.

5. Oirschot J.T. Vaccination of cattle against bovine viral diarrhea / J.T. Oirschot, C.J. Bruschke, P.A. Rijn // Vet. Microbiol. 1999. № 64. P. 169-183.

6. Sockett D. Bovine Viral Diarrhea Virus: A 50 Year Review //Cornell University College of Veterinary Medicine, Ithaca - NY. 1996. P. 207.