CC BY
14SCIENTIFIC ELECTRONIC JOURNAL INNOVA № 4 (9) 2017
ДИНАМИКА КИСЛОРОДЗАВИСИМОЙ ФУНКЦИИ НЕЙТРОФИЛОВ У ЖИВОТНЫХ С МОДЕЛИРОВАННЫМ СПАЕЧНЫМ ПРОЦЕССОМ БРЮШНОЙ ПОЛОСТИ
DYNAMICS OF OXYGEN-DEPENDENT FUNCTION OF NEUTROPHILS IN ANIMALS WITH MODELED ABDOMINAL ADHESIVE PROCESS
I Гомон М.С., Липатов В.А., Локтионов А.Л., | Gomon M.S., Lipatov V.A., Loktionov A.L., Конопля А.И. Konoplya A.I.
I Курский государственный медицинский | Kursk State Medical University
университет
E-mail: GomonMS@kursksmu.net
Одним из звеньев патогенеза послеоперационных спаек брюшной полости
Ключевые слова: удовлетворенность, медицинская помощь, организация медицинской помощи, терапевтическое отделение
Библиографическая ссылка на статью
Гомон М.С., Липатов В.А., Локтионов А.Л., Конопля А.И. Динамика кислородозависимой функции нейтрофилов у животных с
моделированным спаечным процессом брюшной полости // Innova. -2017. -№4 (9) -С.12-15.
DOI: 10.21626/innova/2017.4/02
Одной из актуальных проблем общей хирургии является проблема развития послеоперационных спаек брюшной полости и с ними связанных осложнений. По поводу спаечной болезни брюшины (СББ) ежегодно в хирургических отделениях лечится 1% прооперированных ранее больных, кишечная непроходимость развивается у 50-75% пациентов со СББ, ее консервативное лечение малоэффективно. После операций по поводу спаек брюшной полости рецидивы заболевания составляют 32-71%, летальность при спаечной кишечной непроходимости (СКН) колеблется в пределах 13-55%, надежные средства профилактики послеоперационного спаечного процесса брюшной полости (СПБП) до настоящего времени находятся на стадии разработки [2, 4, 7, 11, 12].
Большинство авторов едины во мнении, что основным этиопатогенетическим фактором заболевания является повреждение мезотелия брюшины и воспаление с преобладанием его
пролиферативной фазы. Немаловажным, также считается момент послеоперационного пареза кишечника с вовлечением иммунного компонента [1, 8, 13].
Многие хирургические заболевания сопровождаются выраженными изменениями в иммунной системе, характеризующимися как состояние вторичного иммунодефицита. Этому способствует комплекс патологических факторов основного заболевания, стресс, обезболивание, операционная травма [6]. Повышение защитных сил организма является важным элементом в улучшении результатов лечения. Исследование иммунного статуса и попытки его коррекции у больных хирургического профиля показали, что применение иммунокорректоров в комплексе современных методов лечения способствует ликвидации послеоперационных осложнений, ускоряет заживление тканей, уменьшает время реабилитации больных после операции [9].
В современной литературе нет однозначных данных о состоянии иммунитета и
SCIENTIFIC ELECTRONIC JOURNAL INNOVA № 4 (9) 2017
факторов неспецифической резистентности при СББ, хотя не вызывает сомнений тот факт, что выраженность воспалительной реакции зависит от фибринолитической активности эндогенных факторов, состояния факторов неспецифической резистентности, клеточной и гуморальной составляющих иммунитета как на местном, так и на организменном уровне.
Как известно, ведущую роль в индукции воспаления играют полиморфноядерные лейкоциты. Они постоянно мигрируют из кровотока в ткани и выполняют свои защитные функции. Продукты стимулированных нейтрофилов влияют на активность макрофагов, лимфоцитов, тромбоцитов; вызывают дегрануляцию тучных клеток; активируют системы комплемента, свертывания крови, фибринолиза в зоне травматического повреждения брюшины [3, 10].
Исходя из этого, целью нашего исследования явилось изучение динамических изменений кислородзависимой функции нейтрофилов периферической крови у животных при экспериментальном СПБП.
Эксперименты проводили на здоровых половозрелых крысах-самцах линии Вистар, массой 250-300 г, содержащихся на стандартном пищевом и питьевом рационе в условиях вивария КГМУ. Исследования выполняли с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986).
В стерильных условиях под рамитаровым наркозом проводилось моделирование СПБП. После срединного лапаротомного разреза выполнялось гидравлическое препарирование брюшины вентральной стенки с последующим ее иссечением на площади 1 х 1 см, отступя 1 см от края срединной раны. Слепая кишка подвергалась скарификации на всей поверхности до появления «кровавой росы».
Животные выводились из эксперимента путем передозировки наркоза на 3, 7 и 14 сутки. Оценивались морфологические изменения в брюшной полости с использованием визуально-описательного метода и оценкой выраженности СПБП методом семантического дифференциала. Органы, вовлеченные в СПБП, изымались из трупов, фиксировались в 10% растворе нейтрального формалина с последующим изготовлением парафиновых срезов и их окраской гематоксилин-эозином, пикро-сириус-ред и по Маллори.
Кислородзависимую активность
нейтрофилов определяли по реакции восстановления нитросинего тетразолия. НСТ-тест основан на поглощении фагоцитами нитросинего тетразолия из среды и последующим его восстановлением внутри клетки до диформазана. Реакция с интактными
нейтрофилами характеризует степень «функционального раздражения» этих клеток in vivo (НСТ-тест спонтанный); показатели НСТ-теста у нейтрофилов, стимулированных in vitro зимозаном, опсонизированным и
неопсонизированным, можно рассматривать как критерий активности при напряжении их кислородзависимой функций (НСТ-тест стимулированный н/з и о/з). Индекс стимуляции нейтрофилов на все виды зимозана (КАо, КАн, КО): отношение диформазан-позитивных клеток в стимулированной реакции к диформазан-позитивным клеткам в спонтанной реакции НСТ-теста [5].
Во всех случаях деформированная слепая кишка была фиксирована плоскостной спайкой к вентральной стенке в месте ее десерозирования. В ряде случаев в СПБП вовлекались петли кишечника, сальник и другие мобильные органы брюшной полости. Выраженность СПБП на 3 сутки составила 2,35±0,22 балла, на 7 сутки произошло незначительное, но статистически достоверное уменьшение его выраженности (p<0,05) до 2,09±0,14 балла. К 14 суткам выраженность спайкообразования также имела тенденцию к снижению (1,87±0,16 балла), однако, это не было статистически достоверно. При гистологическом исследовании выявлены динамические изменения созревающей волокнистой соединительной ткани с явлениями затухания инфильтративных процессов и прогрессивным неоангиогенезом.
На 3 сутки после воспроизведения СПБП наблюдалось снижение спонтанного НСТ-теста, что косвенно свидетельствовало о присутствии в периферическом русле небольшого абсолютного количества клеток, которое обусловлено массивной их миграцией в очаг воспаления. К 7 суткам наблюдается стихание воспалительного процесса, соответственно снижение миграции нейтрофилов. Кроме того, в результате компенсаторной мобилизации костного мозга, в периферическом русле повышается количество полиморфноядерных лейкоцитов, в связи, с чем наблюдается повышение кислородозависимой активности в спонтанном НСТ-тесте, нормализация которого происходит к 14 дню после моделирования СПБП.
В стимулированном НСТ-тесте неопсонизированным зимозаном на 3-и сутки после операции наблюдалось его снижение. К 7 дню эксперимента - он не отличался от показателей здоровых животных, а к 14 суткам, вновь снижался. Несмотря на такую динамику, обращает на себя внимание тот факт, что на 7 и 14 сутки резерв клеточной активности (КАн) в ответ на неопсонизированный зимозан прогрессирующе снижался. Это объясняется наличием в крови юных, функционально незрелых полиморфноядерных лейкоцитов, не
SCIENTIFIC ELECTRONIC JOURNAL INNOVA № 4 (9) 2017
способных адекватно отвечать на стимуляцию.
Формальное исследование НсТ-теста, стимулированного опсонизированным
зимозаном, показало его снижение на 3, 7 и 14 сутки после моделирования СПБП, но при анализе резерва клеточной активности на опсонизированный зимозан (КАо), оказалось, что изменения были такими же, как и при стимуляции неопсонизированным зимозаном.
Дискретная способность клеток отвечать на различные стимулы (КО) изменялась закономерно: на 3 сутки после моделирования -не изменялась, так как в кровеносном русле присутствовали зрелые нейтрофилы, к 7 дню эксперимента отмечался выраженный «провал», что обусловлено наличием незрелых лейкоцитов, а к 14 суткам - вновь стабилизировалась (таблица 1).
Таблица 1
Изменение кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови у крыс с моделируемым СПБП
Me Группа животных Сутки mOD mOD mOD КАо КАн КО
п / HCT-cn. НСТ-ст. НСТ-ст. оз/с нз/с оз/нз
п (н/3) (0/3)
1. Здоровые — 1,3S ± 0,16 1,76 ±0,14 2,31 + 0,12 1,71 ±0,13 1,30 ± 0,06 1,31 ± 0,11
2. Модель спаечной болезни 3 0,78 ± 0,07 1,40 ±0,18 1,95 ± 0,07 2,50 ±0,06 1,79 ± 0,03 1,39 ±0,08
р<0,05 р<0,05 р<0,05 р<0,05 р<0,05 р>0,05
3. Модель спаечной болезни 7 1,81 ±0,11 1,88 ± 0,18 1,94 ± 0,08 1,07 ± 0,06 1,04 ± 0,07 1,03 ± 0,06
р>0,05 р>0,05 р>0,05 р<0,05 р<0,05 р<0,05
4. Модель спаечной болезни 14 1,45 ± 0,09 1,51 ± 0,04 1,87 ± 0,12 1,29 ±0,26 1,04 ± 0,09 1,24 ±0,15
р>0,05 р>0,05 р<0,05 р<0,05 р<0,05 р>0,05
Примечание: достоверность различий между показателями кислородзависимой активности нейтрофилов определялась между здоровыми животными и животными опытной группы.
Достоверной корреляционной
зависимости между выраженностью СПБП и изменениями иммунологического статуса нами не выявлено.
Таким образом, на третьи сутки после моделирования СББ в периферической крови отмечается выраженное снижение
кислородзависимой активности нейтрофилов, за исключением коэффициентов активации, которые повышались или были такими же, как и у здоровых животных, что вероятно, связано с массивной миграцией клеток в очаг воспаления, присутствием в кровеносном русле зрелых нейтрофилов, повышением резерва клеточной активности. К седьмым суткам наблюдается истощение резерва кислородзависимой клеточной активности, что обусловлено компенсаторной активацией костного мозга и появлением в крови юных, функционально незрелых нейтрофилов. На четырнадцатые сутки происходит частичная нормализация
кислородзависимой активности
полиморфноядерных лейкоцитов, что связано со стиханием воспалительных процессов в брюшной полости.
Следовательно, при СПБП на разных сроках после моделирования отмечаются динамические изменения показателей кислородзависимой функции нейтрофилов, что требует фармакологической коррекции.
Литература
1. Анцупова, В.С. Новые подходы к диагностике и профилактике спаечного процесса [Текст] /
B.С. Анцупова, И.А. Шманева, О.В. Колчева // Материалы IV Всероссийской университетской научно - практической конференции молодых ученых по медицине 12-13 мая 2005 г. - Тула, 2005. - С. 218-219.
2. Воробьев, А.А. Профилактика спаечной болезни брюшной полости / А.А. Воробьев, А.Г.Бебуришвили, Е.Е. Писарева // Хирургия. -1998. - N 2. - С. 65-86.
3. Долгушин, И.И. Роль нейтрофилов в регуляции иммунной реактивности и репаративных реакций поврежденной ткани / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, А.В. Чукичев // Вестн. Рос. Ак. наук. - 2000. - № 2. - С. 14-19.
4. Женчевский, Р.А. Спаечная болезнь / Р.АЖенчевский. - М.: Медицина, 1989. - 186 с.
5. Зинкин В. Ю., Годков М. А. Способ количественной оценки кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов человека. // Клиническая лабораторная диагностика, -№1, 2004, -С. 26.
6. Конопля, А.И., Кирсанова Е.В., Нестеренко
C.Н., Сумин С.А. Влияние препарата «берлитион®300ед» на отдельные показатели цитокинового статуса в эксперименте in vitro / Современные проблемы науки и образования, -№ 2, 2005, -С. 53-55.
7. Кургузов, О.П. Профилактика спаечной болезни / О.П. Кургузов, Н.А. Кузнецов, Е.Г.Артюхина // Хирургия. - 1990. - N 10. - С. 153-159.
8. Осипов, В.И. Патогенетическое лечение и профилактика спаечной болезни органов брюшной полости: Автореф. дис... д-ра мед. наук / В.И. Осипов. - Саратов, 1994. - 19 с.
9. Парахонский, А.П. Иммунный дисбаланс при опухолевых заболеваниях и его коррекция. Материалы Международного конгресса «Иммунитет и болезни: от теории к терапии», 2005, -С. 251-258.
10. Тотолян, А.А. Клетки иммунной системы [Текст] / А.А. Тотолян, И.С. Фрейдлин. - СПб.: Наука, 2000. - 231 с.
11. Филенко, Б.П. Возможности профилактики и лечения острой спаечной кишечной непроходимости: Автореф. дис... д-ра мед. наук / Б.П. Филенко. - М., - 2000. - 298 с.
12. Peritoneal adhesions: etiology, pathophysiology, and clinical significance// Digestive Surgery. -2001. - №18. - Р. 260-273.
13. Thompson, J. Pathogenesis and prevention of adhesion formation / J. Thompson // Digestive Surgery. - 1998. - Vol. 15, - N 2. - P. 153-157.
