CC BY
39
Medical Immunology (Russia)/ Медицинская иммунология ОрЫгЫНаЛЬНЬ1@ C^fttt^ftbW Meditsinskaya Immunologiya 2017, Т. 19, № 5, стр. 5б7-57б * ^ . . . . . 2017, Vol. 19, No 5, pp. 5б7-57б
© 2017, СПбро PÄÄKИ Original articles © 2017, sPb raaci
CРАBНИTЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ПРОДУКЦИИ ЦИТОКИНОВ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫМИ КЛЕТКАМИ КРОВИ И ОПУХОЛИ В РАЗЛИЧНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУППАХ БОЛЬНЫХ ИНВАЗИВНЫМ ПРОТОКОВЫМ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Кунц Т.Д.1, Михайлова Е.С.1' 2, Маринкин И.О.1, Вараксин H.A.3, Аутеншлюс А.И.1, 2
1ФГБОУ ВО «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, г. Новосибирск, Россия
2 ФГБНУ«Научно-исследовательский институт молекулярной биологии и биофизики», г. Новосибирск, Россия 3ÄO «Вектор-Бест», Новосибирская область, Россия
Резюме. Известно, что существует взаимосвязь между возрастом пациента и патогенезом злокачественных новообразований, который сопряжен со способностью клеток опухоли и ее микроокружения секретировать цитокины, играющие значительную роль в канцерогенезе. Целью исследования явился сравнительный анализ продукции цитокинов клетками периферической крови и опухоли при воздействии на них поликлональных активаторов (ПА) при инвазивном протоковом раке молочной железы в различных возрастных группах больных. Материалом исследования служили образцы периферической крови и опухоли 54 женщин с инвазивным протоковым раком, являющимся по гистологическому типу аденокарциномой. Пациенты были разделены на группы по возрасту: I гр. — 40-60 лет, II гр. — 61 и более. В группе I метастазы в лимфатических узлах на момент исследования были выявлены у 13 пациентов из 31 (42%), в отличие от группы II, где количество пациентов с метастазами составило всего 3 человека из 23 (10%). Определение критерия Фишера показало достоверные различия между встречаемостью на момент исследования лимфоузлов с метастазами в зависимости от возраста пациентов (p = 0,034). В обеих возрастных группах пациентов отмечалось повышение концентрации IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, IL-18, IL-1ra, G-CSF, GM-CSF и VEGF в супернатанте клеток опухоли и ее микроокружения по сравнению с продукцией цитокинов клетками крови, что свидетельствовало о высокой функциональной активности новообразования в совокупности с его микроокружением. Добавление ПА в среду культивирования приводило к повышению концентраций IL-2, IL-10, IL-17, IL-1ß, IL-1ra, TNFa и IFNy в супернатанте клеток крови, что свидетельствовало об их высоком потенциале в отношении их секреции. В группе пациентов в возрасте 40-60 лет индекс влияния ПА на продукцию IFNy в несколько раз превышал аналогичный показатель у больных в возрасте 61 и более лет. Повышение ИВПА на продукцию практически всех цитокинов в супернатанте крови по сравнению с показателями супернатанта опухоли можно объяснить изначально высокими уровнями спонтанной продукции цитокинов опухолью и ее микроокружением, обеспечивающими злокачественную прогрессию, поэтому действие ПА на опухоль не приводило к такому же эффекту, как при действии на иммунокомпетентные клетки крови. Единственным цитокином, к продукции которого клетки
Адрес для переписки: Address for correspondence:
Кунц Татьяна Лнатольевна Kunts Tatyana A.
ФГБОУ ВО «Новосибирский государственный медицинский Novosibirsk State Medical University
университет» Министерства здравоохранения РФ б30091, Russian Federation, Novosibirsk, Krasny ave, 52.
б30091, Россия, г. Новосибирск, Красный пр., 52. Phone/Fax: 7(383) 22б-35-б0.
Тел./факс: 8 (383) 22б-35-б0. E-mail: tkunts@ngs.ru
E-mail: tkunts@ngs.ru
Образец цитирования: For citation:
ТА. Кунц, E.G. Михайлова, И.О. Маринкин, Н.А. Вараксин, TA Kuns ES M^yb^ L° ШпШщ KA УитЫ^
А.И. Äуmеншлюс «Сравнительная оценка продукции A I Autenshlyus "Comparative analysis °f cytotírn production
цитокинов иммунокомпетентными клетками крови by blood immunocompetent cells and tumor in different age
и опухоли в различных возрастных группах больных groups of patients with invasive ductal carcinoma", Medical
инвазивным протоковым раком молочной железы» Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya, 2017,
//Медицинская иммунология, 2017. Т. 19, № 5. G. 5б7-576. Vol. 19, no. 5, pp. 5б7-57б.
doi: 10.15789/15б3-0б25-2017-5-5б7-57б doi: 10.15789/15б3-0б25-2017-5-5б7-57б
©Кунц ТА и тат 2017 DOI: 10.15789/1563-0625-2017-5-567-576
опухоли и микроокружения сохраняли высокий потенциал, был IL-18, что подтверждает его важную роль в канцерогенезе. На основании полученных данных о влиянии поликлональных активаторов на цитокинпродуцирующую функцию клеток опухоли и крови можно прийти к выводу о том, что постоянно циркулирующие иммунокомпетентные клетки, обладая высокой способностью к секреции цитокинов, являются тем резервом, который обеспечивает опухолевую прогрессию. Ключевые слова: цитокины, супернатант, поликлональные активаторы, рак молочной железы
COMPARATIVE ANALYSIS OF CYTOKINE PRODUCTION BY BLOOD IMMUNOCOMPETENT CELLS AND TUMOR IN DIFFERENT AGE GROUPS OF PATIENTS WITH INVASIVE DUCTAL CARCINOMA
Kunts T.A.a, Mikhaylova E.S.a' b, Marinkin I.O.a, Varaksin N.A.c, Autenshlyus A.I.a' b
a Novosibirsk State Medical University, Novosibirsk, Russian Federation b Research Institute of Molecular Biology and Biophysics, Novosibirsk, Russian Federation c JSC "Vector-Best", Novosibirsk Region, Russian Federation
Abstract. It is known that a relationship exists between patient's age and pathogenesis of malignant tumors associated with ability of tumor and its microenvironment to secrete cytokines that may play an important role in carcinogenesis. The aim of present study was a comparative analysis of cytokine production by peripheral blood cells and tumor samples when exposed to polyclonal activators (PA) in patients of different age groups with invasive ductal carcinoma. Peripheral blood samples of 54 women with invasive ductal carcinoma were under study. The patients were divided into the following groups: I, 40-60 years old; II, 61 year and older. Metastases into lymph nodes were revealed at the moment of study in 13 patients (42%) from group I. By contrast, only 3 of 23 (10%) patients with metastases were revealed in group II. Fisher's ratio test showed significant differences between occurrence of metastases in lymph nodes, and patient age (p = 0.034). In both groups of patients, there was an increase of IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, IL-18, IL-1ra, G-CSF, GM-CSF and VEGF concentrations in tumor supernates and its microenvironment, when compared with the production of cytokines by blood cells, thus indicating to high functional activity of tumor together with its microenvironment. Effect of PA led to increase of IL-2, IL-10, IL-17, IL-1p, IL-1ra, TNFa and IFNy concentrations in blood cells supernatant which suggested their high ability to produce cytokines. In the group of patients who were 40-60 years old, the stimulatory index of PA (SIPA) for IFNy production was several times higher than similar index in patients aged 61 years or more. Increase of SIPA for all cytokines in blood cells supernates, in comparison to SIPA of tumor supernates, could be explained by initially high levels of spontaneous cytokine production by the tumor and its microenvironment that are able to promote tumor growth. Therefore, effect of PA upon tumor tissue was not so expressed as its effect upon immunocompetent blood cells. Both tumor and microenvironment maintained high ability of IL-18 production, thus confirming its important role in carcinogenesis. In summary, these findings suggest that circulating immunocompetent cells may serve as an additional factor providing tumor progression, due to their high ability to secrete cytokines. Keywords: cytokines, supernatant, polyclonal activators, breast cancer
Введение
Цитокины, в силу своих свойств, способны прямо или косвенно влиять на дифференциров-ку и апоптоз опухолевых клеток, стимулировать ангиогенез, тем самым обеспечивая рост и прогрессию опухоли [10, 21, 23]. Являясь центральными регуляторами иммунного гомеостаза, ци-токины, продуцируемые иммунокомпетентными клетками, связаны с процессами, протекающими локально в самом злокачественном новообразовании. Состав микроокружения опухоли
достаточно разнообразен: хотя основная часть и представлена иммунокомпетентными клетками, помимо них в него входят эндотелиальные клетки, фибробласты, фиброциты, незрелые дендритные, тучные клетки, которые также являются продуцентами цитокинов [5]. Известно, что возраст пациентов сопряжен с характером течения опухолевого процесса, в частности с ме-тастазированием, как это было показано при раке молочной железы [2, 29].
Целью настоящего исследования явился сравнительный анализ продукции цитокинов
клетками периферической крови, опухоли ее микроокружения при воздействии на них поли-клональных активаторов при инвазивном про-токовом раке молочной железы в различных возрастных группах больных.
Материалы и методы
Материалом исследования служили образцы периферической кров и и опухоли 54 женщин с инвазивным протоковым раком, являющимся по гистологическому типу аденокарциномой. Пациенты были разделены на группы по возрасту: I гр. — 40-60 лет, II гр. — 61 и более. В группе I метастазы в лимфатических узлах на момент исследования были выявлены у 13 пациентов из 31 (42%), в отличие от группы II, где количество пациентов с метастазами составило всего 3 человека из 23 (10%). Определение критерия Фишера показало достоверные различия между встречаемостью на момент исследования лимфоузлов с метастазами в зависимости от возраста пациентов (p = 0,034).
Для оценки цитокинпродуцирующего потенциала ИКК крови, а также опухоли и ее микроокружения применяли комплекс поликлональных активаторов (ПА), состоящий из фитогемагглю-
ТАБЛИЦА 1. СПОНТАННАЯ ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ОПУХОЛИ У БОЛЬНЫХ С ИНВАЗИВНЫМ ПРОТОКОВЫМ РАКОМ В ВОЗРАСТЕ 40-60 ЛЕТ
TABLE 1. SPONTANEOUS CYTOKINE PRODUCTION BY PERIPHERAL BLOOD CELLS AND TUMOR IN PATIENTS WITH INVASIVE DUCTAL CARCINOMA AGED 40-60 YEARS
тинина в концентрации 4 мкг/мл, конканавали-на А в концентрации 4 мкг/мл и липополисаха-рида в концентрации 2 мкг/мл. В исследовании использовали стандартизованный набор реагентов «Цитокин-стимул-бест» производства АО «Вектор-Бест». Одну часть клеток крови пациента инкубировали в питательной среде DMEM-F12 (для определения спонтанной продукции), а другую — в таком же объеме среды при 37 °С в течение 24 ч с комплексом ПА для определения индуцированной им продукции цито-кинов, после чего клетки осаждали центрифугированием при 2000 об/мин, 15 мин, получали супернатант, в котором проводили определение концентрации цитокинов [3].
Биоптаты опухолей объемом 8 мм3, полученные методом трепанобиопсии, помещали в 2 флакона, в одном из которых находилась только питательная среда DMEM-F12 (спонтанная продукция), а в другом — раствор ПА в таком же объеме среды (продукция, индуцированная ПА) и инкубировали при 37 °С в течение 72 ч. Для получения супернатанта опухоль извлекали, а оставшиеся клетки осаждали центрифугированием при 2000 об/мин, 15 мин, после чего в су-пернатанте с помощью иммуноферментного анализа определяли концентрацию ^-2, ^-6, ^-8,
Цитокин Cytokine Концентрация в супернатанте, пг/мл Concentration the supernatant, pg/ml
Периферическая кровь Peripheral blood n = 31 Опухоль и ее микроокружение Tumor and microenvironment n = 31
Me (Q0,25-Q0,75) Me (Q0,25-Q0,75)
IL-2 2,00 (2,00; 2,00); p = 0,001 2,00 (2,00; 3,30)
IL-6 182,30 (111,00; 643,40); p = 0,0001 52440,00 (36300,00; 69740,00)
IL-8 675,00 (355,00; 2820,00); p = 0,0001 25000,00 (15840,00; 45460,00)
IL-10 2,20 (1,00; 5,80); p = 0,0001 11,20 (5,40; 18,30)
IL-17 2,00 (2,00; 2,00); p = 0,0001 2,20 (2,00; 5,20)
IL-18 24,60 (17,90; 30,40); p = 0,0001 108,70 (41,20; 251,30)
IL-1 ß 52,90 (15,60; 111,40) 49,60 (20,40; 86,00)
IL-1ra 644,40 (494,90; 936,10); p = 0,0001 9600,00 (1659,10; 36365,00)
TNFa 11,80 (5,70; 21,40) 10,50 (7,70; 22,60)
IFNy 2,00 (2,00 2,00); p = 0,0001 9,30 (7,20; 23,20)
G-CSF 13,10 (5,50 42,50); p = 0,0001 2000,00 (606,70; 2850,50)
GM-CSF 3,80 (2,00 9,40); p = 0,0001 43,00 (22,00; 79,50)
VEGF 53,80 (25,40; 89,30); p = 0,0001 2951,20 (2242,00; 4607,40)
MCP-1 3107,10 (1171,00; 7255,90) 3840,30 (1495,20; 10516,00)
ТАБЛИЦА 2. СПОНТАННАЯ ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ОПУХОЛИ У БОЛЬНЫХ С ИНВАЗИВНЫМ ПРОТОКОВЫМ РАКОМ В ВОЗРАСТЕ 61-77 ЛЕТ
TABLE 2. SPONTANEOUS CYTOKINE PRODUCTION BY PERIPHERAL BLOOD CELLS AND TUMOR IN PATIENTS WITH INVASIVE DUCTAL CARCINOMA AGED 61-77 YEARS
Цитокин Cytokine Концентрация в супернатанте, пг/мл Concentration the supernatant, pg/ml
Периферическая кровь Peripheral blood n = 23 Опухоль и ее микроокружение Tumor and microenvironment n = 23
Me (Q0,25-Q0,75) Me (Q0,25-Q0,75)
IL-2 2,00 (2,00; 2,00) 2,00 (2,00; 2,70)
IL-6 140,00 (33,20 657,40); p = 0,0001 41040,00 (21820,00; 46980,00)
IL-8 520,00 (265,00 1875,00); p = 0,0001 24800,00 (10400,00; 28860,00)
IL-10 4,10 (1,70 6,50); p = 0,002 11,30 (4,80; 17,50)
IL-17 2,00 (1,00 2,00); p = 0,001 2,30 (2,00; 8,10)
IL-18 27,40 (21,70 34,20); p = 0,0001 76,90 (47,50; 203,70)
IL-1 p 40,00 (12,90; 98,00) 34,10 (19,90; 61,50)
IL-1ra 533,50 (447,60; 1159,90); p = 0,0001 8820,00 (3105,00; 15855,00)
TNFa 10,90 (2,80; 25,90) 12,80 (4,70; 22,80)
IFNy 2,00 (2,00; 2,00); p = 0,0001 11,40 (6,90; 18,00)
G-CSF 12,90 (2,00; 39,70); p = 0,0001 2767,50 (621,00; 2947,50)
GM-CSF 2,00 (2,00; 7,10); p = 0,0001 21,20 (9,80; 60,50)
VEGF 45,40 (28,70; 76,60); p = 0,0001 2164,40 (1346,60; 3243,00)
MCP-1 2119,00 (1211,00; 6601,30) 2296,00 (1138,00; 7504,00)
ТАБЛИЦА 3. ВЛИЯНИЕ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АКТИВАТОРОВ НА ПРОДУКЦИЮ ЦИТОКИНОВ КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ОПУХОЛИ У БОЛЬНЫХ С ИНВАЗИВНЫМ ПРОТОКОВЫМ РАКОМ В ВОЗРАСТЕ 40-60 ЛЕТ
TABLE 3. POLYCLONAL ACTIVATORS EFFECT ON CYTOKINE PRODUCTION BY PERIPHERAL BLOOD CELLS AND TUMOR IN PATIENTS WITH INVASIVE DUCTAL CARCINOMA AGED 40-60 YEARS
Цитокин Cytokine Концентрация в супернатанте, пг/мл Concentration the supernatant, pg/ml
Периферическая кровь Peripheral blood n = 31 Опухоль и ее микроокружение Tumor and microenvironment n = 31
Me (Q0,25-Q0,75) Me (Q0,25-Q0,75)
IL-2 19,00 (11,80; 32,60); p = 0,0001 6,60 (3,00; 9,50)
IL-6 12750,00 (9700,00; 16300,00); p = 0,0001 110000,00 (60750,00; 165100,00)
IL-8 16550,00 (12300,00; 25950,00); p = 0,0001 41350,00 (22900,00; 75850,00)
IL-10 93,80 (62,40; 123,60); p = 0,0001 13,50 (4,00; 32,30)
IL-17 53,20 (24,30; 120,40); p = 0,0001 6,50 (3,10; 14,00)
IL-18 32,10 (25,10; 38,90); p = 0,0001 226,60 (101,00; 404,30)
IL-1 p 1290,00 (935,00; 1815,00); p = 0,0001 600,00 (390,00; 855,00)
IL-1ra 8146,00 (6176,60; 12254,50); p = 0,0001 16779,70 (10755,00; 38225,00)
TNFa 813,10 (614,00; 1280,00); p = 0,0001 38,60 (17,70; 81,40)
IFNy 1191,50 (488,70; 1511,20); p = 0,0001 36,50 (10,50; 64,50)
G-CSF 855,00 (536,6; 1037,20); p = 0,0001 2845,00 (1275,00; 2906,00)
GM-CSF 91,70 (48,20; 122,40); p = 0,019 125,60 (64,70; 243,70)
VEGF 106,00 (74,20; 163,10); p = 0,0001 1664,40 (864,80; 3392,00)
MCP-1 4633,60 (2849,00; 5863,90) 2742,00 (1896,00; 12756,00)
ТАБЛИЦА 4. ВЛИЯНИЕ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АКТИВАТОРОВ НА ПРОДУКЦИЮ ЦИТОКИНОВ КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ОПУХОЛИ У БОЛЬНЫХ С ИНВАЗИВНЫМ ПРОТОКОВЫМ РАКОМ В ВОЗРАСТЕ 61-77 ЛЕТ
TABLE 4. POLYCLONAL ACTIVATORS EFFECT ON CYTOKINE PRODUCTION BY PERIPHERAL BLOOD CELLS AND TUMOR IN PATIENTS WITH INVASIVE DUCTAL CARCINOMA AGED 61-77 YEARS
Цитокин Cytokine Концентрация в супернатанте, пг/мл Concentration the supernatant, pg/ml
Периферическая кровь Peripheral blood n = 23 Опухоль и ее микроокружение Tumor and microenvironment n = 23
Me (Q0,25-Q0,75) Me (Q0,25-Q0,75)
IL-2 15,10 (7,00; 32,00); p = 0,0001 3,90 (2,00; 12,00)
IL-6 11100,00 (8200,00; 18950,00); p = 0,0001 85900,00 (25550,00; 136350,00)
IL-8 15050,00 (11900,00; 19200,00) 38700,00 (10550,00; 57850,00)
IL-10 92,70 (56,00; 138,10); p = 0,0001 13,20 (3,60; 118,20)
IL-17 41,60 (18,90; 89,00); p = 0,0001 4,30 (2,00; 16,00)
IL-18 35,20 (27,20; 39,30); p = 0,0001 289,40 (86,90; 468,30)
IL-1 ß 1490,00 (1060,00; 3560,00); p = 0,0001 510,00 (265,00; 935,00)
IL-1ra 8600,00 (5071,40; 9365,50); p = 0,0001 16148,90 (11435,00; 27060,00)
TNFa 1174,00 (658,00; 1366,00); p = 0,0001 43,70 (14,80; 90,10)
IFNy 619,30 (310,70; 1224,90); p = 0,0001 12,30 (8,30; 28,70)
G-CSF 760,60 (704,20; 1006,00); p = 0,0001 2832,50 (1333,00; 3485,50)
GM-CSF 63,70 (37,70; 129,30) 133,10 (53,50; 215,20)
VEGF 118,40 (84,20; 208,40); p = 0,0001 1810,80 (1034,60; 2398,00)
MCP-1 3820,00 (2735,00; 4236,00) 3357,00 (739,20; 10521,00)
ТАБЛИЦА 5. ИНДЕКСЫ ВЛИЯНИЯ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АКТИВАТОРОВ (ИВПА) НА ПРОДУКЦИЮ ЦИТОКИНОВ КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ОПУХОЛИ У БОЛЬНЫХ С ИНВАЗИВНЫМ ПРОТОКОВЫМ РАКОМ В ВОЗРАСТЕ 40-60 ЛЕТ
TABLE 5. STIMULATION INDEXES OF POLYCLONAL ACTIVATORS (SIPA) ON CYTOKINE PRODUCTION BY PERIPHERAL BLOOD CELLS AND TUMOR IN PATIENTS WITH INVASIVE DUCTAL CARCINOMA AGED 40-60 YEARS
Цитокин Cytokine Концентрация в супернатанте, пг/мл Concentration the supernatant, pg/ml
Периферическая кровь Peripheral blood n = 31 Опухоль и ее микроокружение Tumor and microenvironment n = 31
Me (Q0,25-Q0,75) Me (Q0,25-Q0,75)
IL-2 9,50 (5,90; 16,30); p = 0,0001 2,40 (1,00 4,35)
IL-6 60,80 (18,10; 119,70); p = 0,0001 2,32 (1,61 2,75)
IL-8 24,10 (5,20; 61,30); p = 0,0001 1,63 (1,04 2,53)
IL-10 38,40 (16,60; 78,80); p = 0,0001 1,27 (0,92 2,14)
IL-17 36,70 (12,20; 60,20); p = 0,0001 1,50 (0,87 6,15)
IL-18 1,30 (1,11; 1,50); p = 0,019 1,85 (1,12 2,81)
IL-1 ß 22,70 (13,10; 76,60); p = 0,013 12,22 (6,19 37,34)
IL-1ra 12,80 (8,50; 16,43); p = 0,0001 1,54 (0,97 4,77)
TNFa 62,70 (28,90; 123,80); p = 0,0001 4,08 (1,97 8,61)
IFNy 477,80 (137,30; 720,90); p = 0,0001 1,70 (0,85 3,07)
G-CSF 51,40 (17,50 132,70); p = 0,0001 1,47 (0,99 2,08)
GM-CSF 17,60 (7,70 25,50); p = 0,0001 2,60 (1,39 7,94)
VEGF 2,20 (1,70 3,09); p = 0,0001 0,50 (0,40 0,90)
MCP-1 1,26 (0,50; 2,70) 1,10 (0,50 2,00)
ТАБЛИЦА 6. ИНДЕКСЫ ВЛИЯНИЯ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АКТИВАТОРОВ (ИВПА) НА ПРОДУКЦИЮ ЦИТОКИНОВ КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ОПУХОЛИ У БОЛЬНЫХ С ИНВАЗИВНЫМ ПРОТОКОВЫМ РАКОМ В ВОЗРАСТЕ 61-77 ЛЕТ
TABLE 6. STIMULATION INDEXES OF POLYCLONAL ACTIVATORS (SIPA) ON CYTOKINE PRODUCTION BY PERIPHERAL BLOOD CELLS AND TUMOR IN PATIENTS WITH INVASIVE DUCTAL CARCINOMA AGED 61-77 YEARS
Цитокин Cytokine Концентрация в супернатанте, пг/мл Concentration the supernatant, pg/ml
Периферическая кровь Peripheral blood n = 23 Опухоль и ее микроокружение Tumor and microenvironment n = 23
Me (Q0,25-Q0,75) Me (Q0,25-Q0,75)
IL-2 6,40 (3,50; 11,40); p = 0,0001 1,12 (1,00 4,55)
IL-6 51,49 (20,81; 301,80); p = 0,0001 1,88 (1,00 3,01)
IL-8 27,30 (11,30; 49,17); p = 0,0001 1,67 (0,89 2,51)
IL-10 34,98 (15,90 48,90); p = 0,0001 1,69 (0,60 5,42)
IL-17 22,60 (10,80 44,10); p = 0,0001 1,00 (0,71 1,70)
IL-18 1,23 (1,10 1,35); p = 0,006 2,31 (1,23 3,40)
IL-1 р 39,08 (26,40 176,90); p = 0,002 12,66 (5,00 42,17)
IL-1ra 11,85 (8,20; 14,80); p = 0,0001 2,10 (1,14 3,25)
TNFa 27,30 (2,96; 160,90); p = 0,0001 2,29 (1,42 7,07)
IFNy 133,20 (0,36; 395,50); p = 0,030 0,66 (0,44 2,75)
G-CSF 68,50 (20,10; 369,30); p = 0,0001 1,06 (0,95 2,39)
GM-CSF 13,00 (6,10; 31,90); p = 0,0001 4,00 (2,23 8,11)
VEGF 3,00 (2,10; 3,90); p = 0,0001 0,85 (0,40 1,20)
MCP-1 1,31 (0,50; 3,32) 1,10 (0,51 2,35)
^-10, ^-17, ^-18, ^-1р, т-1га, ЮТа, №N7, G-CSF (гранулоцитарный колониестимулиру-ющий фактор), GM-CSF (гранулоцитарно-ма-крофагальный колониестимулирующий фактор), VEGF (фактор роста эндотелия сосудов), МСР-1 (моноцитарный хемотаксический протеин-1) с использованием наборов реагентов производства АО «Вектор-Бест».
ИВПА на продукцию цитокинов ИКК крови, а также опухолью и ее микроокружением высчитывали по формуле: ИВПА = А/Б, где А — уровень стимулированной поликлональными активаторами продукции цитокина, Б — уровень спонтанной продукции цитокина.
Статистическую обработку данных выполняли с использованием непараметрического критерия Манна—Уитни. Показатели выражали в виде медианы — Ме, нижнего и верхнего про-центилей ^0>25^0>75), рассчитывали коэффициент ранговой корреляции Спирмена (г) и его достоверность (р). Для определения достоверности различий между встречаемостью лимфоузлов, пораженных метастазами (%) на момент исследования, в исследуемых возрастных группах использовали критерий Фишера (ф).
Результаты
Определение спонтанной продукции цитоки-нов выявило достоверное повышение концентрации ^-6, ^-8, т-10, т-17, т-18, т-1га, IFNy, G-CSF, GM-CSF и VEGF в супернатанте клеток опухоли и ее микроокружения по сравнению с супернатантом клеток периферической крови как в I, так и во II группе больных (табл. 1, 2).
После инкубации с ПА отмечалось повышение концентрации ^-2, ^-10, ^-17, ^-1р, TNFa, IFNy и снижение концентрации ^-6, IL-8, IL-18, IL-1га, G-CSF, GM-CSF и VEGF в супернатанте клеток периферической крови по сравнению с су-пернатантом клеток опухоли у больных I группы (табл. 3). В группе II отмечены аналогичные различия по указанным выше концентрациям цито-кинов в супернатанте клеток крови за исключением Ш-8 и GM-CSF (табл. 4).
Анализ ИВПА на цитокинпродуцирующий потенциал клеток показал, что в обеих возрастных группах его значения относительно супер-натанта клеток крови были достоверно выше для всех исследуемых цитокинов по сравнению с ИВПА относительно супернатанта опухоли и ее микроокружения, за исключением ^-18 и белка
MCP-1. ИВПА на продукцию IL-18 иммуноком-петентными клетками крови был снижен по сравнению с аналогичным показателем супернатанта опухоли и ее микроокружения (табл. 5 и 6).
Сравнение продукции цитокинов клетками периферической крови у пациентов разных возрастных групп выявило достоверные различия ИВПА на продукцию IFNy: группа I — Me = 477,80 (Q025 = 137,30, Q075 = 720,90), группа II - Me = 133,20 (Q025 = 0,36, Q075 = 395,50); p = 0,008; на продукцию VEGF: группа I — Me = 2,20 (Q025 = 1,70, Q075 = 3,09), группа II — Me = 3,00 (Q0,25 = 2,10, Q0,75 = 3,90); p = 0,047.
При сравнении продукции цитокинов опухолью и ее микроокружением у пациентов разных возрастных групп отмечались достоверные различия в спонтанной продукции IL-6: группа I — Me = 52440,00 (Q025 = 36300,00, Q075 = 69740,00), группа II — Me = 41040,00 (Q025 = 21820,00, Q075 = 46980,00); p = 0,037 и продукции VEGF: группа I — Me = 2951,20 (Q025 = 2242,00, Q075 = 4607,40), группа II — Me = 2164,40 (Qo,25 = 1346,60, Q075 = 3243,00); p = 0,007. Влияние ПА в этих группах привело к различиям в концентрациях IFNy: группа I — Me = 36,50 (Q025 = 10,50, Qo,75 = 64,50), группа II — Me = 12,30 (Qo,25 = 8,30, Qo;5 = 28,70); p = 0,035, что отражалось и в различии ИВПА на продукцию IFNy: группа I — Me = 1,70 (Q025 = 0,85, Q0,75 = 3,07), группа II — Me = 0,66 (Q025 = 0,44, Q075 = 2,75); p = 0,012.
Обсуждение
Известно, что опухоль и клетки, входящие в состав ее микроокружения, способны продуцировать широкий спектр цитокинов и факторов роста, которые формируют среду, наиболее благоприятную для ее прогрессии [10, 21, 23, 25]. В первую очередь, их действие, так или иначе, направлено на ангиогенез, обеспечивающий трофику новообразования и поддержание его жизнедеятельности. В обеих возрастных группах пациентов отмечалось повышение концентрации IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, IL-18, IL-1ra, G-CSF, GM-CSF и VEGF в супернатанте клеток опухоли и ее микроокружения, что свидетельствовало о высокой функциональной активности новообразования в совокупности с его микроокружением и способствовало формированию новых кровеносных сосудов, что, естественно, повышало вероятность метастазирования. Хотя самой опухолью, помимо ее микроокружения, продуцируются не все из вышеуказанных цито-кинов, а только IL-1p, IL-6, IL-8, IL-10, IL-18 и VEGF [4].
Ангиогенез в очаге опухолевого роста обеспечивается фактором VEGF, продукция кото-
рого стимулируется прямо или косвенно действием других цитокинов, в частности IL-6 и GM-CSF [14]. IL-6 является провоспалительным цитокином, продуцируется моноцитами, макрофагами, фибробластами, эндотелиальными клетками, Т- и В-лимфоцитами. IL-6 способен стимулировать пролиферативную активность клеток злокачественного новообразования, их инвазию, метастазирование и обеспечивать ангиогенез [12, 18, 21, 27]. При РМЖ это было показано на примере белка Онкостатина М, принадлежащего семейству IL-6 и продуцируемого опухоль-ас-социированными нейтрофилами и макрофагами, которые наиболее часто обнаруживаются в опухолевых инфильтратах при различных видах рака [26]. Сигнал на нейтрофилы поступает от фактора роста GM-CSF, который выступает в роли активатора, нейтрофилы синтезируют Онкостатин М и сохраняют его в гранулах. Клеточные контакты между нейтрофилами и опухолевыми клетками способствуют его выбросу, он связывается с рецептором на опухолевых клетках, увеличивая их подвижность, секрецию VEGF и повышая инвазивность опухоли. Таким образом, нейтрофилы, являясь источником Онкостатина М, индуцируют прогрессию и ме-тастазирование опухоли [26, 28]. Полученные достоверные различия между встречаемостью лимфоузлов с метастазами в разных возрастных группах предполагают более интенсивный рост опухоли и повышение вероятности метастази-рования у пациентов в возрасте 40-60 лет (определение критерия Фишера показало (p = 0,034), что согласуется с данными о достоверном повышении концентраций IL-6 и VEGF при их спонтанной продукции в I группе пациентов по сравнению с группой II.
Еще одним цитокином, также оказывающим стимулирующее действие на ангиогенез, является IL-8, который реализует этот эффект не прямо, а через действие протеинкиназ, повышающих выживаемость опухолевых клеток, усиливающих их пролиферацию и миграцию, способствуя ин-вазивности опухоли [6, 12, 30]. К цитокинам, косвенно регулирующим продукцию факторов, принимающих участие в формировании сосудистой сети опухоли, относится и IL-17, который является провоспалительным и, к тому же, стимулирует синтез такого важного медиатора как TNFa [15]. Особая роль в стимуляции опухолевой прогрессии принадлежит IL-18, действие которого направлено на поддержание ангиогенеза, инвазии и метастазирования за счет увеличения миграции эндотелиальных клеток и опухолевых клеток вследствие экспрессии молекул адгезии на эндотелии сосудов и непосредственной активации протеинкиназы MAPK в опухолевых клетках
[34]. IL-18 повышает продукцию VEGF и тром-боспондина-1 [11], усиливает синтез матриксных металлопротеиназ клетками злокачественного новообразования и его микроокружения [20], а также стимулирует пролиферацию клеток неоплазмы и синтез в них эндогенных кислородных радикалов, вызывающих экспрессию FasL, что приводит к Fas-опосредованному апоптозу им-мунокомпетентных клеток, контактирующих со злокачественным новообразованием [24].
Наряду с факторами, способствующими канцерогенезу, клетками опухоли и ее микроокружения продуцируются цитокины, обладающие противоопухолевым эффектом, в частности IL-10 и IFNy [7, 9], повышение концентраций которых отмечалось в супернатанте опухоли у больных обеих групп. IFNy также ингибирует продукцию IL-8 [6]. Что касается IL-1ra, относящегося к противовоспалительным цитокинам, повышение его концентрации может быть маркером степени выраженности воспалительной реакции при раке [8]. Не исключено, что повышенная секреция IL- Ira позволяет неоплазме поддерживать воспаление на уровне, необходимом ей для создания оптимальных условий жизнедеятельности, а также ингибировать чрезмерно выраженную воспалительную реакцию, которая может привести к повышенной деструкции опухолевой ткани [32]. Регуляторное воздействие IL-1ra на ангиогенез было продемонстрировано через ингибирование продукции VEGF [17, 22]. Таким образом, наблюдаемое нами повышение концентрации цитокинов при их спонтанной продукции опухолью и ее микроокружением связано с обеспечением роста и метастазирования новообразования и отражает сложные взаимосвязи между цитокинами с проопухолевым и противоопухолевым действием.
Добавление ПА в среду культивирования приводило к повышению концентраций IL-2, IL-10, IL-17, IL-1ß, IL-1ra, TNFa и IFNy в су-пернатанте иммунокомпетентных клеток крови, что свидетельствовало об их высоком цитокин-продуцирующем потенциале. IL-2, являясь ре-гуляторным цитокином, способен увеличивать продукцию IL-10 NK-клетками периферической крови [31], а также стимулировать синтез IL-10 и IL-17 Т-регуляторными клетками [13, 33], что объясняет повышение концентрации цитокинов этой группы в супернатанте клеток крови. В ранее проведенных исследованиях было показано, что чем выше продукция IL-2 и IFNy, цитоки-
нов, стимулирующих цитотоксическую активность иммунокомпетентных клеток, тем ниже содержание К67-позитивных клеток в опухоли, показатель, отражающий их пролиферативную активность и сопряженный с большей тяжестью опухолевой прогрессии [1]. Наибольшие различия в концентрациях IFNy при воздействии ПА были получены в супернатанте клеток крови обеих групп пациентов, при этом у больных в возрасте 40-60 лет ИВПА на его продукцию был в несколько раз выше аналогичного показателя больных в возрасте 61 и более лет. Следовательно, противоопухолевый потенциал лимфоцитов в микроокружении опухоли не реализован, о чем свидетельствовало различие в спонтанной продукции IFNy в группах с различной встречаемостью лимфоузлов, пораженных метастазами.
Повышение ИВПА на продукцию практически всех цитокинов в супернатанте крови по сравнению с показателями супернатанта опухоли можно также объяснить изначально высокими уровнями спонтанной продукции цитокинов опухолью и ее микроокружением, обеспечивающими злокачественную прогрессию [16, 19], поэтому действие ПА на опухоль не приводило к такому же эффекту, как при действии на ИКК крови. Единственным цито-кином, к продукции которого клетки опухоли и микроокружения сохраняли высокий потенциал, был IL-18, что подтверждает его важную роль в канцерогенезе.
Таким образом, опухоль и клетки ее микроокружения вырабатывают широкий спектр ци-токинов и факторов роста, о чем свидетельствовали высокие уровни их спонтанной продукции. Цитокины, обладающие разнонаправленными эффектами, объединены в единую сеть межклеточных взаимодействий, которые прямо или при помощи посредников стимулируют ангиогенез, направленный на обеспечение трофики растущего новообразования, усиливают пролифера-тивную активность опухолевых клеток, их инвазию и метастазирование. На основании данных о влиянии поликлональных активаторов на ци-токинпродуцирующую функцию клеток опухоли и крови можно прийти к выводу о том, что постоянно циркулирующие иммунокомпетентные клетки, обладая высокой способностью к секреции исследованных цитокинов, являются тем резервом, который обеспечивает опухолевую прогрессию.
Список литературы / References
1. Аутеншлюс А.И., Соснина А.В., Великая Н.В., Фурсов С.А., Михайлова Е.С., Исакова Н.Б., Морозов Д.В., Лыков А.П., Вараксин Н.А. Оценка цитокинпродуцирующей функции клеток крови и пролифера-тивной активности опухолевых клеток при раке толстой кишки // Российский аллергологический журнал, 2011. № 4. С. 34-35. [Autenshlyus A.I., Sosnina A.V., Velikaya N.V., Fursov S.A., Mikhailova E.S., Isakova N.B.,
Morozov D.V., Lykov A.P., Varaksin N.V. Estimation of cytokine-producing function of blood cells and proliferative activity of tumor cells in colon cancer. Rossiyskiy allergologicheskiy zhurnal = Russian Allergological Journal, 2011, no. 4, pp. 34-35. (In Russ.)]
2. Косенок В.К., Бельская Л.В., Массард Ж., Вьюшков Д.М. Статистические особенности заболеваемости раком молочной железы в Омской области // Вопросы онкологии, 2016. Т. 62, № 4. С. 410-415. [Kosenok V.K., Belskaya L.V., Massard Zh., Viyushkov D.M. Statistical features of breast cancer incidence in the Omsk region. Voprosy oncologii = Problems in Oncology, 2016, Vol. 62, no. 4, pp. 410-415. (In Russ.)]
3. Кунц Т.А., Карпухина К.В., Михайлова Е.С., Маринкин И.О., Вараксин Н.А., Аутеншлюс А.И., Ляхо-вич В.В. Влияние поликлональных активаторов на продукцию цитокинов клетками крови и злокачественных новообразований молочной железы // Доклады академии наук, 2016. Т. 466, № 1. С.117-119. [Kunts T.A., Marinkin I.O., Karpukhina K.V., Mikhaylova E.S., Autenshlyus A.I., Lyakhovich V.V., Varaksin N.A. Effect of polyclonal activators on cytokine production by blood cells and by malignant breast cancer cells. Doklady akademii nauk = Reports of the Academy of Sciences, 2016, Vol. 466, no. 1, pp. 117-119. (In Russ.)]
4. Соснина А.В., Великая Н.В., Вараксин Н.А., Гришаев М.П., Аутеншлюс А.И. Роль цитокинов в патогенезе злокачественных новообразований. Новосибирск, 2014. 128 с. [Sosnina A.V., Velikaya N.V., Varaksin N.A., Grishaev M.P., Autenshlus A.I. the Role of cytokines in the pathogenesis of malignant tumors]. Novosibirsk, 2014. 128 p.
5. Blaylock R.L. Cancer microenvironment, inflammation and cancer stem cells: a hypothesis for a paradigm change and new targets in cancer control. Surg. Neurol. Int., 2015, Vol. 6, p. 92.
6. Brat D.J., Bellail A.C., Van Meir E.G. The role of interleukin-8 and its receptors in gliomagenesis and tumoral angiogenesis. Neuro-oncol., 2005, Vol. 7, no. 2, pp. 122-133.
7. Conti-Freitas L.C., Foss-Freitas M.C., Mamede R.C.M., Foss N.T. Interferon-gamma and interleukin-10 production by mononuclear cells from patients with advanced head and neck cancer. Clinics, 2012, Vol. 67, no. 6, pp. 587-590.
8. Dinarello C.A. Interleukin-1 in the pathogenesis and treatment of inflammatory diseases. Blood, 2011, Vol. 117, no. 14, pp. 3720-3732.
9. Duluc D., Corvaisier M., Blanchard S., Catala L., Descamps P., Gamelin E., Ponsoda S., Delneste Y., Hebbar M., Jeannin P. Interferon-gamma reverses the immunosuppressive and protumoral properties and prevents the generation of human tumor-associated macrophages. Int. J. Cancer, 2009, Vol. 125, no. 2, pp. 367-373.
10. Eissa S.A., Zaki S.A., El-Maghraby S.M., Kadry D.Y. Importance of serum IL-18 and RANTES as markers for breast carcinoma progression. J. Egypt Natl. Canc. Inst., 2005, no. 17, pp. 51-55.
11. Fabbi M., Carbotti G., Ferrini S. Context-dependent role of IL-18 in cancer biology and counter-regulation by IL-18BP. J. Leukoc. Biol., 2015, no. 97, pp. 665-675.
12. Hartman Z.C., Poage G.M., den Hollander P., Tsimelzon A., Hill J., Panupinthu N., Zhang Y., Mazumdar A., Hilsenbeck S.G., Mills G.B., Brown P.H. Growth of triple-negative breast cancer cells relies upon coordinate autocrine expression of the proinflammatory cytokines IL-6 and IL-8. Cancer Res., 2013, no. 73, pp. 3470-3480.
13. Hedrich C.M., Rauen T., Apostolidis S.A., Grammatikos A.P., Rodriguez Rodriguez N., Ioannidis C., Kyttaris V.C., Crispin J.C., Tsokos G.C. Stat3 promotes IL-10 expression in lupus T cells through trans-activation and chromatin remodeling. PNAS, 2014, no. 111, pp. 13457-13462.
14. Huang S., Wu M., Shun C., Wang H., Lin M. Interleukin-6 increases vascular endothelial growth factor and angiogenesis in gastric carcinoma. J. Biomed. Sci., 2004, no. 11, pp. 517-527.
15. Iyoda M., Shibata T., Kawaguchi M., Hizawa N., Yamaoka T., Kokubu F., Akizawa T. IL-17A and IL-17F stimulate chemokines via MAPK pathways (ERK1/2 and p38 but not JNK) in mouse cultured mesangial cells: synergy with TNF-alpha and IL-1beta. Am. J. Physiol. Renal Physiol., 2010, Vol. 298, no. 3, pp. F779-787.
16. Jain R.K., Fukumura D., Duda D.G. From the guest editors: role of tumor microenvironment in tumor progression and treatment response: A 30 Years' Journey. Cancer Journal, 2015, Vol. 21, no. 4, pp. 235-236.
17. Lindahl G., Saarinen N., Abrahamsson A., Dabrosin C. Tamoxifen, flaxseed, and the lignan enterolactone increase stroma- and cancer cell-derived IL-1Ra and decrease tumor angiogenesis in estrogen-dependent breast cancer. Cancer Res., 2011. Vol. 71, no. 1, pp. 51-60.
18. Ma J., Ren Z., Ma Y., Xiao W. Targeted knockdown of EGR-1 inhibits IL-8 production and IL-8-mediated invasion of prostate cancer cells through suppressing EGR-1/NF-kappaB synergy. J. Biol. Chem., 2009, Vol. 284, no. 50, pp. 34600-34606.
19. Man Y., Stojadinovic A., Mason J., Avital I., Bilchik A., Bruecher B., Protic M., Nissan A., Izadjoo M., Zhang X., Jewett A. Tumor-infiltrating immune cells promoting tumor invasion and metastasis: existing theories. J. Cancer, 2013, Vol. 4, no. 1, pp. 84-95.
20. Marco M., Fortin C., Fulop T. Membrane-type matrix metalloproteinases: key mediators of leukocyte function. J. Leukoc. Biol., 2013, no. 94, pp. 237-246.
21. McClintock J.Y., Wagner E.M. Role of IL-6 in systemic angiogenesis of the lung. J. Appl. Physiol., 2005, Vol. 99, no. 3, pp. 861-866.
22. Murakami Y., Watari K., Shibata T., Uba M. Ureshino H., Kawahara A., Abe H., Izumi H., Mukaida N., Kuwano M., Ono M. N-myc downstream-regulated gene 1 promotes tumor inflammatoryangiogenesis through JNK activation and autocrine loop of interleukin-1 a by human gastric cancer cells. J. Biol. Chem., 2013, no. 288, pp. 25025-25037.
23. Odenthal J., Takes R., Friedl P. Plasticity of tumor cell invasion: governance by growth factors andcytokines. Carcinogenesis, 2016, Vol. 37, pp. 1117-1128.
24. Park S., Cheon S., Cho D. The dual effects of interleukin-18 in tumor progression. Cell. Mol. Immunol., 2007, Vol. 4, no. 5, pp. 329-335.
25. Picon-Ruiz M., Pan C., Drews-Elger K., Jang K., Besser A.H., Zhao D., Morata-Tarifa C., Kim M., Ince T.A., Azzam D.J., Wander S.A., Wang B., Ergonul B., Datar R.H., Cote R.J., Howard G.A., El-Ashry D., Torné-Poyatos P. Marchai J.A., Slingerland J.M. Interactions between adipocytes and breast cancer cells stimulatecytokine production and drive Src/Sox2/miR-302b-mediated malignant progression. Cancer Res., 2016, no. 76, pp. 491-504.
26. Queen M.M., Ryan R.E., Holzer R.G., Keller-Peck C.R., Jorcyk C.L. Breast cancer cells stimulate neutrophils to produce oncostatin M: potential implications for tumor progression. Cancer Res., 2005, no. 65, pp. 8896-8904.
27. Shida Y., Igawa T., Hakariya T., Sakai H., Kanetake H. p38MAPK activation is involved in androgen-independent proliferation of human prostate cancer cells by regulating IL-6 secretion. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2007, Vol. 353, no. 3, pp. 744-749.
28. Smith D.A., Kiba A., Zong Y., Witte O.N. Interleukin-6 and Oncostatin-M synergize with the PI3K/AKT Pathway to promote aggressive prostate malignancy in mouse and human tissues. Mol. Cancer Res., 2013, no. 11, pp. 1159-1165.
29. Society A.C. Breast Cancer Facts and Figures 2013-2014. American Cancer Society, Inc., Atlanta, 2013. https://old.cancer.org/acs/groups/content/0research/documents/document/acspc-O42725.pdf
30. Sun W, Liu D.B., Li W.W., Zhang L.L., Long G.X., Wang J.F., Mei Q., Hu G.Q. Interleukin-6 promotes the migration and invasion of nasopharyngeal carcinoma cell lines and upregulates the expression of MMP-2 and MMP-9. Int. J. Oncol., 2014, no. 44, pp. 1551-1560.
31. Tarrio M.L., Lee S.-H, Fragoso M.F., Sun H-W., Kanno Y., O'Shea J.J., Biron C.A. Proliferation conditions promote intrinsic changes in NK cells for an IL-10 response. J. Immunol., 2014, no. 193, pp. 354-363.
32. Triozzi P.L., Aldrich W., Singh A. Effects of interleukin-1 receptor antagonist on tumor stroma in experimental uveal melanoma. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2011, Vol. 52, no. 8, pp. 5529-5535.
33. Tsuji-Takayama K., Suzuki M., Yamamoto M., Harashima A., Okochi A., Otani T., Inoue T., Sugimoto A., Toraya T., Takeuchi M., Yamasaki F., Nakamura S., Kibata M. The production of IL-10 by human regulatory T cells is enhanced by IL-2 through a STAT5-responsive intronic enhancer in the IL-10 locus. J. Immunol., 2008, Vol. 181, no. 6, pp. 3897-3905.
34. Yang Y., Cheon S., Jung M.K., Song S.B., Kim D., Kim H.J., Park H., Bang S.I., Cho D. Interleukin-18 enhances breast cancer cell migration via down-regulation of claudin-12 and induction of thep38 MAPK pathway. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2015, Vol. 10, no. 459 (3), pp. 379-386.
Авторы:
Кунц Т.А. — к.б.н., старший научный сотрудник Центральной научно-исследовательской лаборатории ФГБОУ ВО «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, г. Новосибирск, Россия Михайлова Е.С. — научный сотрудник Центральной научно-исследовательской лаборатории ФГБОУ ВО «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ; старший научный сотрудник лаборатории метаболизма лекарств и фармакокинетики ФГБНУ «Научно-исследовательский институт молекулярной биологии и биофизики», г. Новосибирск, Россия Маринкин И.О. — д.м.н., профессор, заведующий кафедрой, ФГБОУ ВО «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, г. Новосибирск, Россия
Вараксин Н.А. — заведующий лабораторией, АО «Вектор-Бест», Новосибирская область, Россия
Аутеншлюс А.И. — д.б.н., профессор, заведующий Центральной научно-исследовательской лабораторией ФГБОУ ВО «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ; главный научный сотрудник лаборатории метаболизма лекарств и фармакокинетики ФГБНУ «Научно-исследовательский институт молекулярной биологии и биофизики», г. Новосибирск, Россия
Поступила 17.02.2017 Отправлена на доработку 22.02.2017 Принята к печати 02.05.2017
Authors:
Kunts T.A., PhD (Biology), Senior Research Associate, Central Research Laboratory, Novosibirsk State Medical University, Novosibirsk, Russian Federation
Mikhaylova E.S., Research Associate, Central Research Laboratory, Novosibirsk State Medical University; Senior Research Associate, Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, Research Institute of Molecular Biology and Biophysics, Novosibirsk, Russian Federation
Marinkin I.O., PhD, MD (Medicine), Professor, Head of Department, Novosibirsk State Medical University, Novosibirsk, Russian Federation
Varaksin N.A., Head of Laboratory, JSC "Vector-Best", Novosibirsk Region, Russian Federation Autenshlyus A.I., PhD, MD (Biology), Professor, Head, Central Research Laboratory, Novosibirsk State Medical University; Chief Research Associate, Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, Research Institute of Molecular Biology and Biophysics, Novosibirsk, Russian Federation
Received 17.02.2017 Revision received 22.02.2017 Accepted 02.05.2017
