CC BY
61
УДК 619:616-
006.446:615.779.9:636.22/.28 ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ЛЕВАМИЗОЛУ
ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ИЗ НЕБЛАГОПОЛУЧНОГО ПО ЛЕЙКОЗУ ХОЗЯЙСТВА
О.В. Морозова, аспирант;
В.С. Власенко, доктор биол. наук
ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии
UDC 619:616-
006.446:615.779.9:636.22/.28 THE SENSITIVITY TO LEVAMI-SOLE OF IMMUNOCOMPETENT CELLS IN CATTLE FROM DISADVANTAGED FARM BY LEUKEMIA
Morozova O.V., Vlasenko V S. Dr. Biol. Sci.
В настоящей работе данные, свидетельствующие о том, что инкубация лимфоцитов
периферической крови с левамизолом in vitro позволяет выявить животных с Т-клеточным иммунодефицитом,
обусловленного блокадой ре-цепторов к эритроцитам барана (Е-рецепторов). Признаки блокады были выражены у крупного рогатого скота, имеющего наиболее зна-чительный дефицит Т-клеток (мо-лодняк 17-18-месячного возраста и коровы), в особенности у носителей вируса лейкоза из неблагополучного по лейкозу стада. Ключевые слова: крупный рогатый скот, лейкоз, левамизол, Т-лимфоциты,
VNIIBTG RAAS vvs-76@Jist.ru
приводятся In this paper we present evidence that the incubation of lymphocytes of peripheral blood with levamisole in vitro allows us to reveals animals with T-cell immunodeficiency, due to blockade to sheep erythrocytes (E-receptors). The signs of the blockade were expressed in cattle having the most significant deficiency of T-cells (young animals in 17-18-months of age and cows), especially in carriers of leukemia virus from disadvantaged herd by leukemia.
Keywords: cattle, leukemia, levami-sole, T-lymphocytes, rosette for-mation
розеткообразование
В настоящее время не вызывает сомнения тот факт, что нарушение функций иммунной системы является одним из патогенетических механизмов при возникновении лейкоза крупного рогатого скота. Так, в хозяйствах с высокой заболеваемостью лейкозом имеются значительные в процентном соотношении группы животных повышенного риска с иммунной недостаточностью, проявляющейся нарушением субпопуляций Т- и В- субпопуляций иммунокомпетентных клеток, а также содержанием недифференцированных лимфоцитов, неспособных выполнять иммунологические функции [1]. Наиболее выраженная иммунная недостаточность была установлена у серонегативных коров неблагополучного по лейкозу стада. При этом отмечается, что РИД-отрицательные коровы могут быть также инфицированы вирусом лейкоза, но не иметь специфических антител ввиду глубокой недостаточности иммунной системы [2].
Известно, что развитие Т-клеточного иммунодефицита чревато повышенной восприимчивостью организма животных к инфекционным болезням, особенно вирусной этиологии. По мнению некоторых авторов, дефицит Т-лимфоцитов периферической крови у больных онкологическими и лимфопролиферативными заболеваниями в значительной степени обусловлен блокадой, причиной которой является
так называемая модификация рецепторов к эритроцитам барана на поверхности Т-клеток, связанная с изменением уровня циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) [3].
Устранение действия блокирующих субстанций, накапливающихся в кровотоке и реализующих свое влияние через повышение уровня внутриклеточного цАМФ, от которого зависит экспрессия эритроцитов барана на лимфоцитах, стало возможным с помощью прединкубации лимфоцитов с левамизолом [4, 5]. В связи с этим предметом нашего исследовательского интереса стало изучение чувствительности Т-лимфоцитов к левамизолу у крупного рогатого скота разного возраста из неблагополучного по лейкозу стада.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Объектом исследования служил крупный рогатый скот разного возраста (всего 110 голов).
Уровень Т-лимфоцитов периферической крови определяли методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК). Реакцию ставили параллельно с двумя пробами лимфоцитов: чистой взвесью (контрольная) и с обработанными левамизолом (опытная). Лимфоциты опытной пробы обрабатывали левамизолом в концентрации 0,5 мкг/мл среды 199, содержащей 1405 лимфоцитов, и инкубировали 1 час при 37оС. В опытной и контрольной группах подсчитывали процент розеток и высчитывали индекс сдвига (ИС), определяемый как отношение количества Е-РОК после инкубации с левамизолом к Е-РОК до инкубации с левамизолом [5]. Для выявления серопозитивных животных - носителей вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) применяли реакцию иммунодиффузии (РИД) [6].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ В периферической крови 110-и голов крупного рогатого скота разного возраста (до 2-х мес., 5-6 мес., 12 мес., 17-18 мес. и коровы) определили количество Т-лимфоцитов, несущих рецептор к эритроцитам барана (Е-РОК), затем их количество после экспозиции с левамизолом in vitro (EL-РОК). Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Количество Е-РОК до и после обработки левамизолом лимфоцитов периферической крови у крупного рогатого скота разного возраста, М±т ___
Возрастная группа Количество животных Е-РОК, % EL-РОК, %
до 2-х мес. 15 22,2±0,95 12,53±1,22
5-6 мес. 15 18,46±1,01 12,26±1,34
12 мес. 20 16,0±0,92 10,79±0,92
17-18 мес. 30 16,95±0,55 18,52±1,97
Коровы 30 13,05±1,22 20,84±0,92
Примечание — изменения достигают достоверной разницы (Р<0,05)
Из таблицы видно, что наибольшее количество Т-лимфоцитов содержится в крови молодняка крупного рогатого скота в возрасте до 2-х
месяцев. У животных с 5-6-месячного возраста по сравнению с телятами младшего возраста наблюдается достоверное снижение числа Т-лимфоцитов, которое достигает минимума у коров (соответственно 22,2±0,95; 13,05±1,22 %, Р<0,001). В то же время число Т-лимфоцитов, идентифицированных в нагрузочном тесте с левамизолом, напротив, с высокой степенью достоверности увеличивается с 17-18-месячного возраста, достигая максимального уровня у коров (соответственно 12,53±1,22; 20,84±0,92 %, 12,53±1,22).
В дальнейшем, по результатам диагностического исследования на лейкоз в реакции иммунной диффузии (РИД), крупный рогатый скот всех возрастных категорий разделили на 2 группы: 1-ю составили РИД-отрицательные; 2-ю - носители ВЛКРС. У всех животных был подсчитан индекс сдвига (ИС), определяемый как отношение количества Е-РОК после инкубации с левамизолом к Е-РОК до инкубации с левамизолом. Результаты исследований представлены в таблице 2.
Таблица 2 - Результаты оценки чувствительности лимфоцитов к левамизолу в реакции спонтанного розеткообразования у РИД-отрицательных _ и инфицированных ВЛКРС животных разного возраста
Группа возраст
12 мес. 17-18 мес. коровы
n ИС>1,2 % n ИС>1,2 % n ИС>1,2 %
РИД-отрицательные 19 2 10,5 22 8 36,4 17 7 41,2
Носители ВЛКРС 1 - - 8 8 100,0 13 11 84,6
Из таблицы 2 видно, что признаки блокады Е-рецепторов обнаружены у РИД-отрицательных животных с 12-месячного возраста (10,5 %) и более резко выражены у крупного рогатого скота старшего возраста (у 36,4 % в возрасте 17-18 мес. и у 41,2 % коров).
Обработка левамизолом лимфоцитов крови носителей ВЛКРС в возрасте 17-18 мес. привела к ликвидации дефицита Т-клеток у 100 %, тогда как среди коров -у 84,6 %. По-видимому, это объясняется тем, что у этих животных отмечено гематологическое проявление лейкозного процесса, при котором развивается истинный дефицит Т-клеток, сопряженный не только с блокадой поверхностных маркеров, но и со снижением их количества вследствие ослабления лимфопоэза и подавления рециркуляции. Также отмечено, что блокада Т-клеток не проявлялась у одного носителя ВЛКРС в возрасте 12 месяцев. Это может быть связано с начальным периодом инфицирования. В частности, из научной литературы известно, что в начальном периоде заболевания лимфогранулематозом блокада Е-рецепторов лимфоцитов может отсутствовать
ВЫВОДЫ
1. У молодняка крупного рогатого скота неблагополучного по лейкозу стада с 5-6-месячного возраста наблюдается достоверное снижение в крови Е-РОК, сопровождающееся увеличением числа
левамизолчувствительных лимфоцитов с максимальной выраженностью при наиболее значительном дефиците Т-клеток;
2. Обработка левамизолом in vitro лимфоцитов крупного рогатого скота позволяет выделить животных с дефицитом Т-клеток, обусловленным блокадой поверхностных маркеров Т-клеток, отмечающимся преимущественно у молодняка крупного рогатого скота с 17-18 месячного возраста и коров. Признаки блокады выявлены у 85,7 -100,0 % носителей ВЛКРС и у 36,4-41,2 % РИД-отрицательных животных этих возрастных групп.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Донник, И.М. Повышение эффективности диагностики лейкоза крупного рогатого скота в тех-ногенно загрязненных территориях / И.М. Донник, Б.М. Коритняк, М.Ю. Кадочников, Е.Н. Беспамятных // Аграрный вестник Урала. - 2007. - №3(39). - С. 28-30.
2. Дондоладзе, М.Б. Анализ диагностической значимости модификации поверхности Т-клеток при лимфопролиферативных заболеваниях / М.Б. Дондоладзе, А.А. Ярилин, Н.З. Пирадашвили // Иммунология. - 1986. - №2. - С. 66-68.
3. Крикун, В.А. Научно-практическое значение вирусо-иммуногенетической теории В.П. Шишкова в изучении лейкоза крупного рогатого скота (к 70-летию со дня рождения) / В.А. Крикун, М.И. Гулюкин // Тр. ВИЭВ. - М, 1999. - Т. 72. - С. 12-15.
4. Морозова, О.В. Оценка чувствительности лимфоцитов к левамизолу у крупного рогатого ско-та при лейкозе / О.В. Морозова, В.С. Власенко, Т.С. Дудоладова // Ветеринарный врач. - 2012. - №5. - С. 3639.
5. Методические указания по диагностике лейкоза крупного скота / Департамент ветеринарии, Минсельхоз России. 2000. №13-7-2/2130.
6. Пантелеева, Е.С. О причинах дефицита Т-лимфоцитов периферической крови у больных лимфогранулематозом / Е.С. Пантелеева, А.А. Ярилин, Г.С. Неприна, Г.Д. Байсоголов // Иммунология. - 1981. - №1. - С. 70-74.
