CC BY
130
ОБЗОРЫ НАУЧНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
УДК 547.962:577
Е. Г. Скворцевич, Р. В. Романов, О. В. Стурлис
БИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ НАНОСТРУКТУР УГЛЕРОДА
Санкт-Петербургский университет, кафедра биохимии биолого-почвенного факультета
Фуллерены, открытые в 1985 г. английскими исследователями Р Керлом и Р Смолли совместно с американским химиком Г. Крото относятся к кластерным соединениям или каркасным, представляющим собой новую аллотропную модификацию углерода в дополнение к алмазу и графиту. Согласно рекомендации IUPFC, фуллеренами называют замкнутые сферические многогранники, целиком построенные из трижды координированных атомов углерода, имеющих 12 пентагональных и (п / 2-10) гексогональных граней, где п > 20 (чем-то напоминающие футбольный мяч) [2, 5, 17, 19].
Уникальное отличие фуллеренов от большинства других «органических» соединений связано с наличием замкнутой полости внутри молекулы. Поэтому они могут давать два типа производных: эктоэдральные (заместители расположены на внешней поверхности и связаны ковалентной связью с атомом углерода) и эндоэдральные (топологические соединения, в которых атом (или группа атомов) расположены во внутренней полости молекулы и стабильность этих соединений определяется невозможностью этого атома (или группы) выйти наружу без разрушения самой «клетки»). Последние также можно формально рассматривать как соединения включения.
Эндоэдральные комплексы представляют собой особый класс топологических соединений и выделяются в отдельную группу. Они обозначаются как Ме@Сх, где Ме — атом металла (или группа атомов), Сх — фуллерен с X атомами углерода, а знак @ — обозначает, что металл (или группа атомов) находятся внутри фуллереновой «клетки». Атом радиоактивного гольмия, помещенный внутри кора фуллерена не выходит из фуллереновой сферы в условиях живого организма и, следовательно, является абсолютным маркером для определения локализации фуллеренового производного.
С помощью гидроксильного производного эндоэдрального фуллерена с меченым гольмием 166Но было проведено исследование по локализации фуллеренов в живом организме [29].
Фуллерены обладает структурой замкнутой поверхности с сильно развитой системой п-электронов. Они способны к реакциям присоединения, используя которые можно получить широкий спектр продуктов с разнообразными физико-химическими и биологическими свойствами. Сегодня фуллерены и аналогичные соединения выпускаются в тоннажном измерении и имеют широкое применение в производстве наноматериалов, значение которых
© Е. Г. Скворцевич, Р. В. Романов, О. В. Стурлис, 2009
в производстве материалов с заданными свойствами постоянно возрастает. Фуллерены являются принципиально новыми ксенобиотиками, влияние которых на биологические объекты непредсказуемо. Предполагается, что эти соединения являются аналогами некоторых биологических наноструктур. Например фуллерены (из них наиболее изучен фуллерен С60), представляющие собой замкнутые сферы диаметром около 1 нм, обладают рядом физико-химических свойств, позволяющих им взаимодействовать с широким кругом биомолекул клетки. Сегодня отмечены как позитивные, так и негативные эффекты фуллеренов на клеточные функции. Причем различные производные фуллеренов обладают противоположными эффектами. Последнее обстоятельство дает исследователю возможность управлять физико-химическими свойствами фуллеренов и соответственно их биологическими эффектами [3, 20].
Фуллерены не являются деструктивными агентами в клетке, но могут выступать как модификаторы физико-химических свойств клеточных структур, например, биологических мембран.
Показано, что фуллерен С60 обладает мембранотропными свойствами и регулирующим влиянием на механизм работы мембранных ферментов [20, 24, 25,]. Эти свойства фуллеренов дают основания для конструирования молекулярных машин с использованием фуллеренов для различного биомедицинского применения. Фуллерены, как и биологические мембраны, являются объектами нанохимии или химии высокоорганизованных веществ (ВОВ). Объектами нанохимии являются (синтезированные структуры, частицы вещества, слои и другие объекты размером от 0,1 до 10 нм (1-100 А). Термин нанообъект относится не к размерам реальных объектов, а к размерам составляющих их структурных элементов, причем для этих элементов характерен нанометровый размер. Нанообъекты или надмолекулярные структуры характеризуются высоким соотношением поверхностных и объемных фаз и кривизной межфазных границ, что существенно сказывается на физико-химических свойствах этих объектов. Нанообъекты можно назвать вырожденными дисперсными системами (размеры дисперсных систем — объектов коллоидной химии составляют 0,1-1 мкм) или «ультрадисперсными системами». Под дисперсностью изучаемой гетерогенной системы понимают отношение общей площади межфазной поверхности к объему или массе дисперсной фазы. Степень дисперсности (П) определяется размерами тела по трем измерениям, при этом дисперсность определяется по той оси, уменьшением размера по которой она достигнута (наименьшим размером 1). П = 1 / 1. При уменьшении размера по одной из осей образуется пленка, по двум осям — нить, по трем осям — микрочастица. Для оценки дисперсности субмикрочастиц используется другая характеристика 0=ЫХ / Ы, т. е отношение поверхностных атомов (Ы) к их общему числу в частице (Ы). При П = 1 все атомы оказываются локализованными на поверхности [8].
Основной проблемой использования фуллеренов в биологической сфере является практически полное отсутствие растворимости в воде его кристаллической формы-фуллерита, что является критическим фактором для доставки препаратов на основе фуллеренов в организм.
Можно получить растворимые формы производных фуллерена, вводя полярные заместители в молекулу фуллерена. Однако любой заместитель в фуллереновом ядре приводит к значительным изменениям строения молекулы. Введение в него всего лишь одного заместителя меняет свойства сразу двух атомов углерода: их гибридизация меняется из гибридного состояния в состояние sp3. При этом в случае фуллерена С60 исчезает такое его свойство, как равноценность всех атомов углерода. Нарушается также единая п-электронная система молекулы. Более того, введение нескольких заместителей приводит к образованию региоизомеров [21, 22].
При введении заместителей в молекулу фуллеренов получали новые химические соединения соответственно с новыми биологическими свойствами. При этом терялся главный объект изучения, а именно, фуллереновый кор, определяющий базовые химические свойства всего семейства фуллеренов [10, 11, 18, 26, 27, 30].
Чаще всего эксперименты по исследованию биологических свойств фуллеренов проводят с фуллереном С60. Последний легко очищается путем фракционирования в органических растворителях и наиболее полно изучен.
Молекула фуллерена С60 имеет диаметр 7.1 А. Молекулярная масса С60 — 720 а. е. Толщина оболочки С60 оценивается в 1,0 А. Плотность внутриобъемного заряда близка к нулевой, а ковалентный радиус составляет 0,77 А. Расстояние между молекулами в кристалле С60 около 3.1 А, плотность 1,697 г/см3.Температура разложения С60 1700 °С, энергия С-С связи — 448,7 кДж/моль [5, 17, 19].
Известны несколько способов перевода фуллеренов в водорастворимое состояние: наиболее общий и эффективный способ солюбилизации фуллерена в воде — химическая модификация с введением заместителей, обеспечивающих высокую растворимость производных фуллерена [3, 5, 10]. Обычно для этого метода используют циклоаддукты [11].
Введенные заместители могут содержать либо ионные, либо неионные гидрофильные группы. Примером может служить Th — симметричный гексакисаддукт с бис (3-аминопропил) малонатом, содержащий 12 первичных аминогрупп. Растворимость соли, образованной этим соединением достигает 418мг/мл (89 мг С60 на мл воды [14, 23, 32]).
Первый способ солюбилизации нативного фуллерена состоит в получении восстановленных форм фуллеренов — анионов С60п. Моно и дианионы фуллеренов устойчивы в водных растворах, но быстро окисляются кислородом воздуха. Восстановление подходящими реагентами позволяет получать растворы фуллеренов с концентрацией до 1мг/мл.
Второй способ — получение межмолекулярных комплексов. Наиболее простой вариант — применение различных поверхностно-активных веществ, образующих в водном растворе мицеллы, внутри которых располагаются молекулы фуллерена. Однако растворимость таких комплексов довольно низка.
Стабильная дисперсия С60 может находиться в двух состояниях: в виде молекулярной или в виде коллоидальной дисперсий (с диаметром ca. 10 тм). са. — агрегационное число (число молекул в агрегате). Тритон /(Triton — X-100 неионный детергент с имперической формулой (СР3)2ССН2С (СН3)-С6Н2СО)п, где n — 8-10. Алкильная и полиэтиленгликольная цепи находятся в позиции 1,4 ароматического кольца. Этот детергент имеет критическую концентрацию мицеллообразования (cmc) — 2,4 • 10-4мол-дм3, образуя мицеллы с агрега-ционным числом (са)140. Были получены стабильные дисперсии С60 с Triton X-100 и охарактеризованы с применением UV-VIS-спектроскопии и метода малоуглового рассеивания нейтронов. Результаты показали, что стабильная дисперсия С60 может находиться в двух состояниях в виде молекулярной или в виде коллоидальной дисперсий (с диаметром ca. 10 нм). Переход молекулярной формы в коллоидальную индуцируется увеличением отношения [C60]/[Triton X-100]. В органических растворителях С60 диспергирован в виде отдельных молекул с насыщающей концентрацией 2,8 мг-см-3. Появление агрегатов тестировалось по появлению пика в спектре поглощения раствора при X — 440 нм [13].
Третий способ — использование соединений включения. Из известных соединений включения, употребляемых в экспериментах с живыми организмами, следует отметить комплексы с циклодекстрином и с поливинилпирролидоном (PVP) С60 (растворимость фуллерена С60 в растворах поливинилпирролидона составляет 400 мкг/мл и в меньшей степени с колликсаренами. Данные соединения широко используются в биологической
практике, поскольку они относительно слабо удерживают фуллерен и после введения комплекса в организм могут передавать на конкурентной основе фуллерены транспортным системам живого организма [32].
При диспергировании кристаллов фуллерена С60 в воде образуются коллоидные или грубодисперсные системы фуллерен-вода. Молекулярные растворы можно получить путем растворения фуллеренов в органических растворителях: сероуглерод > толуол > бензол > четыреххлористый углерод > гексан. В этом ряду растворимость меняется от 5160 до 40 мкг/мл [28]. В последнее время были разработаны технологии по получению мономолекулярных дисперсий фуллерена С60 в воде.
Одно из уникальных свойств фуллеренов является наличие подвижных п-электронов на поверхности молекулы, придающих ей полярные свойства. Как было показано мономо-лекулярные дисперсии, полученные путем ультразвукового диспергирования фуллеренов в воде или растворения в органических растворителях с последующим переводом в воду, образуют стойкие сольваты единичных гидратированных фуллеренов (HyFn С60 • n H2O, n = 22-24) с максимальной концентрацией 1 • 10-4 моль/л. При повышении концентрации HyFn до 5,5. 10-3 моль/л гидратированные фуллерены образуют кластеры с размерами 3-36 нм, которые при разбавлении коллоидных растворов водой образуют растворы единичных мономолекулярных гидратированных фуллеренов [12].
Таким образом, фуллерены способны взаимодействовать как с полярной, так и неполярной фазами биомолекул, проявляя при этом свойства поверхностно-активных веществ. Именно это свойство роднит их, например, с белками, а также с другими биомолекулами. Взаимодействие фуллеренов с водой осуществляется путем реорганизации структуры воды, увеличивая упорядоченность молекул воды на поверхности фуллерена.
В биологических объектах фуллерены, находясь на поверхности раздела полярной и неполярной фаз, могут выступать конкурентами биомолекул по влиянию на структуру воды, находящейся в активных центрах биомолекул.
Биологические эффекты фуллеренов могут быть обусловлены рядом физикохимических свойств. Например, антиоксидантные свойства. Антиоксидантными свойствами обладают как производные фуллеренов, так и свободные фуллерены [3, 16, 20, 31].
В качестве водорастворимого антиоксиданта был предложен политидроксифуллерен (фуллеренол). Было показано, что он снижает концентрацию свободных радикалов в крови и может быть использован как ловушка для супероксидных радикалов, генерируемых in vitro ксантином и ксантин-оксидазой. Однако фуллерены могут выступать фотосессиби-лизаторами образования свободных радикалов кислорода С60 при облучении светом.
hn
С60 ^ 1С60 ^ 3С60
1 1С60^ С60 ^- + О2 * °2^-
2. 1С60 ^ 3С60 + О2 ^ 1О2
Выше указана схема реакций, приводящих к образованию активных форм кислорода в присутствии фуллеренов [18,21].
В вопросе о механизме действия фуллеренов можно выделить три аспекта: во-первых, липофильные свойства ферментов позволяют им интегрироваться в гидрофобные области мембран и белков, существенно влияя на их функции. Фуллерены способны образовывать структурные аналоги переходных состояний субстратов и таким образом функционировать в качестве эффективных ингибиторов. Общим свойством « фуллереновых субстратов» является сильное ингибирующее влияние фуллереновой гидрофобной сферы
на разрыв химических связей. Химические группы, удаленные от сферы более атакуемые, чем ближайшие к сфере [26]; во-вторых, было показано, что ферменты, обладая высокой стереоспецифичностью, могут быть перспективны для избирательной деградации изомерных форм фуллереновых производных в рацемической смеси; в-третьих, способность фуллеренов, под действием видимого света, переходить в возбужденное триплетное состояние и, взаимодействуя, например, с молекулярным кислородом, генерировать свободно радикальные формы кислорода. В стабильном состоянии фуллерены выступают акцепторами свободных радикалов [15, 16, 20, 30].
Показано, что мишенью для ОН-радикала являются $р2 — гибридизованые атомы углерода. При увеличении числа аддендов, например, при решении проблемы растворимости фуллеренов, снижается антиоксидантная активность, поскольку sp2 — гибридизован-ные атомы углерода переходят в sp3 — гибридизацию, снижая количество п-электронов, доступных для радикальной атаки. Активность по отношению к супероксидному радикалу (О2) была продемонстрирована для фуллеренола С60(ОН)18. Данные свойства позволяют выступать фуллеренам в качестве радиопротекторов.
Прооксидантная активность фуллерена С60 наблюдается при облучении светом. Полагают, что при облучении изначально образуется синглетное состояние С60(*С60) или С70(1С70). Время жизни (т) для *С60 составляет примерно 1,3 нс, а для *С70 около 700 пс. Для *С60 и *С70 наблюдается очень низкая флюоресценция с количественным выходом Ф; = 10-5-10-4. Преобладающий путь распада синглетного фуллерена заключается во внутрисистемном переходе к триплетному состоянию (квантовый выход ~ 100 %). Если присутствует О2, 3С60 эффективно, почти на 100 %, стимулирует образование *О2, эффективность 3С70 в этом процессе несколько хуже (~81 %).
Функционализация С60 с помощи гидрофильных групп приводит к быстрому уничтожению триплетного состояния путем триплет-триплет взаимодействий и делает эти комплексы непригодными для генерации *О2 [19, 21, 22].
Липофильная природа фуллеренов дает основание полагать, что фуллерены должны обладать повышенным сродством к неполярным областям биологических мембран [25]. Для исследования механизма взаимодействия фуллеренов с биологическими мембранами, проведенного в отделе биохимии Института физиологии им. А. А. Ухтомского, были использованы флуоресцентные зонды (Романов Р. В., Скворцевич Е. Г.: [4])).
Моделью биологической мембраны служили фосфолипидные липосомы, полученные путем диспергирования яичного лецитина в буферной системе (0,1 М Трис — НС1; рН — 7,4) из 10 %-ного спиртового раствора с помощью ультразвукового дезинтегратора в токе аргона.
В работе было показано, что комплексы ПВП/С60 вызывают тушение флуоресценции эритрозина, встроенного во внешний слой липосом на 12 и 24 % соответственно. Чистый ПВП не оказывает такого эффекта. Отсутствие сдвига максимума флуоресценции эритрози-на можно объяснить тем, что эритрозин встроен во внешнюю поверхность липосом (район глицериновых остатков фосфатидилхолина) и ПВП не меняет его вязкость и полярность. Вторым флуоресцентным зондом был выбран пирен, который локализуется в неполярных областях мембраны. Результаты показали, что при добавлении комплексов ПВП/С60 происходит значительное тушение как мономерной, так и эксимерной составляющих спектра, что объясняется близким расположением фуллерена от мест локализации пирена.
Таким образом, на основании экспериментов с флуорисцентными зондами можно заключить, что комплекс ПВП/С60 присоединяется на внешней поверхности липосом и высвобождает фуллерен в неполярную область липидного бислоя. Фуллерен, находясь
в мембране, вызывает тушение фосфорисценции эритрозина, встроенного во внутреннюю поверхность липосомы и при этом снижает микровязкость неполярной области мембраны.
Основной вывод из проведенных экспериментов заключается в том, что комплекс ПВП/С60 выполняет роль системы доставки фуллерена С60 в неполярную область мембраны, помогающей фуллерену преодолеть полярный барьер на поверхности биологической мембраны. Связывание свободного ПВП с поверхностью мембраны дает основание полагать его независимое от фуллерена влияние на функции мебран [4].
Таким образом, было показано при взаимодействии комплекса ПВП с мембраной происходит разделение комплекса, при этом ПВП остается связанным с повехностью мембраны, в то время, как фуллерен С60 проникает в неполярную область мембраны. На основании данных экспериментов можно предположить, что механизмы действия компонентов комплекса ПВП/С60 могут различаться. Результаты экспериментов, полученные на эритроцитах, взятых в качестве функциональной модели биологической мембраны [1], подтверждают это предположение. ПВП, взаимодействуя с Ка-, К-АТФазой, с наружной стороны плазматической мембраны эритроцита, приводит к увеличению АТФазной активности, в то время, как фуллерен С60, взаимодействуя с внутримембранными доменами, снижал Ка-, К-зависимую АТФазную активность
Эти эксперименты, выполненные студентом бакалавриата О. М. Стурлисом, в лаборатории сравнительной биохимии ферментов Института эволюционной физиологии и биохимии РАН, показали, что зависимость Ка-, К-АТФазы эритроцитов в свободном состоянии, и в присутствии комплексов ПВП/С60 и ПВП от концентрации М§С12 существенно различается, что может свидетельствовать о разобщении АТФазной функции мембран эритроцитов и ее функциональной активности в составе Ка-насоса. Такое разобщение вероятно связано с увеличением Ка+ АТФазным компонента реакционной последовательности Ка-насоса [6, 7].
Таким образом, в эксперименте, носящем характер поискового исследования, показано, что молекулярной мишенью фуллеренов могут быть биологические мембраны, а именно интегральные белки мембран. Кроме того, эксперименты показали, что действие компонентов водорастворимых комплексов фуллеренов (в конкретном случае поливинил-пирролидон) может вызывать действие, отличное от действия С60, маскируя таким образом эффект самого фуллерена (С60). Для подтверждения высказанной гипотезы о разобщающем эффекте поливинилпирролидона необходимо проверить его действие непосредственно на транспорт одновалентных катионов в прямом физиологическом эксперименте.
Литеатура
1. Казенов А. М., Маслова М. Н., Шалабодов А. Д. Исследование активности Ка-, К-АТФазы в эритроцитах млекопитающих// Биохимия. 1984. Т. 49. Вып. 7. С. 1089-1095.
2. Козырев С. В., Роткин В. В. Фуллерен. Строение, динамика кристаллической решетки, электронная структура и свойства //Физика техн. полупров. 1993. Т. 27. № 9. С. 1409-1434.
3. Пиотровский Л. Б. Фуллерены в биологии и медицине: проблемы и перспективы // СПб., 2003. С. 196-251.
4. Романов Р. В., Скворцевич Е. Г. Применение метода флуоресцентных и триплетных зондов для изучения механизма взаимодействия водорастворимых форм фуллерена С60 с биологическими мембранами // Работы молодых исследователей Санкт-Петербургского университета в области физиологии, биохимии и биофизики. Сб. статей: Нервная система. Вып. 39. СПб., 2005. С. 136-152.
5. Сидоров Л. Н., Юровская М. А., Борщевский А. Я., Трушков И. В., Иоффе И. Н. Фуллерены. М., 2005.
6. Скворцевич Е. Г., Романов Р. В. Биологические эффекты фуллеренов // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. № 1. М., 2002. С. 32-36.
7. Скворцевич Е. Г. Физиология, биохимия и биофизика в Санкт-Петербургском университете // Нервная система. Вып. 38. 2004. с. 167-77.
8. Смирнов В. М. Химия наноструктур. Синтез, строение, свойства // Учеб. пособие. СПб. 1996.
9. Соколов В. И. Химия фуллеренов — новых аллотропных модификаций углерода //Известия Академии Наук. Сер. хим. 1999. № 7. С. 1170-1174.
10. Станкевич И. В., Соколов В. И. Достижения химии фуллеренов // Известия Академии Наук. Сер. хим. 2004. № 9. С. 1749-1766.
11. Юрковская М. А., Трушков И. В. Реакции циклоприсоединения к бакминстерфуллерену С60: достижения и перспективы // Известия Академии Наук. Сер. хим. 2002. № 3. С. 343-413.
12. Цит. по: Andrievsky G. V., Burenin I. S. Hydrated C60 Fullerene as Versatile Bio-Antioxidants Regulate Free-Radical Processes by the«Wise» Manner Proc. of Nanofair Conference 2004.
13. BeebyA., Eastoe J., HeenanR. K. Solubilisation of C60 in aqueous micellar solution // J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1994. N 2. Р 173-175.
14. Buvari-Barcza A., RohonczyJ., Rozlosnik N., Gilanyi T., Szabo B., Lo-vas G., Braun T., Samu J., Barcza L. Aqueous solubilization of [60] fullerene via inclusion complex formation and the hydration of C60 // J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2. 2001. P. 191-196.
15. Cheh S.-C., Lai M.-K., Lee M.-C. Decrease of Free Radical Level in Organ Perfusate by a Novel Water-Soluble Carbon-Sixty, Hexa (sulfobutil) fullerenes // Transplantation Proceedings. 1999. Vol. 31. P. 10809-108013.
16. ChiangL. Y., LuF.-J., Lin J.-T. Free radical scavenging activity of water-soluble fullerenols // J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1995. N 3. P. 1283-1284.
17. CurlR. F., Smalley R. E. Fullerenes // Scient. Amer. 1991. Vol. 265. N 4. Р 14 26
18. Da Ros Т., Spalluto G., Prato M. Biological applications of fullerene derivatives: a brief overview // Croatica Chemica Acta. 2001. Vol. 74. P. 743-755.
19. DiederichF., Gymez-LypezM, Supramolecular fullerene chemistry //Chem. Soc. Rev. 1999. Vol. 28. P. 263-277.
20. Guldi D. M., Asmus K.-D. Activity of water-soluble fullerenes towards OH. — radicals and molecular oxygen // Radiation Physics. Chemistry. 1999. Vol. 56. P. 449-456.
21. Hirsch A. Principles of fullerene reactivity // Topics in Current Chemistry, 1996. Vol. 199. P 1-65.
22. Hirsch A. The Chemistry of the Fullerenes. Stuttgart, 1994.
23. Isaacs N. S., Nicols P. J., Raston C. L, Sandoval C. A., Young D. J. Solution volume studies of a deep cavity inclusion complex of CM: p-benzyl calyx [5] arene // J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1997. P. 1839-1840.
24. Kamat J. P., Devasadayam T. P., Priyadarsini K. I., Mohan H. Reactive oxygen species mediated membrane damage induced by fullerene derivatives and its possible biological implications. // Toxicology. 2000. Vol. 155. P 55-61.
25. KotelnikovaR. A., KotelnikovA. I., Bogdanov G. N. Membranotropic properties of the water soluble amino asid and peptige derivatives of fullerene C60 // FEBS Lett. 1996. Vol. P111-114.
26. Schergna S., Da Ros T., Linda P. Enzymatic Modification of fullerene Derivatives // Tetrahedron Lett. 1998. Vol. 39. P. 7791-7794.
27. Schinazi R. F., Sijbesma R., Srdanov G. Synthesis and virucidal activity of a water-soluble, configurationally stable, derivatized C60 fullerene // Antimicrob. Agents Chemother. 1993. Vol. 37. N 8. P. 1707-1710.
28. Sivaraman N., Dhamodaran R., Kaliappan I. Solubility of C60 in organic solvents // J. Org. Chem. 1992. Vol. 57. N. 22. Р 6077-6079.
29. Wilson L. J., Cargl D. W., Thrash T. P. // Metallofullerene drag design // Coordination Chemistry Reviews. 1999. Vol. 190-192. P 199-207.
30. Yamago S., Tokuyama H., Nakamura E. In vivo biological behavior of a water- miscible fullerene: 14C labeling, absorption, distribution, excretion and acute toxicity // Chemistry and Biology. 1995. Vol. 2. P. 385-389.
31. Yamakoshi Y. N., Yagami T., Fukuhara K. Solubilisation of fullerenes into water with polyvinylpyrrolidone applicable to biological tests // J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1994. N 4. Р 517-518.
32. Yoshida Z., Takekura H., Takekura S., Matsubara Y. Molecular recognition of C60 with y-cyclodex-trin // Angew. Chem. Int. 1994. Vol. 33. P. 1597-1599.
