CC BY
41
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ
© НИКОЛАЕВ С.М., ЦЫРЕНЖАПОВ А.В., НИКОЛАЕВА Г.Г., ЧУКАЕВ С.А., САМБУЕВА З.Г., ТАНХАЕВА Л.М., ДАРГАЕВА Т.Д., МАТХАНОВ Э.И. -
АНТИОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ГРАНУЛ СУХОГО ЭКСТРАКТА
ГОРЕЧАВНИКА БОРОДАТОГО
С.М. Николаев, А.В. Цыренжапов, Г.Г. Николаева, С.А. Чукаев, З.Г. Самбуева, Л.М. Танхаева, Т.Д. Даргаева,
Э.И. Матханов**
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, директор — д.б.н., проф. В.М.Корсунов, отдел биологически активных веществ, рук. — д.м.н., проф. С.М.Николаев; ООО Межотраслевое научно-производственное
объединение «Байкалфарм», директор — Э.И.Матханов)
Резюме. Установлено, что гранулы сухого экстракта горечавника бородатого (ГГБ) обладают антиокислительной активностью в условиях in vitro. При этом предотвращается инициация перекисного окисления липидов (ПОЛ) реактивом Фентона, повышается устойчивость эритроцитарных мембран и не ингибируется осмотический гемолиз. Ингибирование гиперокисления, вероятно, обусловлено высоким содержанием в ГГБ биологически активных веществ g-пироновой природы: флавонов и ксантонов, являющихся природными антиоксидантами. Указанные вещества, очевидно, взаимодействуя со свободными радикалами, замедляют интенсивность радикальных реакций с дальнейшим уменьшением активности и концентрации образующихся токсичных перекисных продуктов.
Ключевые слова. Горечавник бородатый, антиокисдантное действие, гранулы экстракта, ксантоны, флавоны.
В последние десятилетия за рубежом широко проводятся исследования растений семейства горечавко-вык. Интерес к горечавкам объясняется тем, что из них выщелены перспективные классы соединений — фла-воноиды, ксантоны, горькие гликозиды, относящиеся к подгруппе секоиридоидов. По литературным данным перечисленные классы природных соединений обладают высокой фармакологической активностью [15]. Лекарственные формы из них широко применяются в народной и тибетской медицине при заболеваниях органов пищеварения, а также как противовоспалительные средства при заболеваниях верхних дыхательных путей и как ранозаживляющие при порезах, нарывах, ожогах и отморожениях [2,3,4,14].
Одним из представителей семейства Gentianaceae является горечавник бородатый Gentianopsis barbata ^гое1.) Ма. — однолетнее травянистое растение 10-60 см высотой, произрастающий на лесных лугах, луговых склонах, по лесным опушкам, солонцеватым берегам рек на территории России, на лугах Средней Азии [7]. В народной медицине настой травы горечавника бородатого применяется в качестве средства, возбуждающего аппетит и улучшающего пищеварение, при расстройствах желудочно-кишечного тракта. Настой травы растения рекомендуют при малокровии и как общеукрепляющее, особенно после перенесенных тяжелых заболеваний, больным туберкулезом, со злокачественными новообразованиями [13].
В надземной части и корнях горечавника бородатого обнаружены соединения g-пироновой природы: а) флавононоиды — апигенин, лютеолин, генкванин, хри-зоэриол, космосиин, тилианин, цинарозид, 7-О-0-Д-глюкозид диосметина; б) ксантоны — 1,7-дигидрокси-3,8-диметоксиксантон (гентиакаулеин), 1-гидрокси-3,7,8-триметоксиксантон (декуссатин), 1,7,8-тригид-рокси-3-метоксиксантон (гентиакохианин или сверти-анин), 1,8-дигидрокси-3,7-диметоксиксантон (сверти-
аперенин или метилсвертианин), l-O-ß-Д-глюкопира-нозил-3,7,8-триметоксиксантон, l-O-ß-Д-глюкопира-нозил-7-гидрокси-3,8-диметоксантон, l-O-ß-Д-прим-верозил-3,7,8-триметоксиксантон, 1-О-примверозил-7-гидрокси-3,8-диметоксиксантон [11]. Выделены алкалоиды (0,17%), дубильные вещества (следы), кумари-ны и горечи [4]. Сухой экстракт горечавника бородатого (ГХ), зарегистрирован как оригинальное средство «генцихол», которое превосходит фламин и аллохол по влиянию на скорость секреции желчи у белых крыс [8,11].
Целью данной работы явилось определение антиок-сидантного действия гранул сухого экстракта из надземной части горечавника бородатого.
Материалы и методы
Эксперименты проведены в двух сериях опытов. В первой серии проводилась оценка кинетики перекис-ного окисления липидов (ПОЛ) методом индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) [12]. В качестве индуктора ХЛ использовали 10мМ FeSO4. Измерение интенсивности ХЛ проводили на приборе «Хемилюминометр PXL-01» (Россия). Инкубационную смесь помещали в ячейку, термостатируемую при 37оС, и находящуюся в темновой камере. При определении Fe2+- индуцированной ХЛ в качестве модельной системы использовали суспензию липопротеидов (ЛП) яичного желтка. Суспензия готовилась из свежих куриных яиц и фосфатного буфера (20 мМ КН^О^ 10 мМ KCl, рН 7,4), взятых в соотношении 1:1. Инкубационная смесь содержала 0,5 мл суспензии ЛП желтка, 0,9 мл фосфатного буфера, 0,5 мл эозина, 0,1 мл водного раствора гранул горечавника бородатого (ГГБ) в конечной концентрации 0,24; 0,72 и 2,4 мг/мл. После двухминутной инкубации для инициирования ХЛ в систему вводили 0,2 мл 10-2 М раствора FeSO4. Интенсивность ХЛ регистрировали в течение 3-х минут и на кривой анализировали
следующие параметры: амплитуду быстрой вспышки ХЛ (11), скорость ХЛ на начальной экспоненциальной стадии медленной вспышки, определяемой как тангенс угла наклона кинетической кривой медленной вспышки (^ 8), амплитуду медленной вспышки (12). По зарегистрированным уровням хемилюминесценции проводили графический расчет антиокислительной активности указанных доз испытуемого средства.
Во второй серии исследовали мембраностабилизи-рующее действие ГГБ в концентрациях 5; 25; 50 мг/мл. В качестве объекта исследования использовали 1% суспензию отмытых донорских эритроцитов. Гемолиз эритроцитов вызывали реактивом Фентона (перекис-ный гемолиз) и добавлением дистиллированной воды (осмотический гемолиз) [6]. Компоненты, входящие в состав реактива Фентона, были использованы в минимальных концентрациях, вызывающих полный лизис 1% суспензии эритроцитов: FeSO4 *7Н20 — 0.01 мг/мл Нз02 — 0/2 мг/мл (в пересчете на 100% перекись). Для получения осмотического гемолиза к суспензии эритроцитов добавляли равный объем дистиллированной воды. Степень гемолиза измеряли через 24 часа по поглощению надосадочной жидкости при 420 нм. Действие ГГБ на гемолиз эритроцитов оценивали в процентах по отношению к поглощению в контроле (без добавления средств в инкубационную среду). Поскольку раствор ГГБ имел собственную окраску, были поставлены дополнительные контрольные пробы на цвет указанных средств в соответствующих дозах. Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием ^критерия Стьюдента.
Результаты и обсуждение
Полученные данные показали, что с повышением дозы наблюдается существенное ингибирующее влияние ГГБ на кинетику Fe2+-индуцированной хемилюми-несценции в тестируемой системе, о чем свидетельствует уменьшение амплитуды «быстрой вспышки», а также снижение скорости возрастания «медленной вспышки» ХЛ. При введении ГГБ в концентрации 0.72 мг/мл в инкубационную среду снижается показатель I характеризующий амплитуду «быстрой вспышки» на 12% по сравнению с данными контрольной пробы, не содержащей гранулы. Наряду с этим, при использовании ГГБ в концентрациях 0,72 и 2,4 мг/мл отмечалось снижение скорости возрастания «медленной вспышки» ХЛ на 25 и 74%, соответственно, по сравнению с контролем. Рассчитанное значение антиокислительной активности
ГГБ составило 7,14 (г/л)-1, что позволяет отнести его к группе растительных средств с антиоксидангными свойствами.
Во второй серии опытов установлено, что ГГБ в концентрациях 5 и 25 мг/мл проявляют выраженное мемб-раностабилизирующее действие, о чем свидетельствует уменьшение гемолиза, вызванного реактивом Фен-тона, в 1,5 раза по сравнению с контролем. Вместе с тем, применение ГГБ в концентрации 5 мг/мл не сопровождалось заметным повышением устойчивости мембран эритроцитов к действию дистиллированной воды.
Следовательно, данные экспериментов с использованием индуцированной хемилюминесценции в условиях in vitro свидетельствуют о том, что ГГБ обладают антиокислительной активностью, проявляющуюся ин-гибированием липидных радикалов, которые образуются в модельной системе. Благодаря этому предотвращается инициация ПОЛ реактивом Фентона и повышается устойчивость эритроцитарных мембран. Высказанное предположение достаточно вероятно, поскольку ГГБ не ингибируют осмотический гемолиз, что могло бы наблюдаться, если бы данное средство за счет процессов сорбции вызывало стабилизацию мембран клеток [6].
Ранее установлено, что ГГБ обладают желчегонной и гепатопротекторной активностью [8,15]. Ингибиро-вание гиперокисления в мембранных структурах гепа-тоцитов обусловлено высоким содержанием в ГГБ биологически активных веществ у-пироновой природы: флавонов и ксантонов, являющихся природными ан-тиоксидантами [1,8,15]. Они, взаимодействуя со свободными радикалами, замедляют интенсивность радикальных реакций с уменьшением активности и концентрации образующихся токсичных перекисных продуктов. В частности, доминирующие в сумме ксантонов горе-чавника бородатого ксантоновый агликон гентиакауле-ин и его ксантоновый гликозид гентиабаварозид [11], обладают сравнительно выраженными мембраностаби-лизирующими свойствами [9,10,15]. Можно допустить, что ксантоновый агликон гентиакаулеин и его ксанто-новый гликозид гентиабаварозид способствуют проявлению антиокислительной и мембраностабилизирую-щей активностей гранул горечавника бородатого.
Таким образом, гранулы сухого экстракта горечав-ника бородатого обладают антиокислительным свойством при индуцированной хемилюминесценции в условиях in vitro и проявляют выраженную мембраноста-билизирующую активность при гемолизе эритроцитов, вызванного реактивом Фентона.
ANTIOXIDANT EFFECT OF GRANULES OF GENTIANA BARBATA
S.M.Nikolaev, A.V.Tsirenzapov, G.G.Nikolaeva, S.A.Chukaev, Z.G.Sambueva, L.M.Tankhaeva, T.D.Dargaeva,
E.I.Matkhanov
(Institute of General and Experimental Biology, SLR Inter-Branch Scientific-Industrial Association «Baikalfarm»)
It is established that granules of Gentiana barbata extract has antioxidant activity in vitro. In this case initiation of peroxide lipid oxidation process which initiated by Fenton's reactive is decreased, stability of erythrocyte's membranes increases and osmotic hydrolysis is not observed. Hyperoxydative inhibition is the result of a high content of r-pyrone-cycle biologically active substances, like flavonoids and xanthones, which are native antioxidants. These substances react with free radicals and as a result diminish intensity of radical reactions and decrease activity and concentration of toxic peroxide-containing products.
ЛИТЕРАТУРА
1. Барабой В.А., Чеботарева Е.Е. Хемилюминесценция крови в экспериментальной и клинической онкологии.
— Киев: Наукова думка, 1984. — 184 с.
2. Баторова С.М., Яковлев Т.П., Базарон Э.Г. «Дзэйцхар Мигчжан» - памятник тибетской медицины. — Новосибирск: Наука, 1985. — 88 с.
3. Гаммерман А.Ф., СемичовБ.В. Словарь тибетско-лати-но-русских названий лекарственного растительного сырья, применяемого в тибетской медицине. — Улан-Удэ, 1963. - 180 л.
4. Израилъсон В. Ф. Культура горечавки желтой в Новосибирске // Вторая республиканская конференция по медицинской ботанике. — Киев, 1988. — С.120.
5. Карпович В.Н. Фитохимическое исследование забайкальских видов горечавковых // Вопросы фармакогнозии: Тр. ЛХФИ. — 1960. — Т. 12, вып. 1. — С.201-208.
6. Ковалев И.Е, Данилова Н.П., Андронати С.А., Жеребин Ю.Л. Влияние эномеланина на гемолиз эритроцитов, вызываемый свободнорадикальными реакциями и др. факторами // Фармакология и токсикология. — 1986.
— № 4. — С.89-91.
7 Малышев Л.И., Пешкова Г.А. Флора Центральной Сибири. — Новосибирск: Наука. 1979. — Т. 2. — С.709-718. 8. Николаев С.М. Желчегонное действие экстракта горечавки бородатой (ОеШапа ЬагЬа1а Ргое1.) // Фармация.
— 1985. — №№ 3. — С.16-19.
9. Николаев С.М. Полифенольные комплексы при заболеваниях гепатобилиарной системы // Тезисы докладов IV Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. — Ташкент, 1982. — С.32-33.
10. Николаев С.М., Цыренжапов A.B., Самбува З.Г., Николаева Г.Г., Танхаева Л.М., Даргаева Т.Д. Мембраноста-билизирующее действие природных ксантоновых соединений // Фитотерапия в Украине. — 2001. — № 3. — С.26-29.
11. Николаева Г.Г. Фитохимическое исследование растений семейства Горечавковых флоры Сибири: Автореф дис. ... докт.фарм. наук. — Улан-Удэ, 2000 — 40 с.
12. Сыров В.Н., Хусбактов B.A., Гукасов B.M. и др. Антиок-сидантная активность некоторых растительных фе-нольных соединений // Химико-фармацевтический журнал. - 1987. - №№ 1. - С.59-62.
13. Телятъев В.В. Целебные клады. — Иркутск: ВосточноСибирское книжное изд-во, 1991. — 400 с.
14. Хайдав Ц., Алтанчимэг Б., Варламова Т. С. Лекарственные растения в монгольской медицине. — Улан-Батор, 1985. - 390 с.
15. Цыренжапов A.B. Сравнительная оценка желчегонного и гепатозащитного действия лекарственных средств из растений семейства горечавковых: Автореф. дисс... канд. мед. наук. - Улан-Удэ, 1999. - 24 с.
© ЛЫГДЕНОВА Б.Б., АСЕЕВА Т.А., ЧЕХИРОВА Г.В., ПЕТРОВ Е.В., МАТХАНОВ И.Э. -
МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИИ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ФИТОЧАЕ «СЕДАФИТ»
Б.Б. Лыгденова, Т.А. Асеева, Г.В. Чехирова, Е.В. Петров, И.Э. Матханов (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор —проф. В.М. Корсунов)
Резюме. Разработана биологически активная добавка к пище в форме фиточая для профилактики и лечения неврозов, в состав которой входят официнальные лекарственные растения. Для стандартизации разработана методика количественного определения суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии. Ключевые слова. Спектрофотометрия, методика количественного определения суммы флавоноидов, фиточай «Седафит».
Актуальность разработки средств, обладающих мягким седативным действием, обусловлена возросшими нагрузками на нервную систему человека, вызванными высокими темпами современной жизни, глобальными социально-экономическими преобразованиями, уменьшением доли физического труда в жизни современного человека и психотравмирующими ситуациями [9]. В настоящее время доказана эффективность применения препаратов из лекарственных растений в качестве седативных средств, при этом наиболее эффективными являются препараты, содержащие в своем составе несколько компонентов [3,7].
В связи с вышеизложенным разработано многокомпонентное седативное средство растительного происхождения в форме фиточая.
Разработка рецептуры фиточая, условно названного «Седафит», осуществлялась на основе анализа данных литературы о седативной активности извлечений из различных лекарственных растений [5,7,11], а также данных фармакологического скрининга. В результате была составлена рецептура, включающая следующие ингредиенты: трава пустырника пятилопастного
(Leonurus quinquelobatus Gilib.), листья мяты перечной (Mentha x piperita L.), цветки ромашки аптечной (Matricaria recutita L.), корневища с корнями валерианы лекарственной (Valeriana officinalis L.), корни шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi).
В последние годы предъявляются высокие требования к качеству фитопрепаратов и биологически активных добавок к пище, что предполагает использование современных и точных методов стандартизации [2,8,10]. Согласно этим требованиям разработана методика количественного определения содержания суммы флаво-ноидов в фиточае, основанная на дифференциальной спектрофотометрии, так как флавоноиды являются одной из доминирующих групп биологически активных веществ растений, входящих в состав фиточая, и во многом обусловливающих их суммарный фармакологический эффект [1].
Материалы и методы
Объектом исследования служили образцы растений: трава пустырника пятилопастного, листья мяты перечной, цветки ромашки аптечной, корневища с корнями
