CC BY
66
протяженность 44 тысяч пар оснований и содержит 52 экзона [5, 18].
В настоящее время в различных популяциях мира проводится идентификация полиморфных локусов, ассоциированных с увеличением риска развития заболевания с учетом особенностей структуры генофонда отдельных регионов, однако молекулярно-генетические основы формирования заболевания до конца не ясны. Известно относительно небольшое число генов, вовлеченных в патогенез интракраниальных аневризм [21, 22].
С целью выявления предрасположенности к аневризмам сосудов головного мозга нами проведено изучение А1и-повторов в 8 интроне, VNTR полиморфизма в 25 интроне и двух однонуклеотидных полиморфных локусов: 2209G>A,
р.А1а698ТЪг (ге1800255) и 4561А^ (ге8224) гена коллагена III типа (COL3A1) у индивидов русской этнической принадлежности.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалом для исследования послужили образцы ДНК 166 больных с аневризмами мозговых сосудов, оперированных в нейрохирургической клинике Уральской государственной медицинской академии и 193 практически здоровых индивидов в качестве контрольной выборки русской этнической принадлежности, проживающих в Волго-Уральском регионе. Возраст больных варьировал от 14 до 73 лет (средний возраст -43,2 года), доля множественных аневризм составила 18,1%. Наибольшее число аневризм локализовались в области внутренней сонной (ВСА) и передней соединительной артерии (ПМА-ПСА) (62,5%), 25,5% - аневризмы средней мозговой артерии (СМА). Размеры аневризм варьировали от аневризматических выпячиваний до гигантских
(более 25 мм), самыми частыми были аневризмы средних размеров (75,3%).
Выделение ДНК из цельной крови проводилось методом последовательной фенольнохлороформной экстракции [11]. Генотипирование образцов проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК с использованием праймеров, описанных ранее [4, 12, 13]. Для анализа 2209G>A и 4561A>G полиморфных локусов использовались ферменты рестрикции AluI (2209G>A) и NdeI (4561A>G), соответственно.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакетов программ статистического анализа Statistica ver. 6.0 [23] и "Rows x Columns" [19]. В случае наличия статистически значимых отличий в исследуемых выборках проводилась оценка показателя относительный риск (odds ratio, OR), а также границ его 95% доверительного интервала (CI95%).
Гаплотипический анализ провели с использованием программы EH, разработанной университетом Рокфеллера, Нью-Йорк, США (http: //linkage.rockefeller.edu/ott/eh.htm).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Результаты исследования инсерционно-делеционного полиморфизма Alu-повторов в 8 интроне гена COL3A1 у больных с аневризмами сосудов головного мозга и в контрольной группе здоровых индивидов представлено в табл. 1.
Частота Alu инсерции в контрольной группе здоровых индивидов русской этнической принадлежности, проживающих в Волго-Уральском регионе, составила 0.052. По литературным данным, существуют выраженные этнические различия в распространенности частоты Alu инсерции в гене COL3A1 в популяциях мира. С наибольшей частотой данная Alu инсерция обнаружена в попу-
Таблица 1
Распределение частот аллелей и генотипов А1и-инсерционного полиморфизма гена СОЬ3Л1 у больных с аневризмами артериальных сосудов головного мозга и в контрольной группе
Выборки N Аллели Генотипы
*1 *D *I*I *I*D *D*D
n Р n Р n Р n Р n Р
Общая выборка больных 166 8 0,024 324 0,976 0 0,000 8 0,048 158 0,952
Общая выборка контроля 193 20 0,052 366 0,948 1 0,005 18 0,093 174 0,902
Больные женщины 83 5 0,030 161 0,970 0 0,000 5 0,060 78 0,940
Контроль женщины 85 11 0,065 159 0,935 0 0,000 11 0,129 74 0,871
Больные мужчины 83 3 0,018 163 0,982 0 0,000 3 0,036 80 0,964
Контроль мужчины 107 9 0,042 205 0,958 1 0,009 7 0,065 99 0,925
ляциях Африки (0.223), в популяциях ЮгоВосточной Азии и Индии ее частота составила 0.089 и 0.064, соответственно, а популяциях Европы выявлена со средней частотой 0.026 и не обнаружена у поляков, пигмеев и в трех популяциях Индии [25]. Наибольшая частота COL3A1 А1и инсерции среди популяций Азии выявлена у японцев (0.156), а в Европе - у французов (0.050). В исследуемой нам выборке русских частота А1и инсерции в гене COL3A1 оказалась выше, чем в среднем по Европе, и соответствует таковой в популяции французов, ниже, чем в популяциях Азии, и близка к таковой у вьетнамцев (0.056), но выше, чем у китайцев (0.029). Полученные нами результаты подтверждают, что Волго-Уральский регион занимает промежуточное положение между Европой и Азией не только в географическом отношении, но и в генетическом, т.к. этот регион являлся ареной тесных этногенетических взаимоотношений европеоидных и монголоидных народов в течение длительного исторического временного отрезка. Это подтверждается и проведенными нами ранее исследованиями генофонда народов Волго-Уральского региона [1-3]. В других популяциях России А1и полиморфный локус гена COL3A1 не изучался.
В общей выборке больных с интракраниальными аневризмами А1и инсерция обнаружена с частотой 0.024, что в 2,2 раза меньше, чем в контрольной группе, однако различия не достигают статистической значимости из-за низкой частоты А1и инсерции (х=3.659, р=0.056). Аллель *1 чаще встречается у женщин, по сравнению с мужчинами, как в контрольной группе, так и у больных. В группе больных ни разу не встречался генотип *1*1, а в контрольной выборке обнаружен только один случай гомозиготного генотипа *1*1. Обнаружена тенденция снижения частоты гетерозиготного генотипа *I*D и повышения частоты генотипа *D*D у больных с артериальными аневризмами по сравнению с контрольной группой,
но различия статистически не достоверны (х=2.699, р=0.1; х=3.24, р=0.072 соответственно).
Таким образом, А1и полиморфизм гена СОЬ3А1 оказался недостаточно информативным для использования в качестве генетического маркера, что обусловлено его низкой частотой в популяции русских.
На следующем этапе исследования мы выбрали высокополиморфный маркер в 25 интроне гена СОЬ3А1, содержащий от 5 до 11 копий VNTR повторов, состоящих из 15 пар оснований, чтобы увеличить вероятность обнаружения генетической ассоциации. Распределение частот аллелей и генотипов VNTR полиморфизма в гене COL3A1 в контрольной группе и у больных с интракраниальными аневризмами представлено в табл. 2.
В общей группе больных обнаружено 5 аллельных вариантов, а у контроля - 6, самым частым в обеих исследованных группах оказался аллель *2 с частотой 0.44 и 0.38 соответственно. Результаты сопоставимы с полученными ранее данными для европейских популяций, где частота аллеля *2 составила 0.42 [14]. Обнаружена тенденция увеличения частот более длинных аллельных вариантов в контрольной группе, по сравнению с выборкой больных. У больных оказалось меньшее разнообразие генотипов [10] по сравнению с выборкой здоровых доноров [14]. Наблюдается бимодальное распределение частот генотипов. Показатель гетерозиготности у больных составил 66.95%, что ниже, чем в контрольной группе, где ожидаемая гетерозиготность достигала 70,48%. В целом у русских Волго-Уральского региона внутрипопуляционное разнообразие (68.71%) соответствует таковому в ранее изученных европейских популяциях (68,6%).
По литературным данным обнаружена ассоциация аллеля *3 VNTR полиморфизма гена COL3A1 с сердечно-сосудистыми заболеваниями, аллель *4 оказался протективным для развития
Таблица 2
Распределение частот аллелей и генотипов VNTR локуса гена Со13А1 у больных с аневризмами головного мозга и в контрольной группе здоровых доноров
Выборки N Аллели Генотипы
*2 *3 *4 *5 *6 *7 *2*2 *2*3 *2*4 *2*5 *2*7 *3*3 *3*4 *3*5 *3*6 *3*7 *4*4 *4*5 *5*5 *5*6
Больных всего 165 146 0,442 104 0,315 60 0,182 17 0,052 3 0,009 0 0,000 25 0,152 51 0,309 34 0,206 11 0,067 0 0,000 15 0,091 17 0,103 3 0,018 3 0,018 0 0,000 3 0,018 3 0,018 0 0,000 0 0,000
Контроль всего 193 148 0,383 127 0,329 71 0,184 30 0,078 4 0,010 6 0,016 22 0,114 57 0,295 32 0,166 11 0,057 4 0,021 14 0,073 28 0,145 9 0,047 3 0,016 2 0,010 3 0,016 5 0,026 2 0,010 1 0,005
Больные женщины 83 73 0,440 52 0,313 28 0,169 10 0,060 3 0,018 0 0,000 12 0,145 26 0,313 17 0,205 6 0,072 0 0,000 6 0,072 9 0,108 2 0,024 3 0,036 0 0,000 0 0,000 2 0,024 0 0,000 0 0,000
Контроль женщины 85 62 0,365 51 0,300 38 0,224 14 0,082 1 0,006 4 0,024 5 0,059 26 0,306 17 0,200 6 0,071 3 0,035 3 0,035 13 0,153 4 0,047 1 0,012 1 0,012 2 0,024 4 0,047 0 0,000 0 0,000
Больные мужчины 82 73 0,445 52 0,317 32 0,195 7 0,043 0 0,000 0 0,000 13 0,159 25 0,305 17 0,207 5 0,061 0 0,000 9 0,110 8 0,098 1 0,012 0 0,000 0 0,000 3 0,037 1 0,012 0 0,000 0 0,000
Контроль мужчины 107 84 0,393 76 0,355 33 0,154 16 0,075 3 0,014 2 0,009 16 0,150 31 0,290 15 0,140 5 0,047 1 0,009 11 0,103 15 0,140 5 0,047 2 0,019 1 0,009 1 0,009 1 0,009 2 0,019 1 0,009
острых коронарных синдромов и инфаркта миокарда [14].
В результате проведенных нами исследований оказалось, что у женщин, больных аневризмами
сосудов головного мозга, понижена частота аллеля *4 (0.169) и повышена частота генотипа *2*2 (0.145) по сравнению со здоровыми женщинами (0.365 и 0.059 соответственно), однако различия
не достигают статистически значимых значений (х2=1.6, р=0.206 и %2=2.519, р=0.113 соответственно).
У мужчин с аневризмами выявлено 4 аллеля и 9 генотипов, тогда как у здоровых мужчин наблюдается большее разнообразие - 6 аллельных вариантов и 14 генотипов исследуемого полиморфного локуса. Сохраняется тенденция уменьшения числа повторов у больных мужчин по сравнению с контрольной группой и частоты аллелей с большим числом повторов. Так, частота аллеля *5 снижена в 1,7 раза по сравнению с выборкой здоровых доноров, однако различия не достигают достоверных значений (%2=1.672, р=0.196).
По мнению многих исследователей, важное значение в развитии интракраниальных аневризм имеет дисплазия соединительной ткани (ДСТ). В исследованных нами выборках среднее число маркеров дисплазии оказалось равным 3,07 в группе больных с аневризмами и 1,17 в контрольной группе, поэтому наличие дисплазии соединительной ткани можно предполагать у больных, имеющих не менее трех маркеров дисплазии. Среди наших больных 62,8% имели не менее трех внешних маркеров ДСТ.
У больных аневризмами сосудов головного мозга при наличии фенотипических признаков дисплазии соединительной ткани наблюдается накопление генотипа *2*4 по сравнению с контрольной выборкой без признаков ДСТ (%2=3.49, р=0.062), достигая достоверных различий у мужчин с ДСТ по сравнению с соответствующим контролем без ДСТ (%2=4.18, р=0.041). Относительный риск развития заболевания у носителей генотипа *2*4 составляет 2.4 (95%С1=1.02-5.72).
Таким образом, обнаружен повышенный риск развития аневризм сосудов головного мозга у мужчин с признаками дисплазии соединительной
ткани с генотипом *2*4 VNTR полиморфизма гена COL3A1.
Нами также проведено исследование двух однонуклеотидных полиморфных вариантов, расположенных в 31 экзоне (ге1800255) и в 51 экзоне (ге8224) гена COL3A1.
Точечные олигонуклеотидные замены (8КР) являются наиболее частым типом полиморфизма в геноме человека и представляют практический интерес для использования в качестве генетических маркеров, ассоциированных с наследственно обусловленными многофакторными заболеваниями.
Однонуклеотидная несинонимичная замена гуанин на аденина в 2209 положении (2209G>A) приводит к изменению аминокислотной последовательности и замене треонина на аланин в положении 698 белка коллагена 3 типа [14].
Результаты анализа 2209G>A полиморфизма в выборках больных и контроля приведены в табл. 3. Аллель 2209*А встречался как в выборке больных, так и в контрольной группе с частотой 0.247 и 0.306 соответственно, что позволяет нам рассматривать данную однонуклеотидную замену в качестве полиморфизма. Аллель *G чаще встречается у больных (0.753) по сравнению с контрольной группой (0.694), различия недостоверны (Х2=3.06, р=0.08).
При разделении больных и контроля на группы согласно полу, а также наличию, либо отсутствию признаков дисплазии соединительной ткани (ДСТ) обнаружены достоверные различия по распределению частот аллелей исследуемого ло-куса между больными и контрольной группой женского пола (%2=4.278, р=0.039), аллель *А является маркером пониженного риска развития аневризм у женщин (OR=0.6, 95%С1=0.367-0.976).
Таблица 3
Распределение частот аллелей и генотипов 22090>А (ге1800255) полиморфизма гена СОЬ3Л1 у больных с аневризмами артериальных сосудов головного мозга и в контрольной группе
Выборки N Аллели Генотипы
*G *A *G*G *A*G *A*A
n p n p n p n p n p
Общая выборка больных 166 25G G,753 82 G,247 92 G,554 66 G,398 8 G,G48
Общая выборка контроля 193 268 G,694 118 G,3G6 85 G,44G 98 G,5G8 1G G,G52
Больные женщины 83 129 G,777 37 G,223 48 G,578 33 G,398 2 G,G24
Контроль женщины 85 115 G,676 55 G,324 34 G,4GG 47 G,553 4 G,G47
Больные мужчины 83 121 G,729 45 G,27i 44 G,53G 33 G,398 6 G,G72
Контроль мужчины 1G7 152 G,71G 62 G,29G 51 G,477 5G G,467 6 G,G56
В популяциях мира, по данным литературы и базы данных по SNP, частота аллеля 2209*А варьирует от 0.2 до 0.42 [4,
http: //www.ncbi .nlm.nih.gov/SNP/snp_ref.cgi ?rs=18
00255]. У больных с пролапсом митрального клапана по сравнению с контрольной группой статистически значимо чаще (%2=19.17, р>0.0001) встречался аллель *G - 0.76 и 0.58 соответствен-
но [4], что согласуется с полученными нами данными о протективной роли аллеля 2209*А при патологии соединительной ткани.
Нами выявлено три генотипа по исследуемому локусу 2209G>A гена COL3A1. В выборке больных с аневризмами сосудов головного мозга наиболее частым оказался генотип 2209*G*G (0.554), а в контрольной группе чаще встречался гетерозиготный генотип 2209*A*G (0.508). При сравнительном анализе распределения частот генотипов обнаружены статистически значимые различия между общей выборкой больных и контрольной группой по частоте генотипов 2209*G*G (х2=4.624, р=0.0315) и 2209*A*G (%2=3.933, р=0.037). Наименьшая частота генотипа 2209*G*G выявлена в контрольной группе женского пола (0.4), наибольшая частота - у женщин с аневризмами (0.578), различия статистически достоверны (%2=5.344, р=0.021). Генотип 2209*А*G, напротив, с высокой частотой обнаружен в контрольной группе женщин (0.553) и с низкой частотой у больных женского пола (0.398), различия также статистически значимы (х2=4.063, р=0.044). Относительный риск заболевания для носителей генотипа 2209*G*G составил 1.6 (95%С1=1.04-2.398), для женщин - 2.057 (95%С1=1.112-3.804). Генотип 2209*А*G оказался генотипом пониженного риска как в целом (0Я=0.64, 95%С1=0.420-0.974), так и для женщин
- 0.534 (95%С1=0.289-0.985).
По литературным данным, 2209*G*G генотип ассоциирован с пролапсом митрального клапана у китайцев из Тайваня [4]. Результаты наших исследований также подтверждают вовлеченность 2209G>A полиморфизма гена COL3A1 в развитие
заболеваний, связанных с нарушением функции соединительной ткани в целом и в патогенезе интракраниальных аневризм, в частности.
Результаты исследования полиморфного ло-куса 4561А^ в 51 экзоне гена COL3A1 представлены в табл. 4.
Наиболее часто выявлялся аллель 4561*А как в группе больных с аневризмами артериальных сосудов головного мозга (0.657), так и в контрольной выборке (0.808). Наблюдается накопление аллеля 4561*G у больных по сравнению с контрольной выборкой, различия достигают достоверных значений (%2=21.24, р<0.001). Самая высокая частота аллеля 4561*G обнаружена в выборке больных с признаками дисплазии соединительной ткани (0.364), составляя 0.342 у женщин и 0.390 у мужчин. Сравнительный анализ распределения частот аллелей исследуемого локуса между выборками больных и контроля выявил достоверные различия во всех случаях между выборками больных и контроля, как в зависимости от пола, так и наличия, либо отсутствия признаков ДСТ (р<0,005), что позволяет нам рассматривать аллель 4561*G в качестве маркера повышенного риска развития интракраниальных аневризм (OR=2.2, 95%С1=1.569-3.097), а аллель 4561*А оказался маркером пониженного риска развития заболевания (OR=0.45, 95%С1=0.323-
0.637).
В выборке больных аневризмами сосудов головного мозга чаще встречался генотип 4561*А*G (0.687), тогда как в общей выборке контрольной группы преобладал генотип 4561*А*А (0.617). Генотип 4561*G*G не выявлен
Таблица 4
Распределение частот аллелей и генотипов 4561А>0 (ге8224) полиморфизма гена COL3A1 у больных аневризмами артериальных сосудов головного мозга и в контрольной группе здоровых доноров
Аллели Генотипы
Выборки N *Л *в 2 *Л*Л *Л*в 2
п Р п Р X р п Р п Р X р
Общая выборка больных 166 218 0,657 114 0,343 21,24 0,001 52 0,313 114 0,687 32,92 0,001
Общая выборка контроля 193 312 0,808 74 0,192 119 0,617 74 0,383
Больные женщины 83 112 0,675 0,325 10,81 0,005 29 0,349 54 0,651 16,09 0,001
Контроль женщины 85 141 0,829 29 0,171 56 0,659 29 0,341
Больные мужчины 83 106 0,639 60 0,361 10,68 0,005 23 0,277 60 0,723 17,28 0,001
Таблица 5
Распределение частот гаплотипов 22090>Л и 4561Л>0 полиморфных вариантов гена
Col3Л1 у больных аневризмами сосудов головного мозга и в контрольной группе
Гаплотипы больные контроль 2 X p
Абсолютное число (n) Частота (P) Абсолютное число (n) Частота (P)
А1А2 41 G.123 83 G.214 1G.486 G.GG12
А^2 179 G.536 231 G.595 2.58 G.1G8
Gi А 2 41 G.123 36 G.G93 G.G97 G.193
G1G2 73 G.218 38 G.G98 2G.G74 G.GGGGG7
как в группе больных, так и в контрольной группе. Обнаружены достоверные различия между общей выборкой больных и контрольной группой здоровых доноров по распределению частот генотипов локуса 4561А^ гена COL1A3 (%2=32.92, р<0.001). При разделении общей выборки больных и контрольной группы по гендерному признаку и наличию ДСТ также сохраняются достоверные различия между сравниваемыми группами (табл. 5).
Относительный риск заболевания повышен у носителей генотипа 4561*А*G (OR=3.5,
95%С1=2.275-5.463), тогда как у носителей генотипа 4561*А*А риск развития аневризм артериальных сосудов головного мозга понижен (0Я=0.28, 95%С1=0.183-0.440).
Таким образом, нами обнаружены ассоциации аллеля 4561*G и генотипа 4561*А*G полиморфного локуса 4561А>G гена COL3A1 с аневризмами артериальных сосудов головного мозга и выявлена протективная роль аллеля 4561*А и генотипа 4561*А*А в развитии заболевания.
Учитывая сцепление исследованных SNP-локусов гена COL3A1 (D’coeffident=0.25; р<0.003), мы провели гаплотипический анализ изученных полиморфных локусов. При сравнительном анализе обнаружены достоверные различия в распределении частот гаплотипов 22090>А и 4561А^ полиморфных вариантов гена Со13А1 у больных аневризмами сосудов головного мозга и контрольной группой (%2=28.06; df=3;
р=0.0001). Выявлено 4 гаплотипа как в группах больных, так и контроля. Обнаружены достоверные различия по частотам гаплотипов А1А2 и G1G2 между больными и контрольной группой (табл. 5).
Обнаружена ассоциация гаплотипа G1G2 с аневризмами сосудов головного мозга (0Я=2.6, 95%С1=1.686-3.935). Гаплотип А1А2 оказался гаплотипом пониженного риска (0Я=0.5,
95%С1=0.342-0.773).
Таким образом, обнаружены ассоциации полиморфных вариантов гена С0Ь3А1 с аневризмами сосудов головного мозга, что позволяет нам подтвердить роль коллагена 3 типа в патогенезе интракраниальных аневризм в популяции русских. Полученные нами результаты вносят вклад
в исследование популяционных особенностей распределения частот аллелей и генотипов исследованных локусов гена COL3A1 и в определение генетических маркеров индивидуального риска развития аневризм артериальных сосудов головного мозга в российских популяциях.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бермишева М., Викторова Т.В., Тамбетс К. и др. Разнообразие гаплогрупп митохондриальной ДНК у народов Волго-Уральского региона России // Молекулярная биология. -2002. - Т. 36, № 6. -С. 905-906.
2. Хуснутдинова Э.К., Викторова Т.В., Фатхлисла-мова Р.И., Галеева А.Р. Оценка относительного вклада европеоидного и монголоидного компонентов в формирование этнических групп ВолгоУральского региона по данным полиморфизма ДНК // Генетика. - 1999. - T. 35, № 8. -C. 887-893.
3. Хуснутдинова Э.К., Хидиятова И.М., Викторова Т.В. и др. Генетические расстояния и таксономический анализ популяций народов ВолгоУральского региона по данным о полиморфизме ДНК // Генетика. -1999. -T. 35, № 7. - C. 982-987.
4. Chou Hsaiang-Tai, Hung J-S., Chen Y-T. et al. Association between COL3A1 collagen gene exon 31 polymorphism and risk of floppy mitral valve/mitral valve prolapsed // International Jornal of Cardiology. - 2005. - Vol. 95. - P. 299-305.
5. Dalgleish R. The Human Collagen Mutation Database // Nucleic Acids Research. - 1998. - Vol. 26, N 1. -P. 253-255.
6. David G. Peters, Amin B. Kassam, Eleanor Feingold et al. Molecular Anatomy of an Intracranial Aneurysm Coordinated Expression of Genes Involved in Wound Healing and Tissue Remodeling // Stroke. - 2001. -Vol. 32. - P. 1036-1042.
7. Kuivaniemi H., Prockop D.J., Wu Y. et al. Exclusion of the gene for type III collagen (COL3A1) as a common cause of intracranial aneurysms or cervical artery dissections: results from sequence analysis of the coding sequences of type III collagen from 55 unrelated patients // Neurology. - 1993. - Vol. 43. - P. 26522658.
8. Leblanc R., Lozano A.M., van der Rest M. Collagen deficiency in cerebral aneurysms // Stroke. - 1989. -Vol. 20. - P. 561.
9. Majamaa K., Myllyla. V.V. Disorder of collagen biosynthesis in patients with cerebral artery aneurysm //
Biochim Biophys Acta. - 1993. - Vol. 1225. - P. 4852.
10. Majamaa K., Savolainen E.-R., Myllyla. V.V. Synthesis of structurally unstable type III procollagen in patients with cerebral artery aneurysm // Biochim Biophys Acta. - 1992. - Vol. 1138. - P. 191-196.
11. Mathew C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in molecular biology // Haman Press. - 1984. - P. 31-34.
12. Mays P.K., Tromp G., Kuivaniemi H. et al. A 15 base-pair AT-rich variable number tandem repeat in the type III procollagen gene (COL3A1) as an informative marker for 2q31-2q32.3 // Matrix. -1992. - Vol. 12, N 1. - P. 44-49.
13. Milewicz D.M., Byers P.H., Reveille J. et al. A dimorphic Alu Sb-like insertion in COL3A1 is ethnic-specific // J Mol Evol. - 1996. - Vol. 42, N 2. -P. 117-123.
14. Muckian C., Fitzgerald A., Anne O’Neill, Anna O'Byr-ne et al. Genetic variability in the extracellular matrix as a determinant of cardiovascular risk: association of type III collagen COL3A1 polymorphisms with coronary artery disease // Blood. - 2002. - Vol. 100, N. 4. - P. 1220-1223.
15. Neil-Dwyer G., Bartlett J.R., Nicholls A.C. et al. Collagen deficiency and ruptured cerebral aneurysms: a clinical and biochemical study // J. Neurosurg. -1983. - Vol. 59. - P. 16-20.
16. Ostergaard J.R., Oxlund H. Collagen type III deficiency in patients with rupture of intracranial saccular
aneurysms // J. Neurosurg. - 1987. - Vol. 67. -P. 690-696.
17. Pope F.M., Nichols A.C., Narcisi P. et al. Some patients with cerebral aneurysms are deficient in type III collagen // Lancet. - 1981. - Vol. 1. - P. 973-975.
18. Prockop D.J., Kivirikko K.I. Collagens: molecular biology, diseases, and potentials for therapy // Annu Rev Biochem. - 1995. - Vol. 64. - P. 403-434.
19. Roff D.A., Bentzen P. The statistical analysis of mitochondrial DNA: %2 and problem of small samples // Mol. Biol. Evol. - 1989. - Vol. 6. - P. 539-545.
20. Ronkainen A., Miettinen H., Karkola K. et al. Risk of harboring an unruptured intracranial aneurysm // Stroke. - 1998. - Vol. 29. - P. 359-362.
21. Shievink W.I. Genetics of intracranial aneurysms // Neurosurgery. - 1997. - Vol. 40. - P. 651-663.
22. Shievink W.I. Genetics and aneurysm formation // Neurosurg Clin N Am. - 1998. - Vol. 9. - P. 485495.
23. StatSoft, Inc. STATISTICA for Windows (Computer program manual). Tulsa, OK: StatSoft, Inc., 1999. WEB: http://www.statsoft.com.
24. Van den Berg, Limburg M., Pals G. et al. Some patients with intracranial aneurysms have a reduced ratio of type III type I collagen: a case-control study // Neurology. - 1997. - Vol. 49. - P. 1546-1551.
25. Watkins W.S., Ricker C.E., Bamshad M.J. et al. Patterns of ancentral Human Diversity: an analysis of Alu-insertion and restriction-site polymorphism // Am. J. Hum. Genet. - 2001. - Vol. 68. - P. 738-752.
УДК 616-092.14
МИКРОФЛОРА ОЖОГОВЫХ РАН И ЕЁ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АНТИБИОТИКАМ У ДЕТЕЙ
С ОЖОГОВОЙ БОЛЕЗНЬЮ
©Шамаева С.Х., Миронов А.Ю., Потапов А.Ф., Петрова К.М., Евграфов С.Ю.
Кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии Первого Московского государственного медицинского университета им. И.М. Сеченова, Москва
E-mail: profmironov@mmascience.ru
Изучена микрофлора ран у детей с ожоговой болезнью. Она представлена грамотрицательными (50,5%) и грампо-ложительными (45,3%) бактериями, а также Candida albicans (4,0%). Приоритетными грамположительными патогенами являются Staphylococcus aureus (22,6% штаммов) и Enterococcus spp. (19,7%). Приоритетным грамотрицатель-ным патогеном является Pseudomonas aeruginosa (13,8%). Комплексное лечение ожоговой болезни у пострадавших детского возраста должно включать системную антибактериальную терапию препаратами, обладающими высокой активностью против приоритетных грамположительных и грамотрицательных патогенов. Staphylococcus aureus чувствителен к сульфаметоксазолу (94,6% штаммов), линезолиду (100%), ванкомицину (100%); Enterococcus spp. чувствительны к ванкомицину (100% штаммов), линезолиду (88,0%), ампициллину (81,1%); Pseudomonas aeruginosa чувствительна к цефтазидиму и цефепиму (70,4% штаммов), меропенему (69,9%), амикацину (65,8%).
Ключевые слова: микрофлора ран, антибиотикочувствительность.
MICROFLORA OF BURN WOUNDS AND ITS SENSITIVITY TO ANTIBIOTICS IN CHILDREN
WITH BURN DISEASE Shamaeva S.Kh., Mironov A. Yu., Potapov A.F., Petrova K.M., Evgrafov S.Yu.
Microbiology, Virology, Immunology Department of the I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Moscow The microflora of children with burn disease wounds was studied. This microflora is represented by Gram-negative (50.5%) and Gram-positive (45.3%) bacteria, and Candida albicans (4.0%). Priority Gram-positive pathogens are Staphylococcus aureus (22.6% of strains) and Enterococcus spp. (19.7%). Gram priority pathogen is Pseudomonas aeruginosa (13.8%). Comprehensive treatment of burn disease in victims of childhood should include systemic antimicrobial therapy drugs against gram-positive and Gram-negative pathogens. Staphylococcus aureus sensitive to sulfamethoxazole (94.6% of strains), linezolid (100%), vancomycin (100%); Enterococcus spp. susceptible to vancomycin (100% of strains), linezolid (88.0%), ampicillin (81.1%); Pseudomonas aeruginosa sensitive to ceftazidime and cefepime (70.4% of strains), meropenem (69.9%), amikacin (65.8%).
Keywords: microflora of wounds, antibiotic sensitivity.
Важным составляющим интенсивной терапии ожоговой болезни у пострадавших детского возраста является антибактериальная терапия (АБТ) [1, 2, 3, 4, 6]. При этом её эффективность во многом определяется правильным выбором препаратов на начальном, эмпирическом этапе АБТ. С этих позиций, исследования, направленные на изучение этиологической структуры микрофлоры ожоговых ран и чувствительности патогенов к антибактериальным препаратам в конкретном лечебном подразделении, являются важными и обязательными, так как позволяют обосновать стартовую АБТ.
Цель исследования — изучение микрофлоры ожоговых ран и её чувствительности к антибактериальным препаратам у детей с ожоговой болезнью.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследован биоматериал от 133 детей с тяжёлой термической травмой, находившихся в отде-
лении реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ) № 1 Республиканской больницы № 2 -Центр экстренной медицинской помощи Республики Саха (Якутия) с января 2008 г. по октябрь 2010 г.
Возраст детей составил от 1 месяца до 16 лет (средний возраст 4,2±3,5 года), из них мальчиков
- 86 (64,7%), девочек — 47 (35,3%). У всех пострадавших детей глубина ожогов соответствовала 11-111 АБ степени с площадью поражения кожных покровов от 10 до 80%. Средняя длительность нахождения детей в ОРИТ составила 5,2±3,7 койко-дня и всего в ожоговом отделении -14,7±10,1 койко-дня.
Забор содержимого ожоговых ран для микробиологического исследования производили во время второй перевязки (3-й день нахождения в ОРИТ) и в последующем через каждые 5-7 дней.
Посев, культивирование, выделение чистой культуры микробов проводили по общепринятым методам. Идентификацию выделенных УПМ про-
